• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    重慶煙區(qū)硅酸鹽細菌的分離鑒定及生理生化特性

    2014-07-05 10:34:55楊笑笑李振輪王晗李娜
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年5期
    關(guān)鍵詞:分離鑒定

    楊笑笑 李振輪 王晗 李娜

    摘要:采用土壤稀釋平板法從重慶市彭水縣的植煙土壤樣品中分離出8株具有解鉀能力的細菌,通過測定其對含鉀礦石中有效鉀的釋放能力,篩選出兩株具有較強的解鉀能力的硅酸鹽細菌,運用分子生物學(xué)方法對這兩株硅酸鹽細菌的16~23S rDNA序列進行擴增并鑒定。結(jié)果表明,一株細菌屬于膠質(zhì)類芽孢桿菌(Paenibacillus mucilaginosus),另一株細菌屬于短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis),并且研究了這兩株細菌的生理生化特性。

    關(guān)鍵詞:硅酸鹽細菌;分離鑒定;生理生化特性;重慶煙區(qū)

    中圖分類號:Q939.96 文獻標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)05-1013-04

    土壤是一個天然鉀庫,每公頃土壤耕層含鉀量約為26.1 t,而90%~98%以上的鉀素存在于鉀長石和云母等富含硅酸鹽的礦物中,其中的鉀素多以緩效態(tài)存在,不能直接被農(nóng)作物利用,能被植物吸收利用的可溶性速效鉀含量約占農(nóng)作物總需求量的5%和土壤總鉀量的0.1%~0.2% [1]。因此,我國土壤既富含鉀又缺鉀,總體呈現(xiàn)出可溶性速效鉀素缺乏的現(xiàn)象。有關(guān)資料顯示,中國的鉀肥產(chǎn)量占世界的0.34%,而消耗量占14.7%,可見我國鉀素資源短缺,多依賴于進口[2]。以多種形式補充土壤中的可溶性速效鉀素,科學(xué)合理施用鉀肥已成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的主要技術(shù)措施之一[3]。發(fā)掘土壤中具有解鉀能力的微生物,將其應(yīng)用于可溶性速效鉀素的釋放,提高土壤中可利用鉀素的含量,是近些年鉀肥研究領(lǐng)域的熱點。相關(guān)報道表明,解鉀細菌多是硅酸鹽細菌,它能夠分解硅酸鹽類礦物并協(xié)同釋放出鉀等元素供植物利用,將土壤礦物中緩效態(tài)鉀素轉(zhuǎn)化為可溶性速效鉀素,兼具固氮、解磷功能[4],并且該類細菌對營養(yǎng)成分要求不高,廣泛分布于土壤中,是一種良好的功能菌[5]。因此,在化學(xué)鉀肥供應(yīng)不足的大環(huán)境下,以解鉀菌的相關(guān)研究為基礎(chǔ),研發(fā)出效果好、成本低且環(huán)境友好的微生物肥料,進一步挖掘土壤中的鉀素資源,具有重要的科學(xué)和實際意義。

    近年來,對硅酸鹽細菌解鉀的研究,大致集中于4個方面[6] : 一是解鉀的效果研究;二是解鉀的條件,包括土壤條件和環(huán)境條件的研究;三是解鉀的機理研究;四是實際投入運用研究。硅酸鹽細菌解鉀的效果研究處于首要地位,即篩選出一些解鉀能力較強的菌株,目前國內(nèi)外的研究大都處于這一階段。

    我國西南地區(qū)是重要的農(nóng)作物及經(jīng)濟作物產(chǎn)地,其地理位置、生態(tài)環(huán)境和土壤條件具有特殊性,土壤中礦物鉀的含量豐富,但是可供植物直接利用的可溶性鉀含量較低。本試驗主要從重慶彭水縣植煙區(qū)缺鉀土壤中分離一些硅酸鹽細菌,并對其中具有較高解鉀能力的菌株進行分類鑒定,可為利用硅酸鹽細菌增加重慶植煙區(qū)缺鉀土壤中有效鉀的含量提供微生物資源。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    土壤樣品采自重慶市彭水縣植煙區(qū)。風(fēng)干,過1 mm篩備用。

    鉀長石粉:經(jīng)0.1 mol/L NH4Cl溶液清洗,陰干備用[7]。

    白云母粉:過1 mm篩,陰干備用。

    1.2 培養(yǎng)基

    缺鉀培養(yǎng)基A:蔗糖5.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,CaCO3 1.0 g, Na2HPO4 2.0 g,F(xiàn)eCl3 0.005 g,鉀長石粉 1.0 g,去離子水1 L[8]。

    缺鉀培養(yǎng)基B:蔗糖5.0 g,Na2HPO4 2.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,鉀長石粉或白云母粉1.0 g,F(xiàn)eCl3 溶液數(shù)滴,去離子水 1 L,瓊脂 20 g[9]。

    牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏 4.0 g,蛋白胨 10.0 g,去離子水1 L,pH 7.2~7.5。

    無氮培養(yǎng)基:蔗糖 10.0 g,K2HPO2 2.0 g,NaCl 0.1 g,MgSO4 0.5 g, CaCO3 0.5 g, 酵母膏 0.5 g,去離子水1 L,瓊脂 15.0 g,pH 7.4[10]。

    1.3 方法

    1.3.1 解鉀菌篩選與培養(yǎng)

    1)土壤樣品稀釋。在無菌操作下稱取10.0 g土壤樣品,加入到含玻璃珠及90 mL無菌水的三角瓶中。置于搖床以200 r/min充分振蕩30 min,即配制成10-1土壤稀釋液。用無菌槍頭吸取5.0 mL上述稀釋液,加入到含45 mL無菌水的三角瓶中,混勻成10-2土壤稀釋液。這樣依次稀釋,得到10-3土壤稀釋液(每個稀釋度須更換無菌槍頭)。

    2)推板篩選。選取10-2以及10-3稀釋度的土壤稀釋液,分別吸取200 ?滋L加入到缺鉀培養(yǎng)基A中,進行平板涂抹,涂抹均勻后30 ℃培養(yǎng)3 d左右。挑取邊緣整齊、濕潤、黏稠、無色透明、富有彈性的菌落[10],劃線純化。

    挑取純化后的單菌落加入牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,30 ℃,160 r/min搖瓶擴大培養(yǎng),分裝添加適量甘油后低溫保存。

    1.3.2 解鉀能力的測定 每250 mL三角瓶中加50 mL缺鉀培養(yǎng)基B,添加不同類型的礦物(鉀長石粉、白云母粉),121 ℃,20 min滅菌。加入3 mL菌懸液(OD600nm=1.0),分別設(shè)置20、25、30、35 ℃ 4個溫度梯度, 3次重復(fù),160 r/min搖床培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d后取培養(yǎng)液用60 g/L稀H2O2消煮,過濾定容。采用火焰光度法測定速效鉀的含量[11]。

    1.3.3 細菌鑒定 根據(jù)解鉀能力測定結(jié)果,選取解鉀能力較好的細菌進行DNA序列擴增。采用細菌16~23S rDNA通用引物 16~23S(1)(5′- TTGT

    ACACACCGCCCGTC-3′), 16~23S(2)(5′-CCTTTCC

    CTCACGGTACTG-3′),配置25 μL PCR反應(yīng)體系:包括1×PCR緩沖液,0.625 U Taq酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs, 0.4 μmol/L primer1, 0.4 μmol/L primer2,50~100ng /μL DNA模板稀釋液。PCR擴增程序為95 ℃預(yù)變性10 min;94 ℃變性1 min,50 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min,32個循環(huán);72 ℃延伸5 min。取10 μL PCR擴增產(chǎn)物,進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。PCR產(chǎn)物割膠回收,經(jīng)TA克隆后送至英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司進行測序。

    1.3.4 生理生化特性測定 采用革蘭氏染色法,并以無氮培養(yǎng)基為基礎(chǔ),進行葡萄糖、明膠等生理生化特性測定和一些生物學(xué)特性測定,具體方法參見《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[12]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 解鉀菌篩選結(jié)果

    經(jīng)過土壤樣品稀釋涂平板,在分離培養(yǎng)基的平板上可觀察到圓形、表面光滑且透明、凸起、有彈性的菌落,培養(yǎng)3~5 d后菌落直徑約為7~9 mm。由于多數(shù)的解鉀菌在具有解鉀能力的同時具有固氮能力,所以在菌株的選擇上,以能否產(chǎn)莢膜作為一個篩選條件 [4] 。挑取符合上述形態(tài)的菌株在無氮培養(yǎng)基上進行劃線純化,然后通過莢膜染色,選擇有莢膜的菌株,分別命名為K1~K8。

    2.2 解鉀菌K1~K8對鉀長石和白云母的解鉀作用

    將解鉀細菌k1~k8接種于缺鉀液體培養(yǎng)基B(分別含鉀長石和白云母),分別置于20、25、30、35 ℃搖瓶培養(yǎng),培養(yǎng)6 d,測定其速效鉀的含量,結(jié)果見圖1和圖2。由圖1可知,K2與其他菌株相比,在20、30 ℃條件下解鉀能力最強,速效鉀的含量分別比對照增加了近80%和100%,且K2在20 ℃條件下解鉀能力強于其他溫度。由圖2可知,在20 ℃條件下K6解鉀能力強于其他溫度,且其在20、30、35 ℃條件下的解鉀能力強于其他菌株,速效鉀的含量分別比對照增加了133%、100%、125%。同時,由圖2可知,K2在25 ℃條件下對白云母粉的解鉀能力強于其他溫度,這與圖1中K2對鉀長石粉的解鉀能力隨溫度的變化不同。圖1與圖2相比較可知,細菌K1~K8對白云母粉的解鉀能力均高于對鉀長石粉的解鉀能力。

    2.3 解鉀細菌的分子生物學(xué)鑒定及生理生化特性

    2.3.1 菌株K2和K6的鑒定結(jié)果 對解鉀能力較強的細菌K2和K6進行分子生物學(xué)鑒定。PCR擴增結(jié)果表明,K2擴增出長約1 000 bp DNA片段,K6擴增出長約900 bp DNA片段(圖3)。將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫中已報道的菌種進行BLAST比對,結(jié)果顯示K2與短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis NBRC 100599 DHA)(登錄號:AP008955.1)相似度達99%,K6與膠質(zhì)類芽孢桿菌(Paenibacillus mucilaginosus K02)(登錄號:CP003422.1)相似度達99%。可據(jù)此判定K2屬于短短芽孢桿菌(Brevibacillus brevis),K6屬于膠質(zhì)類芽孢桿菌(Paenibacillus mucilaginosus)。

    2.3.2 生理生化特性 K2生理生化特性符合短芽孢桿菌屬(Brevibacillus Shida)的特性,K6的生理生化特性也符合芽孢桿菌屬(Bacillus Cohn)的特性(表1),即從生理生化的角度對分子生物學(xué)鑒定結(jié)果進行了驗證。

    3 討論

    近年來,硅酸鹽細菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中潛在的應(yīng)用前景逐漸為人們所了解,并將應(yīng)用到微生物肥料中,表明硅酸鹽細菌具有良好的發(fā)展前景。

    蔣先軍等[13]認為,硅酸鹽細菌的增產(chǎn)作用不應(yīng)只從它能分解硅酸鹽礦物釋放出鉀來考慮,還應(yīng)考慮到硅酸鹽細菌作為一種根際微生物在植物微生物系統(tǒng)中的作用及自身產(chǎn)生的各種作用,如影響植物營養(yǎng)的有效吸收和植物病原物的活動,以及代謝產(chǎn)物對植株生長的影響等。同時,王思遠[14]研究表明,硅酸鹽細菌能明顯地促進土壤養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化,促進煙株對養(yǎng)分的吸收利用和生長發(fā)育,配合一定量的氮、磷、鉀化肥施用效果更好,能明顯地促進煙株的生長發(fā)育。盛下放等[15]研究表明,硅酸鹽菌劑不僅可以促進棉花生長,提高其產(chǎn)量和品質(zhì),而且可以降低生產(chǎn)成本,保護生態(tài)環(huán)境。因此,從生態(tài)角度上,開發(fā)以具有解鉀能力的細菌為主要成分的生物鉀肥應(yīng)用前景廣闊。

    本試驗通過對8株細菌進行解鉀能力的測定,發(fā)現(xiàn)有兩株細菌的解鉀能力較好。但是, K2細菌25 ℃條件下對鉀長石粉的解鉀作用不及20 ℃和30 ℃,這是本試驗存在的一個重要問題,可能是由于消煮不徹底,導(dǎo)致很大的誤差產(chǎn)生。

    同時,本試驗證實了8株細菌對白云母的釋鉀能力均高于鉀長石,這可能與礦物結(jié)構(gòu)有關(guān),鉀長石是架狀結(jié)構(gòu)的硅酸鹽礦物,而白云母則是層狀結(jié)構(gòu)的硅酸鹽礦物,細菌較易于從云母類礦物中獲得速效鉀。連賓等[16]研究表明,對架狀結(jié)構(gòu)的硅酸鹽礦物而言,硅酸鹽細菌主要通過形成細菌-礦物復(fù)合體并由此產(chǎn)生細菌對礦物表面的溶蝕作用,隨之礦物顆粒晶格逐漸發(fā)生變形或崩解,硅酸鹽細菌對礦物鉀的主動吸收作用,其代謝產(chǎn)物等化學(xué)因子對礦物顆粒有化學(xué)降解作用等幾種途徑來實施對礦物的解鉀作用,而對層狀結(jié)構(gòu)的含鉀礦物而言,硅酸鹽細菌還可以通過擴大其層間的距離來促進其中鉀離子的釋放。這為進一步研究細菌與礦物作用的機理提供了理論依據(jù)。

    何琳燕等[17]認為生物鉀肥功能的有效發(fā)揮必須滿足兩個基本條件:一是菌株的高效性,二是菌株本身對土壤環(huán)境的適應(yīng)性。在將生物鉀肥施用在土壤中之前,必須保證該生物鉀肥有良好的解鉀能力。但是,盛下放等[18]研究發(fā)現(xiàn),膠質(zhì)類芽孢桿菌中有明顯的解鉀溶磷作用的只占15%~29%。因此,從我國豐富的膠質(zhì)類芽孢桿菌資源中篩選出解鉀能力較強的膠質(zhì)類芽孢桿菌具有重要的理論與實用價值。根據(jù)試驗結(jié)果,本研究中所篩選的短短芽孢桿菌和膠質(zhì)類芽孢桿菌菌株有一定的解鉀能力,具備了制作生物鉀肥的前提條件,為進一步研究生物鉀肥對土壤環(huán)境的適應(yīng)性打下了基礎(chǔ)。

    參考文獻:

    [1] MCLEAN E O,WATSON M E. Soil measurements of plant available potassium[A].MUNSON R D. Potassium in Agriculture[C]. Madison,WI: American Society of Agronomy,1985.277-308.

    [2] 謝建昌.世界肥料使用的現(xiàn)狀與前景[J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報,1988,4(4):321-330.

    [3] 賀積強,李登煜,張小平,等.硅酸鹽細菌的研究進展[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,1999,12(土肥專輯):102-108.

    [4] 曲忠誠,孫冬梅,遲 莉.解鉀微生物K3與K4的分離及特性研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):17-19.

    [5] 潘 牧,陳 燁,連 賓.喀斯特環(huán)境中硅酸鹽細菌在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,42(3):201-203.

    [6] 劉五星,楊啟銀,徐旭士,等.硅酸鹽細菌肥料的研究進展[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,9(4):39-42.

    [7] 李玉梅,王根林,孫 彬,等.不同磷鉀水平對硅酸鹽細菌解鉀溶磷能力的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2007,23(5):258-260.

    [8] 閆華曉,趙 輝,朱碩斐,等.6株硅酸鹽細菌解磷解鉀活性的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(28):13728-13729.

    [9] 董昌金,蔣寶貴.復(fù)合微生物肥料高效菌株的篩選[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(1):56-57.

    [10] 徐大勇,李 峰,賀雪麗.硅酸鹽細菌的分離及其解鉀活性的初步比較[J].淮北煤炭師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,27(4):42-44.

    [11] 趙 艷,張曉波,郭 偉.不同土壤膠質(zhì)芽孢桿菌生理生化特征及其解鉀活性[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報,2009,18(6):2283-2286.

    [12] 東秀珠,蔡妙英.常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2001.

    [13] 蔣先軍,黃昭賢,謝德體,等.硅酸鹽細菌代謝產(chǎn)物對植物生長的促進作用[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2)):116-119.

    [14] 王思遠.硅酸鹽細菌與化肥配施對土壤養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化和烤煙生長發(fā)育的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2):10-15.

    [15] 盛下放,黃為一,殷永嫻.硅酸鹽細菌的解鉀作用及對棉花的增產(chǎn)效果[J].土壤,2001,33(3):163-165.

    [16] 連 賓,傅平秋,莫德明,等.硅酸鹽細菌解鉀作用機理的綜合效應(yīng)[J].礦物學(xué)報,2002,22(2):179-183.

    [17] 何琳燕,盛下放,陸光祥,等.不同土壤中硅酸鹽細菌生理生化特征及其解鉀活性的研究[J].土壤,2004,36(4):434-437.

    [18] 盛下放,黃為一.硅酸鹽細菌NBT菌株釋鉀條件的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,35(6):673-677.

    [2] 謝建昌.世界肥料使用的現(xiàn)狀與前景[J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報,1988,4(4):321-330.

    [3] 賀積強,李登煜,張小平,等.硅酸鹽細菌的研究進展[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,1999,12(土肥專輯):102-108.

    [4] 曲忠誠,孫冬梅,遲 莉.解鉀微生物K3與K4的分離及特性研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):17-19.

    [5] 潘 牧,陳 燁,連 賓.喀斯特環(huán)境中硅酸鹽細菌在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,42(3):201-203.

    [6] 劉五星,楊啟銀,徐旭士,等.硅酸鹽細菌肥料的研究進展[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,9(4):39-42.

    [7] 李玉梅,王根林,孫 彬,等.不同磷鉀水平對硅酸鹽細菌解鉀溶磷能力的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2007,23(5):258-260.

    [8] 閆華曉,趙 輝,朱碩斐,等.6株硅酸鹽細菌解磷解鉀活性的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(28):13728-13729.

    [9] 董昌金,蔣寶貴.復(fù)合微生物肥料高效菌株的篩選[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(1):56-57.

    [10] 徐大勇,李 峰,賀雪麗.硅酸鹽細菌的分離及其解鉀活性的初步比較[J].淮北煤炭師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,27(4):42-44.

    [11] 趙 艷,張曉波,郭 偉.不同土壤膠質(zhì)芽孢桿菌生理生化特征及其解鉀活性[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報,2009,18(6):2283-2286.

    [12] 東秀珠,蔡妙英.常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2001.

    [13] 蔣先軍,黃昭賢,謝德體,等.硅酸鹽細菌代謝產(chǎn)物對植物生長的促進作用[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2)):116-119.

    [14] 王思遠.硅酸鹽細菌與化肥配施對土壤養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化和烤煙生長發(fā)育的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2):10-15.

    [15] 盛下放,黃為一,殷永嫻.硅酸鹽細菌的解鉀作用及對棉花的增產(chǎn)效果[J].土壤,2001,33(3):163-165.

    [16] 連 賓,傅平秋,莫德明,等.硅酸鹽細菌解鉀作用機理的綜合效應(yīng)[J].礦物學(xué)報,2002,22(2):179-183.

    [17] 何琳燕,盛下放,陸光祥,等.不同土壤中硅酸鹽細菌生理生化特征及其解鉀活性的研究[J].土壤,2004,36(4):434-437.

    [18] 盛下放,黃為一.硅酸鹽細菌NBT菌株釋鉀條件的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,35(6):673-677.

    [2] 謝建昌.世界肥料使用的現(xiàn)狀與前景[J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報,1988,4(4):321-330.

    [3] 賀積強,李登煜,張小平,等.硅酸鹽細菌的研究進展[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,1999,12(土肥專輯):102-108.

    [4] 曲忠誠,孫冬梅,遲 莉.解鉀微生物K3與K4的分離及特性研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):17-19.

    [5] 潘 牧,陳 燁,連 賓.喀斯特環(huán)境中硅酸鹽細菌在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,42(3):201-203.

    [6] 劉五星,楊啟銀,徐旭士,等.硅酸鹽細菌肥料的研究進展[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,9(4):39-42.

    [7] 李玉梅,王根林,孫 彬,等.不同磷鉀水平對硅酸鹽細菌解鉀溶磷能力的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2007,23(5):258-260.

    [8] 閆華曉,趙 輝,朱碩斐,等.6株硅酸鹽細菌解磷解鉀活性的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(28):13728-13729.

    [9] 董昌金,蔣寶貴.復(fù)合微生物肥料高效菌株的篩選[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(1):56-57.

    [10] 徐大勇,李 峰,賀雪麗.硅酸鹽細菌的分離及其解鉀活性的初步比較[J].淮北煤炭師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2006,27(4):42-44.

    [11] 趙 艷,張曉波,郭 偉.不同土壤膠質(zhì)芽孢桿菌生理生化特征及其解鉀活性[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報,2009,18(6):2283-2286.

    [12] 東秀珠,蔡妙英.常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2001.

    [13] 蔣先軍,黃昭賢,謝德體,等.硅酸鹽細菌代謝產(chǎn)物對植物生長的促進作用[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2)):116-119.

    [14] 王思遠.硅酸鹽細菌與化肥配施對土壤養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化和烤煙生長發(fā)育的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000,22(2):10-15.

    [15] 盛下放,黃為一,殷永嫻.硅酸鹽細菌的解鉀作用及對棉花的增產(chǎn)效果[J].土壤,2001,33(3):163-165.

    [16] 連 賓,傅平秋,莫德明,等.硅酸鹽細菌解鉀作用機理的綜合效應(yīng)[J].礦物學(xué)報,2002,22(2):179-183.

    [17] 何琳燕,盛下放,陸光祥,等.不同土壤中硅酸鹽細菌生理生化特征及其解鉀活性的研究[J].土壤,2004,36(4):434-437.

    [18] 盛下放,黃為一.硅酸鹽細菌NBT菌株釋鉀條件的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,35(6):673-677.

    猜你喜歡
    分離鑒定
    貴州薏苡黑穗病的發(fā)病情況及其病原菌的分離鑒定
    煙粉虱病原真菌的分離鑒定及生物活性初步研究
    草魚腸道不動桿菌的分離鑒定及藥敏試驗
    五株雞傳染性支氣管炎病毒流行株的分離鑒定
    引起奶牛關(guān)節(jié)炎的牛支原體病原的分離鑒定
    江蘇1株雞傳染性貧血病毒的分離鑒定
    一例棘腹蛙“白內(nèi)障”的病原分離鑒定
    一株羊源腸出血性大腸桿菌的分離與鑒定
    丁鱥疑似致病真菌的分離鑒定與生物學(xué)特性
    一株纖維素分解菌的分離鑒定及生物學(xué)特性
    欧美av亚洲av综合av国产av | 看非洲黑人一级黄片| 97在线视频观看| 一区二区三区乱码不卡18| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 免费大片黄手机在线观看| 电影成人av| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美人与性动交α欧美软件| 美女午夜性视频免费| 欧美日韩综合久久久久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 激情五月婷婷亚洲| 欧美成人午夜精品| av视频免费观看在线观看| 99国产综合亚洲精品| 视频区图区小说| 久久影院123| 国产黄色视频一区二区在线观看| 1024香蕉在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 91久久精品国产一区二区三区| 老司机影院成人| 波多野结衣av一区二区av| 90打野战视频偷拍视频| 少妇人妻久久综合中文| 久久国内精品自在自线图片| 成年动漫av网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日本wwww免费看| 国产免费视频播放在线视频| 国产野战对白在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美精品av麻豆av| 婷婷成人精品国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 欧美国产精品一级二级三级| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲国产日韩一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 高清不卡的av网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久99一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产色片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 视频在线观看一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品不卡视频一区二区| 最黄视频免费看| 色视频在线一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 亚洲中文av在线| 日韩伦理黄色片| av国产精品久久久久影院| 成人二区视频| videosex国产| 一级毛片 在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆| 永久网站在线| 欧美精品av麻豆av| 香蕉精品网在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av免费观看日本| 黄色怎么调成土黄色| 超碰97精品在线观看| 99国产精品免费福利视频| 欧美日韩视频精品一区| videossex国产| www.自偷自拍.com| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品欧美亚洲77777| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | av女优亚洲男人天堂| 一区福利在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品av麻豆狂野| 999久久久国产精品视频| videosex国产| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 哪个播放器可以免费观看大片| 看免费av毛片| 91成人精品电影| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人精品婷婷| 久久精品久久久久久久性| 久久久久精品人妻al黑| 久久久久久伊人网av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 精品国产露脸久久av麻豆| 中国三级夫妇交换| 日日爽夜夜爽网站| 精品少妇内射三级| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99热网站在线观看| 国产精品免费大片| 亚洲成人手机| 亚洲精品日本国产第一区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精品一二三| 黄频高清免费视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 啦啦啦在线观看免费高清www| 一区二区三区四区激情视频| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品在线美女| 欧美97在线视频| 看十八女毛片水多多多| 成人手机av| av网站在线播放免费| 99九九在线精品视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 18禁动态无遮挡网站| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲国产欧美在线一区| 美女视频免费永久观看网站| 久久人妻熟女aⅴ| √禁漫天堂资源中文www| 一区二区三区激情视频| 黑丝袜美女国产一区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产成人aa在线观看| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧洲国产日韩| 水蜜桃什么品种好| 精品酒店卫生间| av免费在线看不卡| 久久精品久久久久久久性| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 91精品三级在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲四区av| 成人午夜精彩视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 美女大奶头黄色视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久久久久人人人人人| 精品福利永久在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 两个人免费观看高清视频| 国产精品一国产av| 五月天丁香电影| 亚洲精品一二三| 最新中文字幕久久久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成人国产av品久久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 香蕉丝袜av| 男女国产视频网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 久久精品久久精品一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 国产黄频视频在线观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 精品一品国产午夜福利视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 女性被躁到高潮视频| 亚洲男人天堂网一区| 久久久久久伊人网av| 免费黄色在线免费观看| 国产熟女欧美一区二区| 日本av手机在线免费观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 搡老乐熟女国产| 亚洲精品国产av成人精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美精品av麻豆av| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 大陆偷拍与自拍| 桃花免费在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲伊人色综图| videosex国产| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 国产一级毛片在线| 欧美+日韩+精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩大片免费观看网站| 美国免费a级毛片| 亚洲精品国产av蜜桃| 看免费成人av毛片| 中文字幕人妻熟女乱码| 啦啦啦在线免费观看视频4| 妹子高潮喷水视频| 欧美+日韩+精品| 男女边摸边吃奶| 亚洲精品乱久久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 考比视频在线观看| 亚洲精品自拍成人| 国产人伦9x9x在线观看 | 久久久国产精品麻豆| 日韩伦理黄色片| 久久热在线av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 男女无遮挡免费网站观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲精品第二区| 久久av网站| 免费观看a级毛片全部| av国产精品久久久久影院| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品国产乱码久久久久久小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99热全是精品| 国产又色又爽无遮挡免| 寂寞人妻少妇视频99o| 在线观看三级黄色| 不卡av一区二区三区| 高清在线视频一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲人成电影观看| 看免费av毛片| 国产乱人偷精品视频| 90打野战视频偷拍视频| 日本色播在线视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 97人妻天天添夜夜摸| 精品视频人人做人人爽| 男女边摸边吃奶| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲伊人久久精品综合| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 免费观看av网站的网址| 成人国产av品久久久| 黄片无遮挡物在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 伦精品一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 中文字幕av电影在线播放| 久久久久久人妻| 女人久久www免费人成看片| 少妇人妻 视频| 美女福利国产在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美+日韩+精品| 欧美日韩视频精品一区| 在线观看免费高清a一片| 丁香六月天网| 寂寞人妻少妇视频99o| 精品久久蜜臀av无| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久 成人 亚洲| 少妇精品久久久久久久| 在线看a的网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美日韩av久久| 国产毛片在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产精品国产精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 91久久精品国产一区二区三区| 男人舔女人的私密视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 免费av中文字幕在线| 青春草国产在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日本av免费视频播放| 一级毛片我不卡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av不卡在线播放| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 一级片'在线观看视频| 女性被躁到高潮视频| 日本欧美视频一区| 国产成人精品久久二区二区91 | 日韩av不卡免费在线播放| 伦理电影免费视频| 国产精品免费视频内射| videos熟女内射| 精品福利永久在线观看| 多毛熟女@视频| 日韩一区二区三区影片| 国产成人精品福利久久| 日本vs欧美在线观看视频| 不卡av一区二区三区| 少妇的逼水好多| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产综合精华液| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产成人精品在线电影| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美日韩av久久| 不卡视频在线观看欧美| 精品国产一区二区久久| 美女国产高潮福利片在线看| 国产日韩欧美在线精品| 18在线观看网站| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 1024视频免费在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 男女下面插进去视频免费观看| av天堂久久9| 三上悠亚av全集在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩三级伦理在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 男人添女人高潮全过程视频| 国产黄色免费在线视频| 午夜日韩欧美国产| 老女人水多毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜老司机福利剧场| 午夜福利,免费看| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久久精品区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 观看美女的网站| 午夜影院在线不卡| 日韩中字成人| 九色亚洲精品在线播放| 久久久久久久久久人人人人人人| av天堂久久9| av在线老鸭窝| 制服诱惑二区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品酒店卫生间| 伦理电影免费视频| 免费黄频网站在线观看国产| 两性夫妻黄色片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产在线免费精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩大片免费观看网站| 久久久精品区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久 成人 亚洲| 久久久欧美国产精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品久久蜜臀av无| 麻豆乱淫一区二区| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产av影院在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产高清不卡午夜福利| 91久久精品国产一区二区三区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲av中文av极速乱| 好男人视频免费观看在线| 久久久欧美国产精品| 亚洲国产av影院在线观看| 久久精品夜色国产| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩av免费高清视频| 久久久国产欧美日韩av| 一级片'在线观看视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 欧美另类一区| 国产成人一区二区在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产成人精品福利久久| 性色avwww在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品国产自在天天线| 自线自在国产av| 性少妇av在线| 日韩视频在线欧美| 国产视频首页在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 99久久综合免费| 欧美日韩综合久久久久久| 婷婷色综合www| 国产福利在线免费观看视频| 久久人人爽人人片av| 成人手机av| 晚上一个人看的免费电影| 精品国产乱码久久久久久小说| www.自偷自拍.com| 日韩中文字幕视频在线看片| 考比视频在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av免费高清在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 欧美bdsm另类| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品免费大片| 亚洲,欧美,日韩| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产av码专区亚洲av| 热99国产精品久久久久久7| 久久久久久久久久久久大奶| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品免费大片| 欧美人与善性xxx| 91精品国产国语对白视频| 最近中文字幕2019免费版| 99久久精品国产国产毛片| 伊人亚洲综合成人网| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 国产精品国产三级专区第一集| 老汉色∧v一级毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久精品94久久精品| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美一区二区三区久久| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 婷婷成人精品国产| 国产成人免费观看mmmm| 精品视频人人做人人爽| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 又黄又粗又硬又大视频| 精品福利永久在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| a级片在线免费高清观看视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品久久久av美女十八| 中文字幕最新亚洲高清| 国产在线免费精品| 亚洲av免费高清在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产乱来视频区| 最新中文字幕久久久久| 精品一区二区三卡| 精品第一国产精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 午夜激情av网站| 日本av免费视频播放| 亚洲伊人色综图| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲欧美一区二区三区久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 999精品在线视频| 99热网站在线观看| 另类亚洲欧美激情| 久久 成人 亚洲| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品在线美女| 色吧在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产精品久久久久久av不卡| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av男天堂| 国产av一区二区精品久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 黄片无遮挡物在线观看| 国产野战对白在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 午夜福利在线免费观看网站| 一级a爱视频在线免费观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品国产一区二区三区四区第35| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线免费观看不下载黄p国产| 99香蕉大伊视频| 少妇精品久久久久久久| 久久综合国产亚洲精品| 在线天堂最新版资源| 久久精品夜色国产| 一区二区av电影网| 午夜免费观看性视频| 免费观看性生交大片5| 黄频高清免费视频| 妹子高潮喷水视频| 各种免费的搞黄视频| 亚洲视频免费观看视频| av国产久精品久网站免费入址| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 中文字幕亚洲精品专区| 日韩av免费高清视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 在现免费观看毛片| 国产熟女午夜一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 日韩伦理黄色片| 国产爽快片一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看 | 婷婷成人精品国产| 国产 一区精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 男人操女人黄网站| 欧美 日韩 精品 国产| 国产极品天堂在线| 韩国av在线不卡| 2022亚洲国产成人精品| 久久久精品区二区三区| 男人操女人黄网站| 熟妇人妻不卡中文字幕| 七月丁香在线播放| 免费少妇av软件| 免费av中文字幕在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 天美传媒精品一区二区| 亚洲中文av在线| 日韩欧美精品免费久久| 99国产综合亚洲精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 香蕉丝袜av| 久久久久网色| 视频在线观看一区二区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久精品国产自在天天线| 国产乱人偷精品视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 女人久久www免费人成看片| videossex国产| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 久久久久人妻精品一区果冻| 久久毛片免费看一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 欧美最新免费一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品自拍成人| 国产精品久久久久久久久免| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜精品国产一区二区电影| 国产麻豆69| 18禁动态无遮挡网站| 极品人妻少妇av视频| 精品亚洲成国产av| 亚洲内射少妇av| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 美女高潮到喷水免费观看| 久久精品国产综合久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美国产精品va在线观看不卡| 边亲边吃奶的免费视频| 久久人人爽人人片av| 国产黄频视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 精品一区二区三卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 伊人久久国产一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 热re99久久国产66热| 国产免费福利视频在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 午夜福利在线观看免费完整高清在| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 伦理电影免费视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久午夜综合久久蜜桃| 大话2 男鬼变身卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av欧美aⅴ国产| av线在线观看网站| 观看美女的网站| 一级片免费观看大全| 老女人水多毛片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产极品天堂在线| 男人添女人高潮全过程视频| videossex国产| 日本色播在线视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美老熟妇乱子伦牲交|