一株羊源腸出血性大腸桿菌的分離與鑒定

林家琪+董真+金鐸+劉慧謀+顧敏+焦庫華+展天松+王彥紅+劉文博

摘要：腸出血性大腸桿菌是一種嚴(yán)重危害畜禽養(yǎng)殖的革蘭氏陰性桿菌，揚州大學(xué)動物醫(yī)院接診一例羊急性腸出血伴有嚴(yán)重腹瀉引起的急性死亡的病例，經(jīng)過剖檢、分離培養(yǎng)、革蘭氏染色、生化鑒定后確診為腸出血性大腸桿菌。

關(guān)鍵詞：腸出血性大腸桿菌；分離鑒定；耐藥性分析

中圖分類號：S858.26 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）07-0005-01

收稿日期：2014-05-25

基金項目：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程；江蘇省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃省級重點項目（201311117039Z）

作者簡介：林家琪（1992-），女，江蘇南通人，本科生，主要從事羊臨床菌株耐藥性及質(zhì)粒指紋圖譜分析應(yīng)用的研究；通訊作者，王彥紅，講師，（電子信箱）wyh7405@163.com；劉文博，副教授，（電子信箱）lwb@yzu.edu.cn 。

大腸埃希氏菌通常稱為大腸桿菌，是埃希菌屬中的一類，為革蘭氏陰性無芽胞的直桿菌，兩端鈍圓，周身鞭毛，能運動，為異養(yǎng)兼性厭氧菌，最適生長溫度為37 ℃，最適生長pH 7.2～7.4，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，在麥康凱瓊脂上形成紅色菌落。大腸桿菌主要有O、K、H3種抗原[1]。大腸桿菌廣泛分布在自然界，大多數(shù)是不致病菌，主要附生在人或動物的腸道里，為正常菌群，少數(shù)具有毒性，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。根據(jù)毒力因子和發(fā)病機制的不同，致腹瀉型大腸桿菌可分為5類：產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、腸致病型大腸桿菌、腸出血型大腸桿菌、腸侵襲型大腸桿菌、腸聚集型大腸桿菌。因致病性大腸桿菌的血清型不同，表現(xiàn)的病理過程和臨床癥狀也不一致 一般以腸炎較多見，有時還可引起敗血癥和毒血癥，引起動物死亡，或者嚴(yán)重影響幼畜生長發(fā)育，給畜牧業(yè)發(fā)展造成重大損失[2]。近年來，江浙一帶地區(qū)山羊養(yǎng)殖量不斷擴大，隨之，各種疾病也隨之發(fā)生，現(xiàn)將一例羊感染腸出血性大腸桿菌的病例報告如下。

1 發(fā)病情況

2013年3月，江蘇南通的一山羊養(yǎng)殖戶將發(fā)病的兩月齡山羊送至揚州大學(xué)動物獸醫(yī)院就診。該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)山羊174只，病死24頭。畜主敘述病羊出現(xiàn)腹瀉，伴有鼻涕、咳嗽，食欲不振。用環(huán)丙沙星和氟苯尼考治療，但未見效。剖檢可見病羊有膿性鼻液，肺部淤血、氣腫，肝臟腫大、淤血，膽囊擴張，瘤胃黏膜輕微脫落，真胃黏膜充血、輕度出血，小腸漿膜出血，腸道黏膜卡他性炎癥，腎臟腫大、淤血。

2 材料與方法

2.1 材料

病料：病羊肝臟、脾臟、心臟、腸道等病變組織。

2.2 方法

2.2.1 細菌分離 取山羊的腸道、肝臟、脾臟、腎臟等病變組織在無菌環(huán)境下接種血瓊脂平板，在37℃條件下培養(yǎng)24 h。然后在無菌條件下分別挑取鮮血平板上的單個菌落，在鮮血平板和麥康凱瓊脂進行鑒別培養(yǎng)，并作有氧厭氧于37℃條件下進行對照培養(yǎng)。挑取單個菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，觀察細菌形態(tài)特征和染色特性。

2.2.2 生化試驗 利用細菌微量生化反應(yīng)管（購于杭州微生物試劑有限公司，操作方法與判定標(biāo)準(zhǔn)參照該公司操作方法與標(biāo)準(zhǔn)）對所分離的菌株進行生化指標(biāo)測定，分別挑取純化菌株接種于生化鑒定管，37 ℃溫箱中培養(yǎng)24～48 h，記錄生化反應(yīng)結(jié)果。

2.2.3 藥敏試驗 對此菌進行紙片法藥敏試驗，藥敏紙片購于杭州微生物試劑有限公司。操作方法和判定標(biāo)準(zhǔn)參照該公司操作方法與標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 細菌分離

經(jīng)培養(yǎng)，血平板上出現(xiàn)了圓形，凸起，光滑，濕潤的菌落，并出現(xiàn)溶血環(huán)，在麥康凱培養(yǎng)基上為生長良好的粉紅色菌落，經(jīng)過厭氧有氧的對照培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)該細菌在有氧無氧環(huán)境均可生長，但有氧環(huán)境生長略微旺盛。挑取單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢有中等大小的革蘭氏陰性桿菌。

3.2 生化試驗

結(jié)果表明該分離株能分解葡萄糖乳糖與靛基質(zhì)、鳥氨酸、賴氨酸、衛(wèi)矛醇反應(yīng)，不與苯丙氨酸、枸櫞酸鹽、尿素、硫化氫反應(yīng)，與經(jīng)典大腸埃希氏菌特征相符。

3.3 藥敏試驗

試驗結(jié)果表明該分離株對丁胺卡那霉素、慶大霉素、左氟沙星、菌必治、氟哌酸、鏈霉素等敏感。對氯霉素、卡那霉素、萘啶酸、強力霉素、復(fù)方新諾明、羅美沙星等耐藥。

4 討論

大腸桿菌是革蘭氏陰性、中等大小的桿菌，分類上屬腸桿菌科，埃希氏菌屬，無芽孢，具有周鞭毛。由于大腸桿菌對外界不利因素的抵抗能力不強，60 ℃條件下15 min即死亡，因此優(yōu)化環(huán)境是防治大腸桿菌病的重要方法。場址應(yīng)建立在水源充足、水質(zhì)良好、排水方便、遠離居民區(qū)，平時用0.3%過氧乙酸，按30 mL/m3噴霧消毒，也可用多聚甲醇在25 m2墊料中加入4.5 kg多聚甲醛[3]。

大腸桿菌容易形成抗藥性，而且大腸桿菌可通過菌毛將其抗藥性質(zhì)粒傳遞給其他大腸桿菌，加之現(xiàn)在養(yǎng)殖戶們對抗生素的應(yīng)用還并不是十分明確，抗生素濫用的現(xiàn)象非常嚴(yán)重，這樣使得大腸桿菌的抗藥性形成較快，環(huán)境中大腸桿菌耐藥性菌株越來越多[4]，耐藥性在疾病的治療上扮演著重要的角色，從試驗中發(fā)現(xiàn)使用丁胺卡那霉素、慶大霉素、左氟沙星、菌必治、氟哌酸、鏈霉素等藥物對本羊場大腸桿菌病的治療有顯著的意義。此外，支持療法對于該病的治療非常重要，尤其在該病出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉時，當(dāng)山羊不能自吮時可用5%葡萄糖鹽水或復(fù)方鹽水灌服[5]。

參考文獻：

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].第四版.中國農(nóng)業(yè)出版社，2007.

[2] 房全正.羊大腸桿菌病病原特性[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息，2013，（6）：62.

[3]秦承林，熊東艷，陳清軍. 雞大腸桿菌病的防治[J]. 北京農(nóng)業(yè)，2009（24）：68-71.

[4] 王 建，沃妮娜，邱 江. 大腸桿菌的藥敏試驗[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014，（30）3：29.

[5] 張滿其. 犢牛大腸桿菌的診治[J]. 今日畜牧獸醫(yī)，2013（6）：57-58.