豬腹瀉病料進行病原微生物的分離培養(yǎng)

摘要：對廣東某一家豬場采集的病料進行病原微生物的分離培養(yǎng)，獲得4株菌株。通過菌落和細菌形態(tài)學(xué)觀察、生化試驗進行細菌的分離鑒定。根據(jù)細菌的形態(tài)特征及生長特性，同時應(yīng)用腸桿菌科GYZ-15e編碼鑒定管和葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管TH-16S對所分離的細菌進行分類鑒定，以鑒定其屬和種。試驗結(jié)果確定4株菌種中有大腸埃希氏菌3株，葡萄球菌1株。

關(guān)鍵詞：大腸埃希氏菌；分離培養(yǎng)；鑒定；生物學(xué)特性；生化反應(yīng)；葡萄球菌

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）07-0006-02

收稿日期：2014-06-25

作者簡介：曾小鳳（1985-），女，廣東新豐人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣及獸醫(yī)臨床診斷工作。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 從某豬場分離的4株菌株。

1.1.2 主要儀器 超凈工作臺、THZ-C恒溫振蕩器、pH計、光學(xué)顯微鏡等。

1.1.3 主要用具 接種環(huán)、接種針、培養(yǎng)皿、試管、載玻片等。

1.1.4 生化試劑 大腸桿菌科生化編碼鑒定管、葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管均購于杭州微生物試劑有限公司。

1.1.5 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯、血清肉湯、普通平板、血清平板、康凱培養(yǎng)基、瓊脂斜面。

1.2 方法

1.2.1 菌種分離純化培養(yǎng) 將分離的菌株進行純培養(yǎng)。分別取肉湯培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板和普通瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，觀察其生長情況，記錄。將能在麥康凱上長出紅色菌落的、長出透明菌落、和不生長的分開標記，記錄。挑取單一的菌落放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察其中菌體情況，做相應(yīng)記錄。由普通瓊脂平板上挑取形態(tài)結(jié)構(gòu)相異的菌落的一半再次接種于肉湯中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。同時挑取另一半放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察菌體情況，并做好記錄。將不能在普通瓊脂中生長的菌株接種于鮮血肉湯中增菌，然后接種到鮮血培養(yǎng)基中繼續(xù)分離提純，做好記錄。

重復(fù)上述操作3次作進一步純化后，根據(jù)所得數(shù)據(jù)對菌株進行分類，鏡下檢驗為純菌后進行保菌處理，每株保菌3管，同時做好各項記錄。

1.2.2 涂片制作方法 菌落涂片方法、菌液涂片法、干燥、火焰固定法。

1.2.3 革蘭氏染色方法 在已干燥固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，經(jīng)1～2 min，水洗；加革蘭氏碘液于抹片上媒染30～60 s，水洗；加95%乙醇于抹片上脫色，約30秒至1 min，水洗；加10倍稀釋石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1～2 min，水洗；吸干或烘干，鏡檢。革蘭氏陽性細菌呈藍紫色，革蘭氏陰性細菌呈紅色。

1.2.4 菌株生化特性檢測 將保菌后剩下的菌液，繼續(xù)純化培養(yǎng)及進行生化鑒定。進一步純化培養(yǎng)的菌株進行種屬鑒定、同時對各菌進行氧化酶和觸酶試驗。

2 結(jié)果

經(jīng)多次的分離培養(yǎng)及革蘭氏染色、瑞士染色，共分離獲得8株菌株，具體染色、形態(tài)特征、培養(yǎng)特征和部分生化特性及生化結(jié)果如下：

將528BP1、528BP2、528BX2，3株菌株在振蕩培養(yǎng)16～18 h后，普通肉湯中度混濁；普通平板培養(yǎng)半透明，菌落呈圓形或近圓形，邊緣光滑菌落直徑約1.5～3.0 mm；在麥康凱培養(yǎng)生長旺盛，培養(yǎng)基由紅色變成淺的棕紅色，菌落直徑約1 mm，邊緣光滑，透明。日光下，菌落呈淺藍色。革蘭氏染色陰性，短桿狀，亦有球桿狀，散在分布，有些有兩極略有紅染。

菌株321FXY7 普通肉湯中度混濁灰白；普通培養(yǎng)基：圓形，邊緣整齊，不透明，輕度凸起，表面光滑，直徑約1.4 mm。麥康凱培養(yǎng)基：不生長。革蘭氏染色陽性，藍染，球菌；四疊球狀菌，六個一堆，有些成葡萄狀聚集。生化鑒定結(jié)果見表1～表3。

3 討論

通過此次豬病原菌的分離鑒定，可以診斷為主要由致病性大腸桿菌感染，因此可以用針對性的藥物，對大腸桿菌比較敏感的抗生素有：丁胺卡那霉素、卡那霉素、慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、阿莫西林。

摘要：對廣東某一家豬場采集的病料進行病原微生物的分離培養(yǎng)，獲得4株菌株。通過菌落和細菌形態(tài)學(xué)觀察、生化試驗進行細菌的分離鑒定。根據(jù)細菌的形態(tài)特征及生長特性，同時應(yīng)用腸桿菌科GYZ-15e編碼鑒定管和葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管TH-16S對所分離的細菌進行分類鑒定，以鑒定其屬和種。試驗結(jié)果確定4株菌種中有大腸埃希氏菌3株，葡萄球菌1株。

關(guān)鍵詞：大腸埃希氏菌；分離培養(yǎng)；鑒定；生物學(xué)特性；生化反應(yīng)；葡萄球菌

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）07-0006-02

收稿日期：2014-06-25

作者簡介：曾小鳳（1985-），女，廣東新豐人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣及獸醫(yī)臨床診斷工作。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 從某豬場分離的4株菌株。

1.1.2 主要儀器 超凈工作臺、THZ-C恒溫振蕩器、pH計、光學(xué)顯微鏡等。

1.1.3 主要用具 接種環(huán)、接種針、培養(yǎng)皿、試管、載玻片等。

1.1.4 生化試劑 大腸桿菌科生化編碼鑒定管、葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管均購于杭州微生物試劑有限公司。

1.1.5 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯、血清肉湯、普通平板、血清平板、康凱培養(yǎng)基、瓊脂斜面。

1.2 方法

1.2.1 菌種分離純化培養(yǎng) 將分離的菌株進行純培養(yǎng)。分別取肉湯培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板和普通瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，觀察其生長情況，記錄。將能在麥康凱上長出紅色菌落的、長出透明菌落、和不生長的分開標記，記錄。挑取單一的菌落放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察其中菌體情況，做相應(yīng)記錄。由普通瓊脂平板上挑取形態(tài)結(jié)構(gòu)相異的菌落的一半再次接種于肉湯中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。同時挑取另一半放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察菌體情況，并做好記錄。將不能在普通瓊脂中生長的菌株接種于鮮血肉湯中增菌，然后接種到鮮血培養(yǎng)基中繼續(xù)分離提純，做好記錄。

重復(fù)上述操作3次作進一步純化后，根據(jù)所得數(shù)據(jù)對菌株進行分類，鏡下檢驗為純菌后進行保菌處理，每株保菌3管，同時做好各項記錄。

1.2.2 涂片制作方法 菌落涂片方法、菌液涂片法、干燥、火焰固定法。

1.2.3 革蘭氏染色方法 在已干燥固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，經(jīng)1～2 min，水洗；加革蘭氏碘液于抹片上媒染30～60 s，水洗；加95%乙醇于抹片上脫色，約30秒至1 min，水洗；加10倍稀釋石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1～2 min，水洗；吸干或烘干，鏡檢。革蘭氏陽性細菌呈藍紫色，革蘭氏陰性細菌呈紅色。

1.2.4 菌株生化特性檢測 將保菌后剩下的菌液，繼續(xù)純化培養(yǎng)及進行生化鑒定。進一步純化培養(yǎng)的菌株進行種屬鑒定、同時對各菌進行氧化酶和觸酶試驗。

2 結(jié)果

經(jīng)多次的分離培養(yǎng)及革蘭氏染色、瑞士染色，共分離獲得8株菌株，具體染色、形態(tài)特征、培養(yǎng)特征和部分生化特性及生化結(jié)果如下：

將528BP1、528BP2、528BX2，3株菌株在振蕩培養(yǎng)16～18 h后，普通肉湯中度混濁；普通平板培養(yǎng)半透明，菌落呈圓形或近圓形，邊緣光滑菌落直徑約1.5～3.0 mm；在麥康凱培養(yǎng)生長旺盛，培養(yǎng)基由紅色變成淺的棕紅色，菌落直徑約1 mm，邊緣光滑，透明。日光下，菌落呈淺藍色。革蘭氏染色陰性，短桿狀，亦有球桿狀，散在分布，有些有兩極略有紅染。

菌株321FXY7 普通肉湯中度混濁灰白；普通培養(yǎng)基：圓形，邊緣整齊，不透明，輕度凸起，表面光滑，直徑約1.4 mm。麥康凱培養(yǎng)基：不生長。革蘭氏染色陽性，藍染，球菌；四疊球狀菌，六個一堆，有些成葡萄狀聚集。生化鑒定結(jié)果見表1～表3。

3 討論

通過此次豬病原菌的分離鑒定，可以診斷為主要由致病性大腸桿菌感染，因此可以用針對性的藥物，對大腸桿菌比較敏感的抗生素有：丁胺卡那霉素、卡那霉素、慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、阿莫西林。

摘要：對廣東某一家豬場采集的病料進行病原微生物的分離培養(yǎng)，獲得4株菌株。通過菌落和細菌形態(tài)學(xué)觀察、生化試驗進行細菌的分離鑒定。根據(jù)細菌的形態(tài)特征及生長特性，同時應(yīng)用腸桿菌科GYZ-15e編碼鑒定管和葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管TH-16S對所分離的細菌進行分類鑒定，以鑒定其屬和種。試驗結(jié)果確定4株菌種中有大腸埃希氏菌3株，葡萄球菌1株。

關(guān)鍵詞：大腸埃希氏菌；分離培養(yǎng)；鑒定；生物學(xué)特性；生化反應(yīng)；葡萄球菌

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）07-0006-02

收稿日期：2014-06-25

作者簡介：曾小鳳（1985-），女，廣東新豐人，助理獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣及獸醫(yī)臨床診斷工作。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 從某豬場分離的4株菌株。

1.1.2 主要儀器 超凈工作臺、THZ-C恒溫振蕩器、pH計、光學(xué)顯微鏡等。

1.1.3 主要用具 接種環(huán)、接種針、培養(yǎng)皿、試管、載玻片等。

1.1.4 生化試劑 大腸桿菌科生化編碼鑒定管、葡萄球菌屬細菌生化編碼鑒定管均購于杭州微生物試劑有限公司。

1.1.5 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯、血清肉湯、普通平板、血清平板、康凱培養(yǎng)基、瓊脂斜面。

1.2 方法

1.2.1 菌種分離純化培養(yǎng) 將分離的菌株進行純培養(yǎng)。分別取肉湯培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板和普通瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，觀察其生長情況，記錄。將能在麥康凱上長出紅色菌落的、長出透明菌落、和不生長的分開標記，記錄。挑取單一的菌落放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察其中菌體情況，做相應(yīng)記錄。由普通瓊脂平板上挑取形態(tài)結(jié)構(gòu)相異的菌落的一半再次接種于肉湯中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。同時挑取另一半放于滴有滅菌生理鹽水的潔凈玻片上，固定，染色，于顯微鏡下觀察菌體情況，并做好記錄。將不能在普通瓊脂中生長的菌株接種于鮮血肉湯中增菌，然后接種到鮮血培養(yǎng)基中繼續(xù)分離提純，做好記錄。

重復(fù)上述操作3次作進一步純化后，根據(jù)所得數(shù)據(jù)對菌株進行分類，鏡下檢驗為純菌后進行保菌處理，每株保菌3管，同時做好各項記錄。

1.2.2 涂片制作方法 菌落涂片方法、菌液涂片法、干燥、火焰固定法。

1.2.3 革蘭氏染色方法 在已干燥固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，經(jīng)1～2 min，水洗；加革蘭氏碘液于抹片上媒染30～60 s，水洗；加95%乙醇于抹片上脫色，約30秒至1 min，水洗；加10倍稀釋石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1～2 min，水洗；吸干或烘干，鏡檢。革蘭氏陽性細菌呈藍紫色，革蘭氏陰性細菌呈紅色。

1.2.4 菌株生化特性檢測 將保菌后剩下的菌液，繼續(xù)純化培養(yǎng)及進行生化鑒定。進一步純化培養(yǎng)的菌株進行種屬鑒定、同時對各菌進行氧化酶和觸酶試驗。

2 結(jié)果

經(jīng)多次的分離培養(yǎng)及革蘭氏染色、瑞士染色，共分離獲得8株菌株，具體染色、形態(tài)特征、培養(yǎng)特征和部分生化特性及生化結(jié)果如下：

將528BP1、528BP2、528BX2，3株菌株在振蕩培養(yǎng)16～18 h后，普通肉湯中度混濁；普通平板培養(yǎng)半透明，菌落呈圓形或近圓形，邊緣光滑菌落直徑約1.5～3.0 mm；在麥康凱培養(yǎng)生長旺盛，培養(yǎng)基由紅色變成淺的棕紅色，菌落直徑約1 mm，邊緣光滑，透明。日光下，菌落呈淺藍色。革蘭氏染色陰性，短桿狀，亦有球桿狀，散在分布，有些有兩極略有紅染。

菌株321FXY7 普通肉湯中度混濁灰白；普通培養(yǎng)基：圓形，邊緣整齊，不透明，輕度凸起，表面光滑，直徑約1.4 mm。麥康凱培養(yǎng)基：不生長。革蘭氏染色陽性，藍染，球菌；四疊球狀菌，六個一堆，有些成葡萄狀聚集。生化鑒定結(jié)果見表1～表3。

3 討論

通過此次豬病原菌的分離鑒定，可以診斷為主要由致病性大腸桿菌感染，因此可以用針對性的藥物，對大腸桿菌比較敏感的抗生素有：丁胺卡那霉素、卡那霉素、慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、阿莫西林。