雜交瘤
- 血清4型禽腺病毒廣西分離株單克隆抗體的制備及鑒定
洗滌3次;加入雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清、陰性對(duì)照(其它對(duì)照病毒的陽性血清)、空白對(duì)照(PBS)、陽性對(duì)照(FAdV-4陽性血清)作為一抗,100 μL/孔,37 ℃孵育1 h;用PBST(含0.05%吐溫的PBS)洗滌3次;加入HRP 標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體作為二抗,100 μL/孔,37 ℃孵育1 h;用PBST(含0.05%吐溫的PBS)洗滌3次,加入顯色液顯色10 min,每孔加入50 μL終止液(含2 mol/L硫酸)終止。在波長(zhǎng)450 nm下測(cè)吸光
中國(guó)獸藥雜志 2023年10期2023-10-25
- 3株鴨疫里默氏桿菌OmpA單克隆抗體的制備及特性鑒定
一。本研究通過雜交瘤技術(shù)，成功制備3株能夠穩(wěn)定分泌抗RA OmpA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為進(jìn)一步研制RA快速診斷試劑盒奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 菌株、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株 RA血清1型分離株CH3、RA血清2型分離株NJ3、RA血清10型分離株HXb2[8]，大腸桿菌血清型O78菌株E937，大腸桿菌血清型O2菌株DE719，大腸桿菌血清型O1菌株APEC01[9]，均為本實(shí)驗(yàn)室保存菌株。雞白痢菌株CVCC519，禽傷寒菌株CVCC 3384，巴氏桿
中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào) 2022年4期2022-09-23
- 副流感病毒5型SH蛋白單克隆抗體的制備
，共篩選到3株雜交瘤細(xì)胞，均可識(shí)別PIV5毒株，為外源性PIV5污染檢測(cè)用免疫熒光試劑奠定了基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 細(xì)胞、毒株、重組質(zhì)粒、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Vero細(xì)胞、PIV5/01株，均由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所保存；pET43a-SH重組質(zhì)粒，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所構(gòu)建及鑒定；8周齡Balb/c雌性小鼠，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。1.2 主要試劑 表達(dá)菌株BL21(DE3)plys購(gòu)自北京全式金公司；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有
中國(guó)獸藥雜志 2021年11期2021-12-31
- 一株針對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的單克隆抗體制備及鑒定
10 d后收集雜交瘤細(xì)胞上清采用間接免疫熒光方法(IFA)進(jìn)行檢測(cè)，具體方法如下：將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Marc-145細(xì)胞消化后分散至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，長(zhǎng)成良好單層后(24 h左右)加入PRRSV 46D，每孔100 μL，放置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)30%～50%病變時(shí)，加入預(yù)冷的無水乙醇4 ℃固定細(xì)胞。每孔加入50 μL雜交瘤細(xì)胞上清，37 ℃作用1 h，PBS洗3次，加入1∶100稀釋的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，37
中國(guó)獸藥雜志 2021年10期2021-11-25
- 犬冠狀病毒M和N蛋白單克隆抗體的制備及其生物學(xué)特性鑒定
]。本研究通過雜交瘤技術(shù)獲得CCV M、N蛋白單抗，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行分析鑒定，為CCV診斷試劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 病毒CCV株(JS1706，JS1712株)，由揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定；CDV、CAV-2和CPV-2a/2b/2c毒種，由揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室分離、保存。相關(guān)病毒毒株來源、培養(yǎng)細(xì)胞和用途見表1。表1 病毒毒株、細(xì)胞與用途1.2 細(xì)胞A-72細(xì)胞(ATCC，CRL-1542)
中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2021年8期2021-09-10
- 構(gòu)建物理模型擊破單克隆抗體的制備過程教學(xué)難點(diǎn)
一次篩選得到的雜交瘤細(xì)胞不止一種、HAT培養(yǎng)基的篩選機(jī)理、克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)是怎么操作的……《普通高中生物學(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)（2017年版）》（以下簡(jiǎn)稱《課程標(biāo)準(zhǔn)》）提出“教學(xué)過程要重實(shí)踐”的基本理念，認(rèn)為學(xué)生是學(xué)習(xí)的主體，教師要積極創(chuàng)設(shè)一些探究性活動(dòng)，幫助學(xué)生在實(shí)踐中加深對(duì)知識(shí)的理解，提升應(yīng)用知識(shí)的能力……為此，筆者引導(dǎo)學(xué)生以橡皮泥為材料動(dòng)手制作物理模型，借助模型模擬單克隆抗體的制備過程，從而將抽象的知識(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)樾蜗蟮闹R(shí)，加深學(xué)生的理解，為未來的應(yīng)用做好準(zhǔn)備。
中學(xué)生物學(xué) 2021年2期2021-04-30
- 解析單克隆抗體在高考中的考查方式
斯坦和科勒應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞在體外無限增殖和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能，獲得了只針對(duì)單一抗原決定基的抗體，即“單克隆抗體”。單抗一問世，便被譽(yù)為“免疫學(xué)中的技術(shù)革命”。1984年因?yàn)閱慰寺】贵w的杰出貢獻(xiàn)，兩人獲得了諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。在新冠肺炎世界范圍內(nèi)流行的背景下，關(guān)注人類生命健康，尋求對(duì)抗病毒的有效方法會(huì)在高考中有更多體現(xiàn)。下面以2020年全國(guó)卷Ⅰ中的相關(guān)試題為例，結(jié)合2014年全國(guó)卷中相關(guān)考點(diǎn)，了解高考試題的考查要點(diǎn)和考查形式。一、分析高考真題，梳理高考考點(diǎn)
考試與招生 2021年4期2021-04-16
- 與“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的一次邂逅
——從利用雜交瘤技術(shù)制備單抗說起
瘤細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞，利用雜交瘤細(xì)胞大量制備單克隆抗體。單克隆抗體的橫空出世，使精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)在癌癥的精準(zhǔn)治療方面，實(shí)現(xiàn)了質(zhì)的飛躍。2 走進(jìn)“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”的課堂不同于放療與化療，抗體是癌癥治療中的完美“武器”。利用抗體與癌細(xì)胞表面抗原類物質(zhì)發(fā)生特異性識(shí)別的原理，實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的精準(zhǔn)定位，再結(jié)合其他化學(xué)藥物將癌細(xì)胞置于死地，此舉對(duì)正常細(xì)胞的傷害極大減少。2.1 創(chuàng)新思維開辟新方向 早在19世紀(jì)后期，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)給小鼠多次注射特定抗原，會(huì)刺激小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從小鼠的
生物學(xué)通報(bào) 2020年2期2020-11-09
- 抗犬細(xì)小病毒單克隆抗體的制備與鑒定
、特異性較好的雜交瘤細(xì)胞株，為犬細(xì)小病毒病的診斷、治療及后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 主要材料毒株CPV-YN由本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定，pCI-NS和pCI-VP1表達(dá)質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建，SP2/0骨髓瘤細(xì)胞和F81細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存；DMEM培養(yǎng)基、完全弗氏佐劑、不完全弗氏佐劑、HAT、HT、50% PEG、山羊抗小鼠IgG-FITC和辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(IgG-HRP)均購(gòu)自Sigma公司；CPV單克隆抗體購(gòu)自北京金百奧生物技術(shù)有
畜牧與獸醫(yī) 2020年10期2020-09-27
- 細(xì)胞表面熒光免疫吸附法在豬流行性腹瀉病毒N 蛋白單克隆抗體雜交瘤篩選中的應(yīng)用
和防控[3]。雜交瘤細(xì)胞的篩選技術(shù)是制備良好MAb 的關(guān)鍵。因此，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)MAb 的制備技術(shù)和工藝不斷地完善和發(fā)展[4-5]。任瑞敏等采用半固體培養(yǎng)基，高通量篩選分泌目的MAb 的雜交瘤細(xì)胞，極大縮短其篩選的時(shí)間，但該方法存在無差別性選擇，后續(xù)MAb 驗(yàn)證的工作量大[6]。Dippong 等通過流式細(xì)胞分選技術(shù)，挑取單個(gè)抗原特異性標(biāo)記的雜交瘤細(xì)胞，提高了陽性克隆的篩選效率，但最終MAb 效價(jià)的評(píng)估還需借助ELISA 等方法完成[7]。近日Li 等開
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2020年3期2020-07-01
- 美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP4蛋白中和活性單克隆抗體制備及其抗原表位鑒定
FA)篩選陽性雜交瘤細(xì)胞。將PRRSV各結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，將收獲的表達(dá)PRRSV各結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞作為檢測(cè)抗原，參照上述IFA方法鑒定陽性雜交瘤細(xì)胞與其反應(yīng)的結(jié)構(gòu)蛋白。將分泌MAb的雜交瘤細(xì)胞體外連續(xù)傳10代并凍存于液氮中，每代雜交瘤細(xì)胞以及凍存6個(gè)月的陽性雜交瘤細(xì)胞均采用上述IFA檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞分泌MAb的穩(wěn)定性。根據(jù)文獻(xiàn)[5]制備小鼠腹水凍存于-70℃。制備的MAb按照試劑盒說明鑒定其亞類。1.3 MAb識(shí)別的抗原表位的鑒定及序列分析 已
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2019年6期2019-07-30
- 人突觸小體相關(guān)蛋白25單克隆抗體的制備及初步鑒定
免疫小鼠，利用雜交瘤技術(shù)制備鼠單抗。經(jīng)過2輪篩選獲得12株陽性雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)鑒定選擇14號(hào)雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行抗體的大量制備，純化后獲得高純度的單克隆抗體。1 材料與方法1.1 材料6～8周齡BALB/c小鼠購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；骨髓瘤Sp2/0細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存；大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；pET30a-SNAP25質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建；弗氏完全、不完全佐劑，TMB顯色液購(gòu)自Sigma公司；DMEM購(gòu)自Cell
生物技術(shù)通訊 2019年3期2019-07-16
- 赤羽病病毒N蛋白單克隆抗體的制備
分泌MAb 的雜交瘤細(xì)胞株的制備、效價(jià)及亞類的測(cè)定 在融合前24 h 制備飼養(yǎng)層細(xì)胞用于細(xì)胞融合，將SP2/0 細(xì)胞與效價(jià)最高的小鼠脾細(xì)胞以1:4混合，加入PEG-6000 融合后經(jīng)選擇性培養(yǎng)基HAT、HT 進(jìn)行培養(yǎng)[6]。待雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)至板底面積1/4～1/3 或培養(yǎng)液變微黃色后，通過建立的間接ELISA 方法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株，同時(shí)將SP2/0細(xì)胞培養(yǎng)上清作為陰性對(duì)照。選擇陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，直到篩選出穩(wěn)定分泌特異性MAb 的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2019年3期2019-05-21
- 豬流行性腹瀉病毒N蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
為免疫原,應(yīng)用雜交瘤技術(shù),獲得分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,制備PEDV特異性單克隆抗體,為PEDV診斷或檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)一步研發(fā)以及感染免疫機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 細(xì)胞與毒株 Vero細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；表達(dá)PEDV N蛋白的工程菌E.Coli BL21,由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)傳染病實(shí)驗(yàn)室制備。PEDV HBMC2012株(GenBank ID：JX163294),由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)傳染病實(shí)驗(yàn)室分離鑒定與保存。1.2 主
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2019年1期2019-05-21
- 有限稀釋法制備RecQ解旋酶單克隆抗體1C1及鑒定*＊
免疫小鼠，利用雜交瘤技術(shù)及有限稀釋法制備抗RecQ解旋酶的mAb，并考察其特異性及活性。1 材料和方法1.1 材料8～10周齡雌性BALB/c小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。純化后的重組大腸桿菌RecQ解旋酶、SP2/0骨髓瘤細(xì)胞為貴州醫(yī)科大學(xué)組織工程與干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中心儲(chǔ)存。胎牛血清、超級(jí)新生牛血清購(gòu)自杭州四季青公司，甲基纖維素、Freund完全佐劑(Freund＇s complete adjuvant，F(xiàn)CA)、Freund 不
貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2019年2期2019-03-12
- 抗人FXYD6特異性多肽單克隆功能性抗體制備及生物學(xué)作用鑒定
鼠。1.2.4雜交瘤細(xì)胞融合、篩選、鑒定 取加強(qiáng)免疫3 d后的BALB/c小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0小鼠骨髓瘤(1∶5)，應(yīng)用聚乙二醇(PEG)細(xì)胞融合法進(jìn)行融合，HAT培養(yǎng)基篩選融合細(xì)胞，有限稀釋法篩選陽性克隆，即用FXYD6重組蛋白及標(biāo)簽蛋白通過間接ELISA法篩選針對(duì)重組FXYD6抗原有免疫反應(yīng)的雜交瘤細(xì)胞株，同時(shí)去除對(duì)標(biāo)簽蛋白有免疫反應(yīng)的雜交瘤細(xì)胞株，即得到針對(duì)分泌FXYD6胞內(nèi)區(qū)或胞外區(qū)單抗的雜交瘤細(xì)胞株?？贵w亞類測(cè)定試劑盒檢測(cè)雜交瘤分泌抗體亞型，
重慶醫(yī)學(xué) 2018年10期2018-05-10
- 支氣管哮喘下調(diào)表達(dá)蛋白Annexin-1單克隆抗體的制備及其鑒定①
免疫，通過常規(guī)雜交瘤技術(shù)將免疫后的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞經(jīng)PEG融合，并間接用ELISA法篩選分泌抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞株，對(duì)陽性細(xì)胞株進(jìn)行亞克隆并培養(yǎng)，然后接種于小鼠腹腔，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生腹水，制備Annexin-1單克隆抗體。最后利用ELISA、Western Blot等技術(shù)鑒定所制備的單克隆抗體。結(jié)果：通過雜交瘤技術(shù)獲得5株分泌抗膜聯(lián)蛋白-1的雜交瘤細(xì)胞,分別命名為IA8、ID2、IE2、4E7和5G3,所產(chǎn)抗體,均為IgGI亞型,輕鏈均為k
黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2017年6期2018-01-04
- 抗羊肚菌菌絲特異性抗原單克隆抗體的制備與初步鑒定*
原單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為W2F3。經(jīng)傳代培養(yǎng)和亞克隆純化，得到穩(wěn)定分泌抗羊肚菌菌絲抗原單克隆抗體的細(xì)胞株，經(jīng)鑒定W2F3單克隆抗體抗體亞類為IgG1，輕鏈亞型為Kappa，初步確定該單抗對(duì)應(yīng)的抗原具有羊肚菌屬特異性。羊肚菌；特異性抗原；單克隆抗體羊肚菌 [Morchella esculenta(L.)Pers.]屬子囊菌亞門 （Ascomycotina） 盤菌綱 （Pezizomycetes） 盤菌目（Pezizales） 羊肚菌科（Morche
中國(guó)食用菌 2017年6期2017-12-28
- 分泌抗山羊γ干擾素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的制備與鑒定
擾素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的制備與鑒定張洪杰，桑鋒鋒，劉阿華，李言言，王 毅，陳德坤*(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100)為篩選分泌山羊γ干擾素(IFN-γ)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，以原核表達(dá)的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠，取其脾臟細(xì)胞與SP2/0瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，以間接ELISA方法篩選分泌山羊IFN-γ單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞，采用山羊外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ包被酶標(biāo)板對(duì)IFN-γ的特異性進(jìn)行鑒定，用試紙條對(duì)IFN-γ
動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2017年12期2017-12-26
- IL-17單克隆抗體的制備與鑒定
胞株。對(duì)獲得的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行染色體組型分析，并對(duì)其分泌的IL-17單克隆抗體進(jìn)行抗體特異性、抗體類別等分析。結(jié)果顯示，成功獲得了純化的山羊IL-17原核表達(dá)產(chǎn)物；篩選到1株能特異性分泌山羊IL-17單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株-B6,其分泌的單克隆抗體亞型為IgG1，抗體輕鏈為κ。山羊；IL-17單克隆抗體；雜交瘤細(xì)胞；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)白細(xì)胞介素17(IL-17)是一種主要由IL-17+淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，它通過誘導(dǎo)IL-6、IL-8和TNFα等細(xì)胞因子的
動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2017年11期2017-12-15
- 偽狂犬病病毒單克隆抗體制備及特征分析
附實(shí)驗(yàn)篩選陽性雜交瘤細(xì)胞并制備腹水，用病毒中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單克隆抗體（腹水）對(duì)PRV的中和作用。結(jié)果：通過細(xì)胞融合，共得到11株針對(duì)PRV的雜交瘤細(xì)胞。中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無論是對(duì)于PRV弱毒株Bartha-k61還是強(qiáng)毒株AV25，2株雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的腹水都表現(xiàn)為明顯的中和效應(yīng)；但2株單抗的中和能力不同，其中1株雜交瘤細(xì)胞腹水的中和效價(jià)為1∶16～1∶32，另1株的效價(jià)為1∶4。交叉反應(yīng)顯示，11株單克隆抗體中，2株與單純性皰疹病毒存在明顯的免疫反應(yīng)，1株與猴
生物技術(shù)通訊 2017年4期2017-11-06
- 鴨星狀病毒單克隆抗體的制備及鑒定
F2蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞。取E5C1株和C10F6株進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，2株單抗均為IgM，輕鏈均為κ型；細(xì)胞上清和小鼠腹水的效價(jià)分別為105和106以上；免疫印跡試驗(yàn)表明，2株單抗均能識(shí)別重組ORF2蛋白；特異性試驗(yàn)表明，E5C1株雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清只與DAstV反應(yīng)。鴨星狀病毒 ； 單克隆抗體 ； ORF2蛋白鴨病毒性肝炎(Duck viral hepatitis, DVH)是危害養(yǎng)鴨業(yè)的高度致死性傳染病，其病原包括小RNA病毒科禽肝病毒屬的鴨甲肝病
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2017年4期2017-06-29
- 不同氮添加對(duì)入侵植物瘤突蒼耳和本地近緣植物蒼耳及兩者雜交種的生長(zhǎng)影響
兩者的雜交種(雜交瘤突蒼耳和雜交蒼耳)在植物形態(tài)、生物量及分配、植株生長(zhǎng)和葉片光合特性等方面的差異，探討這些差異與入侵性的關(guān)系。結(jié)果表明，氮添加顯著提高了瘤突蒼耳、蒼耳和雜交種的莖粗、總?cè)~面積、總生物量、根生物量、莖生物量、根生物量比和根冠比，顯著降低了4種植株的葉根比；瘤突蒼耳各指標(biāo)隨氮含量增加而變化明顯，蒼耳和雜交蒼耳的莖生物量比和葉生物量比下降顯著；瘤突蒼耳的凈同化速率在不同氮處理下均顯著高于蒼耳，但葉面積比均顯著低于蒼耳；雜交后代植株的相對(duì)生長(zhǎng)速率
草業(yè)學(xué)報(bào) 2017年5期2017-05-23
- 重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用
細(xì)胞融合、活性雜交瘤細(xì)胞篩選以及抗體純化等。江南大學(xué)胥傳來教授團(tuán)隊(duì)發(fā)展了基于理論模型來預(yù)測(cè)抗原抗體配對(duì)的新方法，創(chuàng)制了重金屬鉛、鎘、汞等元素的免疫分析試劑和產(chǎn)品。設(shè)計(jì)出真菌毒素、抗菌劑、殺蟲劑、抗生素、激素、病原微生物以及非法添加物等物質(zhì)的特異性新型半抗原和完全抗原，在抗體篩選以及抗原、抗體配對(duì)過程中引入食品基質(zhì)，有效提升了檢測(cè)試劑的基質(zhì)耐受性，獲得了200余種優(yōu)良抗體和配對(duì)抗原，解決了抗體和抗原在實(shí)際檢測(cè)過程中耐受性差，易失效的難題，提升了快速檢測(cè)結(jié)果的
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2017年3期2017-04-07
- 抗豬PD-1單克隆抗體的制備與其生物學(xué)特性鑒定
備飼養(yǎng)細(xì)胞。用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)融合免疫BALB/c小鼠的脾細(xì)胞和NS0細(xì)胞，融合好放置37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2.2 陽性雜交瘤細(xì)胞的篩選和克隆 融合細(xì)胞培養(yǎng)10 d吸取少量上清用于篩選；14 d陽性孔半量更換HT培養(yǎng)基，同時(shí)對(duì)陽性孔細(xì)胞轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板擴(kuò)大培養(yǎng)，準(zhǔn)備克隆化，間接ELISA法篩選雜交瘤培養(yǎng)上清液，對(duì)篩選的特異性較強(qiáng)的陽性孔轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板中擴(kuò)大培養(yǎng)克隆化。直至所有克隆孔陽性率為100%時(shí)，定雜交瘤細(xì)胞株。1.2.3 腹水的
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2017年12期2017-02-06
- 混合培養(yǎng)基模式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞表達(dá)單克隆抗體
培養(yǎng)基模式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞表達(dá)單克隆抗體黃亞杰1,2，朱光凱2，劉 珊2，趙永強(qiáng)2，謝 波2，劉道軍1(1.汕頭大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，汕頭 515041；2.中國(guó)科學(xué)院過程工程研究所 生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100190)采用混合培養(yǎng)基模式將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行減血清懸浮馴化培養(yǎng)，通過優(yōu)化提高單克隆抗體的表達(dá)量，并進(jìn)行抗體的分離純化。在雜交瘤細(xì)胞懸浮培養(yǎng)優(yōu)化過程中，最終確定的血清濃度為2%胎牛血清，培養(yǎng)基配比為RPM1640：SFM4CHO：OptiCHO(4.5：
生物學(xué)雜志 2016年6期2016-12-23
- 抗雞lgMμ鏈單克隆抗體的制備及生物學(xué)特性鑒定
鏈單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株（1H2、1D10）。這2株雜交瘤細(xì)胞株連續(xù)傳代4個(gè)月，并經(jīng)液氮凍存5個(gè)月后復(fù)蘇培養(yǎng)，仍能穩(wěn)定地分泌特異性McAb。1H2、1D10腹水ELISA效價(jià)分別為1：106、1：107，亞類鑒定均為IgG1κ型。間接ELISA檢測(cè)顯示，這兩株單抗均與雞血清中的天然IgM發(fā)生特異性反應(yīng)，可用于雞血清中IgM的快速檢測(cè)，對(duì)于各種傳染病的早期診斷具有重要意義。原核表達(dá)雞IgM μ鏈蛋白 單克隆抗體 雞血中的天然IgMIgM是機(jī)體初次體液免疫應(yīng)
中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘 2016年5期2016-11-24
- 雞新城疫病毒(NDV-XX08)單克隆抗體的制備與鑒定
,挑選效價(jià)高的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆和亞克隆,建立陽性雜交瘤細(xì)胞株,最終得到一株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞,命名為4F12.采用體外細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)誘生腹水的方法制備了其McAb.對(duì)獲得的單克隆抗體采用ELISA,HI,Western-Blotting方法進(jìn)行鑒定.雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水的ELISA效價(jià)分別為1∶160和1∶3.2X104.獲得的單克隆抗體與NDV具有良好的特異性反應(yīng),與雞胚陰性尿囊液、雞正常組織、雞IgG、雞傳染性囊病病毒、雞傳染性支氣管炎病毒
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2016年2期2016-09-06
- 利用改良電融合法制備雜交瘤細(xì)胞的試驗(yàn)探索
良電融合法制備雜交瘤細(xì)胞的試驗(yàn)探索吳夢(mèng)1，2，劉作華1，2，3，羅林1，丁玉春1，2，葛良鵬*1，2，3 （1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 榮昌 402460；2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 榮昌 402460；3.養(yǎng)豬科學(xué)重慶市市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 榮昌 402460）摘要：目的：運(yùn)用改良電融合法提高雜交瘤的融合效率，以獲得更多的雜交瘤克隆。方法：將SP2/0細(xì)胞和脾細(xì)胞分別用NHS_d_PEG24_biotin孵育30min，再將脾細(xì)胞用avidin孵
四川畜牧獸醫(yī) 2016年7期2016-08-03
- 伏馬菌素B1單克隆抗體的制備及免疫學(xué)檢測(cè)方法初步應(yīng)用
1抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞株；采用動(dòng)物體內(nèi)誘生腹水方法制備出抗FB1單抗，并鑒定單抗的各種性能；初步建立FB1免疫學(xué)檢測(cè)方法。結(jié)果得到1株穩(wěn)定分泌抗FB1單抗的雜交瘤細(xì)胞株2E11－H3，該細(xì)胞株分泌的mAbs的效價(jià)高達(dá)1∶1.02×106，親和力常數(shù)平均值為7.98×1010L·mol－1，亞型為IgG3。FB1mAbs的工作濃度為1∶6.0×104，與FB1發(fā)生特異性反應(yīng)，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)得IC50＝43.65ng·mL－1；與FB1結(jié)構(gòu)類似物FB2
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2016年5期2016-07-16
- 單增李斯特菌單克隆抗體的研制及特性分析
/c小鼠，運(yùn)用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合，制備得到抗單增李斯特菌的單克隆抗體，并對(duì)其進(jìn)行免疫學(xué)特性分析。結(jié)果表明，成功篩選4株能穩(wěn)定分泌抗單增李斯特菌的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，腹水抗體效價(jià)為1∶102 400～1∶409 600，免疫球蛋白亞型為IgG1、Ig2a、Ig2b，親和力常數(shù)在1×107～1×1010L/mol；經(jīng)測(cè)定分析出最佳配對(duì)抗體；并與綿羊李斯特菌、英諾克李斯特菌及大腸桿菌、沙門氏菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌等菌屬無明顯交叉反應(yīng)；進(jìn)行雙抗體
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2016年2期2016-05-23
- 抗山羊痘病毒P32蛋白雜交瘤細(xì)胞的構(gòu)建及其單克隆抗體的制備
病毒P32蛋白雜交瘤細(xì)胞的構(gòu)建及其單克隆抗體的制備陳伯祥1，楊 明1，賀泂杰2，李 杰1（1.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所，甘肅平?jīng)?744000；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅蘭州 730050）本研究旨在以純化的山羊痘病毒P32蛋白為免疫原，構(gòu)建雜交瘤細(xì)胞株，制備P32蛋白單克隆抗體。用純化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后，按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞融合，構(gòu)建抗山羊痘病毒P32蛋白的雜交瘤細(xì)胞，制備P32蛋白單克隆抗體，獲得4株能識(shí)別重組蛋白且特異性強(qiáng)
中國(guó)動(dòng)物檢疫 2015年12期2015-11-03
- 關(guān)于“單克隆抗體”中相關(guān)問題的探討
選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞？在小鼠B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞混合懸浮液中，放置了多個(gè)骨髓瘤細(xì)胞與多個(gè)多種B淋巴細(xì)胞，由于動(dòng)物細(xì)胞融合是一個(gè)隨機(jī)的過程，所以經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)。如果只考慮兩兩融合的情況，會(huì)有融合的骨髓瘤細(xì)胞—骨髓瘤細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞—B淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞—骨髓瘤細(xì)胞以及未融合成功的單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞、單個(gè)的B淋巴細(xì)胞。那么如何從眾多的細(xì)胞中篩選出雜交瘤細(xì)胞呢？從眾多類型的細(xì)胞中篩選出雜交瘤細(xì)胞，普遍采用的HAT選擇性培養(yǎng)基，也就是在普通的
中學(xué)生物學(xué) 2015年11期2015-09-10
- 流產(chǎn)嗜性衣原體MIP蛋白單克隆抗體的制備及特性鑒定
。1.2.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選及雜交瘤細(xì)胞株的建立用純化的MIP蛋白作為包被抗原，以融合細(xì)胞的上清液為一抗，間接ELISA檢測(cè)篩選分泌抗MIP蛋白抗體的陽性克隆。將初步篩選得到的疑似陽性細(xì)胞克隆株，用HT培養(yǎng)基有限稀釋后，再進(jìn)行3次亞克隆，用同樣的方法篩選，至陽性率達(dá)到100%，將所得的細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)，建株保存，培養(yǎng)上清即含有大量單克隆抗體。1.2.4 抗MIP蛋白單克隆抗體的特性鑒定1.2.4.1 間接ELISA方法檢測(cè)抗體效價(jià) 以純化的重組MIP蛋白包
中國(guó)獸藥雜志 2015年3期2015-05-29
- 山羊痘病毒ORF122 蛋白雜交瘤細(xì)胞的構(gòu)建及其單克隆抗體的制備
RF122蛋白雜交瘤細(xì)胞，制備單克隆抗體，為進(jìn)一步建立山羊痘的檢測(cè)方法奠定工作基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 毒株與菌株山羊痘毒株(GTPV-S-1)、羊口瘡病毒株、鴿新城疫病毒株、雞減蛋綜合癥病毒株、S.enteritidis和E.coli由甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所保存；山羊痘病毒ORF122蛋白抗原由本課題組提供。1.1.2 細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SP2/0細(xì)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心；BALB/C小鼠（18—20g、6—8周齡、
中獸醫(yī)學(xué)雜志 2015年10期2015-04-20
- 偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定
V單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為建立特異性強(qiáng)、敏感性高、簡(jiǎn)便、快速的抗原捕獲ELISA診斷方法提供了條件。1 材料與方法1.1 毒株、細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和其他試劑 骨髓瘤細(xì)胞、PRV、豬睪丸細(xì)胞(ST)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)均為武漢中博生物股份有限公司保存;8周左右的雌性BALB/c購(gòu)自武漢生物制品研究所。DMEM培養(yǎng)基(Hyclone公司)、次黃嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶(HAT，Sigma公司)、次
中國(guó)獸藥雜志 2014年3期2014-11-29
- Corning? hybrigro SF?培養(yǎng)基對(duì)提高雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)密度和抗體產(chǎn)量的研究
?培養(yǎng)基對(duì)提高雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)密度和抗體產(chǎn)量的研究Hilary Sherman，Mark E. Rothenberg200040 上海，康寧生命科學(xué)亞洲技術(shù)中心近幾年，抗體作為生物類治療藥物的需求顯著增長(zhǎng)。因此，提高抗體生產(chǎn)效率并且降低生產(chǎn)成本愈發(fā)必要。而康寧 hybrigro SF?培養(yǎng)基的開發(fā)，正是致力于在不使用昂貴血清的情況下仍能夠高效培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，提高抗體產(chǎn)量。我們使用兩種不同的雜交瘤細(xì)胞株，并通過與兩種商業(yè)化生產(chǎn)的無血清培養(yǎng)基以及一種被廣泛使用的
中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù) 2014年4期2014-10-31
- 不同載體蛋白偶聯(lián)制備促紅細(xì)胞生成素二聚體單克隆抗體的選擇優(yōu)化
備技術(shù)篩選獲得雜交瘤細(xì)胞；ELISA法鑒定雜交瘤細(xì)胞的特性；分析比較不同載體蛋白構(gòu)建單克隆抗體的差異與效果。結(jié)果共篩選獲得了5株雜交瘤細(xì)胞，5株雜交瘤細(xì)胞均能分泌EPO dimer抗體。經(jīng)過進(jìn)一步的特異性鑒定、亞型鑒定以及效價(jià)鑒定后，有4株雜交瘤細(xì)胞被挑選進(jìn)行大量抗體制備，為后期臨床基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)提供材料。4株雜交瘤分別為克隆S-18-2，其亞型為IgG2b，κ；克隆S-369-7，其亞型為IgG1，κ；克隆S-410-3，其亞型為IgG1，κ；克隆S-514-
中國(guó)生化藥物雜志 2014年8期2014-09-14
- 癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3單克隆抗體的制備及應(yīng)用*
3單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，間接免疫熒光檢測(cè)肝癌細(xì)胞中GPC3表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建了GPC3原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)重組GPC3蛋白。應(yīng)用單克隆抗體雜交瘤技術(shù)成功制備1株穩(wěn)定分泌抗GPC3單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，通過Western blot鑒定具有高度的特異性，間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示單克隆抗體能與HepG2細(xì)胞內(nèi)GPC3特異性結(jié)合。結(jié)論成功制備出特異性抗人GPC3單克隆抗體。磷脂酰肌醇蛋白聚糖類；抗體,單克??；重組融合蛋白質(zhì)類；雜交瘤；細(xì)胞系；癌
天津醫(yī)藥 2014年3期2014-08-08
- 孕馬尿中雌酮硫酸鈉單克隆抗體的研制*
A)方法;再以雜交瘤抗體技術(shù)獲得抗ESS單克隆抗體細(xì)胞株。結(jié)果ESS抗原5次以初次免疫200 μg,加強(qiáng)免疫100 μg的免疫劑量多點(diǎn)注射小鼠背部皮下免疫為小鼠最佳免疫方法;確定10 μg·L-1為抗原包被濃度,1∶2 000的一抗血清稀釋倍數(shù);細(xì)胞融合率達(dá)90.2%,ELISA法篩選陽性率為4.4%,并篩選得到兩株特異性較好的細(xì)胞株2C8和8A7。結(jié)論該研究篩選建立了ESS小鼠免疫方法及靈敏度高、特異性好的間接ELISA篩選體系,可用于ESS單克隆抗體的
醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2014年8期2014-05-13
- 抗新型隱球菌莢膜相關(guān)蛋白CAP10單克隆抗體的制備及鑒定
效價(jià)。1.4 雜交瘤細(xì)胞的融合及篩選參考文獻(xiàn)[10]的方法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞融合與篩選。簡(jiǎn)言之，無菌條件下取免疫小鼠脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，用PEG-1500按常規(guī)方法與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，用含HAT的1640完全培養(yǎng)基置37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱中；第4 d換液，7～10 d后以ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)上清有無抗體產(chǎn)生，篩選陽性孔；進(jìn)一步采用有限稀釋法對(duì)陽性克隆進(jìn)行連續(xù)3次的亞克隆，每次亞克隆采用含HT的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)7～10 d，篩選出穩(wěn)定、高水平表
生物技術(shù)通訊 2014年2期2014-05-04
- 細(xì)胞支原體污染清除方法比較及清除后的應(yīng)用
體感染。結(jié)論 雜交瘤細(xì)胞清除支原體感染后，制備所得抗體應(yīng)用于相應(yīng)平臺(tái)可見，清除劑法對(duì)細(xì)胞損傷較大，抗體相應(yīng)功能下降；而實(shí)體瘤法教溫和，抗體相應(yīng)功能保持較完好。支原體；雜交瘤細(xì)胞；抗體支原體是一種大小僅為0.2～0.3 μm，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22～0.45 μm）的原核生物。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到30%～60%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題[1]。當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染是很普遍的問題，做好支原
中國(guó)醫(yī)藥指南 2014年30期2014-04-21
- 大菱鲆免疫球蛋白M(IgM)單克隆抗體的制備與特性鑒定
技術(shù)生產(chǎn)融合的雜交瘤細(xì)胞，篩選分泌大菱鲆IgM的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞，制備并生產(chǎn)大菱鲆IgM單克隆抗體。2 材料與方法2.1 免疫原制備純化的大菱鲆血清IgM由本實(shí)驗(yàn)室制備并保存[7]。將純化的大菱鲆IgM分別與等體積的弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑（Pierce，USA）混勻乳化后免疫小鼠。2.2 免疫動(dòng)物選用6周齡BALB/C雌性小鼠進(jìn)行免疫，免疫程序見表1。表1 免疫程序Table 1 The immunization schedule2.3 飼養(yǎng)細(xì)胞
中國(guó)工程科學(xué) 2014年9期2014-01-02
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體的制備和鑒定
的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，為PRRSV的臨床快速診斷商品化試劑的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 毒株、細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和其他試劑 骨髓瘤細(xì)胞、PRRSV、猴腎細(xì)胞(Marc-145)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)均為武漢中博生物股份有限公司保存;8周左右的雌性BALB/c購(gòu)自武漢生物制品研究所;DMEM培養(yǎng)基(Hyclone公司)、次黃嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶與次黃嘌呤胸腺嘧啶(HT，Sigma公司)、辣根過氧化
中國(guó)獸藥雜志 2013年12期2013-11-23
- 鴨腸炎病毒VP5蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
篩選培養(yǎng)液。待雜交瘤細(xì)胞長(zhǎng)至孔底部的1/3～1/2時(shí)，于換液后3～4d取細(xì)胞培養(yǎng)上清100μL，用建立的ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，以免疫小鼠血清為陽性對(duì)照、未免疫小鼠血清及SP2/0上清為陰性對(duì)照。將ELISA檢測(cè)陽性孔的細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，采用有限稀釋法進(jìn)行。亞克隆3～4次，直至所有克隆化細(xì)胞孔檢測(cè)陽性率為100%。1.5 單克隆抗體腹水的制備 給經(jīng)產(chǎn)BALB/c小鼠腹腔注射液體石蠟，0.5mL/只。1周后，腹腔注射雜交瘤細(xì)胞懸液（1～2×106個(gè)/mL）
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2013年1期2013-11-22
- β2糖蛋白Ⅰ單克隆抗體的制備與鑒定①
2 細(xì)胞融合和雜交瘤細(xì)胞的克隆化 SP2/0細(xì)胞于融合前擴(kuò)大培養(yǎng)，挑選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于融合。小鼠摘眼球取血，留血清作陽性對(duì)照，小鼠處死后取脾細(xì)胞，將脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞以4∶1混合于融合管，離心，去上清，沉淀于37℃水浴中滴加1 ml 50%PEG1450，60秒內(nèi)均勻加完，立即于90秒內(nèi)滴加30 ml無血清RPMI1640培養(yǎng)基終止反應(yīng)，37℃水浴中靜置10分鐘，離心去上清，融合細(xì)胞用HAT培養(yǎng)基稀釋后鋪入加有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板，置于37℃、5%C
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2013年6期2013-09-12
- 抗KDR單克隆抗體的制備＊
作用，我們采用雜交瘤技術(shù)制備能穩(wěn)定分泌抗KDR單克隆抗體（Monoclonal Antibody，mAb）的雜交瘤細(xì)胞，以期獲得能抑制VEGFA生物學(xué)效應(yīng)的抗KDR mAb。1 材料與方法1.1 材料8～10周齡、18～20g雌性清潔級(jí)BALB／c小鼠6只，購(gòu)自四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SYXK（川）2009－045。小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2／0－Ag14、谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶蛋白（Glutathione S－transferases，GST）、GST－KDR
四川生理科學(xué)雜志 2013年1期2013-07-16
- 小鼠抗食蟹猴IgG單克隆抗體的制備
000融合制備雜交瘤細(xì)胞，利用間接ELISA、Western blot等方法進(jìn)行篩選、鑒定。結(jié)果 得到5株陽性雜交瘤，分別命名為2B6、2B7、2D9、3B2、5E4，并且5株雜交瘤分泌的抗體均與恒河猴的 IgG或血清發(fā)生交叉反應(yīng)，而與其他物種如東北虎、犬等動(dòng)物的IgG或血清無交叉反應(yīng)。結(jié)論 5株雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體(McAb)具有較好免疫活性，且能長(zhǎng)期、穩(wěn)定地分泌抗體。此項(xiàng)研究工作為后續(xù)研究食蟹猴、恒河猴傳染病血清學(xué)診斷方法奠定基礎(chǔ)。食蟹猴;IgG;單
中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志 2012年5期2012-12-01
- 重組溶血素蛋白用于單增李斯特菌快速檢測(cè)的效果
LISA法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的篩選培養(yǎng) 脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)PEG處理后形成多種細(xì)胞的混合體，只有脾細(xì)胞與骨髓細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞才有意義。雜交瘤細(xì)胞在HAT選擇培養(yǎng)液中可以生長(zhǎng)繁殖。前幾天用HAT培養(yǎng)液培養(yǎng)融合細(xì)胞，第8天后每天半量換HAT培養(yǎng)液，維持10 d后換一般培養(yǎng)液。當(dāng)細(xì)胞鋪滿管底1/5時(shí)，開始檢測(cè)特異性抗體，用ELISA篩選出陽性克隆。篩選方法：將每孔100 μl細(xì)胞培養(yǎng)液加入到細(xì)菌表面抗原包被好的酶標(biāo)板上，同時(shí)以免疫小鼠血清為陽性對(duì)照(1∶1 0
中國(guó)老年學(xué)雜志 2012年15期2012-11-20
- 重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)單克隆抗體的制備及鑒定①
道，本文擬應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備鼠抗rLZ-8的單克隆抗體，為rLZ-8藥效學(xué)的深入研究奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 主要藥品和試劑 重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)，本室提供;DMDM 細(xì)胞培養(yǎng)液、HAT(次黃嘌呤、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷)，Gibco公司，美國(guó);羊抗兔辣根過氧化物IgG(IgG-HRP)、弗氏完全佐劑(CFA)、弗式不完全佐劑、PEG4000、OPD(鄰苯二胺)、抗體亞類鑒定試劑盒，Sigma公司，美國(guó);牛血清白蛋白(BSA)，Roch
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2012年1期2012-07-30
- 阪崎腸桿菌單克隆抗體的制備與特性鑒定①
道。本研究利用雜交瘤技術(shù)制備出能穩(wěn)定分泌抗ES的單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)的細(xì)胞株，為今后阪崎腸桿菌快速檢測(cè)試劑盒的研制奠定研究基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1材料 6周齡雌性BALB/c小鼠，體重18～20克，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;小鼠骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0)，中國(guó)武漢典型培養(yǎng)物保藏中心;阪崎腸桿菌，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;PEG1000、HAT、HT、TMB為 Sigma公司產(chǎn)品;DMEM、胎牛血清為Gibco公司產(chǎn)品
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2012年9期2012-01-23
- H5N1亞型禽流感病毒血凝素蛋白單克隆抗體的制備及鑒定
，應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備了針對(duì)其HA蛋白的單克隆抗體(MAb)，對(duì)快速檢測(cè)具有該抗原類型的AIV有著重要的應(yīng)用價(jià)值[7]。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 AIV H5N1GD261分離株、骨髓瘤SP2/0細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存；4周齡～6周齡及6周齡～10周齡清潔級(jí)BALB/c雌鼠購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、HAT選擇培養(yǎng)基、HT培養(yǎng)基和PEG(MW1500)融合試劑、秋水仙素、滅活劑β-丙內(nèi)酯、篩選劑8-
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2011年6期2011-05-21
- 豬細(xì)小病毒單克隆抗體的制備和鑒定
V的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，為豬細(xì)小病毒病的臨床快速診斷商品化試劑研發(fā)奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 毒種、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物PPV、豬腎細(xì)胞（PK-15）和 SP2/0細(xì)胞（Sp2/0-Ag14）均購(gòu)自美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒I型（PCV-1）、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV-2）、乙腦病毒（JEV
中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志 2011年9期2011-02-12
- 抗鹿源牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒特異性單克隆抗體的制備與鑒定
定分泌MAb的雜交瘤細(xì)胞株2A3和4B12。通過間接ELISA檢測(cè)，MAb效價(jià)為：上清液及腹水分別為 1∶512、1∶640和 1∶1 2800、1∶16 000；MAb的亞類鑒定結(jié)果表明，2株雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體亞類均為IgGl亞類；經(jīng)ELISA測(cè)定，2A3和4B12與BVDV C24V株、HCV、BDV、PRV均不發(fā)生交叉反應(yīng)，但與BVDV CCSYD株發(fā)生交叉反應(yīng)；IFA試驗(yàn)結(jié)果顯示，4B12和2A3與接種BVDV N71株病毒液的細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生較強(qiáng)的
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2010年8期2010-09-10
- 流行性乙型腦炎病毒E蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
4 細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞的篩選及純化 細(xì)胞融合過程按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[6]進(jìn)行。以純化的E蛋白作為包被抗原,用間接ELISA方法篩選陽性細(xì)胞克隆株。將經(jīng)初步篩選得到的可疑陽性細(xì)胞克隆株用有限稀釋法再進(jìn)行3～5次單克隆,同時(shí)用間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè),直至所有克隆化細(xì)胞孔檢測(cè)陽性率為100%時(shí),即可確定已獲得穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。單克隆經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)凍存于液氮中。1.5 單克隆抗體腹水的制備 取成年的BALB/c小鼠,于腹腔內(nèi)預(yù)先注入0.5mL的弗氏
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2010年1期2010-08-08
- 諾氟沙星單克隆抗體的制備及其特性鑒定
LX MAb的雜交瘤細(xì)胞株，為免疫學(xué)檢測(cè)方法的建立和擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)檢測(cè)產(chǎn)品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 試劑與溶液 鹽酸諾氟沙星為中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所產(chǎn)品；BSA和OVA為Pierce產(chǎn)品；完全佐劑(Freund's complete adjuvant,FCA)、不完全佐劑(Freund's incomplete adjuvant,FIA)、細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640、選擇培養(yǎng)基HAT、HT和PEG-1500為GIBCO產(chǎn)品；新生牛血清為杭州四季
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2010年9期2010-08-06
- 豬細(xì)小病毒核衣殼VP2蛋白單克隆抗體的制備及部分特性鑒定
抗和分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行鑒定,為該病及其病原的基礎(chǔ)性或應(yīng)用性研究提供重要的研究工具。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)8～10周齡BALB/c小鼠,購(gòu)自黑龍江省醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2 免疫原 表達(dá)豬細(xì)小病毒VP2蛋白重組干酪乳桿菌pPG-1-VP2-E290/L.casei393,由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建[3]表達(dá)的VP2蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳,切膠純化,PBS稀釋成所需濃度。1.3 細(xì)胞系 SP2/0骨髓瘤細(xì)胞、ST傳代細(xì)胞,購(gòu)自武
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2010年5期2010-06-01
- 抗雞傳染性支氣管炎病毒核蛋白單克隆抗體的制備及抗原表位鑒定
]。本研究應(yīng)用雜交瘤技術(shù)獲得分泌抗IBV N蛋白MAb的雜交瘤細(xì)胞株，為建立雞傳染性支氣管炎(IB)檢測(cè)方法及相關(guān)研究提供依據(jù)。1 材料和方法1.1 主要材料 IBV tl/CH/LDT3/03[3]、IBV分離株CK/CH/LDL/97Ⅰ、IBN、M41、CK/CH/LSD/05Ⅰ、CK/CH/LHN/00Ⅰ和CK/CH/LAH/08Ⅱ的N蛋白、BL21(DE3)和SP2/0細(xì)胞均由本實(shí)驗(yàn)室保存；雌性BALB/c小鼠由哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；p
中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2010年9期2010-05-21
- 雜交瘤研究中染色體分析的方法及其意義
，易文，褚嘉祐雜交瘤研究中染色體分析的方法及其意義林克勤，易文，褚嘉祐【摘要】目的探討細(xì)胞同步化染色體高分辨技術(shù)檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞染色體的可行性。方法選擇小鼠骨髓瘤 SP-2/O 細(xì)胞株、人淋巴母細(xì)胞CKM-8 細(xì)胞株、人骨髓瘤 KM 細(xì)胞株、抗小鼠胰腺癌鼠-鼠雜交瘤細(xì)胞株，體外培養(yǎng) 24 ～ 48 h。對(duì) 4 種細(xì)胞株分別進(jìn)行同步化處理，加入 5-氟脫氧尿嘧啶核苷和尿嘧啶培養(yǎng)16 ～ 18 h 后，加入 5-溴脫氧尿嘧啶核苷，并在收集細(xì)胞前加入秋水酰胺；收集
中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù) 2010年5期2010-04-06