基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及動物試驗(yàn)探究抗纖苗靈方治療肝纖維化的作用機(jī)制

摘要：本文主要基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及動物試驗(yàn)探究抗纖苗靈方治療肝纖維化的藥效作用機(jī)制。通過數(shù)據(jù)庫篩選出抗纖苗靈方的活性成分及其靶點(diǎn)，并與肝纖維化疾病靶點(diǎn)進(jìn)行對比，以確定相互作用的核心靶點(diǎn)。隨后，對這些核心靶點(diǎn)進(jìn)行了蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)、基因本體（GO）功能和京都基因與基因組百科全書（KEGG）信號通路的富集分析。為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測結(jié)果，利用硫代乙酰胺（TAA）誘導(dǎo)肝纖維化模型大鼠，并在造模的同時給予抗纖苗靈方進(jìn)行治療。通過蘇木素-伊紅（HE）和Masson染色觀察肝組織病理學(xué)變化，并檢測血清生化指標(biāo)以及肝臟組織中相關(guān)基因的表達(dá)情況。研究結(jié)果顯示，抗纖苗靈方含有55種活性成分，與肝纖維化共有98個相互作用靶點(diǎn)。PPI網(wǎng)絡(luò)分析揭示了絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1（AKT1）、腫瘤壞死因子（TNF）白介素-6（IL-6）腫瘤蛋白p53（TP53）、白介素-1β（IL-1β）基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase9，MMP9）缺氧誘導(dǎo)因子1亞單位 a （hypoxia-inducible factor1-alpha，HIF1A）、前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶2（prostaglandin endoperoxidesynthase2，PTGS2）、Jun原癌基因（Jun proto-oncogene，JUN）和雌激素受體1（estrogenreceptor1，ESR1）等10個核心靶點(diǎn)，這些靶點(diǎn)主要涉及癌癥通路、PI3K-Akt信號通路、脂質(zhì)與動脈硬化以及TNF等信號通路。分子對接試驗(yàn)表明，槲皮素、龍膽堿、大黃酸和木犀草素等成分與AKT1和PTGS2等核心靶點(diǎn)有良好的分子結(jié)合位點(diǎn)。動物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，模型組大鼠的肝組織顯示出嚴(yán)重的纖維膠原沉積和炎癥細(xì)胞浸潤，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和總膽紅素（TBIL）水平以及腫瘤壞死因子 σ?a （TNF-α）IL-6和IL-1β的表達(dá)水平顯著升高，肝組織中平滑肌肌動蛋白（ a -SMA）磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亞基 a （PIK3CA）AKT1和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）的mRNA水平亦顯著上升。治療組與模型組相比，肝組織炎癥和膠原纖維沉積有所改善，血清ALT、AST和TBIL水平以及炎癥因子表達(dá)水平顯著降低，肝組織中 a -SMA、PIK3CA和AKT1的mRNA水平同樣顯著降低。本研究發(fā)現(xiàn)，抗纖苗靈方可能通過多組分、多靶點(diǎn)、多通路的相互作用，調(diào)節(jié)PI3K/Akt與TNF信號通路，抑制炎癥因子的釋放，并促進(jìn)膠原纖維的降解，從而有效改善TAA誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化。

關(guān)鍵詞：抗纖苗靈方；肝纖維化；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；PI3K/Akt信號通路；靶點(diǎn)分子對接中圖分類號：Q811.41 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2025.03.008

Abstract：Thisarticleaimstoexplore thepharmacologicalmechanismofthekang-xian-miao-lingformulabasedonnetwork pharmacologyandanimal experiments.Activeingredientsandtheir targets fromtheformula were identifiedviadatabase screningand werecompared withtargetsassociated withliver fibrosis todetermine thecore interactiontargets.Thesecore targets underwent enrichment analysisof protein-protein interaction （PPI） networks，gene ontology（GO）functions，and Kyoto encyclopediaof genesand genomes （KEGG）signaling pathways.To validate the predictions derived from network pharmacology，aliver fibrosis model was established inrats using thioacetamide （TAA），withconcurrenttreatmentusing the formula.Histopathological changes in liver tisse were assessed through hematoxylinand eosin （HE）and Masson staining， while serumbiochemicalindicatorsand theexpressionofrelevant genes in livertissue were evaluated.The studyidentified55 activeingredientsinthekang-xian-miao-lingformula，with98interactingtargetsassciatedwithliverfibrosis.Pnetwork analysisrevealed10core targets，icludingAK1，NF，I-6，53，IL-1β，MMP9，HFA，GS2，JUN，andESR1，icre primarilyimplicated inancerpathways，thePI3K/Aktsignalingpathwaylipidmetabolim，atherosclerosis，andTFgnaling pathways.Moleculardockingexperimentsindicatedthatingredientssuchasquercetin，gentianine，emodi，andluteolinehibit favorablemolecularbindingafinitywithcoretargetslikeAKT1andPGS2.Animalexperimentsdmonstratedthat，compared tothe normalgroup，themodelgroupratsexhibitedsignificantfibrouscollagendepositionandinflammatorycellinfiltrationin liver tissue，along withmarkedlyincreasedserm lvelsofALT，AST，andtotalblirubin （TBI）.Aditionaly，iflator factors such as TNF- α_q ，IL-6，and IL- 1β were elevated， alongside increased mRNA expression levels of a -SMA，PIK3CA， AKT1， and TGF- _?{β1 in liver tissue.In comparison to the model group，the treatment group exhibited improvements in liver tissue inflammationandclagenfiberdepositio，alongsidesgnificantlyducedserumlevelsofALT，AST，andIL.Addiioaly therewas adecrease in the expressionof inflammatory factors and the mRNA levelsof α_a -SMA，PIK3CA，andAKT1inliver tissue.Thisstudy foundthat kang-xian-miao-lingformulamayregulate thePI3K/Akt andTNFsignaling pathways through theinteractioofmultiplecomponents，targets，andpathways.Itinhbitsthereleaseof iflammatoryfactorsandpromotes the degradationof collagen fibers，thereby effectively improving TAA-induced liver fibrosis in rats.

KeyWords： kang-xian-miao-ling formula;liver fibrosis;network pharmacology;PI3K/Aktsignalingpathway;target molecule docking

（ActaLaserBiologySinica，2025，34（3）：254-266）

肝纖維化（hepaticfibrosis）是各種慢性肝損傷的過度修復(fù)反應(yīng)，其主要特征是細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）的合成與降解失衡，導(dǎo)致肝內(nèi)彌漫性ECM的過度沉積。這一過程是慢性肝病向肝硬化、肝衰竭甚至肝癌進(jìn)展的中間病理過程[1]據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球肝纖維化患者接近9億人，每年約200萬人死亡，其中100萬人死于肝硬化，而我國約占28萬人[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚未找到治療肝纖維化的明確藥物，而中醫(yī)藥在治療肝纖維化方面具有顯著優(yōu)勢。中醫(yī)藥治療肝纖維化的獨(dú)特之處在于其多靶點(diǎn)和多途徑的特點(diǎn)，使其在肝纖維化治療中效果顯著，其作用已在相關(guān)研究中得到廣泛認(rèn)可[3]。因此，深入研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制，以及探索低毒高效的中藥方劑，對肝纖維化的防治具有重要意義。

抗纖苗靈方出自《苗藥方劑學(xué)》，屬于貴州民間驗(yàn)方，由茵陳、連錢草、梔子、龍膽和大黃組成。其中，茵陳（Artemisiascoparia）是菊科植物的干燥地上部分，具有保肝利膽、抗腫瘤、平喘和抗炎的作用[4]。其保肝機(jī)制是通過抑制巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，降低肝內(nèi)脂肪的蓄積能力，以及通過p38-MAPK途徑和PI3K/Akt/NF-kB通路，抑制促炎因子的表達(dá)與釋放[5]。連錢草（Glechoma longituba）是唇形科植物活血丹的干燥地上部分，具有消腫、抗炎、抗氧化、抗血栓、保肝利膽、抗腫瘤和降血脂等作用[]梔子（GardeniajasminoidesEllis.）是茜草科梔子屬植物，具有抗炎、抗氧化、利膽、利尿、抗腫瘤、解熱、鎮(zhèn)痛、抗血栓、保護(hù)神經(jīng)和抗阿爾茨海默病等作用[7]。龍膽（GentianaeRadix etRhizoma）是龍膽科植物的干燥根及根莖，具有抗炎鎮(zhèn)痛、保肝、抗腫瘤、調(diào)節(jié)胃腸功能和調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等多種生物活性[8]。大黃（Rheum officinale Baill.）是一味常用的藥材，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)和利濕退黃的功效[9]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，抗纖苗靈方中的各種中藥均具有保肝作用，能夠改善肝功能，抗肝臟脂質(zhì)過氧化損傷。盡管抗纖苗靈方在臨床應(yīng)用治療肝纖維化中取得了一些療效，但對于其抗肝纖維化的具體作用機(jī)制的探究仍然十分有限。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測抗纖苗靈方改善肝纖維化的作用靶點(diǎn)及信號通路，通過構(gòu)建肝纖維化動物模型，檢測抗纖苗靈方對肝纖維化模型大鼠的藥效學(xué)作用，并檢測相關(guān)作用靶點(diǎn)，闡明抗纖苗靈方改善肝纖維化的機(jī)制，為抗纖苗靈方治療肝纖維化提供新思路，并為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1試劑

硫代乙酰胺（thioacetamide，TAA）購買自麥克林科技有限公司，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanineaminotransferase，ALT）天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartateaminotransferase，AST）和總膽紅素（totalbilirubin，TBIL）試劑盒均購自于南京建成生物工程研究所；白介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子 ?α （tumor necrosis factor- ??a ，TNF- ）和白介素 -1β （interleukin- ?1β ，IL- ?1β ）的ELISA檢測試劑盒均購自于上海酶聯(lián)免疫生物科技有限公司；蘇木精-伊紅（hematoxylinand eosin，HE）染色試劑盒和Masson染色試劑盒購自于長沙維世爾生物科技有限公司；引物均由上海生工生物科技有限公司合成；其他化學(xué)試劑為國產(chǎn)分析純。

1.1.2 儀器

多功能酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司），倒置生物顯微鏡（日本Olympus公司），KH30RF高速離心機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司），熒光定量PCR儀CFX96Touch（美國伯樂公司），YC-R50電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），KZ-III-FP低溫型組織研磨儀（武漢塞維爾生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

1.2.1.1篩選藥物有效成分及作用靶點(diǎn)

通過TCMsP數(shù)據(jù)庫（https：//old.tcmsp-e.com/），分別以關(guān)鍵詞“連錢草”“茵陳”“梔子”“龍膽”和“大黃”進(jìn)行檢索。根據(jù)五味藥物的口服生物利用度（oralbioavailability，OB） ≥30% 和類藥性（drug-likedrug，DL） ?0.18 作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，得到每味中藥的潛在化學(xué)成分及其相應(yīng)的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)。然后，在TCMSP數(shù)據(jù)庫中檢索化合物靶點(diǎn)，利用UniProt數(shù)據(jù)庫獲得基因的正式名稱。將物種定義為“Homosapiens”，以排除非人類目標(biāo)，并對所獲取的靶點(diǎn)名稱進(jìn)行規(guī)范化，從而得到靶蛋白的基因名。

1.2.1.2 獲取疾病的靶點(diǎn)

登錄基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards，https：//www.genecards.org/），以“l(fā)iverfibrosis”為檢索詞獲取疾病靶點(diǎn)，以Relevancescore ?12 作為篩選分界值，獲取相關(guān)性較強(qiáng)的靶點(diǎn)，確定肝纖維化的潛在作用靶點(diǎn)。在微生信平臺（https：//www.bioinformatics.com.cn/ ）中將抗纖苗靈方的靶點(diǎn)及肝纖維化的相關(guān)靶點(diǎn)取交集，繪制韋恩圖。

1.2.1.3 構(gòu)建“藥物成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-proteininteraction，PPI）網(wǎng)絡(luò)

建立抗纖苗靈方“藥物成分-疾病-靶點(diǎn)”相互對應(yīng)關(guān)系的數(shù)據(jù)集，導(dǎo)人Cytoscape3.8.0軟件中構(gòu)建“藥物成分-疾病-靶點(diǎn)”靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。將抗纖苗靈方與肝纖維化相互作用的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫（https：//cn.Stringdb.org/）進(jìn)行PPI分析。設(shè)定物種為“Homosapiens”，置信度為0.4，然后將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.8.0軟件進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析。通過AnalyzeNetwork功能進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)分析，并通過degree進(jìn)行排序，構(gòu)建疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。其中，節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深，表明該節(jié)點(diǎn)的degree值越高，即該靶點(diǎn)的作用越關(guān)鍵。

1.2.1.4GO功能及KEGG通路富集分析

將交集靶點(diǎn)上傳到Metascape平臺（https：//metascape.org）進(jìn)行基因本體（geneontology，GO）功能分析，內(nèi)容包括生物過程（biologicalprocess，BP）分子功能（molecularfunction，MF）和細(xì)胞組分（cellularcomponent，CC）。同時，進(jìn)行京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，并在微生信平臺上分析繪制GO功能富集氣泡圖和KEGG通路富集氣泡圖。

1.2.1.5 分子對接

使用分子對接對網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出的活性成分與肝纖維化交集靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證。在PubChem數(shù)據(jù)庫中下載4種主要活性成分的SDF格式3D結(jié)構(gòu)圖，隨后在美國全球蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中下載交集靶點(diǎn)的PDB格式3D結(jié)構(gòu)圖。將這些結(jié)構(gòu)上傳至CB-Dock網(wǎng)站（https：//cadd.labshare.cn/）進(jìn)行分子對接。根據(jù)配體分子與受體蛋白結(jié)合構(gòu)象的能量，選擇能量最低、結(jié)構(gòu)最穩(wěn)定的對接構(gòu)象，并使用PyMOL進(jìn)行可視化。

1.2.2 動物試驗(yàn)

1.2.2.1 動物與藥材

選取的48只雄性（SpragueDawley，SD）大鼠（Rattusnorvegicus），6＼～8周齡，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司［試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK（湘）：2023-0014]，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始試驗(yàn)，控制飼養(yǎng)室溫 （22±2）^°C ，相對濕度為 （55±15）% 。試驗(yàn)所有操作均通過醫(yī)學(xué)倫理委員會審查批準(zhǔn)（倫理號：GZY20230015）。抗纖苗靈方的制備方法：稱取茵陳 200g 連錢草 150g， 梔子100g 、龍膽 120g 和大黃 100g ；利用蒸餾水煎煮兩次，每次1h，過濾后將濾液混合；然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中將藥液濃縮后冷凍干燥，稱取 10g 溶于1L生理鹽水中，制成 10mg/mL 的溶液備用。秋水仙堿購自北京索萊寶科技有限公司，將其溶于生理鹽水中，制成質(zhì)量濃度為 0.03mg/mL 的溶液。

1.2.2.2 動物試驗(yàn)造模、分組與給藥

隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠分為正常組、模型組、抗纖苗靈方低、中、高劑量組和秋水仙堿陽性組，每組8只。SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，其余各組大鼠腹腔注射TAA（ 200mg/kg ）溶液進(jìn)行造模，每周3次，連續(xù)4周。在第5周開始進(jìn)行藥物治療，依據(jù)人與大鼠體表面積換算標(biāo)準(zhǔn)，抗纖苗靈方低、中、高劑量組分別灌胃給予 5.4g/kg，10.8g/kg 和 21.6g/kg 劑量的抗纖苗靈方溶液，分別相當(dāng)于人臨床用量的1、2、4倍。同時，給予秋水仙堿組大鼠灌胃秋水仙堿溶液 0.1mg/kg ，正常組和模型組則灌胃給予等體積生理鹽水，每天1次。持續(xù)給藥4周后，大鼠禁食不禁水 24h ，通過異戊巴比妥麻醉處死大鼠，腹腔動脈取血，采集的肝臟組織迅速置于液氮中冷卻，隨后置于 -80% 冰箱進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.2.3 各組大鼠血清生化指標(biāo)檢測

在大鼠腹腔動脈取血后靜置1h，然后在 4^°C 下以 3500r/min 離心 15min ，收集上層血清。根據(jù)試劑盒說明書，檢測血清中ALT、AST、TBIL、IL-6、TNF- α_a 和IL-1β的表達(dá)水平。

1.2.2.4各組大鼠肝組織病理學(xué)檢測

從大鼠肝臟右葉相同位置取樣，放入組織固定液中固定。經(jīng)過2d后，使用全自動組織脫水儀進(jìn)行組織脫水、石蠟包埋和切片，隨后分別進(jìn)行HE染色和Masson三色染色。之后再進(jìn)行脫水、二甲苯透明與封片，最后使用玻片掃描儀進(jìn)行掃描和拍照。1.2.2.5利用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）法進(jìn)行檢測

采用TRIzol提取肝臟組織的總RNA，測定其濃度和完整性后，按照試劑盒說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GAPDH）作為內(nèi)參蛋白，定量檢測平滑肌肌動蛋白（alpha-smoothmuscleactin，a -SMA）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforminggrowthfactorbeta1，TGF- _?β1 ）磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亞基 a （phosphatidylinositol-4， 5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitalpha，PIK3CA）和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶AKT1的mRNA表達(dá)水平，引物序列見表1。PCR反應(yīng)條件： 95°C 3min 95°C 15 s， 60^°C 30s，共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，使用 2^-ΔΔCt 法計(jì)算基因的相對表達(dá)量，以驗(yàn)證篩選出的關(guān)鍵基因的表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合計(jì)量資料以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組別之間的數(shù)據(jù)比較采用t 檢驗(yàn)。以 Plt;0.05 代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1抗纖苗靈方有效成分及疾病靶點(diǎn)篩選

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選，得到抗纖苗靈方中連錢草的有效成分8種，龍膽的有效成分10種，梔子的有效成分15種，茵陳的有效成分13種，大黃的有效成分17種。合并各藥的有效成分，共獲得抗纖苗靈方的有效成分55種。本研究納入了抗纖苗靈方配伍中生物活性良好和利用價(jià)值大的活性成分，包括槲皮素、木犀草素、龍膽堿、大黃酸、蘆薈大黃酸、山柰酚和谷甾醇，詳見表2。通過整理各數(shù)據(jù)庫檢索出的靶點(diǎn)，并去除重復(fù)項(xiàng)，獲得242個潛在活性靶點(diǎn)。對于GeneCards數(shù)據(jù)庫中與肝纖維化疾病相關(guān)的靶點(diǎn)進(jìn)行了整理，根據(jù)Relevancescore ?12 ，篩選出1119個潛在蛋白靶點(diǎn)。

2.2抗纖苗靈方抗肝纖維化的核心靶點(diǎn)與PPI網(wǎng)絡(luò)分析

將得到的抗纖苗靈方的242個活性靶點(diǎn)，與肝纖維化疾病的1119個靶點(diǎn)進(jìn)行交集。在Venny工具中，對藥物與疾病的交集靶點(diǎn)進(jìn)行映射，得到抗纖苗靈方作用于肝纖維化的潛在核心靶點(diǎn)98個，見圖1a。使用NetworkAnalyzer對核心靶點(diǎn)進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯捎肅ytoHubba插件選擇MCC方法提取核心靶點(diǎn)，并根據(jù)MCC評分提取前10名靶點(diǎn)，如圖1b所示。關(guān)鍵靶點(diǎn)的度值排名前10位的包括AKT1、Jun原癌基因（Junproto-oncogene，JUN）、缺誘導(dǎo)因子1亞單位 a （hypoxia-inducible factor1-alpha，HIF1A）IL- 1β 、IL-6、基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9，MMP9）、前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶2（prostaglandin endoperoxide synthase2，PTGS2）、腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF）腫瘤蛋白p53（tumorproteinp53，TP53）和雌激素受體1（estrogenreceptor1，ESR1）。這些靶點(diǎn)可能是抗纖苗靈方抗肝纖維化的關(guān)鍵靶點(diǎn)。采用Cytoscape3.8.0軟件構(gòu)建了“藥物成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，其

表2藥物主要活性化合物基本信息

中化合物節(jié)點(diǎn)的大小與化合物的度值呈正相關(guān)，如圖1c所示。通過AnalyzeNetwork進(jìn)行拓?fù)浞治觯摼W(wǎng)絡(luò)包含98個節(jié)點(diǎn)和4598條邊。排名靠前的有效化學(xué)成分包括槲皮素、木犀草素、龍膽堿、大黃酸、山柰酚、蘆薈大黃酸和谷甾醇等。結(jié)果表明，抗纖苗靈方可能通過這些活性成分作用于核心靶點(diǎn)，從而發(fā)揮抗肝纖維化的作用。

2.3抗纖苗靈方抗肝纖維化靶點(diǎn)的GO功能富集與KEGG通路富集分析

通過G0功能富集分析得到861個富集條目，包括674個生物過程、57個細(xì)胞組分和130個分子功能。篩選出排名前10的條目進(jìn)行可視化。其中，生物過程主要涉及基因表達(dá)的正向調(diào)控、RNA聚合酶Ⅱ?qū)D(zhuǎn)錄的正調(diào)控、對外來刺激的反應(yīng)、凋亡過程的負(fù)向調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控和細(xì)胞對脂多糖的反應(yīng)等；細(xì)胞組分主要涉及細(xì)胞外空間、細(xì)胞外區(qū)域、含蛋白復(fù)合物、細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)等組分；分子功能主要涉及酶的結(jié)合、同質(zhì)蛋白結(jié)合、蛋白結(jié)合和核受體活性等功能（圖2a）。KEGG通路富集分析得到了抗纖苗靈方抗肝纖維化的重要相關(guān)信號通路164條。選取排名前20的通路，繪制了KEGG可視化氣泡圖（圖2b）。富集的通路主要包括癌癥通）抗纖苗靈方與肝纖維化靶點(diǎn)交集韋恩圖；（b）抗纖苗靈方與肝纖維化靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖；（c）抗纖苗靈方與肝纖維化“藥物成分-疾病-點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

（a）Vendagaoteiaglaisats;（okafa miao-lingfolailveosisagets;）etwkahofgopeiseasaets”foreagiaolaad liver fibrosis.

路、PI3K-Akt信號通路、脂質(zhì)與動脈硬化信號通路、TNF信號通路、MAPK信號通路和IL-17信號通路等。其中，抗纖苗靈方抗肝纖維化相關(guān)的通路中，PI3K/Akt信號通路的富集程度最高，并且在PPI網(wǎng)絡(luò)分析中，多個核心靶點(diǎn)如AKT1、PTGS2和TNF等蛋白靶點(diǎn)均富集于該通路，因此后續(xù)動物試驗(yàn)選用PI3K/Akt信號通路進(jìn)行驗(yàn)證。

2.4分子對接分析

分別選取4個主要化學(xué)活性成分：槲皮素、木犀草素、龍膽堿和大黃酸，與關(guān)鍵靶點(diǎn)AKT1、TNF、TP53、HIF1A和PTGS2進(jìn)行分子對接分析。結(jié)果顯示，這4種主要藥物活性成分與這6個關(guān)鍵靶點(diǎn)的結(jié)合能大部分小于 -5.00kcal?mol^-1 ，表明所篩選的活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)具有良好的結(jié)合活性（圖3a）。通過大黃酸與AKT1進(jìn)行的分子對接顯示，大黃酸能夠與AKT1蛋白443位的THR形成良好的氫鍵結(jié)合位點(diǎn)（圖3b）。龍膽堿與AKT1蛋白153位的LEU和438位的PHE也具有良好的氫鍵結(jié)合位點(diǎn)（圖3c）。槲皮素與AKT1蛋白54位的ASN、271位的VAL和291位的THR形成良好的氫鍵結(jié)合位點(diǎn)（圖3d）。木犀草素與PTGS2蛋白229位的ASP、235位的GLY和333位的ARG具有優(yōu)良的氫鍵結(jié)合位點(diǎn)（圖3e）。結(jié)果顯示，抗纖苗靈方可能通過槲皮素、木犀草素、龍膽堿和大黃酸等主要活性成分調(diào)控AKT1和PTGS2相關(guān)信號通路，從而抑制炎癥和細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膠原纖維的降解，改善肝纖維化。

2.5抗纖苗靈方對肝纖維化大鼠血清肝功能指標(biāo)的影響

大鼠血清中ALT、AST和TBIL的水平是肝臟功能損傷的重要指標(biāo)。我們構(gòu)建了大鼠肝纖維化模型，并通過藥物處理進(jìn)行試驗(yàn)。與正常組相比，模型組大鼠血清中ALT、AST和TBIL水平顯著升高（ Plt;0.01 Plt;0.05 ）。與模型組相比，抗纖苗靈方各劑量組和陽性對照組大鼠血清中ALT、AST和TBIL的表達(dá)水平明顯降低（ Plt;0.01 ， Plt;0.05 ，圖4a＼～4c），結(jié)果提示，抗纖苗靈方對TAA誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的肝功能損傷具有保護(hù)作用。

2.6抗纖苗靈方對肝纖維化大鼠肝組織病理學(xué)變化的影響

通過HE染色檢測各組大鼠肝臟組織的病理學(xué)變化。正常組大鼠的肝臟細(xì)胞排列整齊，肝組織形態(tài)正常；而模型組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，假小葉增多，肝血竇壓縮變形，肝細(xì)胞大小不均，部分出現(xiàn)鈣化，伴隨大量炎性浸潤及明顯的藍(lán)染纖維索，提示有大量膠原纖維沉積（ Plt;0.01 ）。與模型組相比，抗纖苗靈方中、高劑量組及陽性組大鼠肝組織細(xì)胞形態(tài)異常的情況有所改善，假小葉結(jié)構(gòu)顯著減少，炎性浸潤區(qū)域減少，藍(lán)染纖維組織的沉積減輕，纖維條索數(shù)量減少（ Plt;0.01 Plt;0.05 ，圖4d＼～4i）。

2.7抗纖苗靈方對肝纖維化大鼠血清炎性因子TNF- a 、IL-6和IL-1β水平的影響

血清炎性因子水平反映了組織損傷的程度，通過檢測各組大鼠的血清炎性因子水平可以得出這樣的結(jié)論（圖5）。與正常組相比，模型組大鼠的血清炎性因子IL-6、TNF- ??a 和 IL-1β 水平顯著升高中 Plt;0.01 Plt;0.05） 。與模型組相比，抗纖苗靈方各劑量組和陽性對照組大鼠的血清IL-6、TNF- 和IL-1β表達(dá)水平降低（ Plt;0.05 Plt;0.01 ）。這些結(jié)果提示，抗纖苗靈方可以有效抑制TAA誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠血清炎性因子的表達(dá)水平，從而減輕肝纖維化大鼠的炎癥反應(yīng)。

2.8各組大鼠肝組織 、PIK3CA、AKT1 和TGF- _?{β1 的mRNA表達(dá)情況檢測

通過檢測PI3K/AkT信號通路中關(guān)鍵蛋白PIK3CA和AKT1的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示：與正常組相比，模型組大鼠肝組織中 （a-SMA 、PIK3CA、AKT1和TGF- ?β1 的mRNA表達(dá)水平顯著升高（ Plt;0.01 ）；與模型組相比，抗纖苗靈方低劑量組大鼠肝組織中 a-SMA 、PIK3CA、AKT1和TGF- ?{β} 的mRNA表達(dá)無明顯變化 （Pgt;0.05） 。而抗纖苗靈方中、高劑量組及秋水仙堿組大鼠肝組織中a -SMA、PIK3CA、AKT1和TGF _?{β1 的mRNA表達(dá)水平均降低（ Plt;0.05 Plt;0.01 ），見圖 6 這些結(jié)果提示，抗纖苗靈方能夠降低膠原纖維 a -SMA的表達(dá)水平，同時降低PIK3CA和AKT1的表達(dá)水平，從而抑制肝星狀細(xì)胞的增殖，進(jìn)而改善大鼠肝纖維化。

3 討論

肝纖維化是慢性肝炎發(fā)展為肝硬化甚至肝癌的關(guān)鍵過程?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚未有明確治療肝纖維化的藥物，而中藥方劑在治療肝纖維化方面具有突出優(yōu)勢。肝纖維化屬于中醫(yī)“肋痛”“積聚”和“肝著”的范疇，其中肝脾受損、邪實(shí)內(nèi)結(jié)符合肝硬化轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟┑陌┣安∽冾愋蚚10]?？估w苗靈方由連錢草、茵陳、梔子、龍膽和大黃等中藥材組成。方中連錢

（a）活性成分與靶點(diǎn)分子對接結(jié)果；（b）AKT1與大黃酸分子對接可視化圖；（c）AKT1與龍膽堿分子對接可視化圖；（d）AKT1與槲皮素分于 對接可視化圖；（e）PTGS2與木犀草素分子對接可視化圖。

（a）Dockingesultsetwcipotsdargemolees;（b）oleladcvisalatiofni;（colaog visualizationofei;（d）leuladingsalfuei;（e）lecialattel withPTGS2.

（a）各組大鼠血清中ALT活性水平；（b）各組大鼠血清中AST活性水平；（c）各組大鼠血清中TBIL含量；（d）正常對照組大鼠肝臟HE染色；（e）模型組大鼠肝臟HE染色；（f）抗纖苗靈方低劑量組大鼠肝臟HE染色； Π（g） 抗纖苗靈方中劑量組大鼠肝臟HE染色；（h）抗纖苗靈方高劑量組大鼠肝臟HE染色；（i）秋水仙堿組大鼠肝臟HE染色。A代表正常組，B代表模型組，C＼～E代表抗纖苗靈方低、中、高劑量組，F(xiàn)代表秋水仙堿組。 ^##Plt;0.01 ，與正常組比較差異顯著； ^*Plt;0.01 ^*Plt;0.05 ，與模型組比較差異顯著。

（a）LevelsofAactiviintheseuofratsfromeachgoup;（b）LevelsofAactivityinteseruofratsfoeachoup;（c）Levelsf intheeruofatfoachoup;（dHEtaiigflivetisuefroatstoalotloup;（e）HEsaiigofliversefroat inthemodelgop;（fHEaigolessatsinedoagi-lnfougoupHaioleso ratsinthedoeailagop;Egfefroatseaiaola group;（i）HEstaingoflverissatsinoliegop.GoupAepresetsthoalotrolopoupBepeststeodel groupgroupsCtottedigosagousfiletielydo the colchicine group. ^##Plt;0.01 indicates a significant diffrence compared to the normal group; ^**Plt;0.01 ?_Plt;0.05 indicate significant differences compared to the model group.

草具有利濕通淋、清熱解毒和散瘀消腫的作用；大黃則能夠?yàn)a熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)，這兩者共為君藥[]。茵陳具有清熱利濕的作用，而梔子和龍膽則均可保肝利膽[12]。諸藥配伍共具保肝利膽、散瘀消積的功效。TAA是一種間接肝毒素，能夠?qū)е聦?shí)質(zhì)細(xì)胞壞死，其通過微粒體CYP2E1代謝活化為硫代乙酰胺-S-氧化物，然后轉(zhuǎn)化為硫代乙酰胺-S-二氧化物。這是一種高度反應(yīng)性的代謝產(chǎn)物，其反

（a）各組大鼠血清中TNF-a含量；（b）各組大鼠血清中IL-6含量；（c）各組大鼠血清中IL-1β含量；（d）正常對照組大鼠肝臟Masson染色；

（e）模型組大鼠肝臟Masson染色；（f）抗纖苗靈方低劑量組大鼠肝臟Masson染色； （g） 抗纖苗靈方中劑量組大鼠肝臟Masson染色；（h）抗纖

苗靈方高劑量組大鼠肝臟Massn染色；（i）秋水仙堿組大鼠肝臟Masson染色。A代表正常組，B代表模型組，C＼～E代表抗纖苗靈方低、中、 高劑量組，F(xiàn)代表秋水仙堿組，標(biāo)尺 。 ^##Plt;0.01 ，與正常組比較差異顯著； ^*Plt;0.01 ?_Plt;0.05 ，與模型組比較差異顯著。

（a） Levels of TNF- intheserumofrats from eachgroup;（b）LevelsofIL-6intheserumofrats fromeach group;（c）LevelsofIL-1β intheserumof

ratsfromechpdss’sgofsrtsialop（ess’sof tissuefromatsiodelgop;（faso’srchoesaingolverefroatstoseagin-ia-llagop;

（g）Mason’soesagfvesatsindosea-inflagrop;osoeagf

livertissroatsiaialago;s’sgofatsi

group.GrouptsaoptseooCprtoe

groupsof the kang-xian-miao-ling formula，respectively，and groupFrepresents thecolchicine group，bar ?50μm = ^##Plt;0.01 indicatesa significant difference compared to the normal group; ^**Plt;0.01 ^*Plt;0.05 indicate significant diferences compared to the model group.

（a）各組大鼠肝組織 a SMA的mRNA表達(dá)水平；（b）各組大鼠肝組織TGF-β1的mRNA表達(dá)水平；（c）各組大鼠肝組織PIK3CA的mRNA表達(dá)水平；（d）各組大鼠肝組織AKT1的mRNA表達(dá)水平。A代表正常組，B代表模型組，C＼～E代表抗纖苗靈方低、中、高劑量組，F(xiàn)代表秋水仁堿組。 ^##Plt;0.01 ，與正常組比較差異顯著； ^*Plt;0.01 ^*Plt;0.05 ，與模型組比較差異顯著。

（a） mRNA expression levels of a -SMAin livertissueofrats fromeach group;（b）mRNAexpressionlevelsofTGF-β1in livertissueofrats from each group;（c）mexpessolsofinliveisseoftfachgp;（dexpessolsiiveoats fromeachgroup.GouepresntsteoalontoloupopBepesentsteodelgoupoupsCtoEepresnthldd high dosage groups of the kang-xian-miao-ling formula，respectively，and group Frepresents the colchicine group. ^##Plt;0.01 indicates a significant difference compared to the normal group; ^**Plt;0.01 ^*Plt;0.05 indicate significant diferences compared to the model group.

應(yīng)性代謝產(chǎn)物可以與蛋白質(zhì)和脂質(zhì)共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和小葉中心壞死[13]。因此，TAA構(gòu)建的大鼠肝纖維化模型具有明顯優(yōu)勢。為進(jìn)一步探究抗纖苗靈方抗肝纖維化的作用機(jī)制，本研究通過腹腔注射TAA建立肝纖維化大鼠模型。結(jié)果顯示，模型組大鼠肝組織出現(xiàn)明顯纖維化和炎癥反應(yīng)，肝組織的假小葉結(jié)構(gòu)和藍(lán)染纖維結(jié)構(gòu)增加，血清ALT、AST和TBIL水平升高。而抗纖苗靈方組則能改善以上指標(biāo)，表明抗纖苗靈方具有抗大鼠肝纖維化的作用。

血清炎性因子的水平反映了組織損傷的程度。TNF- ??a 、IL-6和IL-1β等炎癥因子是肝纖維化發(fā)生與發(fā)展過程中的關(guān)鍵促炎因子[14]。研究表明，肝星狀細(xì)胞（hepaticstellatecell，HSC）能夠被TNF- σ?a 激活，活化的HSC會進(jìn)一步產(chǎn)生炎癥因子，并分泌 a -SMA等纖維化標(biāo)志物，最終導(dǎo)致肝臟中ECM沉積的增加。因此，抑制炎癥因子的表達(dá)以及HSC的活化是逆轉(zhuǎn)肝纖維化的關(guān)鍵[15]。本研究結(jié)果顯示，抗纖苗靈方能夠降低TAA誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠血清中TNF- ??a 、IL-6和IL-1β的表達(dá)水平，從而通過抑制炎癥因子的產(chǎn)生來改善大鼠的肝纖維化進(jìn)程。此外，a -SMA是HSC活化的標(biāo)志。當(dāng)肝細(xì)胞受到損傷時，炎癥因子會激活HSC，活化的HSC通過分泌大量的a -SMA來增加ECM的沉積。因此， α_u-SMA 不僅是HSC活化的標(biāo)志，也是肝纖維化逆轉(zhuǎn)中的重要標(biāo)志物[16]。本研究結(jié)果表明，抗纖苗靈方干預(yù)后，肝纖維化大鼠的肝臟膠原沉積和炎癥因子減少，肝功能指標(biāo)及 a -SMA表達(dá)降低。這表明抗纖苗靈方可能通過抑制HSC活化，降低 a -SMA的表達(dá)，從而減少肝組織中膠原的沉積。

為探究抗纖苗靈方防治肝纖維化的作用機(jī)制，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測其改善肝纖維化的作用靶點(diǎn)及潛在信號通路。GO功能富集結(jié)果表明，抗纖苗靈方的抗肝纖維化作用機(jī)制與RNA聚合酶II正調(diào)控轉(zhuǎn)錄、調(diào)亡過程的負(fù)向調(diào)控、轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控及炎癥反應(yīng)等過程密切相關(guān)。KEGG信號通路富集結(jié)果顯示，抗纖苗靈方通過多種途徑在肝纖維化治療中發(fā)揮作用。值得注意的是，單個成分可能調(diào)控多個途徑，如主要有效成分中的槲皮素等活性成分可能作用于PI3K/Akt信號通路和MAPK信號通路等。分子對接結(jié)果表明，排名前4的核心成分與靶點(diǎn)的對接情況良好，能夠自由結(jié)合。從成分角度分析，槲皮素和木犀草素與大部分結(jié)合能較低。從靶點(diǎn)角度分析，AKT1、TP53、TNF、HIF1A與大多數(shù)成分的結(jié)合能也較低。槲皮素通過抑制NF-kB/TLR/NLRP3途徑，抑制肝臟炎癥，它還降低由PI3K/Nrf2介導(dǎo)的氧化應(yīng)激，并抑制自噬中mTOR的激活，進(jìn)而抑制與肝病發(fā)展相關(guān)的凋亡因子的表達(dá)[17]。木犀草素通過抑制AKT/mTOR/p70S6K和TGF-β1/Smad信號通路，減少肝星狀細(xì)胞的增殖及膠原蛋白的合成，發(fā)揮抗纖維化作用[8]。龍膽堿通過激活TGF-β1介導(dǎo)的PI3K/Akt信號通路，減輕四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化[19]。大黃酸通過抑制TGF-β1/Smad信號通路，減少肝星狀細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)，抑制肝纖維化的發(fā)展[20]。由此可見，抗纖苗靈方可能通過槲皮素、木犀草素、龍膽堿和大黃酸等化合物作用于AKT1、TP53、TNF、HIF1A和PTGS2等靶點(diǎn)，進(jìn)而通過PI3K/Akt、MAPK、TNF等信號通路發(fā)揮抗炎、抗腫瘤和抗肝纖維化等作用。

PI3K/Akt通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號傳導(dǎo)通路，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、存活、代謝和遷移等多種生理過程[21]。PI3K由調(diào)節(jié)亞基p85和催化亞基p110構(gòu)成，形成異二聚體，具備磷脂酰肌醇激酶和絲/蘇氨酸激酶的雙重活性。AKT1是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶之一，也是PI3K下游的重要靶基酶[22]。PI3K/Akt信號通路在肝纖維化中扮演著關(guān)鍵角色，通過影響HSC的活化狀態(tài)，進(jìn)而調(diào)控ECM的沉積與降解[23]。AKT1可以通過磷酸化多種底物，如參與mTOR信號通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而影響細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解相關(guān)酶的表達(dá)[24]。AKT1是細(xì)胞存活的主要調(diào)節(jié)因子，可以通過直接抑制促凋亡蛋白或抑制由轉(zhuǎn)錄因子引發(fā)的促凋亡信號來實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)。在肝纖維化中，PI3K-Akt信號通路的激活可增強(qiáng)肝細(xì)胞和HSC的存活，抑制其凋亡，從而影響肝纖維化的進(jìn)程[25]。因此，PI3K/Akt信號通路被認(rèn)為是開發(fā)抗肝纖維化治療策略的潛在靶點(diǎn)。通過阻斷該信號通路，可能有助于減緩甚至逆轉(zhuǎn)肝纖維化的進(jìn)程。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析表明，抗纖苗靈方對PI3K/Akt信號通路具有調(diào)節(jié)作用?？估w苗靈方抗肝纖維化潛在作用靶點(diǎn)的蛋白相互作用研究發(fā)現(xiàn)，度值排名靠前的靶點(diǎn)包括AKT1、TP53、TNF、HIF1A和PTGS2。研究結(jié)果顯示，在TAA誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型和肝硬化患者中，AKT1的表達(dá)水平上調(diào)。抑制AKT1可以降低原代肝星狀上皮細(xì)胞中 a -SMA的表達(dá)，同時也能抑制TGF-β1的表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)表明，AKT1在肝臟纖維化中發(fā)揮著重要作用，抑制AKT1的過度表達(dá)可以在一定程度上阻止肝纖維化進(jìn)程[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化大鼠肝組織中PIK3CA、AKT1和TGF-β1的mRNA表達(dá)水平均顯著升高。高劑量抗纖苗靈方處理組的大鼠肝組織中PIK3CA、AKT1和TGF-β1的mRNA表達(dá)則顯著降低。上述結(jié)果與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究所預(yù)測的靶點(diǎn)相吻合，表明抗纖苗靈方抗大鼠肝纖維化可能與下調(diào)PI3K/Akt信號通路相關(guān)。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及動物試驗(yàn)證明，抗纖苗靈方中的多種主要活性成分可能通過抑制肝纖維化的炎癥反應(yīng)，減少纖維蛋白膠原表達(dá)，調(diào)控PI3K-Akt與TNF等信號通路，發(fā)揮抗肝纖維化的作用。本研究為抗纖苗靈方通過多通路、多靶點(diǎn)抗肝纖維化提供了客觀依據(jù)。然而，肝纖維化的機(jī)制及中藥活性成分的作用較為復(fù)雜，研究仍存在不足之處，尤其是缺乏體外細(xì)胞試驗(yàn)和分子機(jī)制的驗(yàn)證。課題組后續(xù)將通過體外試驗(yàn)深人研究抗纖苗靈方抗肝纖維化的機(jī)制，以期為抗纖苗靈方的臨床應(yīng)用及中醫(yī)藥的開發(fā)利用提供新的方向。

參考文獻(xiàn)（References）：

[] HORNP，TACKE F.Metabolic reprogrammingin liver fibrosis[J]. CellMetabolism，2024，36（7）：1439-1455.

[2] ASRANISK，DEVARBHAVIH，EATONJ，etal.Burdenofliver diseases in the world[J].Journal of Hepatology，2O19，70（1）： 151-171.

[3] 呂桂基，柏兆方，紀(jì)冬.中藥抗肝纖維化作用的研究進(jìn)展［J]. 傳染病信息，2023，36（6）：547-550，562. LYUGuiji，BAI Zhaofang， JI Dong.Research progress on antifibroticeffectof traditionalChinese medicine[J].Infectious Disease Information，2023，36（6）：547-550，562.

[4]黃麗平，許遠(yuǎn)航，鄧敏貞，等.茵陳的化學(xué)成分、藥理作用機(jī)制 與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2021，33（4）： 676-690. HUANGLiping，XUYuanhang，DENGMinzhen，etal.Research progress on chemical constituents，pharmacological mechanism and clinical application of Artemisiae Scopariae Herba[J].Natural Product Research and Development，2021，33（4）： 676-690.

[5] 何靜怡，舒騰云，蘇麗花，等.茵陳蒿的化學(xué)成分及其藥理活 性研究[J].云南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2023，46（1）：64-70. HE Jingyi， SHU Tengyun，SU Lihua， et al. Study on chemical constituents and pharmacological activitiesofArtemisia capillaris[J].JournalofYunnanUniversityofTraditional Chinese Medicine，2023，46（1）： 64-70.

[6] 吳西，周雷罡，鄧維，等.連錢草化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn) 展［J].藥品評價(jià)，2021，18（1）：4-7. WU Xi， ZHOU Leigang， DENG Wei， et al.Advances in the study of chemical constituents and pharmacological effects of Glechoma longituba[J].DrugEvaluation，2021，18（1）：4-7.

[7] 李萍，劉耀.梔子的主要藥理作用及質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測研究 [J].中藥材，2023，46（12）：3171-3174. LI Ping，LIU Yao.Study on main pharmacological action and qualitymarkerpredictionof gardenia[J].JournalofChinese Medicinal Materials，2023，46（12）： 3171-3174.

[8] 潘旭，朱鶴云，張昌浩，等.龍膽化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn) 展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2020，41（2）：150-151. PAN Xu， ZHU Heyun， ZHANG Changhao， et al. Research progress on chemical constituents and pharmacological effects of Gentian[J].Journal of Jilin Medical College，202O，41（2）： 150-151.

[9] 肖先，李春燕，薛金濤.大黃的主要化學(xué)成分及藥理作用研究 進(jìn)展［J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2024，41（5）：486-490，496. XIAO Xian，LI Chunyan， XUE Jintao.Research progress on main chemicalconstituentsand pharmacological effectsofRadixet Rhizoma Rhei[J].Journal ofXinxiangMedical College，2024， 41（5）： 486-490，496.

[10]杜燕，梁爽，周波，等.肝纖維化中醫(yī)證治研究進(jìn)展［J].中醫(yī) 藥臨床雜志，2019，31（3）：416-419. DU Yan， LIANG Shuang， ZHOU Bo， et al. Research progress ofTCMsyndromedifferentiationofliverfibrosis[J].Clinical JournalofTraditionalChineseMedicine，2019，31（3）：416-419

[11]曾健，李聰，熊磊，等.大黃有效成分及其藥理作用研究進(jìn)展 [J].山東化工，2024，53（10）：135-137，141. ZENG Jian，LICong，XIONG Lei， etal.Research progress on activecomponentsand pharmacological activitiesof rhubarb[J]. Shandong Chemical Industry，2024，53（10）：135-137，141.

[12]陳榕，何梓炫，顏燁，等.梔子及其主要成分的藥理及毒性作 用研究進(jìn)展[J].中草藥，2023，54（18）：6092-6105. CHEN Rong， HE Zixuan， YAN Ye， et al. Research progress on pharmacological and toxic effects of Gardeniae Fructusand its main components[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs， 2023，54（18）：6092-6105.

[13]GUO Y W， GUO T T， HUANG C， et al. Combining T1rho and advanced diffusion MRI for noninvasively staging liver fibrosis： anexperimental studyinrats[J].Abdominal Radiology，2024， 49（6）： 1881-1891.

[14]懷千，王華.白細(xì)胞介素-1家族細(xì)胞因子在肝臟疾病中的研 究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2023，39（5）：828-832.

HUAIQian，WANGHua.Advance instudyof interleukin-1 family cytokines in liver diseases[J].Chinese Pharmacological Bulletin，

2023，39（5）： 828-832.

[15]趙鵬，金海，朱加興.白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6與腫瘤壞 死因子-α在非酒精性脂肪性肝病發(fā)展過程中的作用[J].海 南醫(yī)學(xué)，2022，33（1）：96-99. ZHAO Peng，JINHai，ZHU Jiaxing.Roleofinterleukin- ?1β interleukin-6 and tumor necrosis factor-α in the development of nonalcoholic fatty liver disease[J].Hainan Medical Journal， 2022，33（1）： 96-99.

[16] CHENL，GUOWY，MAO C， et al.Liver fibrosis： pathological features， clinical treatment and application of therapeutic nanoagents[J].Journal ofMaterialsChemistryB，2O24，12（6）： 1446-1466.

[17] CHIRUMBOLO S，BJORKLUND G.Quercetin in the experimental liver fibrosis inducedbycarbon tetrachloride（CCl4） [J].International Immunopharmacology，2018，55：254-256.

[18] BATUDELIGEN，HANZQ，CHENHM，etal.Luteolinalleviates liver fibrosis in rat hepatic stellate cell HsC-T6： a proteomic analysis[J].Drug Design，Development and Therapy，2023，17： 1819-1829.

[19]ZHANG Y，ZHANG M，LIH， et al.Serum metabonomics study of the hepatoprotective effect of amarogentin on CCl₄. -induced liver fibrosis inmice by GC-TOF-MSanalysis[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2018，149：120-127.

[20] 郝曉方，張榮花，王琳，等.賴氨大黃酸對膽汁淤積性肝纖維 化模型大鼠的治療作用及其分子機(jī)制[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī) 學(xué)版），2015，41（3）：481-485. HAO Xiaofang， ZHANG Ronghua，WANG Lin，et al. Therapeutic effectofrheinlysinateon liverfibrosisincholestaticmodel rats and itsmolecularmechanisms[J].Journalof JilinUniversity （Medicine Edition），2015，41（3）： 481-485.

[21]SHAMSAN E，ALMEZGAGI M，GAMAHM，et al.The role ofPI3k/AKTsignaling pathway inattenuating liver fibrosis：a comprehensive review[J].Frontiers inMedicine，2O24，11： 1389329.

[22]TANGS，LIYH，BAOYY，etal.Novel cytisinederivatives exert anti-liver fibrosis effect via PI3K/Akt/Smad pathway[J]. Bioorganic Chemistry，2019，90：103032.

[23]JID，ZHAO Q，QINYW，et al.Germacrone improves liver fibrosisbyregulatingthePI3K/AKT/mTORsignallingpathway [J].Cell Biology International，2021，45（9）：1866-1875.

[24]TANGY，ZHUZS，LIMY，etal.Lycorine relieves the CCl₄ 1 induced liver fibrosismainlyvia theJAK2/STAT3and PI3K/AKT signaling pathways[J].Toxicology and Applied Pharmacology， 2024，489：117017.

[25]MAYC，BAOYN，WULF，et al.IL-8 exacerbates CCl₄ -induced liver fibrosisin humanIL-8 expressingmicevia thePI3K/Akt/ HIF-1alpha pathway[J].Molecular Immunology，2022，152： 111-122.

[26] ZHAO Y C，LIU X L，DING C B，et al.Aronia melanocarpa polysaccharideameliorates liver fibrosisthrough TGF _?β1 1 mediated theactivationofPI3K/AKT pathwayandmodulating gutmicrobiota[J].Journal ofPharmacological Sciences，2022， 150（4）： 289-300.