不同標(biāo)本DNA檢測對疑似巨細(xì)胞病毒感染嬰兒的檢測效能

Efficacy of DNA Testing in Different Specimens in Infants with Suspected Cytomegalovirus Infection/ ZHANG Hua，GUO Hui，XUE Ting.//Medical Innovation ofChina，2025，22（20）： 145-148

[Abstract]Objective：To investigate the efficacy of DNA testing in different specimens for infants with suspected cytomegalovirus （CMV） infection.Method： Atotal of 10O cases of suspected CMV-infected infants admited tothe Maternaland Child Health Hospitalof Ji'an from January2021 to December 2O22 wereselected as the study subjects，and ethylene diamine tetraaceticacid-anticoagulated blood，urine and sputum samples were collected from the infants，andreal-time fluorescencequantitative polymerase chain reaction method was applied to perform CMV-DNA detection，the positive rates of different specimens，the positive rates of CMV-DNA detection and the viral loads of different specimens with positive CMV-DNA detection were compared.Result： Among the 100 children with suspected of CMV infection，there was a statistically significant diference in the positive rate of different specimens （Plt;0.05） ; and the positive rate of CMV-DNA in urine and sputum specimenswere higher than thatin blood specimens， the differences were statistically significant （ P lt;0.05）. There was statistically significant difference in the viral load of positive CMV-DNA tests in blood， urine and sputum samples （ P lt;0.05）; the viral load of positive CMV-DNA tests in sputum was higher than those in blood and urine，the differences were statistically significant ?Plt;0.05， ; and the viral load of positive CMV-DNA tests in urine was higher than that in blood， the difference was statistically significant （Plt;0.05） . Conclusion： Infant sputum CMV-DNA test has high diagnostic value for CMV infection.

[Keywords] Human cytomegalovirusDNA Infant Sputum

First-author's address： Department of Pediatrics，the Maternal and Child Health Hospital of Ji'an， Ji'an343000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2025.20.034

巨細(xì)胞病毒（CMV）是一種常見的皰疹病毒，主要通過體液傳播。對于胎兒、新生兒及嬰幼兒群體，CMV感染可能引發(fā)急性或慢性病程，并潛在地導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)遲發(fā)后遺癥，兒童CMV感染已成為一個跨越國界的公共衛(wèi)生焦點。在全球范圍內(nèi)，發(fā)達(dá)國家CMV感染率為 40%～50% ；而在發(fā)展中國家，感染率普遍超過 90%^[1] 。中國作為CMV感染的高風(fēng)險區(qū)域，不僅孕產(chǎn)婦群體中的血清抗體陽性率居高不下，超過 95.0% ，兒童群體的相應(yīng)指標(biāo)也維持在 83.2%～87.3%^[2-3] 。CMV具有獨(dú)特的潛伏－活化生物學(xué)特性，一旦侵入宿主體內(nèi)，便可能實現(xiàn)長期乃至終身寄居。盡管在免疫功能健全的個體中，CMV往往以無癥狀感染的形式隱匿存在，但在免疫力尚未成熟的胎兒、嬰幼兒及免疫受抑的個體中，能迅速引發(fā)多系統(tǒng)性疾病或?qū)Ｒ黄鞴贀p傷，展現(xiàn)出其強(qiáng)大的致病潛能[4。CMV感染對靶器官的損害模式與宿主年齡緊密相關(guān)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損及先天畸形多發(fā)生在宮內(nèi)先天性感染的病例中，而嬰幼兒期感染則更傾向于表現(xiàn)為肝炎或肺炎的臨床征象。重癥先天性CMV感染的新生兒死亡率高達(dá) 30% ，而存活者往往伴隨著永久性的神經(jīng)系統(tǒng)損傷。出生時無癥狀的患兒，其中 5%～17% 可能出現(xiàn)感覺神經(jīng)性耳聾、智力發(fā)展滯后、運(yùn)動障礙、癲癇及視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎等在內(nèi)的神經(jīng)系統(tǒng)遲發(fā)后遺癥[5。因此，針對兒童CMV感染的早期識別與精準(zhǔn)診斷，對減少出生缺陷和提高人口素質(zhì)具有重要的現(xiàn)實意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年1月—2022年12月吉安市婦幼保健院收治的疑似CMV感染嬰兒共100例為研究對象，男52例，女48例；月齡1＼～12個月，平均（ 6.2±2.5 ）個月。納入標(biāo)準(zhǔn)：嬰兒伴有黃疸、淋巴結(jié)腫大等表現(xiàn)；血 IgM 、IgG陽性。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并精神疾?。淮嬖谙忍煨孕呐K??；存在器官移植。

嬰兒家屬對本試驗知曉，并自愿簽署知情同意書。

本研究經(jīng)吉安市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1樣本采集血液樣本采集：入院時，抽取嬰兒 3mL 外周靜脈血液，并立即轉(zhuǎn)移至無菌試管中，確保全程無菌操作。尿液樣本收集：首先，使用75% 濃度的乙醇對嬰兒的會陰區(qū)域進(jìn)行細(xì)致清潔，隨后收集其排出的新鮮尿液 3～5mL ，迅速注人無菌試管內(nèi)，避免污染。痰液樣本采集：所有嬰兒的痰液采集工作均由經(jīng)驗豐富的醫(yī)護(hù)人員通過專業(yè)的吸痰技術(shù)完成，確保安全且高效地收集痰液至無菌試管，以備后續(xù)分析。

1.2.2 CMV-DNA提取尿液與痰液CMV-DNA提?。悍謩e量取尿液與痰液樣本各 1mL ，并置于1.5mL 離心管中。隨后，以 13000r/min 的速度進(jìn)行 10min 的離心處理，棄去上清液。向沉淀中加入50μL DNA提取液并充分混勻，隨后在 100^°C 條件下恒溫處理 10min 。之后，再次以 13000r/min 的速度離心 10min ，最終保留上清液作為PCR擴(kuò)增的模板。血液CMV-DNA提?。簭难獫{中取出 100μL 與等體積的DNA濃縮液充分混合均勻。隨后，進(jìn)行 10min 的離心處理（轉(zhuǎn)速為 13000r/min ），去除上清液。向沉淀中加入 20μL DNA提取液并徹底混合，于 100^qC 條件下加熱 10min 。之后，重復(fù)離心步驟（轉(zhuǎn)速同上），最終保留上清液用于PCR擴(kuò)增。陰陽對照與質(zhì)控品處理：遵循與尿液樣本相同的處理程序。CMV陽性定量參考品處理：通過振蕩使其充分混合均勻，隨后以 8000r/min 的速度短暫離心 5s ，確保無氣泡干擾，并妥善保存以備使用。

1.2.3實時熒光定量PCR檢測將 2μL 的DNA模板準(zhǔn)確加人預(yù)先配置好試劑的PCR反應(yīng)管中，隨后置人ABI7500熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增程序設(shè)定如下：首先，在 93‰ 下預(yù)變性 2min ；接著，進(jìn)行10個循環(huán)的擴(kuò)增，每個循環(huán)包括 93^°C 變性 45s 和 55^qC 退火/延伸 60s ；最后，再進(jìn)行30個循環(huán)的擴(kuò)增，每個循環(huán)條件為 93°C 變性 30s 和 55°C 退火/延伸 45s 。

1.2.4CMV-DNA陽性判定參考《巨細(xì)胞病毒感染診斷方案》中的標(biāo)準(zhǔn)，CMV-DNA拷貝數(shù) gt;5× 10²copies/mL ，且增長曲線呈典型S曲線為陽性，否則為陰性[，同一患兒任意樣本檢測為陽性則診斷為CMV感染。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）疑似CMV感染嬰兒不同標(biāo)本DNA檢測陽性情況：統(tǒng)計血液、尿液、痰液的CMV-DNA檢測陽性率。對于三種樣本檢測結(jié)果不一致的情況，再次采集兩次三種樣本進(jìn)行重復(fù)檢測，以相同檢測結(jié)果 ?2 的情況為最終檢測結(jié)果。（2）不同標(biāo)本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比：主要為血液、尿液、痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量。CMV-DNA載量采用 log₁₀ 對數(shù)轉(zhuǎn)換。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS20.0對行統(tǒng)計學(xué)檢驗。偏態(tài)分布的計量資料用 M （ Q₁ ， Q₃ ）表示，M為中位數(shù)， Q₁ 、Q₃ 分別為四分之一位數(shù)、四分之三位數(shù)，采用Kruskal-Wallis H 檢驗，兩兩比較采用Nemenyi法檢驗。陽性率等計數(shù)資料采用率（ % ）表示，比較用χ² 檢驗。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1疑似CMV感染嬰兒不同標(biāo)本DNA檢測陽性情況對比

疑似CMV感染的100例患兒中，血液CMV-DNA陽性15例，陽性率為 15% ；尿液CMV-DNA陽性40例，陽性率為 40% ；痰液CMV-DNA陽性42例，陽性率為 42% 。不同標(biāo)本的陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ χ²=20.690 ， P=0.000 ），其中尿液、痰液標(biāo)本CMV-DNA陽性率高于血液標(biāo)本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ χ²=15.674 ， P=0.000 ； χ²=17.887 ，P=0.000 ）。

2.2 不同標(biāo)本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比

經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換，血液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為3.72（3.03，4.15） log₁₀ copies/mL，尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為4.77（3.87，5.13）log₁₀ copies/mL，痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量為6.89（5.64，7.22） log₁₀ copies/mL。血液、尿液和痰液標(biāo)本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ _H=45.721 ， P=0.000 ）；且痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液和尿液，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Z=5.124 ， P=0.000 Z=3.872 P=0.000 ），尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Z=3.241 ， P=0.000 ）。

3討論

CMV是皰疹病毒家族中基因組最大的成員，是一種雙鏈DNA病毒，可編碼200多種蛋白質(zhì)，屬于 β 皰疹病毒亞科，其對宿主或組織培養(yǎng)細(xì)胞有明顯的種屬特性，CMV可存在與人體上皮、內(nèi)皮、平滑肌等多種細(xì)胞中，肝、腎、肺、胰等是CMV的主要靶器官[7-9]。CMV 感染者是唯一傳染源，感染后可在人體內(nèi)形成巨大的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)嗜堿性包涵體及核內(nèi)嗜酸性包涵體，導(dǎo)致細(xì)胞病變和溶解破壞[1]。CMV的傳播途徑多元，既可通過血液、體液及移植器官的直接交換實現(xiàn)，又以母嬰傳播為核心模式，涵蓋胎盤傳遞、分娩過程及哺乳等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。CMV的水平傳播包括與感染兒童唾液、尿液、淚液等體液的密切接觸，醫(yī)療過程中的血液制品輸注、器官/骨髓移植及性接觸[1]。部分免疫正常的個體感染后表現(xiàn)為無癥狀感染，對于免疫功能低下的嬰兒，CMV感染可導(dǎo)致多器官損傷，導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)育障礙，影響嬰兒智力、視力及聽力的發(fā)展，甚至?xí)?dǎo)致死亡[12]。

本研究中，100例疑似CMV感染的患兒中，不同標(biāo)本的陽性率對比差異顯著，其中尿液、痰液標(biāo)本CMV-DNA陽性率高于血液標(biāo)本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ）。血液、尿液和痰液標(biāo)本CMV-DNA檢測陽性的病毒載量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ），痰液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液和尿液，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ），尿液CMV-DNA檢測陽性的病毒載量高于血液，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ）。提示痰液標(biāo)本CMV-DNA檢測對嬰兒CMV感染更具敏感性。在探討CMV感染的臨床診斷策略時，筆者發(fā)現(xiàn)其臨床表現(xiàn)的多樣性和非特異性顯著，因此，高度依賴于精準(zhǔn)的實驗室檢查以明確診斷。盡管病毒培養(yǎng)技術(shù)被視為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其冗長的周期與嚴(yán)苛的技術(shù)門檻在實際臨床應(yīng)用中構(gòu)成了顯著障礙。血清學(xué)檢測雖然操作簡便，但在病毒感染的早期階段，其敏感性有限，難以滿足快速診斷的需求[13-14]。相比之下，PCR技術(shù)憑借其能夠?qū)崿F(xiàn)早期檢測及病毒載量量化的能力，在評估抗病毒治療效果方面展現(xiàn)出重要價值[15-16]。特別是在嬰幼兒CMV 感染的診斷中，血液與尿液作為傳統(tǒng)的主要檢測標(biāo)本，反映了病毒傾向于侵襲管道上皮細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞是CMV的主要靶細(xì)胞，患兒尿液中CMV濃度較高，若感染CMV， 24～72h 即可檢出，因而CMV感染的患兒尿液CMV-DNA 陽性檢出率高[17-18]。然而，有研究指出，單獨(dú)依賴尿液標(biāo)本進(jìn)行新生兒CMV感染的診斷可能存在局限性，如標(biāo)本污染風(fēng)險及感染后持續(xù)排毒導(dǎo)致的假陽性問題[19-20]。鑒于這些挑戰(zhàn)，提出采用多種標(biāo)本聯(lián)合檢測的策略，并優(yōu)先推薦尿液，但需謹(jǐn)慎評估其局限性。值得注意的是，在臨床實踐中，面對眾多年幼的肺炎患兒，他們往往因無法自主排痰而加劇呼吸道阻塞的風(fēng)險。此時，吸痰術(shù)作為一種有效的輔助治療手段，不僅能幫助清理呼吸道，還提供了一個創(chuàng)新的思路一一通過吸痰術(shù)獲取的痰液作為CMV感染檢測的潛在標(biāo)本。本研究進(jìn)一步揭示，與尿液相比，痰液中的CMV-DNA載量顯著更高，這一發(fā)現(xiàn)提示痰液標(biāo)本在提升檢測敏感度和特異度方面可能具有獨(dú)特優(yōu)勢，為嬰兒CMV感染的診斷開辟了新的視角。

綜上所述，嬰兒肺炎中的痰液標(biāo)本CMV-DNA檢測對CMV感染具有較高的診斷價值。

參考文獻(xiàn)

[1]蔣吳君，李明磊，華軍.兒童巨細(xì)胞病毒肺部感染的診斷和挑戰(zhàn)[J].中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2023，46（5）：472-475.

[2]左江成，鄧琛琛，楊潔，等.湖北宜昌市育齡婦女和母嬰巨細(xì)胞病毒感染現(xiàn)狀調(diào)查及感染風(fēng)險評估[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2020，35（6）：91-94.

[3]楊娟，楊博，王望橋，等.深圳市坪山區(qū)婚檢女性和孕婦巨細(xì)胞病毒感染情況調(diào)查[J].中國婦幼保健，2021，36（6）：1348-1350.

[4]張冬梅，應(yīng)海燕，楊慶，等.新生兒巨細(xì)胞病毒感染及發(fā)育障礙與PAX9基因多態(tài)性的關(guān)系[J]中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2021，31（12）：1766-1769.

[5]XIEM，TRIPATHIT，HOLMESNE，etal.Serologicalscreening for cytomegalovirus during pregnancy： a systematicreview ofclinical practice guidelines and consensus statements[J].PrenatDiagn，2023，43（7）：959-967.

[6]中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會感染消化學(xué)組.巨細(xì)胞病毒感染診斷方案[J].中國實用兒科雜志，2000，15（2）：121.

[7] SU L，CHEN Y，F(xiàn)U M，et al.CD14 facilitates perinatal humancytomegalovirus infection in biliary epithelial cells via CD55[J].JHEP Rep，2024，6（5）：101018.

[8]張瑜，郭軻，劉道路.巨細(xì)胞病毒活動性感染患兒NK細(xì)胞及GGT水平與CMV DNA 的相關(guān)性[J].肝臟，2024，29（2）：220-222.

[9]陳艷，侍效春，劉曉清.不同巨細(xì)胞病毒感染患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群分析[J].北京醫(yī)學(xué)，2024，46（3）：181-185.

[10] KANEKO M，MURAOKA J，KUSUMOTO K，et al.Lowmaternal immunoglobulin Gavidityand single parityasadverseimplications of human cytomegalovirus vertical transmission inpregnant women with immunoglobulin M positivity[J].Viruses，2021，13（5）：362-365.

[11]徐水寶，盧洪洲.先天性巨細(xì)胞病毒感染的研究進(jìn)展[J].微生物與感染，2022，17（2）：123-128.

[12]陳英虎.重視先天性巨細(xì)胞病毒感染的篩查和全病程管理[J].中華臨床感染病雜志，2023，16（4）：251-255.

[13]陳瑜.制約臨床病毒血清學(xué)檢測的瓶頸問題及解決方案[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2022，36（6）：625-628.

[14]藍(lán)陳福，李司鵬，徐曉紅，等.麗水地區(qū)嬰兒巨細(xì)胞病毒感染篩查與隨訪結(jié)果分析[J].中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2020，43（8）： 678-685.

[15]王金林，史亞茹，王文韜，等.實時熒光定量及數(shù)字PCR技術(shù)在病毒檢測中的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)診斷，2023，13（3）： 320-327.

[16]賴金甜，李相新，鄭芬，等.化學(xué)發(fā)光法聯(lián)合定量PCR用于嬰幼兒巨細(xì)胞病毒感染合并肺炎的診斷價值[J].廣東醫(yī)學(xué)，2019，40（14）：2104-2107.

[17]邱銳琴，吳小波，杜志云，等.尿液病毒載量檢測對先天性巨細(xì)胞病毒感染診斷及病情評估的價值分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2021，25（1）：43-46.

[18]中國醫(yī)師協(xié)會新生兒科醫(yī)師分會，中國醫(yī)師協(xié)會新生兒科醫(yī)師分會感染專業(yè)委員會，中華新生兒科雜志編輯委員會.新生兒巨細(xì)胞病毒感染管理專家共識[J].中華新生兒科雜志，2021，36（6）：1-7.

[19]李東明，何升.先天性巨細(xì)胞病毒感染早期篩查研究現(xiàn)狀[J/OL].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志：電子版，2022，18（6）：627-633（2023-04-11） [2024-10-10].htps：//d.wanfangdata.com.cn/periodical/ChlQZXJpb2RpY2FsQ0hJTmV3UzIwMjQwNzA0EhN6aGZ5bGN5eHp6MjAyMjA2MDAyGgh0OHNham12ag%3D%3D.D0I：10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2022.06.002.

[20] ZHANG X Y，LIU C，NEPAL S，et al.A hybrid approach forscalable sub-tree anonymization over big data using MapReduceon cloud[J].Journal of Computer and System Sciences，2014，80（5）： 1008-1020.

（收稿日期：2024-11-15）（本文編輯：郎序瑩）