復(fù)性
- 基于兩親性超分子的共價水凝膠輔助蛋白折疊
菌酶進(jìn)行體外折疊復(fù)性研究. 結(jié)果表明, UPy-C6-HBA含量、 凝膠用量、 溶菌酶濃度和復(fù)性溫度對復(fù)性效果均有影響. 當(dāng)環(huán)境溫度為25 ℃時, 含UPy-C6-HBA單體15%（質(zhì)量分?jǐn)?shù))的水凝膠可以使0.25 mg/mL溶菌酶的復(fù)性率提高41%. 研究結(jié)果表明, 向凝膠體系中加入UPy-C6-HBA單體顯著提高了溶菌酶的復(fù)性率, 對于高濃度變性溶菌酶的復(fù)性具有重要意義.2-{6-[3-(6-甲基-4-氧代-1,4-二氫嘧啶-2-基)脲基]己烷氨甲酰氧
高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報 2023年11期2023-11-24
- 溫度響應(yīng)的黃曲霉毒素B1納米抗體重組表達(dá)、復(fù)性及生物活性
種蛋白分別以稀釋復(fù)性、ITC純化、透析復(fù)性、柱上復(fù)性的方式進(jìn)行復(fù)性。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分析4 種復(fù)性方式得到4 種蛋白純度與含量，間接競爭酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）測定其IC50差異，相對濁度分析測定其相變溫度，圓二色譜分析其二級結(jié)構(gòu)組成
食品科學(xué) 2023年18期2023-10-21
- 性善情擾與息情復(fù)性：李翱《復(fù)性書》思想分析
分析和探究，著《復(fù)性書》，意圖以此教化百姓?！?span id="j5i0abt0b" class="hl">復(fù)性書》以“性”與“情”為主體，對“性”“情”及其關(guān)系進(jìn)行闡釋，其目的在于恢復(fù)人的本性，繼承并發(fā)展儒家的正統(tǒng)思想。《復(fù)性書》主要以《中庸》為藍(lán)本，融匯《易》、《詩經(jīng)》等經(jīng)典，是對儒家先賢思想的繼承和進(jìn)一步發(fā)展?！?span id="j5i0abt0b" class="hl">復(fù)性書》有上、中、下三篇。上篇借圣人與百姓的差異性，闡述“性情”問題產(chǎn)生的原因，直言其寫作的緣由；中篇通過問答的方式，借用各種經(jīng)典文集，論述其“復(fù)性”的方法；下篇雖極為簡短，卻清晰地表述了“復(fù)性”的意義
華夏文化 2022年1期2022-11-23
- scFv-DEC205-Trap重組包涵體靶向抗原復(fù)性及過程的優(yōu)化①
的雜質(zhì)，方便后續(xù)復(fù)性步驟［5-6］。包涵體在溶解的過程中高級結(jié)構(gòu)遭到破壞，從而失去了生物活性，因此對重組蛋白進(jìn)行復(fù)性操作成為重中之重。復(fù)性過程主要是變性的蛋白重新折疊的過程，但是在這個過程中會發(fā)生錯誤折疊和聚集等現(xiàn)象。傳統(tǒng)的蛋白復(fù)性方法主要包括稀釋復(fù)性法、透析復(fù)性法、超濾復(fù)性法，近幾年來柱層析復(fù)性法、低分子添加物輔助復(fù)性法和分子伴侶輔助復(fù)性法等成為研究熱點［7-8］。稀釋復(fù)性法的優(yōu)點是簡單、可使還原劑及變性劑下降到一定濃度、復(fù)性蛋白易于后續(xù)檢測。缺點是需要
中國免疫學(xué)雜志 2022年15期2022-10-02
- 青海血蜱重組rHq002 蛋白包涵體的純化
體進(jìn)行變性溶解后復(fù)性，可獲得具有生物活性的重組蛋白。其具體過程為：將含有包涵體的大腸埃希菌裂解，經(jīng)低速離心后棄上清液留沉淀，用含洗滌劑的洗滌液洗滌沉淀后獲得包涵體粗提物；用增溶劑高濃度鹽酸胍或尿素通過破壞蛋白質(zhì)間的聚集達(dá)到增溶重組蛋白的目的；然后復(fù)性，通過將增溶劑的濃度降低或者完全清除，使蛋白恢復(fù)天然狀態(tài)。為了提高蛋白的復(fù)性效率和減少聚集現(xiàn)象的產(chǎn)生，會添加少量還原劑、小分子聚合物、表面活性劑或者分子伴侶等。蜱是體外吸血節(jié)肢動物，可攜帶細(xì)菌、病毒、立克次體等
中國生物制品學(xué)雜志 2022年1期2022-01-19
- 表達(dá)重組包涵體蛋白的變性溶解及復(fù)性研究
結(jié)合力，以至于使復(fù)性過程更加有效。這種情況不包括洗滌劑在內(nèi)。洗滌劑與蛋白的結(jié)合力決定于其臨界膠團(tuán)濃度(CMC)的大小。這種膠團(tuán)結(jié)合往往在臨界膠團(tuán)濃度之上，即變性非折疊蛋白溶解性好的條件下發(fā)生，而這種膠團(tuán)結(jié)合不能或者很少能在臨界膠團(tuán)濃度之下，即蛋白溶解性差的條件下發(fā)生[2]。這表明，只有在洗滌劑存在的條件下，蛋白復(fù)性過程才能發(fā)生，否則，去除洗滌劑后，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和溶解度又將形成原包涵體。2 蛋白復(fù)性復(fù)性過程是蛋白質(zhì)構(gòu)象從展開狀態(tài)到折疊狀態(tài)的變化過程。包涵體只能
今日畜牧獸醫(yī) 2021年7期2021-03-28
- 小切口復(fù)位克氏針內(nèi)固定治療難復(fù)性兒童肱骨髁上骨折
病高峰[1]。難復(fù)性兒童肱骨髁上骨折一般采用手術(shù)治療，但手術(shù)方式爭議較多。2012年1月～2018年12月，我科采用外側(cè)小切口輔助復(fù)位克氏針內(nèi)固定治療24例難復(fù)性兒童髁上骨折，取得了滿意的療效，報道如下。1 材料與方法1.1 病例資料本組24例，男15例，女9例，年齡2～14歲。Gartland分型：Ⅱ型2例，Ⅲ型22例。左側(cè)9例，右側(cè)15例。2例合并橈神經(jīng)損傷。致傷原因：摔傷20例，高處跌落傷4例。受傷至手術(shù)時間8 h～11 d。1.2 手術(shù)方法全身麻醉
臨床骨科雜志 2020年3期2020-07-01
- 人源溶菌酶在大腸桿菌中的表達(dá)與復(fù)性研究
其空間結(jié)構(gòu)和蛋白復(fù)性中具有重要作用（圖1-B）［9］。人源溶菌酶廣泛分布于人體器官、細(xì)胞和體液中［6，10］。已報道的含有人源溶菌酶的器官有肺、腎、胎盤等；細(xì)胞有巨噬細(xì)胞、白細(xì)胞等；體液有眼淚、唾液、尿液、血清和乳汁等［11］。其作為一種非特異性免疫因子和抗炎因子，人源溶菌酶在人體防御機(jī)制中扮演著重要角色［12］。此外，很多研究表明人源溶菌酶還具有抗真菌和抗病毒的作用［13-14］。在活性方面，其抗菌活性是雞蛋清溶菌酶的3倍，是牛溶菌酶的10倍［15］。目
生物技術(shù)通報 2020年3期2020-03-19
- 應(yīng)用雜交技術(shù)在腹腔鏡難復(fù)性疝修補術(shù)中15例報道
泛應(yīng)用。其中的難復(fù)性疝臨床中會經(jīng)常遇到，以前我們都是通過開放性手術(shù)來處理，近年來我們對于其中非急診的應(yīng)用雜交技術(shù)來處理，均取得非常好的手術(shù)效果。回顧性分析自2017年1月～2019年12月期間保定市徐水區(qū)人民醫(yī)院普外科，其中應(yīng)用雜交技術(shù)治療原發(fā)性單側(cè)難復(fù)性腹股溝疝患者15例，其中斜疝6例，股疝9例?，F(xiàn)將具體手術(shù)方式介紹如下：（1）手術(shù)采用喉罩全身麻醉。（2）術(shù)中采用標(biāo)準(zhǔn)的腹腔鏡TAPP三孔法布局。鏡下疝內(nèi)容物均不能應(yīng)用腹腔鏡器械還納。術(shù)中對于其中不能回納的
臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)雜志(電子版) 2020年38期2020-02-28
- 大分子擁擠環(huán)境對不同糖基化MUC5AC折疊和聚集的影響①
5AC)的變性和復(fù)性 Li等[7]在研究大分子擁擠環(huán)境對葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6pDH)和蛋白質(zhì)二硫異構(gòu)酶復(fù)性的影響時，使用了Ficoll70、Dextran70、PEG2000、BSA、卵清白蛋白和溶菌酶作為不同擁擠試劑，濃度梯度為0 g/L、50 g/L、100 g/L、150 g/L和200 g/L。因此本實驗利用BSA、Ficoll70、Dextran70和PEG2000作為擁擠試劑體外模擬四種不同的大分子擁擠環(huán)境。分別取15 μl n-MUC
中國免疫學(xué)雜志 2019年23期2019-12-27
- 基于模型建構(gòu)突破“PCR技術(shù)”教學(xué)難點的策略
CR技術(shù)中變性、復(fù)性、延伸三個環(huán)節(jié)及其循環(huán)，應(yīng)用概念模型、物理模型及數(shù)學(xué)模型等方法構(gòu)建，將抽象微觀的知識通過親手構(gòu)建變成具體的模型，從而突破學(xué)習(xí)難點.關(guān)鍵詞：模型建構(gòu);PCR技術(shù);變性;復(fù)性;延伸PCR技術(shù)（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是高中生物人教版選修三基因工程中目的基因體外擴(kuò)增的重要學(xué)習(xí)內(nèi)容，在刑事偵破、古生物研究、基因序列分析、基因檢測等方面，只要提供微量的DNA分子就能通過PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，獲得大量的DNA分子，因此，應(yīng)用廣泛，為生物學(xué)命題提供大量的素
理科考試研究·高中 2019年8期2019-09-19
- 人胱抑素C大腸桿菌表達(dá)載體構(gòu)建及包涵體復(fù)性研究
表達(dá)及蛋白純化、復(fù)性進(jìn)行深入研究，本研究采用基因工程的方法構(gòu)建了人cysC大腸桿菌表達(dá)載體，并探討了CysC蛋白包涵體胞外復(fù)性的方法，為降低體外診斷試劑的成本，提高產(chǎn)品競爭力做出了一定的貢獻(xiàn).1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌種與質(zhì)粒：大腸桿菌E.coli DH5α、BL21菌株由本實驗室保存，原核表達(dá)載體pET32a購自TaKaRa公司.1.1.2 試劑：BamHⅠ與HindⅢ限制性內(nèi)切酶購自Promega公司；Taq DNA聚合酶、DNA連接酶購
惠州學(xué)院學(xué)報 2018年6期2019-01-24
- 彩色多普勒超聲對小兒腹股溝疝的診斷價值
兒股骨溝均出現(xiàn)可復(fù)性包塊，可將其置入陰囊中，患兒雙側(cè)腹股溝不對稱。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）排除合并凝血功能障礙或其他血液系統(tǒng)疾病患兒。（2）排除合并免疫系統(tǒng)以及代謝系統(tǒng)疾病患兒。（3）排除合并心、肺、肝、腎等其他臟器疾病患兒。（4）排除對臨床檢查依從性低的患兒。1.3 方法參與本次研究的患兒均采用彩色多普勒超聲診斷儀對患者腹股溝區(qū)進(jìn)行掃描，探頭掃描頻率在5MHz至7MHz，對患兒腹股溝管4壁2口等生理解剖結(jié)構(gòu)逐一進(jìn)行掃描，并探測患兒腹股溝管擴(kuò)張程度、腹股溝斜疝、疝
影像研究與醫(yī)學(xué)應(yīng)用 2019年3期2019-01-24
- Bacillus sp.肌氨酸氧化酶的脫輔基與重構(gòu)
D的SOX包涵體復(fù)性的方法，對肌氨酸氧化酶進(jìn)行脫輔基以及與天然輔基的復(fù)合，探究如何在復(fù)性的過程中添加輔因子[8]，促使酶蛋白本體在正確折疊的過程中螯合輔因子，并呈現(xiàn)出酶學(xué)活性[9]。研究SOX酶蛋白與不同的、潛在的輔基之間存在著什么樣的關(guān)系，對改造乃至提高此類黃素酶的催化特性，將提供有意義的參考價值[10]。1 材料與方法1.1 菌種E.coli BL21（DE3）/pET28a-soxopB：由作者所在實驗室保存[11]。1.2 培養(yǎng)基1.2.1 種子培
食品與生物技術(shù)學(xué)報 2018年9期2018-11-06
- 李翺人性論探析
善情惡”和“滅情復(fù)性”的人性論。李翺認(rèn)為人性本善，只是受了七情的影響而失去善的本性，因此只要滅情就可以恢復(fù)人的善性了。在復(fù)性過程中，李翺強調(diào)的是向內(nèi)尋求自身的反省。但是李翺的人性論中包含有善之性產(chǎn)生的邪情的矛盾，因此，對這一個矛盾的回答就產(chǎn)生了宋明時期的性二元論。關(guān)鍵詞：李翺；人性論；性善情惡；復(fù)性中圖分類號：F24 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A doi：10.19311/j.cnki.1672-3198.2018.23.0511 李翺人性論思想產(chǎn)生的背景李翺生于公元7
現(xiàn)代商貿(mào)工業(yè) 2018年23期2018-09-20
- 人血小板衍生生長因子BB亞型包涵體復(fù)性與純化
是表達(dá)量非常低，復(fù)性率不高，純化條件不穩(wěn)定，生物活性也不高。本實驗室根據(jù)原核表達(dá)特點，參照生物信息學(xué)和軟件Vector NTI suitor7.0分析結(jié)果，提高了PDGF-BB的表達(dá)量，占菌體總蛋白的25%[5]。在此，我們對基因工程下游技術(shù)進(jìn)行探索，對PDGF-BB包涵體的變性、復(fù)性方法和條件，以及純化工藝的優(yōu)化進(jìn)行多次嘗試，提高了PDGF-BB包涵體的復(fù)性率達(dá)40%以上，同時穩(wěn)定了重組蛋白的純化工藝，獲得了純度大于95%且具有良好生物活性的重組PDGF
生物技術(shù)通訊 2018年3期2018-06-13
- 厚殼貽貝抗菌肽mytichitin-CB的固相化學(xué)合成、復(fù)性及功能
in-CB的氧化復(fù)性和功能研究。上述研究為進(jìn)一步揭示mytichitin-CB的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 試劑9-芴甲氧羰基(Fmoc)氨基酸、二氯甲烷、二異丙基乙胺、HOBt(1-羥基-苯并-三氮唑)、TBTU(1-氧-3-雙二甲胺羰基苯駢三氮唑四氟化硼鹽)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)等固相化學(xué)合成試劑購自上海吉爾公司。NMM(N-甲基嗎啉)、piperidine(哌啶)、Fmoc-Rink-AM-Resin 合成樹脂、TFA(
浙江海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版) 2018年1期2018-05-16
- 包涵體蛋白的純化層析復(fù)性技術(shù)研究進(jìn)展
的過程中必須通過復(fù)性操作技術(shù)對其進(jìn)行復(fù)性。層析復(fù)性技術(shù)是一種蛋白質(zhì)分離純化的方法并且得到了相對廣泛的應(yīng)用；按照目前純化實驗中機(jī)制的不同，可將層析技術(shù)大致分為凝膠過濾層析、吸附性層析，本次研究則主要分析以上兩類包涵體蛋白的層析復(fù)性技術(shù)詳情（如下表1），現(xiàn)將研究概況做出整理報道。表1 層析復(fù)性技術(shù)1 凝膠過濾層析復(fù)性凝膠過濾層析復(fù)性也稱體積排阻復(fù)性或分子篩復(fù)性。和常用的稀釋復(fù)性法（或透析法）比較，凝膠過濾層析復(fù)性能在較高的起始蛋白濃度下對蛋白進(jìn)行復(fù)性，其具有較
商品與質(zhì)量 2018年38期2018-04-16
- 四氫嘧啶對熱變性凝乳酶復(fù)性作用的研究
后，會發(fā)生顯著的復(fù)性作用，這與四氫嘧啶對植酸酶熱穩(wěn)定性的影響完全不同[6]。蛋白質(zhì)的復(fù)性是變性蛋白質(zhì)在適當(dāng)條件下恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物活性的過程。蛋白質(zhì)復(fù)性要求有一定的條件，如pH、溫度、離子強度、蛋白質(zhì)濃度等。多種添加劑能促進(jìn)蛋白質(zhì)復(fù)性，包括：表面活性劑、低濃度變性劑、分子伴侶蛋白等[7]。目前，蛋白質(zhì)從伸展態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩砘钚缘奶烊粦B(tài)結(jié)構(gòu)的復(fù)性過程與機(jī)理還沒有完全闡明。酶結(jié)構(gòu)的變化是時間和溫度2個因素的復(fù)合作用所致[8]。筆者研究了四氫嘧啶存在條件下，熱
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年3期2018-01-19
- 脲對Flt3配體包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用研究
包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用研究余秀娟1，張如月1，盧金銘2(1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000；2.華北電力大學(xué)科技學(xué)院，河北 保定 071000)目的研究小分子脲對包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用。方法考察在高效疏水相互作用色譜(HPHIC)流動相中添加脲時，不同濃度的小分子脲對包涵體蛋白重組人酪氨酸激酶配體(recombined human Flt3 ligand,rhFL)復(fù)性效率的影響，并采用熒光光譜技術(shù)，進(jìn)一步研究目
河北北方學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版） 2017年12期2018-01-11
- 淺析程朱理學(xué)范式下薛瑄思想的轉(zhuǎn)向
即性之說。薛瑄的復(fù)性說簡化了程朱理學(xué)的程序，把形而上的理置于易于把握的性之下，提高了窮理的操作性與可行性，是理學(xué)的新發(fā)展，也是對程朱理學(xué)的修正。在薛瑄復(fù)性思想的構(gòu)建中，《易》起著不可替代的作用?！兑住烽_辟了儒家視野中的宇宙本體論哲學(xué)，既完成了對先秦儒家形而上的構(gòu)建，也為儒學(xué)以后的發(fā)展提供了理論源泉。薛瑄的性與復(fù)性說學(xué)正是其理論體系形而上的構(gòu)建，《易》以宏大的形而上體系，獨特的宇宙生產(chǎn)模式，為薛瑄性體構(gòu)建、復(fù)性理論建設(shè)提供了基礎(chǔ)，是薛瑄復(fù)性說的支點之一。[關(guān)
地方文化研究 2017年2期2017-05-30
- 小鼠PD-1胞外段重組蛋白表達(dá)及其包涵體復(fù)性
白表達(dá)及其包涵體復(fù)性江 慧， 康巧珍， 黃夏冰， 張成龍， 劉 鑫(鄭州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 河南 鄭州 450001)旨在利用原核表達(dá)系統(tǒng)制備可溶性的PD-1胞外段(以下簡稱exPD-1)蛋白.以C57BL/6小鼠脾細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增小鼠exPD-1基因，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-exPD-1，并在E.coliBL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá).結(jié)果顯示，小鼠exPD-1重組蛋白大小約為17 kD，以包涵體形式存在.exPD-1包涵體蛋白經(jīng)8 mol
鄭州大學(xué)學(xué)報（理學(xué)版） 2017年2期2017-04-17
- 脊柱關(guān)節(jié)病致敏蛋白HLA-B27的非經(jīng)典同源二聚體的表達(dá)與純化
，將包涵體溶解、復(fù)性和純化。最終從20 mg HLA-B27包涵體中得到0.2 mg純度高且性狀均一的HLA-B27同源二聚體，為獲得高質(zhì)量HLA-B27同源二聚體蛋白晶體及結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)奠定了重要基礎(chǔ)。強直性關(guān)節(jié)炎;HLA-B27;同源二聚體;純化1 引言強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)是脊柱關(guān)節(jié)病(spondyloarthritides, SpA)的一種，屬于風(fēng)濕性疾病。強直性脊柱炎與HLA-b27基因高度相關(guān)，94%的強
武漢輕工大學(xué)學(xué)報 2017年1期2017-04-11
- 人C反應(yīng)蛋白在不同原核表達(dá)載體及菌株中的表達(dá)及免疫反應(yīng)性分析
，親和層析及透析復(fù)性等方法。成功構(gòu)建了CRP原核表達(dá)載體及菌株。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，得到了不同的重組CRP蛋白。結(jié)果表明，相同表達(dá)載體在不同的表達(dá)菌株中的表達(dá)情況有一定差別，分別在大腸桿菌及Rosetta gami2（DE3）pLysS中表達(dá)并得到了重組CRP的包涵體，對復(fù)性后的CRP重組蛋白進(jìn)行Westen blotting及ELISA檢測，結(jié)果表明原核表達(dá)的重組CRP蛋白的免疫反應(yīng)性很低，CRP蛋白發(fā)揮免疫活性需要以五聚體形式存在。C反應(yīng)蛋白；原核表達(dá)；
生物技術(shù)通報 2016年3期2016-10-13
- 對大腸桿菌異源表達(dá)乳酸片球菌素包涵體復(fù)性方法的研究
酸片球菌素包涵體復(fù)性方法的研究檀茜倩,韓燁,肖華志,周志江*(天津大學(xué)化工學(xué)院食品科學(xué)與工程系,食品生物技術(shù)實驗室,天津 300072)本研究對E.coliBL21(DE3)基因工程菌高效表達(dá)的乳酸片球菌素融合蛋白包涵體進(jìn)行了提取和變性溶解,并采用稀釋復(fù)性,反稀釋復(fù)性,透析復(fù)性,CTAB輔助復(fù)性和CTAB和β-CD結(jié)合輔助復(fù)性五種方法對乳酸片球菌素融合蛋白包涵體的變性溶液進(jìn)行了復(fù)性的研究。結(jié)果表明CTAB和β-CD結(jié)合輔助復(fù)性的復(fù)性方法優(yōu)于其它的復(fù)性方法,
食品工業(yè)科技 2016年13期2016-09-13
- 重組融合蛋白Trx-IFN-CSP復(fù)性工藝研究
-IFN-CSP復(fù)性工藝研究黃演婷1，2，3盧雪梅2，3楊小蓉1金小寶2，3朱家勇2，3（1. 廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院，廣州 510006；2. 廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院藥用生物活性物質(zhì)研究所，廣州 510006；3. 廣東省生物活性藥物研究重點實驗室，廣州 510006）旨在建立并優(yōu)化融合蛋白Trx-IFN-CSP的復(fù)性工藝。對重組融合Trx-IFN-CSP進(jìn)行體外復(fù)性研究，考查pH、溫度、蛋白濃度、氧化還原體系及輔助復(fù)性小分子等復(fù)性條件對融合蛋白重折疊的影響
生物技術(shù)通報 2016年6期2016-06-10
- 重組精氨酸脫亞胺酶的制備工藝
體洗滌、溶解稀釋復(fù)性后經(jīng)DEAE陰離子交換層析柱和Butyl疏水層析柱純化；通過SDS-PAGE和RP-HPLC等方法檢測表達(dá)和純度；用體外測活法檢測活性。將工程菌進(jìn)行放大培養(yǎng)并誘導(dǎo)表達(dá)，獲得了相對分子質(zhì)量在46 kDa的rADIES。重組蛋白表達(dá)量占總蛋白的25%以上，經(jīng)制備工藝獲得的rADIES純度高于95%，酶活性為42 IU。實驗結(jié)果表明：該工藝具有可行性，可以獲得較高活性的重組精氨酸脫亞胺酶。關(guān)鍵詞：精氨酸脫亞胺酶；發(fā)酵；復(fù)性；分離純化精氨酸脫亞
重慶理工大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)) 2016年4期2016-05-28
- 廣西師范大學(xué)出版社集團(tuán)公司成都分社成立
社集團(tuán)主辦，成都復(fù)性書院文化傳播有限公司承辦的“復(fù)性書院重建暨廣西師范大學(xué)出版社集團(tuán)成都分社成立揭牌儀式”，在成都望江路29號逸夫樓復(fù)性書院隆重舉行，宣告了廣西師范大學(xué)出版社集團(tuán)成都分社正式成立。廣西師范大學(xué)出版社集團(tuán)成都分社的成立，將進(jìn)一步完善、拓展出版社集團(tuán)“內(nèi)涵發(fā)展、自我裂變”的發(fā)展道路，通過突出主業(yè)、多元化發(fā)展，實現(xiàn)多領(lǐng)域、跨地域發(fā)展。成立后的成都分社將以“繼承傳統(tǒng)、弘揚國學(xué)、關(guān)懷大眾、服務(wù)社會”的為宗旨，實踐“國學(xué)人才培養(yǎng)”和“國學(xué)經(jīng)典出版”兩大
出版廣角 2016年3期2016-04-21
- 包涵體蛋白復(fù)性的研究進(jìn)展
1)?包涵體蛋白復(fù)性的研究進(jìn)展付明娟1△，林接玉1,2(綜述)，謝捷明1※(審校)(1.福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系，福州 350004； 2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院藥學(xué)部，福州 350001)摘要：包涵體是指外源重組蛋白在細(xì)胞內(nèi)凝集的無活性的固體顆粒。經(jīng)分離、洗滌除去一些膜蛋白或膜碎片后，用適宜試劑溶解,如高pH值加低濃度的尿素緩沖液、不同羥基的醇類或含小分子的變性劑。傳統(tǒng)的稀釋、透析等復(fù)性方法效率一般較低，目前可通過高靜水壓、沸石的高通量篩選及高通量篩
醫(yī)學(xué)綜述 2015年20期2015-12-10
- 甲胎蛋白的原核表達(dá)及復(fù)性優(yōu)化
蛋白的原核表達(dá)及復(fù)性優(yōu)化才蕾 矯麗媛 王繼華 唐時幸（廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司，廣州 510660）構(gòu)建甲胎蛋白的原核表達(dá)載體pET32a-AFP，對包涵體形式表達(dá)的甲胎蛋白進(jìn)行復(fù)性優(yōu)化。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET32a-AFP轉(zhuǎn)化入E.coli，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，經(jīng)親和層析純化獲得AFP包涵體，通過對復(fù)性過程、pH、添加劑等的研究摸索，獲得最佳復(fù)性條件。當(dāng)采用添加0.5 mol/L L-精氨酸的一步法透析復(fù)性方法，且透析液pH值為8.5，重組人AFP包
生物技術(shù)通報 2015年1期2015-10-25
- 重組瑞替普酶包涵體制備及其體外復(fù)性
涵體制備及其體外復(fù)性王俊雄，關(guān)怡新，姚善涇（浙江大學(xué)化學(xué)工程與生物工程學(xué)院，浙江杭州 310027）將攜帶重組瑞替普酶(reteplase, rt-PA)的質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)后，誘導(dǎo)表達(dá)獲得包涵體，考察了誘導(dǎo)劑濃度、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等條件對目標(biāo)蛋白表達(dá)量的影響。在此基礎(chǔ)上，對高效表達(dá)的rt-PA包涵體體外復(fù)性過程進(jìn)行了詳細(xì)研究。首先利用單因素實驗考察了復(fù)性液pH、GSH濃度、GSH/GSSG比例、蛋白濃度等各種復(fù)性條件對復(fù)性效果的影
化工學(xué)報 2015年2期2015-10-15
- 大腸桿菌重組幾丁質(zhì)酶的表達(dá)、包涵體復(fù)性及酶學(xué)性質(zhì)研究
酶的表達(dá)、包涵體復(fù)性及酶學(xué)性質(zhì)研究呂夢圓，呂永玲，夏 祥，林建國，王常高，蔡 俊，胡 瑛*（湖北工業(yè)大學(xué)輕工學(xué)部生物工程學(xué)院，發(fā)酵工程教育部重點實驗室/工業(yè)發(fā)酵湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北武漢430068）通過研究重組幾丁質(zhì)酶在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中誘導(dǎo)表達(dá)的濃度、時間和溫度，獲得表達(dá)的最佳條件。表達(dá)產(chǎn)物除了可溶性目的蛋白以外，仍存在于包涵體中。采用透析復(fù)性和Ni-NTA親和層析柱上復(fù)性兩種方法對包涵體中的目的蛋白進(jìn)行復(fù)性，并比較對目的蛋白產(chǎn)率和比酶活的影響。并考
食品工業(yè)科技 2015年22期2015-04-24
- 重組中國明對蝦溶菌酶包涵體的復(fù)性研究
蝦溶菌酶包涵體的復(fù)性方法主要有稀釋復(fù)性、透析復(fù)性、超濾復(fù)性等[2]。然而，關(guān)于重組蛋白復(fù)性后高回收率、高活性和高純度的報道不多，特別是層析法復(fù)性包涵體蛋白的研究較少。親和層析法復(fù)性包涵體蛋白不但可以實行純化和復(fù)性同時進(jìn)行，同時固相介質(zhì)作為分子伴侶可以減少蛋白的錯誤折疊和聚合，并且可以實現(xiàn)大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)[3]。因此，本實驗運用稀釋復(fù)性和親和層析復(fù)性對重組對蝦溶菌酶包涵體進(jìn)行處理，并對2種方法復(fù)性的重組蛋白進(jìn)行比較，以期為進(jìn)一步深入研究對蝦溶菌酶包涵體復(fù)性提
大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報 2014年4期2014-09-19
- 抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶融合蛋白的制備
并進(jìn)行了包涵體的復(fù)性研究.1 材料與方法1.1 材 料1.1.1 菌株及質(zhì)粒大腸桿菌BL21(DE3)和DH5α由本實驗室保存，質(zhì)粒pLac-duet-1-AKP和pCANTAB5E-H3由杭州遠(yuǎn)方生物科技有限公司提供.1.1.2 酶及主要試劑限制性內(nèi)切酶NotI、NcoI和T4 DNA連接酶購自TaKaRa公司，DNA和蛋白購自Fermentas公司，DNA凝膠回收試劑盒、質(zhì)粒小量抽提試劑盒和堿性磷酸酶檢測試劑盒購自碧云天公司，Ni2+-NTA基質(zhì)購自Q
浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報 2014年1期2014-08-24
- 以Triton X－100處理重組E.coli制備重組人SOD 包涵體
包涵體進(jìn)行了體外復(fù)性.1 材料與方法1.1 材料與儀器菌種為含重組質(zhì)粒pTK－rhSOD的大腸桿菌DH5α（本研究室構(gòu)建）.氧化型（GSSG）和還原型谷胱甘肽（GSH）（TaKaRa公司），β－巰基乙醇（β－ME）（Serva公司），三羥甲基氨基甲烷（Tris）（Amresco公司，進(jìn)口分裝），Triton X－100（上海生物工程公司），鄰苯三酚和尿素等均為國產(chǎn)分析純試劑.Model 250／2.5型電泳儀（Bio－Rad公司），WFJ 2100型可見分
河北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版） 2014年5期2014-07-24
- 一種從大腸桿菌包涵體中分離純化GST-TRAF6融合蛋白的方法
性，通過逐級稀釋復(fù)性的方法對尿素溶解后的GST-TRAF6融合蛋白進(jìn)行復(fù)性，將復(fù)性后的GST-TRAF6融合蛋白進(jìn)一步利用谷胱甘肽瓊脂糖樹脂親和層析的方法進(jìn)行分離純化，將分離純化后的蛋白通過Western blot方法進(jìn)行驗證，最后利用體外泛素化反應(yīng)檢測經(jīng)包涵體變性、復(fù)性和純化后的GST-TRAF6融合蛋白的生物學(xué)活性。經(jīng)過包涵體變性、梯度稀釋復(fù)性和谷胱甘肽瓊脂糖樹脂親和層析3個步驟后純化得到純度達(dá)90%以上、濃度為396 ng/μL的蛋白質(zhì)溶液。利用GS
生物技術(shù)通報 2014年8期2014-04-09
- 復(fù)性之學(xué)與教化之樂
詞：朱子；學(xué)而；復(fù)性；教化；成德中圖分類號：B224.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1003-854X（2014）01-0088-06“學(xué)而時習(xí)”章為《論語》開篇之作，歷來為學(xué)者所重視，但自古至今也聚訟紛紜，難有確詁。朱子作為宋代理學(xué)的集大成者，對本章的注解亦投入極大心力，他在繼承二程理學(xué)，歷經(jīng)多年修改的基礎(chǔ)上，作出了具有綜合性而又別開生面的詮釋，對后世產(chǎn)生了重要影響。但由于朱子詮釋用詞精密含蓄，“渾然猶經(jīng)”，而且早晚思想頗有差異，致使其中精義不僅不為人知
江漢論壇 2014年1期2014-04-01
- 變性再復(fù)性方法提取高純度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鑒定
0001）變性再復(fù)性方法提取高純度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鑒定孫宇，封瑞，孫威，胡慧媛，郝麗英（中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物毒理教研室，沈陽110001）目的探尋誘導(dǎo)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）與Cav1.2鈣通道片段CT1重組的易形成包涵體的大分子融合蛋白的提取與純化的方法。方法在E.coliBL21中轉(zhuǎn)化入pGEX-6p-3/CT1重組質(zhì)粒并誘導(dǎo)表達(dá)，采用GST包涵體變性復(fù)性試劑盒和非離子去污劑B-PER分離純化GST-CT1融合蛋白，用Pu
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2014年9期2014-03-22
- 牙鲆(Paralichthys olivaceus)β諾達(dá)病毒衣殼蛋白重組表達(dá)及復(fù)性條件優(yōu)化*
會形成包涵體,需復(fù)性后才具有生物學(xué)活性,因此,復(fù)性效率的高低對產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)成本至關(guān)重要(吳正輝等,2008)。不同蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和構(gòu)象復(fù)雜多樣,復(fù)性條件差別較大,因此,有針對性地探索目的蛋白的包涵體復(fù)性條件對工業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。本研究構(gòu)建了感染牙鲆的β諾達(dá)病毒完整衣殼蛋白原核表達(dá)載體,優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)參數(shù),在獲得目的蛋白高效表達(dá)的基礎(chǔ)上,利用正交分析獲得包涵體復(fù)性的最適條件,為今后的工業(yè)化生產(chǎn)提供了重要依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料、試劑和儀器1.1.1
海洋與湖沼 2014年2期2014-03-08
- 體外蛋白質(zhì)復(fù)性方法及小分子添加劑在復(fù)性過程中的作用
代密碼。蛋白質(zhì)的復(fù)性或折疊問題是生命科學(xué)研究中的核心問題之一，蛋白質(zhì)從它的變性狀態(tài)轉(zhuǎn)變到它特定的生物學(xué)天然構(gòu)象稱為蛋白質(zhì)復(fù)性，這個過程并不復(fù)雜。但是，一直以來將變性蛋白質(zhì)恢復(fù)其天然的活性構(gòu)象卻是一項很艱難的工作。到目前為止，已發(fā)展了各種體外輔助蛋白復(fù)性方法。在眾多體外輔助蛋白質(zhì)復(fù)性的方法中，蛋白折疊液相色譜 （protein folding liquid chromatography，PFLC）法獲得了長足的發(fā)展。與通常的液相色譜技術(shù)不同，PFLC除了能在
河北北方學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版） 2013年2期2013-08-15
- 核糖核酸酶Onconase的稀釋復(fù)性條件優(yōu)化研究
涵體，再使包涵體復(fù)性得到有活力的Onconase蛋白。由于氧化型谷胱甘肽（GSSG）對蛋白質(zhì)中二硫鍵的重新形成起到很重要的作用，尿素對蛋白質(zhì)的復(fù)性也有意想不到的效果，因此，在復(fù)性緩沖溶液［4］中加入一定量的GSSG和尿素，并考察了復(fù)性溫度、尿素濃度、GSSG加入時間對復(fù)性效果的影響，以確定最優(yōu)稀釋復(fù)性條件，并與傳統(tǒng)的醋酸沉淀復(fù)性法進(jìn)行了對比。擬為Onconase生產(chǎn)工業(yè)化、提高Onconase產(chǎn)量提供幫助。1 實驗1．1 試劑與儀器牛血清白蛋白（BSA）、
化學(xué)與生物工程 2013年10期2013-08-14
- 梅毒螺旋體重組抗原TpN47的純化工藝研究＊
然涉及到蛋白質(zhì)的復(fù)性問題，以解決其溶解性。實際應(yīng)用中，可以采用兩種方式進(jìn)行復(fù)性，一種是在變性條件下洗脫結(jié)合蛋白，然后進(jìn)行透析或稀釋復(fù)性，另一種是蛋白結(jié)合在柱上之后，用相對溫和的溶液環(huán)境頂替變性溶液環(huán)境，待蛋白復(fù)性后再進(jìn)行洗脫操作[3-4]。1 材料與儀器Urea，NaCl，NiSO4，Imidazol 均 為 國 產(chǎn) 分 析 純 試 劑;Protein Molecular Weight Marker購自 Amersham;Tris，β-ME 及 SDSPA
中國藥業(yè) 2013年21期2013-04-17
- 析薛瑄的復(fù)性說
——兼論黃宗羲在《明儒學(xué)案》中對薛瑄的評價
其學(xué)說看成性學(xué)或復(fù)性之學(xué)，為什么薛瑄這么重視性呢?薛瑄認(rèn)為:“孟子之后道不明，只是性之一字不明?！保?］1445不明的原因是“自孔孟以后，皆不識性”［1］1042，這是薛瑄極力研究并探討性學(xué)的主要原因。同時，薛瑄的性學(xué)與朱子的理學(xué)是大不一樣的。朱熹在“性即理”的基礎(chǔ)上提出“理一分殊”，薛瑄則在“理即性”的基礎(chǔ)上提出了“性一分殊”。薛瑄認(rèn)為:“萬事萬物一理貫之，理即性也。”［1］1473在此基礎(chǔ)上，薛瑄提出:“一性散為萬善，萬善原于一性，一本萬殊，萬殊一本也
中國石油大學(xué)學(xué)報(社會科學(xué)版) 2013年4期2013-02-01
- 新一代重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的工業(yè)化發(fā)酵、復(fù)性和純化
子的工業(yè)化發(fā)酵、復(fù)性和純化宋 爽1蔣文宏2蔣永平1，2，*1(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 蘇州方舟生物醫(yī)藥研發(fā)中心，蘇州 215126)2(蘇州方舟基因藥業(yè)有限公司，蘇州 215126)工業(yè)化大規(guī)模發(fā)酵、復(fù)性和純化突變型人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSFa)，并測定其體外生物學(xué)活性。利用定點突變和DNA重組技術(shù)獲得突變型G-CSF(rhG-CSFa)。通過40 L發(fā)酵罐發(fā)酵基因工程菌株獲得rhG-CSFa包涵體，經(jīng)過一系列透析后，通過離子交換柱和分子
中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報 2012年4期2012-09-18
- 由《復(fù)性書》淺析李翱的心性論思想
00872）由《復(fù)性書》淺析李翱的心性論思想李冉（中國人民大學(xué)哲學(xué)院，北京 100872）李翱的心性論思想是儒學(xué)思想發(fā)展中的一個轉(zhuǎn)折點，在儒學(xué)發(fā)展史上具有重要意義。本文旨在通過對《復(fù)性書》的研讀，梳理李翱提出的心性論思想體系，并結(jié)合《中庸》以及中國佛教哲學(xué)中的相關(guān)思想，揭示李翱心性論思想的內(nèi)涵及其重要意義?！?span id="j5i0abt0b" class="hl">復(fù)性書》；李翱；心性論漢唐時期的中國哲學(xué)是一個儒、釋、道三教共同發(fā)展的階段，各家各派在相互借鑒、吸取彼此思想內(nèi)容的基礎(chǔ)上使得自己的理論體系更加豐富和完
中共太原市委黨校學(xué)報 2012年5期2012-08-15
- 雞IFN－γ基因重組蛋白復(fù)性條件的優(yōu)化及生物活性鑒定
包涵體進(jìn)行變性、復(fù)性等后續(xù)處理工作，以獲得具有生物學(xué)效應(yīng)的重組表達(dá)產(chǎn)物。不同的重組蛋白的復(fù)性條件有非常大的差異，復(fù)性效率顯著不同，這些嚴(yán)重制約雞IFN－γ的工業(yè)化生產(chǎn)。因此，我們對蛋白質(zhì)復(fù)性條件進(jìn)行優(yōu)化，力求找到一種簡單、價格低廉、復(fù)性得率和效率較高的方法，為雞IFN－γ的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 重組雞γ干擾素（cIFN－γ）蛋白表達(dá)產(chǎn)物純化的重組雞γ干擾素由課題組制備[12]。1.1.2 SPF雞胚 SPF雞胚購于北京梅
動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2012年3期2012-06-29
- 包涵體變復(fù)性技術(shù)研究進(jìn)展
·綜述·包涵體變復(fù)性技術(shù)研究進(jìn)展羅莉，李坤，王保成，王明蓉現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展使大規(guī)模表達(dá)異源重組蛋白成為現(xiàn)實，這極大地促進(jìn)了蛋白類產(chǎn)品的開發(fā)，尤其是重組蛋白藥物的研發(fā)。目前非糖基化的重組蛋白表達(dá)多采用大腸桿菌的原核表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)的突出特點是表達(dá)產(chǎn)物多以包涵體形式存在。與蛋白可溶性表達(dá)相比，包涵體具有產(chǎn)量高、蛋白穩(wěn)定、容易純化等優(yōu)點，對毒性蛋白制備尤其適宜。因此，采用包涵體形式已成為規(guī)模制備重組蛋白產(chǎn)品的主要途徑之一。包涵體形成的原因普遍認(rèn)為主要是外源
中國醫(yī)藥生物技術(shù) 2012年4期2012-04-13
- 一心二門式的儒家復(fù)性思想評析
一心二門式的儒家復(fù)性思想評析韓 麗 華（蘇州大學(xué) 政治與公共管理學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）先秦儒家的告子性無善惡論、孟子性善論、荀子性惡論皆把人性單一化，不能合理地說明人性的構(gòu)成及人行善或作惡的原因。儒家“一心開二門”模式的性善情惡復(fù)性論認(rèn)為，人性具有先天善性和后天惡情兩種因素，由一體之心開出性情二門，主張以復(fù)性的方式去掉惡情回復(fù)善性。復(fù)性就是由后天之惡情向先天之善性復(fù)性。一心二門、性善情惡的復(fù)性論是人向善復(fù)性的基礎(chǔ)和道德教化的根本，為棄惡從善的道德
東方論壇 2012年1期2012-04-01
- HLA-A*2402多肽復(fù)合物的兩種構(gòu)象——對Wolynes理論的補充
獲得[18]，自復(fù)性方法獲得有活性pHLA-A2后[19]，酶切方法被摒棄。復(fù)性后的 HLA-A*2402多肽復(fù)合體 (pHLA) 可以與 TCR結(jié)合，通過對結(jié)合力的比較，可以在一定程度上反映天然狀態(tài)下HLA-A*2402的活性。本文通過研究復(fù)性所得 pHLA-A*2402，發(fā)現(xiàn)它存在兩種不同構(gòu)象。進(jìn)一步研究了這兩種不同構(gòu)象的生物活性，發(fā)現(xiàn)它們并無差別。由此給出結(jié)論：如果在不同的能量陷阱下折疊成的蛋白構(gòu)象在活性上沒有差別，那么它們就不會被自然選擇區(qū)分，也就
生物工程學(xué)報 2012年11期2012-02-09
- 高頻超聲在腹股溝斜疝診斷中的應(yīng)用
區(qū)或陰囊內(nèi)出現(xiàn)難復(fù)性或反復(fù)出現(xiàn)可復(fù)性包塊來我所行高頻超聲檢查,其中男性66例,女性12例;年齡4個月～15歲,平均47.6歲;右側(cè)55例,左側(cè)15例,雙側(cè)8例。1.2 儀器與方法使用惠普8500超聲診斷儀,探頭頻率(5～13)MHz。采用平臥位大腿外展及站立位,并囑患者咳嗽或做Valsalva動作[1],仔細(xì)觀察病灶部位、大小、形態(tài)、邊界、內(nèi)部回聲特點,特別注意疝囊頸部的位置,疝內(nèi)容物與腹腔的關(guān)系,疝囊與陰囊(或陰唇)的關(guān)系,必要時雙側(cè)對比檢查和加做腹盆腔
中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè) 2011年17期2011-08-15
- 重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2原核表達(dá)及單克隆抗體制備
合其推廣應(yīng)用，如復(fù)性困難、工藝難以放大等。本研究利用簡單的原核表達(dá)系統(tǒng) (E.coli)獲得具有生物學(xué)活性的rhBMP-2m并制備能檢測真核細(xì)胞表達(dá)rhBMP-2m的單克隆抗體，為rhBMP-2m研究和商業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。材料和方法材料 雌性Balb/c小鼠 (北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司);辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠IgG(北京義翹神州生物技術(shù)有限公司);小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞MC3T3-E1(中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心);SP瓊脂糖
中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報 2011年5期2011-08-09
- 擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AGL47的原核表達(dá)與包涵體復(fù)性研究
體的純化，變性和復(fù)性后，初步獲得了可溶性目的蛋白，為進(jìn)一步研究AGL47轉(zhuǎn)錄因子的功能奠定了重要基礎(chǔ).1 材料與方法1.1 材料工程菌 E.coli DH5α 和 E.coli BL21(DE3)表達(dá)載體pET-28a由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室保存;At5g55690全長CDS克隆pENTR-At5g5569 為前期研究構(gòu)建［14］.限制性內(nèi)切酶BamHⅠ/XhoⅠ，T4 DNA連接酶、IPTG，蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(低)購自TaKaRa公司;尿素
河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 2011年3期2011-05-10
- 敬釗毒素-XI與突變體R3A-JZTX-XI的合成、復(fù)性及其藥理活性鑒定
索合成產(chǎn)物的氧化復(fù)性條件，結(jié)合電生理膜片鉗技術(shù)研究合成毒素對 HEK293T細(xì)胞上瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)的鉀通道亞型 Kv2.1和鈉通道亞型Nav1.5電流的抑制作用，為下一步通過蛋白質(zhì)工程將JZTX-XI改造成一個高效特異性的Kv2.1通道亞型或Nav1.5通道亞型的抑制劑提供實驗依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料9-芴甲氧羰基 (Fmoc) 氨基酸、N-甲基嗎啡啉(NMM)、哌啶 (Piperidine) 購自吉爾生化 (上海) 有限公司；Rink Resin樹脂
生物工程學(xué)報 2011年6期2011-02-10
- 西維因單鏈抗體基因克隆、表達(dá)及活性分析
利用不同條件進(jìn)行復(fù)性，結(jié)果顯示最佳復(fù)性時間為48h，最佳起始蛋白濃度為200μg/mL，含有精氨酸的復(fù)性液效果最佳；利用親和層析純化scFv，并利用競爭ELISA檢測其活性，結(jié)果顯示該scFv對西維因具有良好的親和性和特異性。西維因，單鏈抗體，克隆，表達(dá)，活性西維因（Carbaryl）是氨基甲酸酯類農(nóng)藥的一種，廣泛用于防治稻、麥、棉、果樹、蔬菜等作物害蟲，畜禽外寄生蟲和衛(wèi)生害蟲。它是一種接觸性殺蟲劑，兼有內(nèi)吸活性，如殘留在體內(nèi)，能抑制膽堿酯酶，使乙酰膽堿在
食品工業(yè)科技 2010年11期2010-11-14
- 層析輔助體外復(fù)性含有多對二硫鍵的融合蛋白質(zhì)
90層析輔助體外復(fù)性含有多對二硫鍵的融合蛋白質(zhì)謝偉全1,2，張貴鋒2，高玲1，劉永東2，余蓉1，蘇志國21 四川大學(xué)華西藥學(xué)院，成都 610041 2 中國科學(xué)院過程工程研究所 生化工程國家重點實驗室，北京 100190為建立一種基于陰離子交換介質(zhì)輔助的含多對二硫鍵的抗凝溶栓雙功能水蛭素 12肽-瑞替普酶融合蛋白質(zhì)(HV12p-rPA)的復(fù)性方法，采用Q Sepharose XL作為層析復(fù)性介質(zhì)，通過正交實驗考察蛋白質(zhì)上樣量、流速、脲梯度、洗脫液中精氨酸濃
生物工程學(xué)報 2010年8期2010-10-16
- L-精氨酸助溶菌酶復(fù)性過程動力學(xué)研究
白，必須進(jìn)行體外復(fù)性。蛋白質(zhì)復(fù)性技術(shù)對于重組蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)具有重要意義，其中稀釋復(fù)性是一種最常見的蛋白質(zhì)復(fù)性方法。實現(xiàn)蛋白質(zhì)復(fù)性首先需要提供能使蛋白質(zhì)以能量最低狀態(tài)存在的溶液環(huán)境，其次在操作過程中需抑制蛋白質(zhì)聚集體的生成[2]。蛋白質(zhì)折疊過程中存在兩種疏水作用，即分子內(nèi)和分子間疏水作用。前者促進(jìn)蛋白質(zhì)正確折疊成天然活性態(tài)，而后者導(dǎo)致變性蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆聚集和沉淀[3]。稀釋復(fù)性過程中往往由于聚集體的生成而嚴(yán)重影響復(fù)性收率。抑制蛋白質(zhì)肽鏈之間的聚集作用、提
化學(xué)與生物工程 2010年10期2010-06-05