桃紅四物湯特征圖譜及多成分含量研究

關(guān)鍵詞經(jīng)典名方；桃紅四物湯；特征圖譜；多中圖分類號R286 文獻標識碼A文章編號 0517-6611（2025）13-0170-04d . issn. 0517-6611.2025.13. 032開放科學(xué)（資源服務(wù)）標識碼（OSID）：

Study on the Characteristic Chromatogram and Determination of Multi-component Content of Taohong Siwu Decoction ZHU Qi-liang，ZHOU Quan2，CAOLan-lan2etal（1.GuangzhouBaiyunshanzhongyiPharmaceuticalCo.，Ld.，Guangzhou，Guangdong 510530;2.Shanghai Ramp;D Center for Standardization of Chinese Medicines，Shanghai ）

AbstractObectiveTostablishamethodforcharacteristicromatoamanddetermiatioofulticompoentsofTaohongSiDeco tion.[Method]CAPCELL PAK C₁₈ （MGII） column（ 250nm×4.6nm，5μm） ）was used and the mobile-phase was methanol-acetonitrile -0.2% phosphoric acid solution with gradient elution. The column temperature was 30^qC . The detection wavelengths were 280，210，230，330 and 403 nm. The flow rate was 1.0mL/min and the injection volume was 20μL . The similarity evaluation combined with cluster analysis was used toevaluateteharacteristicapof5batsofaohongSiuDecoctioandteotentsof1omponntsredeteindiulta ously.Resultesilarityfebcharkcharacteristcspectraof15batchsofTohongSiuDecoctionasgeaterthanO.9and16 commonpeakswerealibratedandatotalof13hromatographicpeakswereidentifed.The1omponentssowedgodlinearelatiosis within a certain concentration range （ ）.[Conclusion]The established method for characteristic chromatogram and content determinationofmultcomponntsofTaohongSiuDecoctionereacurateandreliable，hichanprovidareferenceforfurtqualityotol valuation of traditional classical formula.

KeywordTraditioalclasicfoula;TaongSiDecotion;Characteritichoatoga;Multi-opoents;Contentdeteatio

桃紅四物湯出自清朝柴得華所撰婦科名著《婦科冰鑒》，該方由當(dāng)歸、地黃、川芎、白芍、桃仁、紅花6味藥組成[1]?，F(xiàn)代關(guān)于桃紅四物湯的研究表明，其具有活血化瘀、調(diào)經(jīng)鎮(zhèn)痛、抗炎、提高免疫力、促進骨折愈合等藥理作用[2-5]

桃紅四物湯由多味中藥組成，因此，在研究過程中對其物質(zhì)基準的定性、定量研究至關(guān)重要。指紋圖譜、特征圖譜具有信息量大、特征性強、整體性和模糊性等特點，是公認的現(xiàn)代中藥質(zhì)量評價最為常用的分析方法之一，可宏觀反映中藥化學(xué)信息的整體狀況，實現(xiàn)中藥內(nèi)在質(zhì)量的有效表征，從整體上提高了中藥質(zhì)量控制水平[6-10]。目前，王繼陳等[1]采用超高效液相色譜法測定桃紅四物湯中6種指標性成分，李雙雙等[12]采用RP-HPLC法測定了桃紅四物湯中9種水溶性活性成分，雖然多指標成分的檢測可以為中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)[13]，但由于中藥成分復(fù)雜，多指標成分檢測難以反映整體質(zhì)量。成顏芬等[4]利用HPLC法測定桃紅四物湯中9種指標性成分，對桃紅四物湯質(zhì)量控制研究較為深入。該研究在上述研究的基礎(chǔ)上，通過HPLC法，建立了經(jīng)典名方桃紅四物湯物質(zhì)基準的特征圖譜以及12種指標性成分的含量測定方法，以評價其質(zhì)量，為桃紅四物湯物質(zhì)基準的建立奠定了基礎(chǔ)

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1260 型高效液相色譜儀，美國Agilent公司；BT-25S、BT-124S、BT-323S型分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；ZNHW型電熱套，上海羌強儀器設(shè)備有限公司；HWS-26型電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；45u2型紫砂煎藥壺，潮州市潮安區(qū)康雅順電器有限公司；BDZ-155-B型便攜式燃氣灶，浙江永康市金宇有限公司。

1.2試劑沒食子酸（批號110831-201906）羥基紅花黃色素A（批號111637-201810）、苦杏仁苷（批號110820-201808）、毛蕊花糖苷（批號111530-201713）綠原酸（批號110753-201817）、芍藥苷（批號110736-201943）和阿魏酸（批號110773-201614）對照品，均來源于中國食品藥品檢定研究院。地黃苷D對照品（批號D-084-200103），來源于成都瑞芬思生物科技有限公司；芍藥內(nèi)酯昔對照品（批號DST190912-071），來源于成都樂美天醫(yī)藥科技有限公司；洋川芎內(nèi)酯I（批號AF9102004）、洋川芎內(nèi)酯H（批號AF9102005）洋川芎內(nèi)酯A（批號AF9102006）藁本內(nèi)酯（批號AF9102001）對照品，均來源于成都埃法生物科技有限公司；乙晴（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司；甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司；，磷酸（色譜純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水為超純水。

1.3試材桃紅四物湯中6味藥材，分別購自各藥材的道地產(chǎn)區(qū)及主產(chǎn)區(qū)，經(jīng)上海中藥標準化研究中心鑒定：紅花為菊科植物紅花（C.tinctoriusL.）的干燥花，桃仁為薔薇科植物山桃[P.davidiana（Carr.）Franch.]的干燥成熟種子，白芍為毛茛科植物芍藥（P.lactifloraPall.）的干燥根，地黃為玄參科植物地黃（R.glutinosaLibosch.）的干燥塊根，當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸[A.sinensis（Oliv.）Diels.]的干燥根，川芎為傘形科植物川芎（ L. chuanxiongHort.）的干燥根莖。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件采用Agilent1260 型高效液相色譜儀，以CAPCELL PAK C₁₈（MGII） （ 4.6mm×250mm，5μm） 為色譜柱，流動相A為甲醇，流動相B為乙腈，流動相C為 0.2% 磷酸溶液，按表1中的規(guī)定進行梯度洗脫;流速為 1.0mL/min ：進樣量 20μL 。檢測波長為 0～16min，280nm;16～30min 210nm;30～37min，230nm;37～48min，330nm;48～51min 280 nm;51＼～54 min， 403nm ;54＼～70 min， 280nm 。理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于 3000_?

2.2 溶液的制備

2.2.1參照物溶液。精密稱定適量沒食子酸對照品，加25% 甲醇制得含沒食子酸 50μg/mL 的溶液

2.2.2供試品溶液。稱取酒地黃 56g 、酒當(dāng)歸 75g 酒白芍28g 川芎 19g 桃仁（去皮尖） 20g 酒紅花 19g ，加12倍量水，大火煮沸后，小火煎煮 25min ，煎煮1次，過濾，加水至1 000mL ，即得。將前期收集并檢測合格的6味藥材進行隨機組合，按上述方法分別制得15批供試品溶液，依次編號為S_＼～S150

2.3 特征圖譜建立

2.3.1精密度考察。取供試品溶液 S₁ ，按\"2.1\"色譜條件連續(xù)進樣6次并測定。以沒食子酸色譜峰為參照峰，計算16個共有峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD分別在 0～ 0.20% 和 0～3.99% ，表明儀器精密度良好。

2.3.2穩(wěn)定性考察。取供試品溶液 S₁ ，按“2.1\"色譜條件對供試品溶液分別于0、2、6、12和 24h 進樣并測定，以沒食子酸色譜峰為參照峰，計算得到16個共有峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD分別在 0～0.35% 和 0～6.38% ，表明供試品溶液在室溫條件下 24h 內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.3.3重復(fù)性考察。取6份供試品溶液 S₁ ，按“2.1”色譜條件對供試品溶液進行測定，以沒食子酸色譜峰為參照峰，計算得到16個共有峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD分別在 0～0.41% 和 0～5.39% ，表明此方法重復(fù)性良好。

2.3.4特征圖譜的建立及分析。取15批桃紅四物湯的供試品溶液（ ΔS₁～S₁₅ ），按\"2.1\"色譜條件檢測，供試品特征譜圖中共有16個共有峰；將測試數(shù)據(jù)導(dǎo)人相關(guān)軟件進行分析，以沒食子酸色譜峰（1號峰）為參照峰，計算各色譜峰的相對保留時間。設(shè)定所有共有峰的相對保留時間須在規(guī)定值的±5% 之內(nèi)[規(guī)定值為1.00（1號峰）、1.08（2號峰）、1.27（3號峰）1.85（4號峰）、2.14（5號峰）、2.23（6號峰）2.55（7號峰）、2.64（8號峰）、2.88（9號峰）、3.47（10號峰）、3.78（11號峰）、4.10（12號峰）、4.13（13號峰）、4.23（14號峰）、4.73（15號峰）4.81（16號峰）]，進行全譜峰匹配，得到15批桃紅四物湯的供試品溶液（ ΔS₁～S₁₅ ）的特征圖譜，結(jié)果見圖1。

經(jīng)計算，15批桃紅四物湯的供試品溶液樣品 （S₁～S₁₅ 與其對照特征圖譜的相似度大于0.9，表明桃紅四物湯制備工藝穩(wěn)定，不同批次間的差異較小。桃紅四物湯共確定16個共有峰，經(jīng)與相對應(yīng)的對照品色譜峰比對，指認了13個色譜峰，結(jié)果見圖2。

2.4多指標成分含量測定方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系考察。分別取適量對照品，精密稱定，配成一定濃度的儲備液，并置于 的冰箱中保存?zhèn)溆茫础?.1”色譜條件檢測，以峰面積 （Y） 對相應(yīng)的對照品濃度 （X） 進行線性回歸，結(jié)果見表2。從表2可以看出，各成分在考察濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系 ）

2.4.2精密度考察。取供試品溶液 S₁ ，按\"2.1”色譜條件連續(xù)測定6次，分別計算得到12種指標成分峰面積的RSD為0.03%～0.56% ，表明儀器精密度良好。

2.4.3重復(fù)性考察。取6份供試品溶液 S₁ ，按“2.1”色譜條件進行測定，計算得到12個指標成分峰面積的RSD為0.28%～2.99% ，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.4穩(wěn)定性考察。取供試品溶液 S₁ ，分別在室溫下放置0.2、4、8、12和 24h ，按“2.1”色譜條件進行測定，計算得到12個指標成分峰面積的RSD為 0.56%～1.96% ，表明供試品溶液在室溫下放置 24h 內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.4.5加樣回收考察。取已知含量的樣品桃紅四物湯水煎液，分別按已知含量的 0.5，1.0，1.5 倍分別加入對照品溶液，各平行3份，并精密吸取各供試品溶液 20μL ，按照“2.1\"色譜條件進樣測定，12個指標成分的回收率在 97.12%～ 103.05% ，RSD在 0.91%～2.57% ，表明該方法的準確度較好。

2.4.6樣品含量測定。精密稱取15批物質(zhì)基準，分別按“2.2.2”方法制備供試品溶液，并按“2.1”色譜條件測定，分別平行測定2次，并記錄峰面積，按“2.4.1”線性回歸方程，計算各指標成分的含量，結(jié)果見表3。從表3可以看出，15批桃紅四物湯指標成分的含量無明顯差異，指標成分中以芍藥苷、苦杏仁昔、羥基紅花黃色素A等成分含量較高。

3結(jié)論

該試驗通過HPLC法，開展了經(jīng)典名方桃紅四物湯物質(zhì)基準的特征圖譜研究，并建立了沒食子酸、地黃苷D、苦香仁苷、綠原酸、芍藥苷、羥基紅花黃色素A、芍藥內(nèi)酯苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎內(nèi)酯I洋川芎內(nèi)酯H和洋川芎內(nèi)酯A共12種指標成分的含量測定方法，以提高制劑質(zhì)量，確保臨床安全用藥。中藥成分復(fù)雜，且各成分最佳吸收波長不一致，容易互相干擾，因此在研究過程中，采用波長切換法同時測定各指標性成分的含量，能更好地排除干擾，保證最佳峰強度、高靈敏度以及結(jié)果的準確性和可靠性[15-16]，測得的12個指標成分的峰形最好、含量最高。15批物質(zhì)基準的特征圖譜相似度均大于0.9且15批樣品中12種指標性成分的含量無明顯差異，說明該方法準確、高效、科學(xué)，成本低廉，可對藥效成分復(fù)雜的中藥復(fù)方制劑的整體質(zhì)量進行客觀評價，同時為建立經(jīng)典名方桃紅四物湯質(zhì)量標準提供了科學(xué)依據(jù)。

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