藏藥“隆秀”軟膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007－8517（2025）10-0069-06

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.10. zgmzmjyyzz202510013

StudyonQualityStandardforZangMedicineLongxiuOintment

LI Maojia1，2 DU Lianping1.2*Guanque Duojie3KA Zhejie1，2 MA Zhiliang1，2 1. Qinghai Laboratory of Zang Medicine，Xining 810003，China; 2. State Key Laboratory of Zang Medicine Xining 81OoO3，China; 3．Hainan Zang Autonomous Prefecture Zang Hospital，Hainan 813OOO，China

Abstract：Objective To establish thequalitystandard for Zang medicine Longxiu Ointment.Method Thecomponents of piperine andeugenolwereidentifiedbythin-layerchromatograghy（TLC）．Thecontentofpiperinewasdeterminedbyhighperformaceliquid chromatography（HPLC）.Results TheTLCchromatographic spots wereclearandnegativewithoutinterference.Thelinearrelationship of piperine was good in the range of 10.501μg/mL to 210.014μg/mL ，and the recovery rate was 101.97% （ RSD=2.79% ）. Conclusion Themethodcan efectivelyremove matrix interference，andtheexperimentalresultsareacurateandreliable.

Keywords：Longxiu Ointment；Piperine；Eugenol

“隆秀”是藏醫(yī)的一種治療“隆”性疾病的涂擦療法，隆秀軟膏是以療法命名的藥方，此方出自藏醫(yī)著作《臨床札記精粹》1]，由胡椒、丁香、干姜、肉豆蔻、沉香、白檀香、紫檀、木香等11味藥組成。各大藏醫(yī)院外治科主要以涂擦療法將隆秀軟膏用于痛風(fēng)、濕痹、黃水病等引起的關(guān)節(jié)腫痛的治療，具有消腫、止痛功效。在藏醫(yī)中痛風(fēng)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、濕痹、白色黃水病等多由飲食起居不當(dāng)引起“培根隆”偏盛所致。而“隆”是人體固有“三因素”（隆、赤巴、培根）中的功能體之一，體內(nèi)的助推功能體，遇“培根”則助力“培根”使之偏盛，從而使“培根”的寒性升高，引發(fā)寒性疾病[2-3]。因此，此方配伍了降“培根”的胡椒、丁香、干姜等熱性藥材，還配伍了壓制“隆”的沉香、肉豆蔻、木香等藥材，且胡椒治療寒性培根病，丁香主治培根隆病[4-5]，均有溫中散寒之功效[6。胡椒中的胡椒堿具有消炎、止痛功效，可治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷等[7-8]。丁香中的丁香酚具有抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理活性[9-10]。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)將此方中能抑制“培根隆”偏盛的，具有消炎、止痛功效的胡椒和丁香作為核心藥物，明確此方中胡椒堿、丁香酚為指標(biāo)成分，建立隆秀軟膏的定性、定量質(zhì)量控制方法，填補(bǔ)藏藥隆秀軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)空白。為藏藥隆秀軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供數(shù)據(jù)支撐，為提高藏醫(yī)藥外用制劑的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

高效液相色譜儀［型號(hào)：LC-2030C，島津儀器（蘇州）有限公司]，電子分析天平［型號(hào)：AP225W，島津儀器（蘇州）有限公司]，超純水系統(tǒng)（型號(hào)：Comfort1，德國賽多利斯公司），全自動(dòng)點(diǎn)樣儀（型號(hào)：ATS4，CAMAG），超聲波清洗器（型號(hào)：2700TH/HCS951，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司），恒溫水浴鍋（型號(hào)：HHS-21-6，上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（型號(hào)：LAS-9023A，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）。

胡椒堿（批號(hào)：RDD－H00111802014，含量以98.0% 計(jì)），丁香酚（批號(hào)：RDD-H00111802014，含量以 98.0% 計(jì)）均購自成都瑞芬思德丹生物科技有限公司。胡椒、丁香、干姜、沉香、白檀香、降香、肉豆蔻、寒水石（炒）、肉桂、石榴子、紅花、訶子等均購自青海九康中藥飲片有限公司?！奥⌒恪避浉嘤汕嗪Ｊ『Ｄ现莶蒯t(yī)院制劑科提供（批號(hào)：2023072601、2023072602、2023072603）。甲醇為色譜純（美國Tedia）；水為娃哈哈純凈水；無水乙醇等其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 胡椒堿取本品 2.5g ，加無水乙醇50mL，加熱回流 60min ，稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取上清液10mL，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。根據(jù)制備工藝及上述方法，制得缺胡椒陰性對(duì)照溶液。另取胡椒堿，加無水乙醇制成每 1mL 含 4mg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[4]試驗(yàn)，吸取上述溶液各 2μL ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10% 硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置 365nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果供試品在與對(duì)照如圖2所示。

2.1.2 丁香酚 取本品 20g ，加乙醇 25mL ，超聲處理（功率 300W ，頻率 40kHz ， 25°C ）30min ，濾過，取濾液作為供試品溶液。根據(jù)制備工藝及上述方法，制得缺丁香陰性對(duì)照溶液。另取丁香酚，加乙醇制成每 1mL 含 25μL 的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）4試驗(yàn)，吸取供試品溶液 5μL ，對(duì)照品溶液 1μL ，陰性樣品溶液 5μL ，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 5% 香草醛硫酸溶液，在 105^°C 下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品在與對(duì)照品色譜對(duì)應(yīng)處，可見相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，如圖3所示。

圖2胡椒薄層色譜圖（紫外燈 365nm ）

A：胡椒堿對(duì)照品；B：陰性樣品；C：2023072601；D：2023072602；E：2023072603

A：丁香酚；B：陰性樣品；C：2023072601；D：2023072602；E：2023072603

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件BDS HYpersilTM C₁₈ （ 4.6mm ×250mm ， 5μm ）；流動(dòng)相為甲醇：水（ 65：35 ，梯度洗脫（ 0～20min ， 68% A; 20～25min ， 68% ～100% A； 25～26min ， 100%～68% A； 26～30 min ， 68% A）；體積流量 0.8mL/min ；柱溫30C ；進(jìn)樣量 10μL ；胡椒堿檢測波長為 343nm 。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對(duì)照品溶液精密稱定胡椒堿 1.118mg 于50mL 容量瓶中，加入甲醇制成對(duì)照品母液，精密量取母液 1mL 于 20mL 容量瓶，作為對(duì)照品溶液

2.2.2.2供試品溶液制備取隆秀軟膏劑 2.5g 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇50mL ，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流 60min ，再稱定質(zhì)量，無水乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取上清液 10mL ，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2.3 陰性對(duì)照溶液按隆秀軟膏的處方比例和制備工藝，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制得缺胡椒陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

2.2.3.1專屬性考察分別精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μL ，進(jìn)樣分析，HPLC色譜圖如圖4所示。由圖可知，供試品溶液在與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處出現(xiàn)胡椒堿色譜峰，而缺胡椒陰性對(duì)照溶液未見相應(yīng)色譜峰，表明對(duì)胡椒堿成分的測定未產(chǎn)生干擾。

2.2.3.2線性關(guān)系考察精密稱定胡椒堿2.143mg，置 10mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成每 1mL 含胡椒堿 210.014μg 的線性對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液 2mL ，置 5mL 量瓶中，加甲醇定容成 84.0056μg/mL 的對(duì)照品溶液 ① ；精密吸取對(duì)照品貯備液 3mL ，置 10mL 量瓶中，加甲醇定容成 63.0042μg/mL 的對(duì)照品溶液② ；精密吸取對(duì)照品貯備液 1mL ，置 5mL 量瓶中，加甲醇定容成 42.0028μg/mL 的對(duì)照品溶液 ③ ；精密吸取對(duì)照品貯備液 1mL ，置 20mL 量瓶中，加甲醇定容成 10.507μg/mL 的對(duì)照品溶液 ④ ，即得到線性濃度對(duì)照品溶液。按“2.2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo) （y） ，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo) （x） ，見表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖5。結(jié)果表明濃度為 10.501～210.014μg/mL 的范圍內(nèi)胡椒堿濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.3.3精密度試驗(yàn)精密吸取上述專屬性考察的供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算峰面積RSD值。結(jié)果顯示，同一份供試品溶液連續(xù)進(jìn)6針，胡椒堿峰面積RSD值為 0.43% ，RSD值小于 3.0% ，說明儀器精密度良好。結(jié)果見表2。

2.2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)稱取同一批隆秀軟膏制劑（批號(hào)：2023072601） 2.5010g ，精密稱定，按照“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于 0h 、 ^2h ） 、8h、 ^12h 、 24h 進(jìn)樣分析，結(jié)果胡椒堿峰面積RSD為 0.36% ，表明供試品溶液在 24h 內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

2.2.3.5重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批隆秀軟膏（批號(hào)：2023072601）約 2.5g ，精密稱定，平行稱定6份，分別按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果胡椒堿含量RSD值均小于 3.0% （見表4），表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)取隆秀膏（批號(hào)：2023072601，胡椒堿含量： 1.015mg/g ）約1.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，平行3組，每組3份，分別加入加樣回收溶液 10mL ！ 20mL 和30mL，再分別加入 40mL 、 30mL 和 20mL 的無水乙醇，稱定重量，加熱回流 60min ，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取上清液 10mL ，置 25mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測定供試品溶液中胡椒堿含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表5。

2.2.3.7樣品含量測定精密稱取隆秀軟膏制劑3批（批號(hào)分別為2023072601，2023072602，2023072603），每份 2.5g ，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，見表6。三批樣品含量結(jié)果為 1.003mg/g ～1.020mg/g ，平均值為 1.012mg/g 。擬規(guī)定本品含胡椒堿（ C₁₇H₁₉NO₃ ）不得低于 0.71mg/g 。

3討論

在薄層鑒別中丁香酚用甲苯溶劑展開，效果略差，拖尾，經(jīng)多次試驗(yàn)，其在噴完顯色劑后，應(yīng)立即在 105^°C 下進(jìn)行烘烤，要注意烘烤薄層板時(shí)間不宜過長，否則斑點(diǎn)會(huì)模糊，不易辨認(rèn)。含量測定中胡椒堿的甲醇溶液經(jīng)PDA全波段掃描發(fā)現(xiàn)，該成分的紫外最大吸收波長為 343nm ，確定343nm為胡椒堿的檢測波長。流動(dòng)相體系考察了甲醇-水、甲醇 -0.001% 磷酸水、乙腈－水的色譜條件，經(jīng)對(duì)比得出，流動(dòng)相用甲醇-水溶液加酸或洗脫能力較強(qiáng)的乙腈-水溶液時(shí)，胡椒堿成分出峰時(shí)間較短，易與溶劑峰混淆；流動(dòng)相用甲醇-水體系時(shí)，所需對(duì)照品峰從峰面積、峰形、出峰時(shí)間等都優(yōu)于其他兩個(gè)體系。

本研究在前期試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，軟膏制劑前處理過程中常出現(xiàn)藥品基質(zhì)過硬或不易軟化等問題，這使得樣品不易溶解或溶解濃度較低，從而影響軟膏藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確測定。因此，優(yōu)化制劑工藝，確保軟膏基質(zhì)的黏稠度、粒度適中，是后續(xù)外用制劑質(zhì)控研究的重要前提。此外，無論是外用還是內(nèi)服制劑，選擇合適的指標(biāo)成分對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)是至關(guān)重要的，它不僅應(yīng)具備藥品的整體有效性、安全性，還應(yīng)體現(xiàn)特有性，但是中藥及民族藥多數(shù)為多味藥材組成的復(fù)方制劑，僅從某個(gè)藥的單一成分很難體現(xiàn)復(fù)方制劑的功效，從而影響整體質(zhì)量評(píng)價(jià)。劉昌孝院士及其團(tuán)隊(duì)提出的“質(zhì)量標(biāo)志物（Q－marker）”新概念[11-12]，為我們提供了寶貴的指導(dǎo)，這一理論適用于多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的中藥及民族藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立，其強(qiáng)調(diào)了在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)注重中藥君臣佐使配伍理論，組成的方劑應(yīng)遵循君藥首選原則，兼顧君臣藥物的復(fù)方機(jī)制，選定出可用于定性、定量的結(jié)構(gòu)成分明確的質(zhì)量標(biāo)志物來建立一系列質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。藏醫(yī)藥可借鑒此經(jīng)驗(yàn)，立足藏醫(yī)配伍理論結(jié)合自身特點(diǎn)，建立基于“質(zhì)量標(biāo)志物”的具有有效性、安全性的，且能夠反應(yīng)藥品整體質(zhì)量的藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，為完善藏藥質(zhì)量研究、評(píng)價(jià)和控制提供新方向。

4結(jié)論

本研究通過采用薄層鑒別和高效液相色譜方法，建立了藏藥隆秀軟膏的質(zhì)量控制方法，該定性、定量方法簡便、可靠、專屬性強(qiáng)，可為該藥的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)。但藏藥“隆秀”軟膏的膏體基質(zhì)較硬，后期有待優(yōu)化，其黏稠度、粒度、裝量等法定檢測項(xiàng)在本次實(shí)驗(yàn)中需進(jìn)一步完善。

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