窄葉藍(lán)盆花野生品與栽培品的質(zhì)量比較研究

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）10-0063-06

DOI： 10.3969/j .issn.1007-8517.2025.10. zgmzmjyyzz202510012

ComparativeStudyontheQualityofWildandCultivated ScabiosacomosaFisch.exRoem.etSchult

BAI Sanalatu1.2 HONG Yan1.2*XIN Ying1，2YANG Lingzhen1，2Tonglaga1.2 1.Inner Mongolia Minzu University，Tongliao O28OOo，China； 2.Mongolian Medicine National Local Joint Enginering Research Center Inner Mongolia，Tongliao O280oo，China

Abstract：Objective HPLC fingerprintand multi-componentcontent determinationmethodwereestablished tocompare the qualitydiferecebetweewildndultivatedproductsnddiferentfertilizationtreamntofnarrolafbluepotedflowdfer entharvesting periods，andtoprovidebasisforfurtherdevelopmentandutilizationofScabiosacomosa Fisch.exRoem.etSchlt. Method HPLCwasusedtoestablishfingerprintsof15batchesofScabiosacomosaandanalyzeteirsimilrity.Thecontentsof4componentsweredeterminedandtheirqualitydiferenceswerecompared.ResultAotalof12commonpeakswereidentifiedin15batches ofScabiosacomosa.Luteolin，isochlorogenicacidA，isochlorogenicacidCandapigeninwereidentifiedbycomparisonwiththecontrolproductseiiygetsgdfro6t998oetsoflisloccidA acid C and apigenin in 15 batches were 0.0512-0.1172mg/g ，0.1821-0.6986 mg/g， 0.0495-0.1140mg/g ，0.024 1 - 0.1697mg/g ，respectively.Thecontentof luteolininwild products was higherthan thatincultivated products，whilethecontentof theotherthreecompoentsincultivatedproductswas hgherthanthatinwildproducts.Ligantus，compoundferilizerandbiological fetilizerouldincreasethecontentofluteolininSabiosacomosaFisch.exRoemetSchult.andstressresistancecoulddecreasethe contentofluteolinThereasnosignificantefectonisochlorogenicacidAcontent；Thereasadecreasingtendencyforisocloogn icacidC.Biologicalfrtilizercanobviouslyincreasetheapigenincontent.ConclusionBycomparingthequalitydiferencebetween wildandcultivatedproductsanddiferentertilizationtreatment，tequalitycontrolofSabioscomosaFisch.exRom.etSultas provided，and the ideas for expanding the drug source were provided.

Keywords：Scabiosacomosa Fisch.ex Roem.etSchult.；Fingerprint；Content Determination；QualityDiference

窄葉藍(lán)盆花（Scabiosa comosa Fisch.ex Ro-em.etSchult.）為川續(xù)斷科（Dipsacaceae）藍(lán)盆花屬（Scabiosa）植物，又名細(xì)葉山蘿卜，主要分布于內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林、遼寧等地區(qū)1，是我國內(nèi)蒙古地區(qū)民族特色藥，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊》2。以干燥花序入藥，蒙藥名為套森－套日麻，具有清熱、清“協(xié)日”之功效，用于肺熱、肝熱、咽喉熱等疾病[3]，是蒙醫(yī)治療肝膽疾病的特色藥物，也是德都紅花-7味散、額力根-7等蒙醫(yī)經(jīng)典藥方中的主要成分[4]。據(jù)文獻(xiàn)[5]報道，窄葉藍(lán)盆花主要含有黃酮類、酚酸類、萜類、香豆素類等多種成分，其中黃酮類和酚酸類化合物是窄葉藍(lán)盆花含有的主要活性成分?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)窄葉藍(lán)盆花具有解熱抗炎[6-7]、抗氧化[8-12]、抗肝損傷[13-14]以及抗癌[15等藥理作用，與所含的木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素等的藥理活性密切相關(guān)[16-18]。近年來，隨著醫(yī)療需求的增加與氣候環(huán)境的惡化以及野生資源的大肆開發(fā)與過度采挖，野生資源面臨資源枯竭的狀態(tài)，又因花序人藥，采集者通常在開花期采摘，引起種群個體數(shù)量迅速下降，藥材資源貧乏。張欣華等[9研究發(fā)現(xiàn)采自內(nèi)蒙古呼倫貝爾市的藍(lán)盆花藥材木犀草素含量最高，其次是內(nèi)蒙古興安盟。王樹梅等[2通過測定不同采收期窄葉藍(lán)盆花木犀草素含量發(fā)現(xiàn)，野生馴化的窄葉藍(lán)盆花于8月上旬至9月初采摘時其含量達(dá)到最高，與傳統(tǒng)的秋季采收時間基本相符。鋅凌娟等[21]通過不同施肥處理發(fā)現(xiàn)，施肥處理的覆盆子鞣花酸含量總體比不施肥的高，其中 200g 硫酸鉀復(fù)合肥的鞣花酸含量最高?？梢姡幉馁|(zhì)量差異與產(chǎn)地、采收、栽培方式等密切相關(guān)。目前，關(guān)于窄葉藍(lán)盆花栽培品與野生品、不同采收期以及不同施肥處理的有效成分有無差異，尚未有全面的研究報道。鑒于黃酮類、酚酸類均為窄葉藍(lán)盆花發(fā)揮藥效的基礎(chǔ)物質(zhì)，本研究通過HPLC分析并建立其指紋圖譜，測定窄葉藍(lán)盆花所含木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素4種成分的含量，對不同花期的野生品與栽培品、不同施肥處理的窄葉藍(lán)盆花進(jìn)行比較，以期為窄葉藍(lán)盆花栽培品的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)，同時為窄葉藍(lán)盆花質(zhì)量評價與藥用資源可持續(xù)開發(fā)提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1260 Infinity高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；HA125SM型電子天平（普利賽斯稱重設(shè)備有限公司，十萬分之一）；ME204/02型電子天平［梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司，萬分之一]；KQ-600B型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DFY-200C型搖擺式高速粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2試藥對照品木犀草苷（批號：A22GB141264，純度 98% ）、異綠原酸A（批號：P11D11L134209，純度 98% ）、異綠原酸C（批號：M11GB140940，純度 98% ）、芹菜素（批號：M29GB150104，純度98% ）均購自上海源葉生物科技有限公司。甲醇（批號：20220401）、乙腈（批號：20220504）均為色譜純（天津市大茂化學(xué)試劑廠），磷酸（批號：20210802）為分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠），水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

供試肥料：利根生（有機(jī)質(zhì)含量 ≥40% ，黑龍江農(nóng)墾三龍生物科技有限公司生產(chǎn)）；抗逆態(tài)（黑龍江農(nóng)墾三龍生物科技有限公司生產(chǎn)）；復(fù)合肥（總養(yǎng)分：氮17磷17鉀 17?51% ，天津市中填盛華農(nóng)業(yè)科技有限公司）；生物肥（有機(jī)質(zhì) ? 45% ， N+P₂O₅+K₂O?5% 。

1.3藥材藥材樣品來自產(chǎn)地采集，共15批次窄葉藍(lán)盆花樣品，經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院紅艷副教授鑒定均為窄葉藍(lán)盆花（ScabiosacomosaFisch.exRoem.etSchult.）的干燥花序，樣品來源信息見表1。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件采用Agilent Eclipse plus C₁₈ 色譜柱（ 250mm×4.6mm ， 5μm ）；以乙腈為流動相A，以 0.2% 磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫（0～5min ， 5%A?15%A ； 5～25min ， 15%AA18% A； 25～35min ， 18%A20% A； 35～55min ，20%AA-80%A ），流速 1.0mL?min^-1 ，指紋圖譜檢測波長 350nm ，含量測定檢測波長 326nm ；柱溫 30% ，進(jìn)樣量 10μL 。

2.2混合對照品溶液制備取木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1mL 含木犀草苷 56μg 、異綠原酸A 50μg 、異綠原酸 C35μg 、芹菜素 30μg 的混合溶液，即得。

2.3供試品溶液制備取樣品粉末（過3號篩）約 0.5g ，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25mL ，稱量，浸泡 ¹h ，超聲處理（功率6 0 0W "，頻率 40kHz ） 40min ，放冷，再稱量，用甲醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，取上清液用微孔濾膜（0.45μm） ）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4指紋圖譜方法學(xué)考察

2.4.1精密度實(shí)驗取窄葉藍(lán)盆花樣品（S1）適量，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以木犀草苷為參照峰，各特征共有峰相對保留時間RSD均小于 1% ，相對峰面積RSD均小于1% ，表明所用儀器精密度良好，符合指紋圖譜技術(shù)要求。

2.4.2重復(fù)性實(shí)驗 取窄葉藍(lán)盆花樣品（S1）適量，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下的色譜條件依次進(jìn)樣，各特征共有峰相對保留時間RSD均小于 1% ，相對峰面積RSD均小于 2% ，表明本方法重復(fù)性良好，符合指紋圖譜技術(shù)要求。

2.4.3穩(wěn)定性實(shí)驗取窄葉藍(lán)盆花樣品（S1）適量，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別在 0h 、2h、 ^4h ！ 6h ！ 、 ^12h ！ 24h 按“2.1\"項下的色譜條件進(jìn)行分析，以木犀草苷為參照峰。結(jié)果表明，各特征共有峰相對保留時間的RSD均小于 1% ，相對峰面積RSD均小于 3% ，表明供試品溶液在 24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5指紋圖譜的建立及相似度評價

2.5.1指紋圖譜共有峰的指認(rèn)與歸屬取15 批窄葉藍(lán)盆花樣品，分別按“2.3”項下方法配制供試品溶液，按“2.1”項下的條件進(jìn)行測定，獲得各批次樣品的指紋圖譜。利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行分析，以S1為參照圖譜，采用中位數(shù)法，通過多點(diǎn)校正和Mark峰匹配，生成15批樣品指紋圖譜及共有模式圖譜（R），如圖1。結(jié)果共標(biāo)定了12個共有峰，4號色譜峰有較好的峰形，穩(wěn)定性較好，故以4號峰為參照峰，并與4個對照品的圖譜及保留時間對比，指認(rèn)了4個共有峰，分別為峰4木犀草苷、峰7異綠原酸A、峰10異綠原酸C、峰12芹菜素，如圖2所示。

2.5.2相似度評價以對照譜圖為參考，對15批窄葉藍(lán)盆花樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度評價，結(jié)果表明，其相似度介于 0.963～0.998 ，見表2。表明不同花期野生品與栽培、不同施肥處理方式的窄葉藍(lán)盆花樣品中化學(xué)成分組成基本一致。

2.5.3聚類分析結(jié)果以15 批窄葉藍(lán)盆花樣品的12個共有峰峰面積為變量，通過SPSS27.0軟件，運(yùn)用組間對比法進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析（CA），以平方歐氏距離為標(biāo)尺計算樣品的相似程度，連接方法為組間連接，15批藥材的聚類分析樹狀圖如圖3所示。可看出，不同采收期的野生品與栽培以及不同施肥處理的窄葉藍(lán)盆花可以被較好地分開。當(dāng)距離為5時，樣品可被劃分為7類：第I類為S5、S6；第Ⅱ類為S4；第ⅢI類為S1、S2；第Ⅳ類為S3、S15；第V類為S7、 、S12；第V類為S10、S11、S13、S14；第VI類為S8。當(dāng)距離為10時，樣品可被劃分為4類：第I類為 S4～S6 ；第Ⅱ類為S1＼～S3、S15；第Ⅲ類為S7、 、S12；第V類為S8、S10、S11、S13、S14；當(dāng)距離為20時，樣品可被劃分為2類：第I類為 S4～S6 ；第Ⅱ類為S1＼～S3、 S7～S15 。

2.6 多成分含量測定

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取“2.2”項下混合對照品溶液 ？μL，4μL，6μL，8μL，10 μL 、 12μL 分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積 Y 對進(jìn)樣量 X （ μg ）進(jìn)行回歸分析。木犀草苷： Y=119.65X-0.5667 （ r=0.9997 ）；異綠原酸A： Y=475.65X+48.6 （ r=0.999 ；異綠原酸C： Y=107.99X+0.4533 （ r=0.9997 ）；芹菜素： Y=127.65X-0.7133 （ r=0.9998 ）。結(jié)果表明木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素進(jìn)樣量分別在 0.11～0.67μg ， 0.28～1.68μg ，0.07～0.42μg ， 0.06～0.36μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6.2精密度試驗取窄葉藍(lán)盆花（S1）樣品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計算樣品中木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素峰面積的RSD分別為 0.54% 、 0.54% 、 0.56% ！1.12% ，表明儀器精密度良好。

2.6.3重復(fù)性試驗取窄葉藍(lán)盆花（S1）樣品適量，稱取6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行測定，計算樣品中木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素含量RSD分別為 0.7% 、 0.81% 、 0.53% 、 1.26% ，表明方法重復(fù)性良好。

2.6.4穩(wěn)定性試驗取窄葉藍(lán)盆花（S1）樣品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于制備后 0h.2h.4h.6h.12h.24 按“2.1\"項下色譜條件進(jìn)行測定，計算樣品中木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素峰面積的RSD分別為 0.47% 、 0.61% 、 0.75% 、 0.85% ，表明供試品溶液在 24h 內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.6.5加樣回收試驗取窄葉藍(lán)盆花（S1）樣品約 0.25g ，精密稱定，共6份，按1：1的比例分別精密加人混合對照品溶液 1mL （木犀草苷、異綠原酸A、異綠原酸C、芹菜素的質(zhì)量濃度分別為0.05mg/mL 、 0.265mg/mL 、 0.05mg/mL 、0.055mg/mL ），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算上述成分的平均加樣回收率分別為 100% 、 98.9% 、 99.93% /96.82% ，RSD分別為 0.75% 、 0.53% 、 2.09% ！0.97% ，表明建立的含量測定方法準(zhǔn)確性良好。

2.6.6樣品含量測定稱取不同批次的窄葉藍(lán)盆花樣品各3份，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，按“2.6.1”項下線性回歸方程計算鹽窄葉藍(lán)盆花中4個成分的含量。見表3。

2.7不同采收期的野生品與栽培品差異比較通過對窄葉藍(lán)盆花4個成分進(jìn)行含量測定發(fā)現(xiàn)，不同采收期的野生品與栽培品窄葉藍(lán)盆花（S1～S9）在成分含量上有一定的區(qū)別，從表3可以看出窄葉藍(lán)盆花木犀草苷含量最高的樣品為S1，其次為S2、S9；異綠原酸A含量最高的樣品為S9，其次為S7、S2；異綠原酸C含量最高的樣品為S7，其次為S8、S2；芹菜素含量最高的樣品為S5，其次為S4、S6。

2.8不同施肥處理差異比較從不同施肥處理的窄葉藍(lán)盆花4個成分含量測定結(jié)果（表3）可以發(fā)現(xiàn)，窄葉藍(lán)盆花木犀草苷含量最高的樣品為S10，其次為S12、S13；異綠原酸A含量最高的樣品為S14，其次是S10、S12；異綠原酸C含量最高的樣品為S14，其次為S10、S13；芹菜素含量最高的樣品為S15，其次為S13、S10。

3討論

3.1指紋圖譜中藥指紋圖譜從中藥整體化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)角度出發(fā)，是評價中藥優(yōu)劣、鑒別真?zhèn)?、區(qū)分藥材產(chǎn)地和確保其一致性、穩(wěn)定性的有效方法，能夠全面、整體地反映出中藥材的化學(xué)物質(zhì)的種類和數(shù)量，被越來越多的研究者應(yīng)用于質(zhì)量差異分析及有效成分的研究[23-24]。本研究建立了15 批窄葉藍(lán)盆花藥材的HPLC指紋圖譜，共標(biāo)定了12個共有峰，通過與混合對照品色譜圖進(jìn)行比對，共指認(rèn)了4個指標(biāo)成分，分別為木犀草苷（峰4）、異綠原酸A（峰7）、異綠原酸C（峰10）、芹菜素（峰12），指紋圖譜相似度軟件分析發(fā)現(xiàn)15批樣品相似度均在0.90及以上，說明樣品之間的相似性較高，指紋圖譜相似度未能對15批樣品進(jìn)行區(qū)分，因此，后續(xù)通過聚類分析能較好地區(qū)分15批窄葉藍(lán)盆花樣品，可能是由于不同產(chǎn)地、環(huán)境、采收及不同處理等因素導(dǎo)致部分化學(xué)成分的含量具有一定的差異。

3.2多成分含量測定通過比較不同采收期的野生品與栽培品窄葉藍(lán)盆花發(fā)現(xiàn)，其中木犀草苷含量野生品較高于栽培品，而其余的3個成分含量栽培品較高于野生品，對兩個地區(qū)的栽培品進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，內(nèi)蒙古通遼地區(qū)窄葉藍(lán)盆花栽培品的異綠原酸A和異綠原酸C含量均高于內(nèi)蒙古呼和浩特地區(qū)的栽培品，芹菜素含量則是呼和浩特地區(qū)較高于通遼地區(qū)，這可能與藥材基原、地域分布、種植技術(shù)及區(qū)域的土壤、日照等生長環(huán)境有密切相關(guān)。不同采收期的窄葉藍(lán)盆花在成分含量上有一定的區(qū)別，但未呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，且本文只對呼倫貝爾市、呼和浩特市、通遼市3個產(chǎn)區(qū)進(jìn)行分析，不能代表所有野生品與栽培品的質(zhì)量，故后續(xù)需進(jìn)一步研究。

肥料是保障植物生長發(fā)育、產(chǎn)量、品質(zhì)的重要因素，在藥用植物生長過程中參與化合物的合成與代謝，影響次生代謝產(chǎn)物的形成與積累，進(jìn)而影響到藥材有效成分的含量[25]。本研究通過比較不同施肥處理發(fā)現(xiàn)，利根生、復(fù)合肥、生物肥會提高窄葉藍(lán)盆花中木犀草苷含量，抗逆態(tài)會降低木犀草苷含量；對異綠原酸A含量沒有明顯效果；對異綠原酸C有降低趨勢；生物肥對芹菜素含量有明顯提高作用。

目前，如何培育且栽培品質(zhì)優(yōu)良、均一穩(wěn)定的藥材是最為重要的一個難題。本研究從化學(xué)角度分析不同采收期野生品和栽培品、不同施肥處理窄葉藍(lán)盆花的差異，以期為窄葉藍(lán)盆花的規(guī)范化栽培及品質(zhì)評價標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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