HPLC法測定金匱腎氣丸中茯苓酸的含量

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）10-0053-04

DOI： 10.3969/j . issn.1007 -8517. 2025. 10. zgmzmjyyzz202510010

DeterminationofPachymicAcidinJinguiShenqiPillbyHPLC

CAO Puqiong1YU Jikui2MA Guangyu3*LI Dongliang3 1.Baoshan Inspection and Testing Center for Food and Drug，Baoshan 678OOo，China; 2. Baoshan Maternal and Child Health Hospital，Baoshan 678OOo，China; 3.BaoshanCollege of Traditional Chinese Medicine，Baoshan678OOO，China

Abstract：Objective Toestablishamethod forthedeterminationof pachymicacid inJingui Shenqi Pill.Methods High perforance liquid chromatography（HPLC）was used to determinethe content of pachymic acid.Shiseido CAPCELL PAK C₁₈ （ 4.6mm× 250mm ， 5μm ）was used as the chromatographic column，and the mobile phase was acetonitrile -0.1% phosphoric acid aqueous solution（75：25）.The detection wavelength was 2O8 nm，injection volume 20μL ，column temperature 30‰ .Results The linear relationship of pachymic acid was good in the range of 2.92-58.40μg/mL （ r=0.9995 ）. The average recovery was 95.65% （RSD =1.02% ）.Conclusion The established method issimple，specific and reproducible，and can be used for the determinationof pachymic acid in Jingui Shenqi Pill.

Key words：Jingui Shenqi Pill；Pachymic Acid；High Performance Liquid Chromatography；Content Determination

金匱腎氣丸為中醫(yī)臨床治療腎氣虛常用藥，由地黃、山藥、酒萸肉、茯苓等10味藥材組方，具有溫補(bǔ)腎陽、化氣行水之功，用于腎虛水腫、腰膝酸軟、小便不利、畏寒肢冷等癥[1-2]?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3892-98-2011 ，處方中茯苓的用量約占處方比例的 21% ，查閱文獻(xiàn)，有對金匱腎氣丸中茯苓進(jìn)行薄層色譜定性鑒別，未見對茯苓的指標(biāo)成分開展定量分析[3-6]。茯苓含三萜、多糖、甾醇、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，具有利水滲濕、保肝、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。由文獻(xiàn)報道可知三萜類化合物為茯苓的主要活性成分，包括茯苓酸、去氫土莫酸、去氫茯苓酸等[7-8]，其中茯苓酸在茯苓中含量相對較高，茯苓酸具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化等多種藥理活性，能減輕慢性腎衰竭大鼠腎組織的病理損傷，改善其腎功能，減輕其腎組織纖維化、炎癥和氧化應(yīng)激[9-10]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究[1]表明，金匱腎氣丸可明顯改善腎小球腎炎大鼠的腎功能以及免疫水平、可減輕腎間質(zhì)纖維化，在臨床上廣泛應(yīng)用于各類慢性腎臟病的治療。因此本文選擇茯苓酸作為含量測定指標(biāo)，建立高效液相色譜法測定金匱腎氣丸中茯苓酸的含量[12-17]，為進(jìn)一步完善金匱腎氣丸中茯苓的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1200 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），XPE205電子天平（ 0.01mg ，瑞士梅特勒-托利多公司）、BP211D電子天平（ 0.01mg ，德國Satorious公司）， KQ-500E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DZKW-S-4電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療儀器有限公司），A2S-10-BE超純水機(jī)（美國艾科浦國際有限公司）。

1.2試劑乙腈（色譜純，德國默克）；水為超純水，石油醚、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、磷酸（均為分析純）。

1.3材料茯苓酸（CAS：29070-92-6；批號：DSTDF000101質(zhì)量分?jǐn)?shù) 98.0% ，購自德斯特生物）。金匱腎氣丸（批號：20201112、20201159、20201204；規(guī)格為 5g 袋）購自廠家A，金匱腎氣丸（批號：20030730；規(guī)格為360丸/瓶）購自廠家 B 。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件采用資生堂CAPCELL PAK C₁₈ （ 4.6mm×250mm ， 5μm ）為色譜柱。流動相：乙腈A（75） -0.1% 磷酸水溶液B（25）；流速1.0mL/min ；柱溫： 30^qC ；檢測波長： 208nm ；進(jìn)樣量： 20μL 。理論板數(shù)按茯苓酸計(jì)為19281。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液制備精密稱取茯苓酸對照品5.96mg ，置 10mL 容量瓶中，加甲醇溶解定容到刻度，搖勻，得母液1（濃度為 0.5841mg/mL ；精密量取 1mL 置 10mL 容量瓶中，加甲醇定容到刻度，搖勻，得母液2（濃度為 0.0584mg/mL ；再精密量取 1mL 置 2mL 容量瓶中，加甲醇定容到刻度，搖勻，即得對照品溶液（濃度為0.0292mg/mL 。

2.2.2 供試品溶液制備本品剪碎，取 2g ，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇 15mL ，超聲60min ，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液制備金匱腎氣丸的處方配比和生產(chǎn)工藝制備缺茯苓陰性樣品，根據(jù)“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備陰性對照溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1專屬性試驗(yàn)分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各 20μL ，按按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，色譜圖如圖1所示，供試品與對照品溶液在相應(yīng)保留時間處有相同的色譜峰，分離度較好且陰性對照無干擾，表明該方法專屬性良好。

2.3.2線性關(guān)系考察精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的母液2（濃度為 0.0584mg/mL ） 1mL 、 1mL 、2.5mL 、 1mL ！ 2mL 分別置于 20mL 、 10mL 、10mL 、 2mL 、 2mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度，搖勻，濾過，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件依次進(jìn)樣測定，以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X） ，峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，如圖2所示，得到回歸方程為 Y=13.786X-3.6127 ， r=0.9995 （ n =5 ）。表明茯苓酸質(zhì)量濃度在 2.92～58.40μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度試驗(yàn)取“2.2.1”對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)6次進(jìn)樣，測得峰面積，計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果為 0.28% ，見表1，表明儀器精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品（批號為20201204）2g ，精密稱定，按“2.2.2”制備成供試品溶液，分別在配置后的 0h 、 ⁴h 、 8h 、 12h 、 24h 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測得峰面積，計(jì)算峰面積的RSD，結(jié)果為 1.65% ，見表2，表明供試品在 24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)取樣品（批號為20201204）6份，每份 2g ，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定峰面積，按照2.3.2項(xiàng)下的線性回歸方程計(jì)算6份樣品中茯苓酸的含量，結(jié)果見表3，含量RSD為 1.06% ，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.6加樣回收試驗(yàn)取已知含量的樣品（批號為20201204，含量為 0.1229mg/g ）6份，每份1g，精密稱定，精密加人“2.2.1”茯苓酸母液1（濃度為 0.5841mg/mL ） 0.2mL ，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備，再按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果見表4，茯苓酸的平均回收率為 95.65% ，RSD為 1.02% ，表明回收率良好。

2.4樣品含量測定將金匱腎氣丸4個不同批次的樣品按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算茯苓酸的含量，結(jié)果見表5。4批次樣品中，茯苓酸的含量在 0.1229～0.2081mg/g 之間，同一廠家不同批次間存在一定差異，造成差異的原因可能與茯苓人工栽培規(guī)模較大、產(chǎn)地來源較多有關(guān)[12-15] C

3討論

3.1提取條件的選擇參考文獻(xiàn)［12］～［15]，提取溶劑考察了甲醇、乙醇、乙腈、石油醚、乙酸乙酯；提取方式考察了超聲提取 30min 、45min 、 60min ！ 90min ，回流提取 ¹h ！ 1.5h.2h ，結(jié)果采用甲醇為溶劑時，色譜峰型較好，提取方式超聲提取 60min 與回流提取 1.5h 均能提取完全，考慮到操作簡便，故選擇超聲 60min 為提取方式。同時還考察了甲醇用量，考察了 10mL 、15mL 、 25mL 、 50mL ，結(jié)果 15mL 與 25mL 含量無差異，表明 15mL 就能提取完全。最終采用甲醇15mL 為提取溶劑，超聲提取 60min 。

3.2色譜條件的選擇參考文獻(xiàn)[12］～［15]，取茯苓酸對照品溶液，采用DAD二極管陣列檢測器在 190～400nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在208nm 波長下，基線較平穩(wěn)，且有較好吸收，故檢測波長選擇 208nm ；流動相考察了不同比例甲醇-水-磷酸、已腈-水-磷酸、已腈-水-乙酸系統(tǒng)，結(jié)果流動相為乙腈A（75） -0.1% 磷酸水溶液B（25）時，茯苓酸色譜峰保留時間適當(dāng)，且與其他雜質(zhì)峰有較好分離。

3.3含量測定結(jié)果分析4批次金匱腎氣丸樣品中茯苓酸的含量為 0.1229～0.2081mg/g ，樣品來源于2個廠家，同一個廠家不同批次間存在差異，企業(yè)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對茯苓藥材的質(zhì)量控制。

研究建立的方法簡單易行、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，適用于金匱腎氣丸中茯苓酸含量測定，可為金匱腎氣丸質(zhì)量控制研究提供參考。

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（收稿日期：2024-08-04編輯：陶希睿）