關(guān)于阿達(dá)木單抗生物類似藥質(zhì)量相似性評價(jià)要點(diǎn)的初步探討

程速遠(yuǎn)，趙靖，胡瑩瑩，白玉

國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，北京100022

近年，生物類似藥研發(fā)的熱度日增，已有近200個(gè)單抗生物類似藥候選藥進(jìn)入臨床研究階段，其中阿達(dá)木單抗（adamumab）是申報(bào)量最高的生物類似藥之一。截至2020年7月，我國已有2種阿達(dá)木單抗生物類似藥上市［1］，另有2個(gè)廠家產(chǎn)品進(jìn)入申報(bào)生產(chǎn)階段，22個(gè)廠家產(chǎn)品處于臨床試驗(yàn)階段。美國FDA已批準(zhǔn)安進(jìn)公司、勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司、諾華-山德士公司、三星Bioepis／默沙東集團(tuán)、輝瑞制藥有限公司和邁蘭公司／協(xié)和發(fā)酵株式會(huì)社6家公司研發(fā)的阿達(dá)木單抗生物類似藥上市，歐盟也已批準(zhǔn)上述除輝瑞公司之外5家公司研發(fā)的阿達(dá)木單抗生物類似藥上市。

本文通過匯總與比較原研廠及國內(nèi)26家阿達(dá)木單抗生物類似藥研發(fā)企業(yè)的表征分析數(shù)據(jù)，結(jié)合各國生物類似藥相關(guān)指導(dǎo)原則及參考文獻(xiàn)，對阿達(dá)木單抗生物類似藥質(zhì)量相似性的技術(shù)評價(jià)要點(diǎn)進(jìn)行初步探討。

1 阿達(dá)木單抗質(zhì)量相似性評價(jià)

阿達(dá)木單抗（商品名Humira?）系由美國雅培公司開發(fā)，采用中國倉鼠卵巢細(xì)胞系表達(dá)制備的首個(gè)重組全人源化IgG1κ型單克隆抗體，由2條重鏈和2條輕鏈組成，共含1 330個(gè)氨基酸，每條重鏈Fc部分相同糖基化位點(diǎn)含有典型的N-端連接糖鏈。阿達(dá)木單抗通過特異性結(jié)合可溶性腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），阻斷其與細(xì)胞表面受體p55和p75相互作用，從而有效抑制TNF-α誘導(dǎo)的多種病理效應(yīng)。另外，阿達(dá)木單抗還可與跨膜TNF-α結(jié)合，通過Fcγ受體結(jié)合的抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（complement dependent cytotoxicity，CDC），誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等效應(yīng)，清除部分致病靶細(xì)胞。

生物類似藥的研發(fā)是以原研藥的關(guān)鍵質(zhì)量屬性為目標(biāo)，以證實(shí)候選藥物與原研藥的質(zhì)量相似性或二者結(jié)構(gòu)功能差異不會(huì)引起安全性或有效性方面具有臨床意義的差異作為生物類似藥藥學(xué)開發(fā)與評價(jià)的核心［2］。在生物類似藥的開發(fā)過程中，一方面應(yīng)關(guān)注原研藥上市后變更，盡可能收集較多批次的原研參照藥；一方面應(yīng)關(guān)注使用統(tǒng)計(jì)方法的策略和相關(guān)法規(guī)隨著經(jīng)驗(yàn)積累進(jìn)行的調(diào)整［3］。

1.1 阿達(dá)木單抗原研產(chǎn)品注冊與工藝變更情況 阿達(dá)木單抗于2002年在美國注冊上市，2003年在歐盟注冊上市，現(xiàn)已在90多個(gè)國家和地區(qū)上市，批準(zhǔn)用于包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis）、銀屑病關(guān)節(jié)炎（psoriatic arthritis）、強(qiáng)直性脊柱炎（anky-losing spondylitis）、克羅恩?。–rohn disease）、斑塊銀屑?。╬laque psoriasis）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis）、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎（juvenile idiopathic arth-ritis）、兒童克羅恩病（Crohn disease pediatric）、特定類型葡萄膜炎（specific types of UVEITIS）、治療影像學(xué)陰性中軸脊柱炎（nr-axSpA）等多種適應(yīng)證。阿達(dá)木單抗于2010年在中國上市，先后獲批用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和銀屑病3種適應(yīng)證，并于2020年獲批新增克羅恩病、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、兒童斑塊銀屑病和葡萄膜炎4種適應(yīng)證。

根據(jù)歐洲藥監(jiān)機(jī)構(gòu)公布的公眾評估報(bào)告（European Public Assessment Report，EPAR）信息，阿達(dá)木單抗自2002年上市后至少經(jīng)過28次不同風(fēng)險(xiǎn)等級的工藝變更，包括8次低風(fēng)險(xiǎn)變更，17次中度風(fēng)險(xiǎn)變更和3次重大風(fēng)險(xiǎn)變更［4］。從阿達(dá)木單抗原研公司在我國藥品再注冊和補(bǔ)充申請等受理情況分析，中國已上市的阿達(dá)木單抗在原液生產(chǎn)場地、生產(chǎn)工藝、包材、包裝規(guī)格、制劑處方等方面的確存在多次工藝變更。上述工藝變更可能導(dǎo)致阿達(dá)木單抗的質(zhì)量在其產(chǎn)品生命周期內(nèi)發(fā)生“漂移”。

1.2 生物類似藥質(zhì)量相似性評價(jià)的一般考慮 生物制品具有分子量大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、生物活性對其結(jié)構(gòu)完整性依賴性強(qiáng)、變異體多、生產(chǎn)工藝復(fù)雜等特點(diǎn)［5］，因此，隨著國內(nèi)外生物類似藥研發(fā)和評價(jià)的不斷深入，生物類似藥相似性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的推出尤為重要。我國于2015年發(fā)布了《生物類似藥研發(fā)與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，明確了相似性評價(jià)的基本原則，包括比對原則、逐步遞進(jìn)原則、一致性原則和相似性評價(jià)原則［6］。

通過借鑒國際相關(guān)法規(guī)政策和近年的審評經(jīng)驗(yàn)積累，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心于2020年8月發(fā)布了《生物類似藥相似性評價(jià)和適應(yīng)證外推技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，提出相似性是指生物類似藥與參照藥之間高度相似，在純度、安全性及有效性不存在有臨床意義的差別。進(jìn)一步明確了應(yīng)基于對參照藥質(zhì)量屬性的認(rèn)知程度及其與臨床風(fēng)險(xiǎn)獲益的相關(guān)性，對質(zhì)量屬性進(jìn)行高、中、低風(fēng)險(xiǎn)的分級。高、中風(fēng)險(xiǎn)質(zhì)量屬性可采用驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)范圍方法進(jìn)行定量評估；低風(fēng)險(xiǎn)和無法采用定量方法評價(jià)的質(zhì)量屬性可采用頭對頭定性比對或圖譜比對的方法進(jìn)行評估。用于定量評估的質(zhì)量范圍通常定義為μRXσR／μR+XσR，其中μR為檢測樣本的平均值，σR為標(biāo)準(zhǔn)偏差，系數(shù)X的設(shè)定需根據(jù)質(zhì)量屬性的風(fēng)險(xiǎn)等級和方法的變異性等進(jìn)行科學(xué)論證，針對高風(fēng)險(xiǎn)質(zhì)量屬性應(yīng)合理收緊系數(shù)。根據(jù)質(zhì)量屬性權(quán)重和相似性評價(jià)目標(biāo)，也可采用其他統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，如等效性檢驗(yàn)。鼓勵(lì)采用先進(jìn)的、靈敏度高的技術(shù)和方法對候選藥和參照藥開展全面質(zhì)量比對研究。對候選藥與參照藥存在的與臨床風(fēng)險(xiǎn)獲益相關(guān)性認(rèn)知尚不充分的差異，應(yīng)設(shè)計(jì)針對性的比對試驗(yàn)研究，以證實(shí)質(zhì)量差異的不確定性對藥物安全性、有效性和免疫原性等方面的影響。必要時(shí)，還需要提供額外的非臨床和／或臨床證據(jù)，科學(xué)地論證質(zhì)量差異是否具有臨床意義［7］。

1.3 關(guān)鍵質(zhì)量屬性的識別 阿達(dá)木單抗屬于典型的IgG1型單克隆抗體，糖基化修飾復(fù)雜，具有多種質(zhì)量屬性，根據(jù)對其生物學(xué)活性、藥代動(dòng)力學(xué)（pharmacokinetic，PK）、安全性和免疫原性的潛在影響及對應(yīng)的臨床用藥風(fēng)險(xiǎn)獲益程度，確定阿達(dá)木單抗的關(guān)鍵質(zhì)量屬性并對質(zhì)量屬性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)等級排序，見表1［8］。

1.4 關(guān)鍵質(zhì)量屬性相似性評價(jià)

匯總26家國內(nèi)阿達(dá)木單抗生物類似藥廠家（共109批，其中37批重復(fù)）、原研藥廠家（30批）、中國食品藥品檢定研究院（簡稱中檢院）質(zhì)量復(fù)核（9批）的質(zhì)量研究數(shù)據(jù)，并結(jié)合文獻(xiàn)［2，9-10］對阿達(dá)木單抗原研藥的關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)后確認(rèn)初步質(zhì)量相似性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（Mean±3SD），再評估各家候選藥的各質(zhì)量屬性檢測結(jié)果是否符合該相似性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)范圍。

1.4.1 結(jié)構(gòu)確證

1.4.1.1 氨基酸序列 生物類似藥研發(fā)的前提是氨基酸序列的一致性，通常多種酶切后采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（簡稱液質(zhì)聯(lián)用）的方法進(jìn)行肽圖檢測，大部分阿達(dá)木單抗生物類似藥候選藥的二級質(zhì)譜覆蓋率可達(dá)100%，同時(shí)應(yīng)證明氨基酸序列與參照藥一致。

1.4.1.2 分子量 單抗分子量包括完整分子量、還原和去糖后重鏈及輕鏈分子量。完整分子量通常采用點(diǎn)噴射離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行檢測；還原態(tài)的去糖基化重鏈和輕鏈的質(zhì)量分析則多采用多肽-N-糖苷酶（PNGase F）去除N連接的糖鏈后變性還原，再進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析。各廠家的阿達(dá)木生物類似藥候選藥切糖分子量與參照藥一致性良好，通常切糖后重鏈和輕鏈分子量分別為49 200和23 412，與理論值一致。完整蛋白水平的分析難以提供糖基化修飾的精細(xì)信息，在質(zhì)譜法測定中易受蛋白同位素峰的影響，僅可提供抗體的平均分子量信息。鑒于目前收集到的各家完整蛋白分子量批次有限，暫未納入統(tǒng)計(jì)。但候選藥廠家應(yīng)盡可能采用高分辨率質(zhì)譜與參照藥開展頭對頭的檢測，并分析各分子量與參照藥的異同。

1.4.1.3 二硫鍵及自由巰基 通過比較還原條件和非還原條件下的肽圖，可鑒別出含有二硫鍵的多肽，進(jìn)一步確認(rèn)二硫鍵的結(jié)構(gòu)。阿達(dá)木單抗共有16對二硫鍵，包含12對鏈內(nèi)二硫鍵及4對鏈間二硫鍵，理論上不應(yīng)存在游離巰基。對各廠家二硫鍵鑒定結(jié)果均與理論一致，自由巰基含量一致性良好，均保持在極低水平。

1.4.1.4 糖基化修飾 通常采用PNGase F酶切糖鏈，經(jīng)糖鏈熒光標(biāo)記后通過液質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行糖型分析。阿達(dá)木單抗的糖基化位點(diǎn)位于重鏈第301位天冬酰胺（Asn）上，主要糖型為巖藻糖基化二天線寡糖（如G0F、G1F、G2F等），占糖型總量的82.3%～95.1%，其中G0F占74.3%～76.5%，G1F+G2F占13.3%～24.9%［9］，其他糖型還有G0、高甘露寡糖（如Man5、Man6等）、半乳糖基化、唾液酸化等。其中，半乳糖基化基團(tuán)包括全部復(fù)合物及至少含1個(gè)末端半乳糖的雜合聚糖結(jié)構(gòu)，半乳糖基化對補(bǔ)體C1q與IgG1的結(jié)合較重要，是通過CDC激活I(lǐng)gG1介導(dǎo)細(xì)胞裂解的關(guān)鍵步驟；高甘露糖聚糖類型是人血清IgGs中天然存在的，可通過結(jié)合至甘露糖結(jié)合受體引起清除率變化而影響PK，并通過結(jié)合FcγRⅢa影響ADCC活性，如Fc端N-連接聚糖缺少核心巖藻糖可顯著提高IgG1結(jié)合至FcγRⅢa的親和力，從而提高ADCC活性；唾液酸含量會(huì)影響PK和有效性［11］，但阿達(dá)木單抗的唾液酸含量較低，對產(chǎn)品功能相似性影響較小。另外，阿達(dá)木單抗具有一定的ADCC和CDC效應(yīng)，與跨膜TNF-α作用機(jī)制相關(guān)的克羅恩病和葡萄膜炎可能與此有關(guān)，在適應(yīng)證外推中應(yīng)考慮影響ADCC和CDC效應(yīng)的糖基化水平。鑒于糖基化與阿達(dá)木單抗的生物活性、有效性、安全性及PK等密切相關(guān)，不同生物類似藥應(yīng)與原研藥具有相似的糖型分布。

各生物類似藥廠家獲得的阿達(dá)木單抗主要糖型的分布較為相似，但由于各家對糖型的分類、采用的檢測方法及積分計(jì)算方法不同，原研廠家自測和生物類似藥廠家測定的參照藥糖型含量區(qū)間范圍存在一定差異，個(gè)別候選藥的部分糖型含量超出了初步擬定的相似性標(biāo)準(zhǔn)范圍。部分候選藥主要糖型含量見圖1。

圖1 阿達(dá)木單抗參照藥和候選藥的糖型含量

1.4.1.5 高級結(jié)構(gòu) 一般采用圓二色譜法、熒光光譜法及差示掃描量熱法等進(jìn)行單克隆抗體高級結(jié)構(gòu)的檢測，候選藥應(yīng)與參照藥進(jìn)行頭對頭分析比較，檢測圖譜、吸收峰和Tm值應(yīng)與參照藥一致。

1.4.1.6 等電點(diǎn) 等電點(diǎn)受蛋白質(zhì)氨基酸序列和高級結(jié)構(gòu)的影響，一般采用毛細(xì)管等電聚焦（capillary isoelectric focusing，cIEF）法檢測等電點(diǎn)。阿達(dá)木單抗為糖基化蛋白，等電點(diǎn)的圖譜為一組峰，各峰的出峰時(shí)間與峰高應(yīng)與原研藥一致。各生物類似藥廠家的主峰出峰時(shí)間與參照藥基本一致，但酸性峰和堿性峰分布存在一定差異。

1.4.2 生物活性

阿達(dá)木單抗功能相似性評價(jià)包括與可溶性TNF-α的結(jié)合動(dòng)力學(xué)及與跨膜TNF-α相對結(jié)合力的檢測，同時(shí)還應(yīng)檢測TNF-α細(xì)胞毒中和作用及與Fcγ受體（FcRⅠa、FcRⅡa、FcRⅢa）和新生兒受體（FcRn）的結(jié)合能力，并分析其ADCC及CDC活性。通常采用ELISA法測定與可溶性TNF-α的相對結(jié)合力，細(xì)胞凋亡抑制法檢測細(xì)胞活性，表面等離子體共振法（surface plasmon resonance，SPR）測定樣品和TNF-α和Fc受體的親和力。

1.4.2.1 結(jié)合活性 采用ELISA法檢測樣品與可溶性TNF-α的結(jié)合能力，一般擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為對照品的75%～125%。

1.4.2.2 細(xì)胞活性TNF-α可誘導(dǎo)L-929小鼠成纖維細(xì)胞凋亡，TNF-α與阿達(dá)木單抗特異性結(jié)合后，阻斷了其對靶細(xì)胞的凋亡作用，中和了其對L-929細(xì)胞毒性。采用TNF-α細(xì)胞毒中和法，通過比較參比品和供試品的EC50值，計(jì)算供試品的凋亡抑制生物活性。一般擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍為對照品的80%～125%，由于方法的變異性較大，部分生物類似藥企業(yè)擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為70%～150%。鑒于候選藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)不低于參照藥，建議通過方法優(yōu)化提高方法的精密度，盡量收緊至原研藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍。

1.4.2.3 Fc受體及C1q親和力 抗體Fc端與免疫細(xì)胞表達(dá)的Fc受體（FcRⅠa、FcRⅡa、FcRⅢa）、新生兒受體（FcRn）及血液中的補(bǔ)體（C1q）的結(jié)合對抗體的PK有一定影響，因此需要關(guān)注候選藥與參照藥在樣品Fc端多種受體親和力方面的相似性。Fc受體及C1q親和力通常采用SPR法檢測，方法的變異性使各家檢測結(jié)果差異較大，因此在相同檢測條件下的頭對頭研究十分必要。

表1 阿達(dá)木單抗關(guān)鍵質(zhì)量屬性

1.4.2.4 ADCC和CDC活性 通常阿達(dá)木單抗與可溶性TNF-a結(jié)合不具有ADCC和CDC活性，但與跨膜TNF-α結(jié)合后可發(fā)揮ADCC和CDC活性。ADCC檢測一般采用報(bào)告基因檢測系統(tǒng)，靶細(xì)胞為細(xì)胞表面表達(dá)TNF-α的CHO-K1／hmTNF-α細(xì)胞，阿達(dá)木單抗可與細(xì)胞膜表面TNF-α結(jié)合，啟動(dòng)效應(yīng)細(xì)胞報(bào)告基因表達(dá)，促進(jìn)發(fā)光底物發(fā)光，發(fā)光程度與抗體濃度呈正相關(guān)。CDC通過阿達(dá)木單抗與CHOK1／hmTNF-α細(xì)胞表面表達(dá)的TNF-α結(jié)合，形成復(fù)合物激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，所產(chǎn)生的攻膜復(fù)合物對靶細(xì)胞發(fā)揮裂解作用，通過乳酸脫氫酶（lactatedehy-drogenase，LDH）及鈣黃綠素（calcein AM）的釋放來檢測CDC作用，其顯色程度與抗體濃度呈正相關(guān)。由于各廠家檢測生物活性時(shí)均采用自制對照品作為標(biāo)準(zhǔn)品，橫向比較和統(tǒng)計(jì)各廠家生物活性檢測結(jié)果意義較小。統(tǒng)一國家標(biāo)準(zhǔn)品的建立將有助于同類產(chǎn)品生物活性等質(zhì)量的平行對比。

1.4.3 純度

1.4.3.1 SEC-HPLC純度 通常采用SEC-HPLC法檢測分子大小異構(gòu)體，主峰前后分別是聚體和降解片段。聚體的存在會(huì)帶來免疫原性風(fēng)險(xiǎn)，并影響PK；降解片段可能會(huì)造成結(jié)合活性下降，對有效性產(chǎn)生影響。各生物類似藥廠家測得的阿達(dá)木單抗單體純度范圍為98.5%～100.6%，個(gè)別候選藥廠家的檢測結(jié)果超出相似性驗(yàn)收范圍，低于該項(xiàng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，部分結(jié)果見圖2，作為較嚴(yán)重的缺陷項(xiàng)可判斷為該項(xiàng)不符合相似性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

圖2 阿達(dá)木單抗參照藥和候選藥的SEC-HPLC純度

1.4.3.2 CE-SDS純度 在還原條件及非還原條件下，根據(jù)分子量大小的不同采用CE-SDS法進(jìn)行純度檢測，能檢測到降解片段和非糖基化重鏈，檢測結(jié)果可反映抗體結(jié)構(gòu)的完整性。各廠家測得阿達(dá)木單抗的還原CE-SDS的重鏈+輕鏈純度范圍為96.6%～99.3%，非還原CE-SDS的重鏈+輕鏈純度范圍為94.1%～100.2%，部分結(jié)果見圖3。

圖3 阿達(dá)木單抗參照藥和候選藥的非還原CE-SDS純度

1.4.3.3 SDS-PAGE純度SDS-PAGE可將蛋白質(zhì)按分子大小分離，包括還原SDS-PAGE和非還原SDSPAGE。各廠家測得阿達(dá)木單抗的輕鏈和重鏈條帶總含量范圍為96.6%～99.3%。

1.4.3.4 CEX-HPLC純度 目前最常采用CEXHPLC檢測單抗的電荷異構(gòu)體，除主峰外的酸性峰和堿性峰對生物活性均有影響。各廠家測得阿達(dá)木單抗CEX-HPLC純度的可見主峰與堿性峰之和均在一定的質(zhì)量范圍內(nèi)，與文獻(xiàn)報(bào)道85.62%～87.59%的結(jié)果相近［11］。個(gè)別候選藥的主峰和堿性峰含量超出了初步擬定的相似性標(biāo)準(zhǔn)范圍，部分結(jié)果見圖4，可能與樣品前處理有關(guān)，建議在頭對頭對比的基礎(chǔ)上盡可能保證電荷異構(gòu)體與原研藥的相似性。對堿性峰含量產(chǎn)生影響的原因之一是C-末端賴氨酸含量，但通常認(rèn)為由C-末端賴氨酸產(chǎn)生的堿性峰含量的差異不會(huì)影響PK及有效性和安全性。

圖4 阿達(dá)木單抗參照藥和候選藥的CEX-HPLC純度

中檢院及生物類似藥廠家檢測參照藥的純度結(jié)果與原研自測結(jié)果存在一定差異，提示檢測方法對結(jié)果可能有較大影響，如色譜柱、洗脫條件、樣品前處理等，因此生物類似藥廠家進(jìn)行參照藥與候選藥頭對頭研究的結(jié)果更具有參考意義。

1.4.4 工藝相關(guān)雜質(zhì) 主要包括工藝過程中可能引入的雜質(zhì)，通常有宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量、外源性DNA殘留量、蛋白質(zhì)A殘留量及生產(chǎn)過程中其他的添加物（如消泡劑、胰島素等）。工藝相關(guān)雜質(zhì)并非相似性評價(jià)關(guān)鍵項(xiàng)目，主要影響產(chǎn)品的安全性，通常不要求進(jìn)行頭對頭對比研究，但應(yīng)進(jìn)行工藝相關(guān)雜質(zhì)的去除研究，并對殘留量進(jìn)行安全性風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)不低于已上市同類產(chǎn)品的要求。

2 參照藥及候選藥的選擇標(biāo)準(zhǔn)

2.1 參照藥及候選藥的選擇 藥學(xué)的質(zhì)量相似性研究是候選藥作為生物類似藥開發(fā)的前提。應(yīng)在對參照藥的關(guān)鍵質(zhì)量屬性有充分的認(rèn)識和理解的基礎(chǔ)上，采用多種先進(jìn)、靈敏的技術(shù)手段對足夠批次的參照藥進(jìn)行全面分析，合理設(shè)定質(zhì)量相似性的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。由于單克隆抗體存在多種翻譯后修飾、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有電荷異質(zhì)性和分子量大小的異質(zhì)性及批間的不均一性，因此在參照藥的選擇上，應(yīng)盡可能收集跨越較長時(shí)間范圍的多批次來源中國市場的原研藥進(jìn)行表征分析，其他國家來源原研藥的質(zhì)量屬性可作為參考，但不作為主要評價(jià)依據(jù)。候選藥應(yīng)基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，充分考慮生產(chǎn)中使用的原材料、生產(chǎn)工藝、規(guī)模、場地、制劑處方、包材等，將具有代表性的批次用于相似性評價(jià)的質(zhì)量研究中［12］。

生物類似藥研發(fā)中，應(yīng)納入盡可能多批次的參照藥與候選藥，以便相似性分析結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。申報(bào)臨床試驗(yàn)階段，通常應(yīng)采用至少3批候選藥與至少3批參照藥進(jìn)行頭對頭對比研究；申報(bào)上市階段，應(yīng)積累10批以上的原研藥和候選藥的質(zhì)量研究數(shù)據(jù)，其中候選藥批次中應(yīng)納入臨床試驗(yàn)批樣品、擬上市商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模批次的代表性樣品［13-14］。為確保研發(fā)各階段良好的銜接，關(guān)鍵臨床試驗(yàn)前應(yīng)確定生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)規(guī)模及生產(chǎn)場地等。

2.2 相似性評價(jià) 由于原研藥生產(chǎn)工藝信息獲取的有限性及生物制品生產(chǎn)工藝的復(fù)雜性，難以驗(yàn)證兩種來源的生物制品在結(jié)構(gòu)和組成方面的完全一致性，候選藥和原研藥通常在分子量大小異質(zhì)性、電荷異質(zhì)性、糖基化程度方面存在差異。對于質(zhì)量相似性評價(jià)中觀察到的差異，應(yīng)提供更多的支持性資料（包括對安全性、有效性、免疫原性和PK／PD的影響及進(jìn)一步的研究數(shù)據(jù)等），來說明存在的差異是否影響候選藥與參照藥相似性的判斷。在某些情況下，可通過部分調(diào)整生產(chǎn)工藝來減小或消除觀察到的差異，并確保其他的質(zhì)量屬性不會(huì)因此受到顯著影響［15］。

3 小結(jié)

本文基于審評實(shí)踐所積累的數(shù)據(jù)，采集了不同生物類藥廠家、原研廠家及中檢院對阿達(dá)木單抗的檢測結(jié)果。上述數(shù)據(jù)來源于不同實(shí)驗(yàn)室，分析方法、樣品來源、樣品出廠后放置時(shí)間、參照藥自身的工藝變更和場地變更等可能存在差異，因此，根據(jù)上述數(shù)據(jù)設(shè)定的質(zhì)量相似性標(biāo)準(zhǔn)范圍較為寬泛，雖然對生物類似藥廠家的藥學(xué)研發(fā)具有一定參考價(jià)值，但建議僅將此標(biāo)準(zhǔn)作為基本參考。對于質(zhì)量相似性評價(jià)，更有意義的是采用靈敏的分析方法對候選藥和參照藥進(jìn)行頭對頭的比較分析。另外，原研藥與候選藥頭對頭的圖譜比對分析、穩(wěn)定性變化趨勢、降解途徑和降解速率的對比也非常重要，但目前采集的數(shù)據(jù)中，圖譜比對和穩(wěn)定性趨勢對比分析的數(shù)據(jù)有限，本文僅對可用于統(tǒng)計(jì)分析的數(shù)據(jù)進(jìn)行了梳理，因此得到的質(zhì)量相似性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)具有一定的局限性。生物類似藥研發(fā)持續(xù)深入推進(jìn)，隨著原研藥質(zhì)量研究數(shù)據(jù)的不斷積累及分析技術(shù)的進(jìn)步和統(tǒng)計(jì)經(jīng)驗(yàn)的豐富，生物類似藥質(zhì)量相似性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)也會(huì)日趨完善。