抗菌肽對(duì)禽流感和新城疫防治效果研究

中圖分類號(hào)： S859.79⁺7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-1085（2025）07-0024-07

禽流感與新城疫是兩種嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)的病毒性傳染病[1-2]。近年來(lái)，這兩種疾病給家禽業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。禽流感是由A型流感病毒引起的一種高度接觸性傳染病，根據(jù)病毒的血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）抗原性的差異，禽流感病毒可分為不同的亞型[3]，其中，對(duì)高致病性禽流感（如H5NX、H7N9）可通過(guò)高強(qiáng)度的免疫實(shí)現(xiàn)有效控制[4-5]；但低致病禽流感（H9N2）

和新型流行毒株（H3N8/3），因能通過(guò)空氣、接觸、糞便等多種途徑快速傳播，且病毒變異頻繁，已成為當(dāng)前家禽疫病防控的重點(diǎn)和難點(diǎn)[。雞新城疫同樣可通過(guò)疫苗免疫進(jìn)行有效控制，但在實(shí)際養(yǎng)殖中，非典型新城疫時(shí)有發(fā)生，尤其當(dāng)繼發(fā)細(xì)菌感染時(shí)，往往給養(yǎng)雞業(yè)造成更嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[7-8]。目前，我國(guó)家禽業(yè)對(duì)這兩種疫病的防控工作，仍面臨諸多挑戰(zhàn)。除持續(xù)優(yōu)化傳統(tǒng)疫苗免疫防控策略外，開發(fā)抗菌肽等高效輔助性防治藥物，已成為保障家禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的迫切需求?？咕模ˋMPs）是指具有抗菌活性的堿性肽類的總稱，是動(dòng)物先天性免疫的組成部分。一方面，抗菌肽可以作用于病毒的膜性結(jié)構(gòu)，使其喪失對(duì)易感細(xì)胞的侵染，或使其不能有效地在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制；另一方面可以通過(guò)改變易感細(xì)胞膜表面的受體，有效阻斷病毒進(jìn)入靶細(xì)胞的途徑，并具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的功效，在人類及動(dòng)物疫病防控中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用[9-10]。康之源生產(chǎn)的抗菌肽生物制劑，能夠促進(jìn)黏膜上皮細(xì)胞的發(fā)育，修復(fù)黏膜組織，誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞增殖，增強(qiáng)黏膜免疫，減少病原微生物的定植、侵襲，提高黏膜防御功能。

本試驗(yàn)旨在驗(yàn)證抗菌肽對(duì)禽流感病毒（H3N8）與新城疫病毒的防治效果，擬通過(guò)在飼料中添加不同劑量的抗菌肽飼喂攻毒雞，分析生長(zhǎng)性能、死亡率、血清抗體滴度、器官組織病毒載量等指標(biāo)，驗(yàn)證其對(duì)這兩種病毒病的防治效果。

1材料與方法

1.1材料與儀器

材料：抗菌肽生物制劑（泰健康），由康之源提供；SPF雞胚，購(gòu)自濟(jì)南斯帕法斯；FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取試劑盒，購(gòu)自GENFINE；禽流感病毒H3亞型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒、新城疫病毒（中強(qiáng)毒）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自嘉智生物技術(shù)有限公司；禽流感H3亞型病毒，由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)提供；新城疫病毒，購(gòu)自哈爾濱國(guó)生生物科技有限公司； 1% 雞紅細(xì)胞懸液，購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司；PBS，購(gòu)自上海肖鵬生物科技有限公司；PCR離心管、移液槍吸頭，購(gòu)自山東科維生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司。

儀器：離心機(jī)（Eppendorf），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司），PCR儀（賽默飛世爾科技有限公司），自動(dòng)核酸提取儀（GENFINE），Lightcycle熒光定量PCR儀（上海羅氏制藥有限公司），電泳儀（賽默飛世爾科技有限公司），智能凝膠成像系統(tǒng)（廣州博鷺騰生物科技有限公司）。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用1日齡SPF雞105只，隨機(jī)分為7組（A1、A2、A3、N1、N2、N3和陰性對(duì)照組），15只/組，每只雞為1個(gè)重復(fù)。將分離的禽流感病毒（H3N8）雞胚尿囊液，用生理鹽水按10倍 ELD₅₀ 稀釋度進(jìn)行稀釋，A1、A2、A3三組在第21天時(shí)肌肉注射，0.5mL/ 只。A1組飼喂正常飼料；A2組在14～30d飼喂含 0.1% 抗菌肽的飼料；A3組在21～30d飼喂含 1% 抗菌肽的飼料。

將分離的新城疫病毒雞胚尿囊液，用生理鹽水按10倍 ELD₅₀ 稀釋， N1 、N2、N3三組分別在21d時(shí)肌肉注射， 0.5mL/ 只。各組飼喂模式同禽流感攻毒組。陰性對(duì)照組不做任何處理，自由采食。

1.3生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定

分別于第14、21、24、27、30天對(duì)雞只進(jìn)行稱重，計(jì)算平均日增重。其計(jì)算方式為：平均日增重 Σ=Σ （末重一初重）/飼喂天數(shù)。

1.4血清抗體滴度的測(cè)定

分別于第14、21、24、27、30天，隨機(jī)從各組挑取5只雞采血，離心收集血清，通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)（HI）進(jìn)行禽流感H3亞型和新城疫抗體檢測(cè)。

1.5不同組織器官病毒載量的測(cè)定

分別于第24、27、30天，每組隨機(jī)挑選5只雞進(jìn)行屠宰，分別采集胸腺、脾臟、法氏囊、氣管、肺臟和盲腸扁桃體，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)病毒載量[1I-12]。CT值在35以下為陽(yáng)性，數(shù)值越低，其病毒含量就越高。

如發(fā)生雞只死亡，記錄死亡時(shí)的體重，在計(jì)算生長(zhǎng)指標(biāo)中進(jìn)行校正。在抗體水平檢測(cè)中，死亡雞不進(jìn)入統(tǒng)計(jì)。雞死亡時(shí)立即剖檢，采集胸腺、脾臟、法氏囊、氣管、肺臟和盲腸扁桃體組織放入冰箱保存，等第24、27、30天進(jìn)行病毒載量測(cè)定時(shí)，再將病料混合檢測(cè)。

1.6統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)采用GraphPadPrism軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差”表示， Plt;0.05 表示差異顯著。

2結(jié)果

2.1抗菌肽對(duì)平均日增重的影響

在第21～24天，新城疫攻毒組出現(xiàn)雞只死亡，其中N1組死亡2只，N3組死亡1只，而禽流感攻毒組和陰性對(duì)照組未出現(xiàn)死亡。如圖1所示，A2組在21～24d和27～30d兩個(gè)階段平均日增重顯著高于A1、A3組（ Plt;0.05 ）。如圖2所示，N2 組在第21～24天和第27～30天兩個(gè)階段平均日增重顯著高于N1、N3組（ Plt;0.05 ）。以上結(jié)果表明，提前一周飼喂含 0.1% 抗菌肽的飼料，可有效緩解攻毒造成的生長(zhǎng)抑制，表現(xiàn)出明顯的促生長(zhǎng)作用。

2.2抗菌肽對(duì)血清抗體滴度的影響

如圖3和圖4所示，攻毒前（14、21d）對(duì)各組雞（每組隨機(jī)挑選5只）進(jìn)行禽流感H3亞型和新城疫抗體檢測(cè)，結(jié)果均為陰性，排除母源抗體及飼養(yǎng)過(guò)程中雞只感染的影響。

21日齡攻毒后，在 3dpi （感染后天數(shù)）時(shí)，各組均未產(chǎn)生抗體；在6dpi時(shí)，A2和N2組均檢測(cè)到了抗體產(chǎn)生，A1、A3、N1和N3各組均未檢測(cè)到抗體產(chǎn)生。在 9dpi 時(shí)，攻毒組均可檢測(cè)到抗體的產(chǎn)生，且A2組禽流感抗體水平顯著高于A1和A3組（ Plt;0.05 ），N2組新城疫抗體水平顯著高于N1和N3組（ Plt;0.05 ）。

2.3抗菌肽對(duì)各器官病毒載量的影響

分別在3、6、9dpi對(duì)雞只進(jìn)行安樂(lè)死，采集胸腺、脾臟、法氏囊、氣管、肺臟和盲腸扁桃體，研磨離心后，取上清進(jìn)行核酸提取，進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。

禽流感攻毒組結(jié)果（圖5、圖6和圖7）顯示，在 3dpi 及6dpi時(shí)，A2組氣管、胸腺、肺臟、脾臟病毒載量均顯著低于A1和A3組（ Plt;0.05 ）；在9dpi時(shí)，A2組氣管、胸腺、肺臟病毒載量均顯著低于A1和A3組（ Plt;0.05 ），說(shuō)明提前一周飼喂 0.1% 抗菌肽的飼料抗病毒效果最好。

新城疫攻毒組結(jié)果（圖8、圖9和圖10）顯示，在3、6、9dpi時(shí)，N2組氣管、胸腺、肺臟、脾臟病毒載量均顯著低于 N1 和N3組（ Plt;0.05 ），說(shuō)明提前一周使用 0.1% 抗菌肽的N2組抗病毒效果最好。

3討論

抗菌肽作為天然免疫防御系統(tǒng)的一部分，以其獨(dú)特的生物學(xué)特性和廣譜抗菌效果在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究中備受關(guān)注。本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加不同劑量的抗菌肽飼喂攻毒雞，驗(yàn)證抗菌肽對(duì)禽流感病毒（H3N8）與新城疫病毒有較好的防治效果。

首先，抗菌肽能夠顯著提高攻毒雞的平均日增重，這主要得益于抗菌肽的以下作用：1）抑制病原微生物：抗菌肽能夠有效抑制腸道內(nèi)的有害微生物，減少因感染而導(dǎo)致的生長(zhǎng)抑制；2）改善腸道菌群：抗菌肽能夠促進(jìn)腸道有益微生物的生長(zhǎng)，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高腸道健康。雞群擁有健康的腸道，才能更好地吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而促進(jìn)其生長(zhǎng)；3）調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)：抗菌肽具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力，減少疾病發(fā)生，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能；4）促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收：抗菌肽能夠提高腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率，特別是對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸的吸收，進(jìn)而有助提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速度。

其次，在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，使用抗菌肽后，攻毒雞的抗體水平升高，產(chǎn)生抗體的時(shí)間提前。這是因?yàn)榭咕牟粌H能夠直接破壞病毒的囊膜，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)宿主的免疫系統(tǒng)來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力?？咕哪軌蚣せ顧C(jī)體的體液免疫系統(tǒng)，提高其敏感性，并激活免疫記憶，從而促進(jìn)抗體的產(chǎn)生。這種作用機(jī)制使得抗菌肽在防治疾病方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

在病毒載量測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，人工接種病毒之后，使用抗菌肽會(huì)使不同組織器官中的病毒載量降低。

這是因?yàn)榭咕牟煌趥鹘y(tǒng)抗生素的獨(dú)特之處，它不僅能顯著抑制細(xì)菌、真菌生長(zhǎng)繁殖，還展現(xiàn)出較優(yōu)的抗病毒效果。抗菌肽的抗病毒機(jī)制主要包括：1）直接抑制病毒復(fù)制：某些抗菌肽可以直接與病毒的核酸或蛋白質(zhì)結(jié)合，抑制病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程；2）破壞病毒膜結(jié)構(gòu)：抗菌肽通過(guò)其兩親性結(jié)構(gòu)與病毒包膜相互作用，破壞其病毒膜，使病毒內(nèi)容物泄漏，從而抑制病毒的感染能力；3）增強(qiáng)宿主免疫反應(yīng)：抗菌肽不僅可以直接抗病毒，還能刺激宿主的免疫反應(yīng)，促進(jìn)免疫細(xì)胞對(duì)病毒的識(shí)別和清除。

4結(jié)論

綜上所述，提前一周飼喂 0.1% 的抗菌肽可改善感染禽流感（H3N8）和新城疫病毒雞的平均日增重，提高抗體水平，降低組織器官中的病毒載量，表現(xiàn)出較好的抗病毒效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]李艷青.淺談當(dāng)前蛋雞禽流感的流行與防控[J].家禽科學(xué)，2020（1）：41-43.

[2]王學(xué)霞.雞新城疫流行特點(diǎn)及防控對(duì)策研究[J].家禽科學(xué)，2022（8）：41-43.

[3]LIUJH，CHANGCC，CHENCW，etal.Conservationregion finding forinfluenzaAvirusesbymachinelearningmethodsofN-linkedglycosylation sitesandB-cell epitopes[J].Math Biosci，2019，315：108217.

[4]SWAYNEDE，PAVADEG，HAMILTONK，etal.Assessment of national strategies for control of high-pathogenicity avian influenza and low-pathogenicitynotifiable avian influenza in poultry，with emphasisonvaccines and vaccination[J].Revue Scientifique etTechnique-OIE，2011，30（3）：839.

[5] 路烜，劉江，張愛瓊，等.規(guī)模蛋雞場(chǎng)防控高致病性禽流感疫情的綜合措施[J].家禽科學(xué)，2025，47（6）：139-141.

[6] YU J，YAO Q，LIU J，et al.Concern regardingH3-subtype avian influenza virus[J].FrontMicrobiol，2023，4：1327470.

[7]陳瑞紅.雞非典型新城疫的防治分析[J].家禽科學(xué)，2020（11）：61.

[8]文開.雞新城疫的病原學(xué)、流行病學(xué)及綜合防控措施[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2021，17（9）：180-181.

[9]LAUERSM，REEPMEYERM，BERENDESO，etal.Multimodal binding and inhibitionofbacterialribosomes by the antimicrobial peptides Api137 andApi88[J].Nat Commun，2024，15（1）：3945.

[10]MAITIBK.Potential roleof peptide-based antiviraltherapy against SARS-CoV-2 infection[J].AcsPharmacolTransl，2020，3（4）：783-785.

[11]王楷成，王素春，朱琳，等.禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2019，36（4）：64-69.

[12]王素春，孫亞偉，樊擎瑩，等.新城疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2020，37（1）：74-78.