保健食品人參蜂王漿口服液中5種人參皂苷含量的測定

Determination of the Content of Five Ginsenosides in HealthCare Food Ginseng Royal Jelly Oral Liquid

ZHENG Yan， MAI Yunjia， HUANG Dishu， YE Youfang， XU Wanlu， YE Rong （Beihai Public Inspection and Testing Centre， Beihai 536ooo， China）

Abstract： Objective：To establish a method for simultaneous determination of the contents offive ginsenosides in ginseng royal jelly oral liquid by high performance liquid chromatography （HPLC）.Method： After ultrasonic extraction with methanol，dilution and fitration，the samples were subjected to gradient elution using a CAPCELL PAK- C₁₈ MG I column with water-acetonitrile as the mobile phase，and HPLC detection was performed. Result： The linear relationship of ginsenoside Rg_l， ，ginsenoside Re， ginsenoside Rb₁， ginsenoside Rb₃ ， and ginsenoside Rd was good r?0.999 8 ），with an average recovery rate of 97.4%～105.7%， ，and an relative standard deviation of （20 0.9%～1.3% . Conclusion： The method is simple to operate，accurate in results，and has good repeatability， and can be used for the determination of the contents of five ginsenosides in ginseng royal jelly oral liquid.

Keywords： ginseng royal jelly oral liquid; high performance liquid chromatography; ginsenoside; content determination

人參蜂王漿口服液是一種以人參和蜂王漿為主要原料制成的保健食品，具有調(diào)節(jié)免疫力、延緩衰老的保健功能。其主要功效成分人參具有補(bǔ)氣固脫、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等作用[。人參的活性成分包括原人參三醇型皂苷（人參皂苷 Rg₁ 、Re等）、原人參二醇型皂苷（人參皂苷 Rb₁ 、 Rb₃ 、Rd等）[2]。不同的人參皂苷具有不同的藥理活性， Rg₁ 具有修復(fù)神經(jīng)損傷的藥理活性；Re具有保護(hù)心血管、抗氧化的藥理活性； Rb₁ 具有保護(hù)心肌細(xì)胞、抗炎的藥理活性； Rb₃ 具有提高心肌細(xì)胞收縮力、保護(hù)心血管、抗血栓的藥理活性；Rd具有鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)免疫的藥理活性[3-4]?！吨袊幍洹芬?guī)定采用高效液相色譜法（HighPerformanceLiquid Chromatography，HPLC）測定人參中的人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁^[5] 。目前，含五加科原料保健食品中總皂昔含量多采用分光光度法測定，方法較為粗放。因此，本研究在參考人參皂苷測定方法的基礎(chǔ)上[，建立了以高效液相色譜法同時法測定人參蜂王漿口服液中人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 ?Rb₃ 和 Rd含量的方法[7-8]，以期為該制劑及含人參保健品的質(zhì)量控制提供參考。

1材料與方法

1.1材料與設(shè)備

人參皂苷 Rg₁ （批號：110703-201832，純度92.4% ）、Re（批號：110754-201827，純度 93.4% ）、Rb₁ （批號：110704-201827，純度 91.2% ）、 Rb₃ （批號：111686-201504，純度 97.0% ）、Rd（批號：111818-201603，純度 92.1% ），均來源于中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇均為色譜純，賽默飛世爾科技有限公司；自制超純水；3批人參蜂王漿口服液，吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司（批號：2306104）、北京市東風(fēng)保健營養(yǎng)品有限責(zé)任公司（批號：20240903、20241201）。

Agilent1260高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；XA205DU分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；5510E-DTH超聲波清洗儀，必能信超聲（上海）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd對照品適量，加甲醇分別制成濃度為 2.307，2.105，1.868， 1.918mg?mL^-1 和 1.591mg?mL^-1 的貯備液。分別精密量取各對照品溶液 2mL ，置于同一 20mL 容量瓶中，70% 甲醇至刻度，搖勻，即得混合對照品儲備液（約200μg?mL^-1 ）。

1.2.2 樣品前處理

精密量取樣品 1mL ，置于 5mL 容量瓶中，加上適量甲醇，超聲處理 10min（ 300W， 250kHz） ，渦旋混勻，放冷，用 70% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得樣品溶液。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：CAPCELLPAK- ?C₁₈ MGⅡ色譜柱（ 250mm×4.6mm ， 5μm ）；流動相：水（A）-乙腈（B），梯度洗脫。洗脫程序： 0～35min ， 19%B ： 35～ 60min ， 19%40%B ； 60～ 65min ； 40% 19%B ： 65～70min ， 21%B 。流速： 1.3mL?min^-1 ：進(jìn)樣量： 20μL ；檢測波長： 203nm ；柱溫： 25^°C 。

2 結(jié)果與分析

2.1專屬性試驗(yàn)

取制備好的對照品、空白、樣品溶液分別注入液相色譜儀進(jìn)行分析。結(jié)果表明，空白溶液在5種人參皂昔各自的保留時間處無相應(yīng)峰出現(xiàn)，說明方法具有良好的專屬性。對照品和樣品溶液5種成分理論塔板數(shù)均 gt;10 000 。人參皂苷 Rg₁ 和Re分離度均 ?1.8 ，其他成分分離度 gt;1.5 ，且峰形良好。

2.2 線性關(guān)系和檢測限分析

精密量取“1.2.1”項(xiàng)下適量混合對照品儲備液0.20、0.50、1.00、 2.00mL 和 5.00mL ，置于 10mL 容量瓶中，用 70% 甲醇稀釋至刻度，制得標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 1～5 。按“1.2.3”項(xiàng)條件下進(jìn)樣檢測，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；將混合對照品儲備液稀釋至信噪比接近3時的質(zhì)量濃度作為檢測限，回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢出限見表1。各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法靈敏度較高。

2.3精密度試驗(yàn)

將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液3按“1.2.3”項(xiàng)下條件測定6次，測得人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和 Rd峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RelativeStandardDeviation，RSD）分別為 0.3% 、 0.8% 、 0.6% 、 0.4% 、 0.9% ，表明儀器具有良好的精密度。

2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品（批號2306104）溶液，在室溫下放置0、4、8、16、 24h 后按“1.2.3”項(xiàng)下條件測定，根據(jù)人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd色譜峰面積計(jì)算RSD，分別為 0.3% 、 0.9% ！ 0.8% 、 0.3% ！ 0.8% 表明供試品溶液在 24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號2306104），按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，在“1.2.3”條件下進(jìn)樣，測得人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和 Rd含量，計(jì)算RSD分別為 1.1% 、 1.6% 、 0.8% 、 0.9% 、 1.0% ，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密量?。ㄅ?306104）樣品3份，每份 1mL 精密加入 100μL 混合對照品儲備液，按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“1.2.3”條件下測定，結(jié)果見表2。5種人參皂昔的平均回收率在

97.4%～ 105.7% ，RSD為 0.9%～ 1.3% ，表明該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確[9]。

2.7樣品含量測定

取3批人參蜂王漿口服液，按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“1.2.3”條件下測定，結(jié)果見表3。

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法同時測定保健食品人參蜂王漿口服液中人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd含量的方法。該方法高效快速，準(zhǔn)確可靠，相比于《保健食品理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（2020年版）》規(guī)定的保健食品人參總皂苷測定方法[1]，對皂苷單體成分的檢測更具針對性，可為該制劑及含人參保健品的質(zhì)量控制提供參考。

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