卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑誘導(dǎo)食管鱗癌Eca-109細(xì)胞凋亡的研究

中圖分類號：R735.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2025.03.010

Abstract：Inorder to study the effctofcarilizumabcombined with cisplatinonapoptosis of esophagealsquamous cell carcinoma celsEca-109byregulating mitochondrialoxidative phosphorylation （OXPHOS）andphosphatidylinositol3 kiase/ proteinkinaseB（PI3K/AKT）signaling pathway，andtoobservetheexpresionofheatshock proteinA9（HSPA9）.Inthis study， the test was divided into blank control group，cisplatin group （100μmol/L ）and combined administration group which is cisplatin （100μmol/L）? +carrilizumab 200mg/time ）.Transwell migration test，scratch test，cell counting kit8（CCK-8） test andclonalaggregation technique were used toobserve the effectsofcarrelizumabcombined with cisplatinontheinvasion， migrationand proliferationof esophagealsquamouscellcarcinomacelsEca-19.The expressionofHSPA9gene wasdetected by RT-PCR. Westernblot（WB）was used to detect the expresion ofOXPHOS and PI3K/AKTpathway proteins.Mitochondrial reactiveoxygenspecies （ROS）were detected byflowcytometry.Transwellmigration，scratchtest，CCK-8 testandclonal formationtestshowedthatthecombinedadministrationgroupihbitedtheactivitymigrationandaggregationofEca-O9cells more than the cisplatin group.Reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR）and WB detectionresults showed that compared with cisplatin group and control group，the expresion of HSPA9 and OXPHOS in combined administration group significantly decreased，and the phosphorylation of PI3K/AKTwas inhibited （Plt;0.01 ）. Flow cytometry showed that compared withcontrolgroupandcisplatin group，ROSlevelsincisplatin+carilizumab groupsignificantly increased，andtherewas a significantdifference ?Plt;0.05 ）.Compared with cisplatinalone，carrellizumabcombined with cisplatincould significantly inhibit the expressionofHSPA9andOXPHOS inesophagealsquamous cellcancercells，ihibit thephosphorylationofPI3K/ AKTsignalingpathwayandregulatereoxidationandmitochondrialhomeostasis.TheinhibitionofEca-1O9onesophageal squamous cellcarcinoma by inducing mitochondrial apoptosis provides a reference forthe precise interventionandtreatmentof esophageal squamous cell carcinoma in clinical practice.

Key words： carrilizumab; cisplatin; esophageal squamouscell carcinoma; OXPHOS; HSPA9 （ActaLaser Biology Sinica，2025，34（3）：274-281）

食管癌（esophagealcancer）是臨床上發(fā)病率較高、惡性程度較高的一類消化道腫瘤，因臨床癥狀較隱匿，早期不容易被及時發(fā)現(xiàn)，等出現(xiàn)臨床癥狀時已是中晚期。因此，其具有高發(fā)病率、高侵襲性以及預(yù)后差等特點，其治療手段較有限，主要為化學(xué)治療、放射治療、外科治療和綜合治療?；熓鞘彻馨┏Ｒ姷闹委熓侄?，常用的藥物如順鉑（cisplatin）、紫杉醇（paclitaxel）等，但因其副作用較多，常導(dǎo)致療效較差，患者5年生存率不高[1-2]。免疫治療是目前的研究熱點，程序性死亡受體1（programmed cell death1，PDCD1）抑制劑屬于免疫檢查點抑制劑，具有適應(yīng)證廣、療效安全可靠等特點。注射用卡瑞利珠單抗（camrelizumabforinjection）屬于人源化的免疫球蛋白G4（immunoglobulinG4，IgG4）單克隆抗體中的一種，是PD-1抑制劑，其通過激活T細(xì)胞發(fā)揮抑制腫瘤的作用[3]。自2019年卡瑞利珠單抗獲批用于治療經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤以來[3]，卡瑞利珠單抗的適應(yīng)證不斷擴(kuò)大，截至2021年底，卡瑞利珠單抗已在淋巴瘤、肺癌、肝癌以及鼻咽癌等腫瘤中廣泛應(yīng)用。隨著研究技術(shù)水平的不斷提高和完善，HSPA9基因已經(jīng)在不同類型腫瘤細(xì)胞的增殖和發(fā)生發(fā)展中被證實發(fā)揮著一定的作用，并和腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移存在高度的相關(guān)性，這就為臨床的診斷及靶向治療提供了一定的理論依據(jù)。近幾年來，研究人員對婦科腫瘤及消化系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床病理特征進(jìn)行了系統(tǒng)地統(tǒng)計分析，進(jìn)一步明確了HSPA9可以作為癌癥獨立的危險因素，并提出了其對腫瘤患者預(yù)后的預(yù)測價值。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號通路是腫瘤細(xì)胞惡性增殖、轉(zhuǎn)移的重要通路之一，通過產(chǎn)生磷酸化，阻斷抑癌基因形成復(fù)合物，從而促進(jìn)癌癥的形成[4]。研究表明，HSPA9通過MEK/ERK、PIK3/AKT、JAK/STAT、 β -catenin通路發(fā)揮上述作用。線粒體在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。細(xì)胞氧化磷酸化（oxidativephosphorylation，OXPHOS）和活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）水平的改變均在線粒體中發(fā)生。卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑在食管鱗癌細(xì)胞Eca-109中的研究鮮有報道。本研究擬分析PI3K/AKT信號通路在卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑促進(jìn)食管鱗癌發(fā)生凋亡中的作用，以及聯(lián)合用藥對相關(guān)凋亡蛋白HSPA9表達(dá)的影響和線粒體OXPHOS和ROS水平的研究，為臨床上食管鱗癌的精準(zhǔn)干預(yù)和治療提供新靶點。

1材料與方法

1.1主要細(xì)胞株、藥物、試劑與儀器

食管鱗癌細(xì)胞株Eca-109、正常人的食管上皮細(xì)胞（HET-1A）購自上海生命科學(xué)院細(xì)胞庫，在本實驗室中進(jìn)行傳代培養(yǎng)并于液氮中保存。順鉑注射液購自山東省德州德藥制藥公司，產(chǎn)品規(guī)格每瓶為 10mg ，產(chǎn)品批號為CYHB2100107;卡瑞利珠單抗注射液購自蘇州盛迪亞生物醫(yī)藥有限公司，產(chǎn)品規(guī)格每瓶為 200mg ，產(chǎn)品批號為CTR20212837；DMEM培養(yǎng)基、RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清（fetalbovineserum，F(xiàn)BS）來源于美國Gibco公司；所有一抗含AKT（1：2000；ab235958）P-AKT（1：2000：ab81283）PI3K（1：2000;sc-93）P-PI3K（1：2000;sc-16982-R）、HSPA9（sc-81623）和GADPH（sc-47778），均來源于美國Abcam公司；異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）和碘化丙啶（pmropidiuIodide，PI）購自美國Sigma公司；細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8（CCK-8）反轉(zhuǎn)錄試劑盒由上海生工生物工程股份有限公司提供；聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride，PVDF）來自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；二喹啉甲酸（diquinolinicacid，BCA）特定蛋白定量檢測試劑盒購自美國Thermo公司。主要儀器有QiEPICSULTRA流式細(xì)胞儀（美國Beckmanamp;Coulter公司）TCSSP2激光共聚焦顯微鏡（德國Leica公司）MultiskanFC型多功能酶標(biāo)儀（上海熱電生物科技有限公司）等。

1.2 培養(yǎng)與傳代

將食管鱗癌細(xì)胞株Eca-109和正常人的食管上皮細(xì)胞（HET-1A）放置于DMEM培養(yǎng)基中（含 10% 的FBS、 100U/mL 青霉素和 100U/mL 鏈霉素）于 、飽和濕度 95% 的恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)，并用 0.25% 胰酶-EDTA進(jìn)行消化，當(dāng)貼壁的細(xì)胞達(dá)到 80%～90% 時進(jìn)行傳代，傳至第三代后，收集培養(yǎng)的細(xì)胞用于后續(xù)試驗研究。

1.3CCK-8試驗檢測細(xì)胞活力

將 100μmol/L 順鉑處理過的Eca-109細(xì)胞接種在96孔板中（每孔 1×10⁴ 個細(xì)胞），培養(yǎng) 0，24，48h 和72h后，每組設(shè)置6個重復(fù)孔，同時取6個孔做空白對照孔，各孔分別加入 10% CCK-8溶液（ 10μL ），繼續(xù)在 37^°C，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)2h，最后用酶標(biāo)儀測定各孔在 450nm 處的吸光度值并計算細(xì)胞活力。

1.4平板克隆形成試驗

取對數(shù)期生長的各組細(xì)胞，分別用 0.25% 胰酶-EDTA消化并吹打成單個細(xì)胞，加入RPMI1640培養(yǎng)基（含 10% FBS）制成細(xì)胞懸液，將懸液作梯度倍數(shù)稀釋，分別以每孔 500～1000 個細(xì)胞的密度接種于6孔板，每個試驗組重復(fù)3個復(fù)孔，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細(xì)胞平均分布，于 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 7～14d 。丟棄上清液，用PBS洗滌細(xì)胞3次，加入 4% 多聚甲醛對細(xì)胞進(jìn)行固定， 20min 后丟掉固定液， 0.2% 結(jié)晶紫染色 5min ，最后使用PBS洗滌細(xì)胞，晾干，用相機(jī)拍照，計算克隆形成率。

克隆形成率 %= 克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù) ×100%

1.5 劃痕試驗

在24孔板中接種Eca-109，待細(xì)胞鋪滿孔底后，在孔底垂直劃線，并用ImageJ軟件測量 0h 的劃痕寬度，培養(yǎng) 48h 后，再次測量 48h 的劃痕寬度，計算細(xì)胞遷移率。

細(xì)胞遷移率 /%=（0h 劃痕寬度-48h劃痕寬度） /0h 劃痕寬度 ×100% （2）

1.6 細(xì)胞內(nèi)ROS水平的測定

將每孔 3×10³ 個Eca-109細(xì)胞置于6孔培養(yǎng)板中，用藥物（順鉑 和卡瑞利珠單抗每次200mg ）培養(yǎng) 24h 后收集，加人PBS液 5mL ，洗滌3次， 5000r/min 離心 5min 后丟棄上清液，收集沉淀細(xì)胞，用加人DCFH-DA的無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并于 37^°C 恒溫箱中孵育 40min ，最后加入 5mL PBS終止反應(yīng)， 5000r/min 離心 10min 收集單細(xì)胞，將沉淀細(xì)胞用 500μL PBS輕輕吹打均勻后上機(jī)（流式細(xì)胞檢測儀）檢測。每次試驗需獨立重復(fù)3次。

1.7 HSPA9基因的表達(dá)檢測

用Trizol提取培養(yǎng) ^48h 后的Eca-109細(xì)胞的RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒步驟逆轉(zhuǎn)錄RNA為第一鏈DNA，按照試劑說明書的要求于擴(kuò)增反應(yīng)管中依次加人第一鏈DNA、RNaseFree H₂O 、dNTPMixture（10mmolL ） 10×RT Buffer、 MgCl₂ 、HSPA9引物、β2微球蛋白引物和Opti-Taq在PCR儀器中進(jìn)行片段擴(kuò)增，擴(kuò)增后的片段于 4^°C 保存。最后，用 2% 瓊脂糖凝膠電泳鑒定HSPA9基因的表達(dá)情況。引物序列見表1。

1.8蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）法檢測AKT、PI3K和OXPHOS的表達(dá)

48h 后收集培養(yǎng)板中的細(xì)胞， 1500r/min 離心 5min ，獲取沉淀細(xì)胞，抽提總蛋白并測定蛋白濃度。利用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）分離蛋白，并轉(zhuǎn)至PVDF膜， 5% 脫脂牛奶室溫封閉 ^2h ，接著加入一抗AKT、PI3K、OXPHOS（ ）和內(nèi)參（GAPDH）（ 1：1 000? 繼續(xù) 4% 過夜孵育，隨后加人二抗1：5000，室溫避光孵育2h，洗滌3次，每次 10min 最后在成像系統(tǒng)進(jìn)行顯影、定影，掃描膠片。計算分析條帶灰度值采用ImageJ軟件。

目的蛋白相對表達(dá)量 Σ=Σ 目的蛋白灰度值/GADPH蛋白灰度值 （3）

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法

兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，多組間利用單因素方差進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料數(shù)據(jù)以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差 表示， Plt;0.05 被認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義；運用GraphPadPrism10軟件進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1各組細(xì)胞增殖活力的比較

用 100μmol/L 濃度的順鉑處理 0，24，48h 和72h 后，Eca-109細(xì)胞存活率呈現(xiàn)下降趨勢，分別為（97.2±1.9）^0%（76.4±8.3）^0/_0.（61.9±4.4）^0/₀ （33.8±3.2）% 。如圖1所示，順鉑 100μmol/L 和卡瑞利珠單抗每次 200mg 聯(lián)合用藥 24h 和 48h 的細(xì)胞存活率分別為 （63.7±2.3）% 和 （51.2±5.4）% 。因此，選擇 48h 順鉑 和卡瑞利珠單抗每次 200mg 進(jìn)行后續(xù)試驗。

2.2 Eca-109細(xì)胞克隆聚集的對比

從圖2a中可以看出，隨著順鉑和卡瑞利珠單抗的加人，與對照組（不加藥物組）和順鉑組相比較，細(xì)胞聚集的數(shù)量肉眼可見明顯減少（ Plt;0.05 ）（圖2），各組細(xì)胞克隆形成率分別為 90% 、 56% 和24% ，提示順鉑和卡瑞利珠單抗可能對Eca-109細(xì)胞有明顯的抑制作用。

2.3 Eca-109細(xì)胞遷移能力的對比

用藥0h和 48h 后觀察細(xì)胞的遷移情況，試驗發(fā)現(xiàn)，順鉑組和聯(lián)合用藥組與對照組相比較， 0h 各組沒有變化， 48h 后順鉑組和聯(lián)合用藥組細(xì)胞的遷移數(shù)明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ））（圖3）。

2.4各組細(xì)胞中線粒體ROS表達(dá)水平的比較

對照組、順鉑組和聯(lián)合用藥組中ROS的表達(dá)水平分別為 14.29% 19.35% 和 23.73% ，順鉑組和聯(lián)合用藥組分別與對照組相比較，ROS的表達(dá)水平增高，隨著卡瑞利珠單抗的加人，聯(lián)合用藥組細(xì)胞線粒體ROS的表達(dá)進(jìn)一步增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義0 （圖4），提示ROS釋放到一定程度可以影響腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展。

2.5Eca-109細(xì)胞中 HSPA9mRNA 表達(dá)的比較

如圖5所示，順鉑組和聯(lián)合用藥組用藥48h后Eca-109細(xì)胞中HSPA9mRNA的表達(dá)水平低于對照組，隨著順鉑組中加入卡瑞利珠單抗，與其他組相比較， HSPA9mRNA 的表達(dá)水平快速地下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （Plt;0.05 。

2.6Eca-109細(xì)胞中AKT、ERK和OXPHOS相關(guān)蛋白表達(dá)的對比

48h 聯(lián)合用藥組與對照組和順鉑組相比較，

AKT、PI3K和OXPHOS的表達(dá)發(fā)生顯著下降，隨著卡瑞利珠單抗的加入，其抑制AKT和PI3K蛋白發(fā)生磷酸化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.01 ）；順鉑組與對

（a）電泳圖； （b）HSPA9/β₂m 光密度比值。1：Eca-109;2：Eca ?109+1 Cisplatin;3：Eca- 109+ Cisplatin+Carrellizumab;4：Marker。與對照組相比， （20 ^*Plt;0.01 ；與順鉑組相比， ^#Plt;0.05， 0 （a）Electrophoresed photo; （b） Ratio of luminous intensity of HSPA9 to β₂m bands.1： Eca-109;2：Eca ?109+ Cisplatin; 3：Eca-109+Cisplatin+Carrellizumab; 4：Marker.Compared with control group， ^*Plt;0.01 ; compared with control group， ^#Plt;0.05

照組相比較，AKT、PI3K和OXPHOS的表達(dá)無明顯改變，無顯著性差異 Pgt;0.05） （圖6）。這提示AKT、PI3K和OXPHOS蛋白表達(dá)的改變在卡瑞利珠單抗誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡中發(fā)揮著重要的作用。

3 討論

食管癌是一類發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤，其致病機(jī)制非常復(fù)雜，往往涉及基因突變、DNA損傷、腫瘤微環(huán)境等，不良的飲食生活習(xí)慣、食管黏膜損傷、炎癥反應(yīng)、營養(yǎng)不良等也是增加食管癌發(fā)病風(fēng)險的因素[5-6]。目前，食管癌的致病原理一直未能完全揭示，眾多學(xué)者希望通過尋找有效的藥物來降低食管癌的病死率。近年來隨著研究的深人，免疫制劑受到廣泛關(guān)注，其逐漸被應(yīng)用于惡性腫瘤的治療中。注射用卡瑞利珠單抗是一種國產(chǎn)的免疫檢查點抑制劑，通過激活T細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，重建腫瘤免疫監(jiān)測機(jī)制，發(fā)揮顯著的抗腫瘤作用[7-8]?？ㄈ鹄閱慰箚为毷褂茂熜в邢?，為使大部分病患受益，提高腫瘤的治療效果，臨床上常將卡瑞利珠單抗和其他藥物聯(lián)合使用，卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑對食管癌細(xì)胞Eca-109的治療效果及作用機(jī)制的研究鮮有報道。因此，對卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑在食管癌中的作用的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究，在臨床治療中具有重要的意義。

本研究首先通過CCK-8試驗進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，順鉑 100μmol/L 和卡瑞利珠單抗每次 200mg 作用于Eca-109細(xì)胞 48h ，細(xì)胞存活率為 （51.2±5.4）% 故選擇該濃度進(jìn)行后續(xù)試驗。后面我們運用劃痕試驗和克隆試驗進(jìn)一步驗證藥物對細(xì)胞的抑制作用。本研究發(fā)現(xiàn)，卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑作用下，細(xì)胞聚集顯著減少，遷移率明顯降低（ ）。這與曾本姣等[3卡瑞利珠單抗在消化道系統(tǒng)腫瘤的應(yīng)用研究進(jìn)展中的報道結(jié)果相一致，說明卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑對食管癌有顯著的抑制作用。

PI3K/AKT、 Wnt/β -catenin、JAK2/STAT3是食管癌發(fā)生、發(fā)展的3條主要信號通路。食管癌患者病死率高，主要的原因是化療后期都會出現(xiàn)藥物耐藥情況，腫瘤產(chǎn)生藥物耐藥的機(jī)制很多。線粒體被稱為細(xì)胞的發(fā)電站，細(xì)胞內(nèi)高達(dá) 90% 的三磷酸腺昔通過OXPHOS在線粒體中產(chǎn)生，線粒體在正常組織的穩(wěn)態(tài)和代謝、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、神經(jīng)退行性變、免疫穩(wěn)態(tài)和傳染病等多種生理和病理過程中發(fā)揮重要作用[9]。在本研究中，順鉑聯(lián)合卡瑞利珠單抗組AKT、PI3K和OXPHOS的表達(dá)較順鉑組與對照組相比較顯著下降，并抑制AKT和PI3K蛋白發(fā)生磷酸化 Plt;0.01 ）。這與聶旭陽等[10]、向中山等[1]研究發(fā)現(xiàn)的PI3K/AKT信號通路系調(diào)節(jié)多種腫瘤耐藥性的途徑之一、可以通過干預(yù)PI3K/AKT通路來抑制PI3K/AKT磷酸化治療甲狀腺癌的報道相一致，說明聯(lián)合用藥能夠通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路和線粒體功能抑制食管癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑使Eca-109細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著增加（ Plt;0.05 ）并誘導(dǎo)Eca-109細(xì)胞凋亡，這與眾多研究發(fā)現(xiàn)的多種化療藥物能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS含量升高、當(dāng)ROS水平達(dá)到一定數(shù)值時可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的相關(guān)報道相一致[12-15]，說明ROS的增加對食管癌的進(jìn)程具有抑制作用。HSPA9基因在包括乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌和胰腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中高表達(dá)，參與腫瘤抗凋亡與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號通路，維持線粒體穩(wěn)態(tài)，是腫瘤細(xì)胞生長和發(fā)展的重要調(diào)節(jié)因子[16-17]。本研究結(jié)果顯示，卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑與對照組和順鉑組相比較，HSPA9表達(dá)顯著下降（ Plt;0.01 ，說明HSPA9基因在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮著重要的作用。

綜上所述，卡瑞利珠單抗聯(lián)合順鉑可能通過促進(jìn)ROS表達(dá)，打破氧化還原和線粒體穩(wěn)態(tài)，下調(diào)HSPA9和OXPHOS表達(dá)，抑制食管鱗癌Eca-109細(xì)胞中AKT和PI3K發(fā)生磷酸化，抑制PI3K/AKT信號通路的促癌作用從而對食管癌發(fā)揮抑制作用。本試驗尚缺少動物試驗的研究，對聯(lián)合用藥抗食管癌作用的分子機(jī)制研究不夠深入。下一步，我們將從miRNA角度對線粒體信號通路上的蛋白表達(dá)抑制進(jìn)行進(jìn)一步深入的探討。

參考文獻(xiàn)（References）：

[1] 孫魏，戴虹.程序性死亡受體-1抑制劑聯(lián)合安羅替尼二線療 法治療晚期食管鱗癌的臨床療效及安全性［J].實用臨床醫(yī) 藥雜志，2023，27（19）：17-21. SUNWei，DAIHong.Clinical efficacyand safetyof programmed deathreceptor-1inhibitorcombined withanrotinib second-line therapy in the treatment of advanced esophageal squamous cell carcinoma[J].Journal of Practical Clinical Medicine，2023， 27（19）：17-21.

[2] YAN C Y， CHEN L Q. Retrospect of 2019： focus on the surgical treatment for adenocarcinoma of esophagogastric junction[J]. Oncology Progress，2020，23（1）：20-25.

[3] 曾本姣，龍庭鳳.卡瑞利珠單抗在消化系統(tǒng)腫瘤中的應(yīng)用研 究進(jìn)展[J].癌癥進(jìn)展，2023，21（21）：2321-2324. ZENG Benjiao， LONG Tingfeng.Research progress of carrilizumab in digestive system tumors[J].Cancer Advances， 2023，21（21）：2321-2324.

[4] LI M，LUOH，WUX，etal.Anti-inflammatory effectsof huangqin decoction on dextran sulfate sodium-induced ulcerativecolitisin mice through regulation of the gut microbiota and suppression of theRas-PI3K-Akt-HIF- 1μ andNF-kBpathways[J].Frontiersin Pharmacology，2020，10：1552.

[5] 史偉偉，張璐，孫旭，等.中醫(yī)藥聯(lián)合放化療治療食管癌研究 進(jìn)展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2024，44（8）：1019-1024. SHIWeiwei，ZHANGLu，SUNXu，etal.Research progress of traditional Chinesemedicine combined with chemoradiotherapy inthetreatmentofesophageal cancer[J].Chinese Journalof Integrated Traditional and Western Medicine，2O24，44（8）： 1019-1024.

[6] 劉燕，呂茵，穆克代斯·伊力亞斯，等.食管癌根治性放療患 者營養(yǎng)風(fēng)險篩查的臨床意義［J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2022， 45（8）： 829-834. LIUYan，LYUYin，MUkedaisiYiliyasi，etal.Clinicalsignificance ofnutritional risk screening in patientswith esophageal cancer undergoingradical radiotherapy[J].JournalofXinjiangMedical University，2022，45（8）： 829-834.

[7] 王露方，江豐收，賈偉，等.免疫檢查點抑制劑治療晚期 肺癌毒副反應(yīng)臨床觀察[J].臨床肺科雜志，2020，25（9）： 1389-1394. WANG Lufang， JIANG Fengshou，JIA Wei，etal. Clinical observation on toxicityand sideeffectsof immunecheckpoint inhibitorsin treatment of advanced lungcancer[J].Journalof Clinical Pulmonology，2020，25（9）：1389-1394.

[8] JIANGY，ZHANGL，ZHUF，etal.Camrelizumabcombinedwith anlotinib for the treatment of small cell lungcancer：acase report and literaturereview[J].Annalsof Palliative Medicine，2022， 11（3）：1135-1146.

[9] GREENE J，LORD S. Targeting OXPHOS and the electronic transport chain in cancer[J].Molecularand Therapeutic Semin Cancer Biology，2022，86（Pt2）：851-859.

[10]聶旭陽，高笑男，高敬林，等.小檗堿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的研 究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報，2023，39（2）：219-224. NIEXuyang，GAOXiaonan，GAO Jinglin，etal.Research progressof berberine in reversingmulti-drugresistance in tumor [J].Chinese Pharmacology Bulletin，2023，39（2）：219-224.

[11]向中山，王立祚，張格松，等.基于PI3K/Akt信號通路探討 中醫(yī)藥治療甲狀腺癌研究進(jìn)展[J].中醫(yī)學(xué)報，2024，25（9）： 1389-1394. XIANG Zhongshan，WANG Lizuo，ZHANG Gesong，et al. Research progressin the treatment of thyroid cancerby traditional Chinese medicine based on PI3K/Akt signalingpathway[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine，2024，25（9）：1389-1394.

[12]高新躍，馮羽敬，包蓉，等.血紅素加氧酶-1降低RAW264.7巨 噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的線粒體機(jī)制研究[J].實用臨床醫(yī)藥 雜志，2022，26（13）：26-29. GAO Xinyue，F(xiàn)ENG Yujing，BAO Rong， et al. Mitochondrial mechanism of heme oxygenase-1 reducing inflammatory factor expression inRAW264.7macrophages[J]. Journal of Practical Clinical Medicine，2022，26（13）：26-29.

[13]ZHELEV Z，IVANOVAD，BAKALOVAR，et al. Inhibition of thepentose-phosphate pathway selectively sensitizesleukemia lymphocytestochemotherapeuticsby ROS-independent mechanism[J].AnticancerResearch，2016，36（11）：6011-6020.

[14]SHEN J，LI ZJ，HANG ZF，et al. Insights into the effect of reactive oxygen species regulation on photocatalytic performance via ponstruction of a metal-semiconductor heterojunction[J]. Journal of Nanoscience and Nanotechnology，2020，20（6）： 3478-3485.

[15]SHUKAH，CHITRAKARR，BIBIHA，etal.Reactive oxygen species production by BP-1，6-quinone and its effects on the endothelial dysfunction：involvement of the mitochondria[J]. Toxicology Letters，2020，322（6）：120-130.

[16]KIRALY V TR， DORES-SILVA P R， SERRAO V HB，et al. Thermal aggregatesof humanmortalinand Hsp7O-1Abehaveas supramolecular assemblies[J].International Journal of Biological Macromolecules，2020，146（9）：320-331.

[17]JODS，PARKSJ，KIMAK，etal.Loss ofHSPA9 induces peroxisomal degradation by increasing pexophagy[J].Autophagy， 2020，16（11）： 1989-2003.