山楂提取物調(diào)控高脂小鼠T細胞免疫及脂代謝的作用機制研究

AbstractObjective：ToxplorethemechanismofhawthoextractregulatingTcelimmunityandiidmetabolisminhyperideic mice.Methods：Sixty healthymale6-weekoldspecicpathogenic（SPF）gradeC57BL/6Jmicewereadaptivelyraisedforoneweekand thenrandomly divided into the normal control group，high-fat diet（HFD） group，HFD + high-dose hawthorn extract group，HFD+mediumdosehawthomextractgroup，HFDlow-dosehawthomextractgroupandHFDatorvastatingroup.Thenormalcontrolgroupwasgiven ordinary feed andraised normaly for8weeks，while the mice in the HFDgroup were fed with high-fatfeed powered by 60% fat for 8 weks.MiceintheHFDhigh-dosehawthomextractgroup，HDmedium-dosehawthomextractgroup，ndHFDlow-dosehawthom extract group were gavaged with 5.2，2.6，and 1.3g/kg hawthorn extract，respectively after 4weeks of high-fat rearing，once a day.Mice in theatorvastatin groupwere given oraladministration of atorvastatinat a dose of 10mg/kg bygavageafter4weeksof high-fat feeding， onceaday.Thecontrolgroupandthe HFDgroupweregavagedwiththesamevolumeof normalsalineatthesamevolume.The intervention period was 4weeks.The mRNA and protein expression levels of CD₃₆ and peroxidase proliferation-activated receptor γ （PPARγ） weredetected by WestemBlotand reverse transcription polymerasechain reaction（qRT-PCR）.Flowcytometry was used to detecthepropiosa）el）neli mice.Results：Compared with the normal group，the body weight of mice in the HFD group increased Plt;0.01 ）;theexpression levels of CD₃₆ ， PPARγ mRNA，proteinincreased Plt;0.01 ）;the proportionof Th17 cels in the spleen increased，and the percentages of Treg and Tfhcells increased（ Plt;0.01 ）.Compared with the mice in the HFD group，the expression levelsof CD₃₆ PPARγ mRNA，and protein inthe model groupmice intervenedwith hawthornextractand atorvastatindecreased Plt;0.01 ），thepercentagesofTregandTfhcellsincreased （Plt;0.01） ，andthepercentageofTh17celsdecreased Plt;0.01 ）.Theeffect of the HFD+high-dose hawthorn extract group and the atorvastatin group were significant（ Plt;0.05 or Plt;0.01 ）.Conclusion：Hawthorn extract can improve the imbalance of Treg，Th17 and Tfh cellsand the expression of CD₃₆ PPARγ receptors in mice with dyslipidemiamodels.Lipid regulation by hawthorn extract may be related to T-cell immunity and lipid metabolism differentiation.

Keywordsdyslipidemia;Tcellimmunity; hawthorn extract; peroxisome proliferator-activated receptor γ; experimental study

心血管疾病（cardiovasculardisease，CVD）仍是全球首位死亡原因，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，約13的病人死于CVD，是當(dāng)今嚴重危害人類健康的疾病之-[1]。血脂異常（dyslipidemia）是引發(fā)CVD的主要致病性危險因素[3]，其發(fā)生發(fā)展會增加CVD的發(fā)病率與死亡率，有效防治血脂異常有助于減少CVD風(fēng)險人群的不良心血管事件，提高病人的生活質(zhì)量。當(dāng)前西醫(yī)一線調(diào)脂藥物為他汀類藥物，但在長期應(yīng)用于臨床的同時會產(chǎn)生肌痛、肝腎功能損害等不良反應(yīng)[45]，因此探討藥食同源的藥物以調(diào)脂是一個較好的解決方法。

山楂為薔薇科植物山里紅或山楂的干燥成熟果實，是我國傳統(tǒng)藥食兩用植物，具有消食健胃、行氣散瘀、化濁降脂功效?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，山楂含有的黃酮類、三萜皂苷類等活性成分可以調(diào)節(jié)機體炎性細胞因子表達及免疫調(diào)節(jié)活性，對于改善血脂異常等慢性炎癥性疾病有著積極的意義[。其中，山楂乙醇提取液能夠緩解Caco-2細胞中腫瘤壞死因子 -a（TNF-α） 誘發(fā)的腸上皮屏障缺陷從而抑制炎癥反應(yīng)；山楂提取物能夠抑制長期高熱量飲食（high-caloriediet，HCD）大鼠總膽固醇（TC）低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）升高，增加高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）活性，減輕一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase，NOS）及氧化應(yīng)激帶來的不良反應(yīng)[8]。

血脂異常作為一種慢性炎癥性疾病，不僅導(dǎo)致血清TC、三酰甘油（TG）、LDLC和HDL-C失衡，還涉及多種免疫細胞的協(xié)同作用，特別是T淋巴細胞亞群[9]，如調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）抑制輔助性T細胞（Th17）、濾泡輔助性T細胞（Tfh）及自身免疫反應(yīng)。研究表明，T淋巴細胞在血脂異常、糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病的防治中發(fā)揮著重要作用，其通過互相協(xié)調(diào)能夠產(chǎn)生免疫應(yīng)答，清除外來病原體，維持機體正常的免疫功能[10]。本研究建立高脂飲食小鼠模型，從T細胞免疫及脂代謝角度探討山楂提取物調(diào)控血脂代謝異常的科學(xué)內(nèi)涵，為山楂提取物防治血脂異常、動脈粥樣硬化性心臟病（atheroscleroticcardiovasculardisease，ASCVD）、糖尿病等慢性炎癥疾病提供實驗基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。

1材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性6周齡無特定病原體（SPF）級C57BL/6J小鼠60只，體質(zhì)量 20±2）g ，由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供，許可證號：SCXK（遼）2020-0001，明（12h）/暗（12h）交替下飼養(yǎng)，空氣流通，自由進食、飲水，預(yù)適應(yīng)1周。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過（No.2023012）。

1.2 藥物

山楂提取物（制備方法：稱取山楂藥材 1000g ，以10倍水煎煮2次，每次1h，合并濾液濃縮至 1000mL 定容，為山楂提取物組的供試液。每毫升供試液相當(dāng)于1g原藥材，于 4^°C 冰箱中保存。使用前，加入蒸餾水配置成高、中、低劑量山楂提取物組（按生藥量計），由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供（安徽省普仁中藥飲片有限公司，生產(chǎn)批號：2212022），阿托伐他汀鈣片（麥克林，批號：A801644）。

1.3實驗試劑及儀器

1.3.1 試劑

實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（real-timequantitativePCR，qRT-PCR）檢測基因試劑盒：TRlpure（RP1001，北京BioTeke公司）、BeyoRTIMMLV反轉(zhuǎn)錄酶（D7160L，上海碧云天公司）、RNaseinhibitor（RP5602，北京BioTeke公司） .2x TaqPCRMasterMix（PC1150，北京Solarbio公司）、SYBRGreen（SY1020，北京Solarbio公司）。蛋白免疫印跡法（WesternBlot）檢測試劑盒：全蛋白提取試劑盒（WLA019）、二喹啉甲酸法（BCA）蛋白濃度測定試劑盒（WLA004）、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）凝膠快速制備試劑盒（WLA013）、過氧化物酶增殖活化受體 γ （PPARy）抗體（WL01800）、 CD₃₆ 抗體（WL02390）、羊抗兔IgG-HRP（WLA023）、內(nèi)參抗體 β -actin（WL01372）均購自中國wanleibio公司。APCanti-mouse CD₃（70- F21003A03）、PEanti-mouse CD₄ （F21004A02）、APCAnti-MouseFoxP3（F21FP303）均購自中國聯(lián)科生物公司。FITCanti-mouse IFN-γ（貨號：505805，Biolegend）、APCCD279 MonoclonalAntibody（17-9981-80，美國Thermo）、Alexa FluorlL-4 Monoclonal Antibody（53-7041-80，美國Thermo）。

1.3.2 儀器

流式細胞儀（NovoCyte，美國Agilent公司）、微量移液器（Proline，蘇州BIOHIT公司）、紫外可見分光光度計（UV752N，上海佑科公司）、超速冷凍離心機（H-2050R，湖南湘儀公司）真空干燥箱（DZF-6050，上海SYSBERY公司）紫外分光光度計（NANO2000，美國Thermo公司）熒光定量PCR儀（Exicycler96，韓國BIONEER公司）、水平搖床（WD-9405B）、電泳儀（DYY-7C）、轉(zhuǎn)移槽（DYCZ-40D）、雙垂直蛋白電泳儀（DYCZ-24DN）均購自北京六一公司，酶標(biāo)儀（ELX-800，美國BIOTEK公司）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（DH36001B，天津泰斯特公司）。

1.4實驗方法

1.4.1 分組與造模

60只雄性6周齡C57BL/6J小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分為正常對照組、高脂飲食（HFD）組、 HFD+ 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組、HFD + 低劑量山楂提取物組、HFD + 阿托伐他汀組。正常對照組小鼠給予普通飼料正常飼養(yǎng)8周，HFD組小鼠給予 60% 脂肪供能高脂飼料喂養(yǎng)8周。HFD十高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組、HFD + 低劑量山楂提取物組小鼠在高脂飼養(yǎng)4周后，分別灌胃 5.2，2.6，1.3，9/kg 山楂提取物，每日1次;阿托伐他汀組小鼠在高脂飼養(yǎng)4周后灌胃 10mg/kg 阿托伐他汀，每日1次；正常對照組與HFD組同時以等量生理鹽水灌胄，十預(yù)周期為4周。8周后，腹主動脈取血，收集脾臟、心臟組織，進行后續(xù)實驗。

1.4.2 觀察指標(biāo)及方法

1.4.2.1 取材方法

取材前，禁食 12h ，正常飲水，取材當(dāng)天稱重，用1% 戊巴比妥鈉麻醉小鼠，從腹主動脈取血。取小鼠脾臟、心臟組織切成小塊，用 4% 的多聚甲醛進行固定，冷凍保存于一 80^°C 。

1.4.2.2 CD₃₆ 和 PPARγ mRNA表達檢測

采集心臟組織細胞后，TrizoI法提取總RNA，離心柱法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進行qRTPCR擴增， 95°C5min ， 95^°C 10 s， ， ，共40個循環(huán)。利用SYBRGreenMaterMix試劑對清道夫受體 CD₃₆mRNA 和 PPARγ mRNA水平進行定量檢測， 2^-ΔΔCT 法進行分析。引物序列見表1。

1.4.2.3WesternBlot法檢測 CD₃₆ 和 PPARγ 蛋白表達

收集細胞，加入組織蛋白裂解液，充分研磨后于冰上靜置 5min . 4^°C ， 12 000r/min ，離心 10min ，取上清液。BCA蛋白濃度測定試劑盒對蛋白進行定量檢測。加入上樣緩沖液， 100^°C 變性 5min ，每組按照 20μg 電泳， 80∨.2.5h 恒壓電泳， 80V 恒壓濕轉(zhuǎn) ，再將蛋白轉(zhuǎn)印到聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上， 5% 脫脂奶粉封閉1h，一抗稀釋到 1：300 后， 4^°C 搖床孵育過夜，TrisHCI緩沖鹽溶液（TBST）洗滌4次，每次 5min 。 1：5000 進行二抗稀釋，孵育 45min 后，TBST洗滌6次，每次 5min 。利用增強化學(xué)發(fā)光法（ECL）法顯色，凝膠成像分析系統(tǒng)采集圖像，分析其條帶灰度值。

1.4.2.4 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟組織Treg、Th17、Tfh淋巴細胞比例

取小鼠新鮮脾臟，研磨后經(jīng) 濾網(wǎng)過濾，將紅細胞裂解液加入其中，配制成 500μL 的細胞懸液。加入 500ng/mL 離子霉素， 50ng/mL PMA， 3mg/mL 布雷菲德菌素A刺激細胞6h，洗滌細胞后，分別加入5μLCD₃ 抗體 .5μLCD₄ 抗體、 .0.13μLCD₂₅ 抗體、 0.5μg CXCR5抗體和 1μg 的PD-1抗體， 4^°C ，進行避光孵育30min ，采用固定破膜工作液處理后，分別加入 5μL Foxp3抗體及 0.25μg 的白細胞介素（IL）-17A抗體，4^°C ，進行避光孵育 30min ，用流式細胞儀分別對TregL （CD₄⁺CD₂₅⁺FO×p3⁺） 廣、 Th17（CD₃⁺CD₄⁺|L-17A⁺ ）、Tfh中 CD₄⁺CXCB5+PD-1⁺ 細胞比例進行檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準差 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組比較采用獨立樣本t檢驗。定性資料以例數(shù)、百分比 （% 表示，采用 x² 檢驗。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1山楂提取物對小鼠體質(zhì)量的影響

第8周，比較各組小鼠體質(zhì)量，結(jié)果顯示，與正常對照組相比，HFD組小鼠體質(zhì)量明顯增加（ Plt;0.01） ;與HFD組小鼠相比，HFD + 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組、HFD + 低劑量山楂提取物組小鼠體質(zhì)量有所降低，且HFD + 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組效果顯著（ Plt; 0.01）。詳見圖1。

2.2山楂提取物對小鼠 CD₃₆ mRNA和 PPARγ mRNA水平變化的影響

與正常對照組相比，HFD組模型小鼠 PPARγ mRNA、 CD₃₆ mRNA表達明顯上升（ Plt;0.01 ）；與HFD組小鼠相比，HFD + 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組與HFD + 阿托伐他汀組小鼠CD₃₆ mRNA和 PPARγ mRNA表達明顯減少（ Plt; 0.01）。詳見圖2。

（A為各組小鼠PPARγmRNA表達比較；B為各組小鼠 CD₃₆ mRNA表達比較。a為正常對照組;b為HFD組;c為HFD + 高劑量山楂提取物組;d為HFD + 中劑量山楂提取物組；e為HFD十低劑量山楂提取物組;f為HFD十阿托伐他汀組。與正常對照組相比， ?Plt;0.01 ；與HFD組相比，# Plt;0.01 ）

2.3山楂提取物對各組小鼠 CD₃₆ 蛋白和PPARγ蛋白表達水平變化的影響

與正常對照組相比，HFD組小鼠PPARγmRNA、CD₃₆ mRNA表達顯著增加（ Plt;0.01 ；與HFD組小鼠比較，HFD + 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組、HFD + 阿托伐他汀組小鼠 CD₃₆ 蛋白、PPAR_Y 蛋白表達顯著降低（ Plt;0.01 ）。詳見圖3、圖4。

2.4山楂提取物對各組小鼠脾臟組織Th17、Treg、Tfh細胞比例的影響

與正常對照組相比，HFD組小鼠脾臟Th17比例明顯上調(diào)（ Plt;0.01 ），Treg、Tfh比例明顯下調(diào)（ Plt;0.01） ；與HFD組小鼠相比，HFD + 高劑量山楂提取物組、HFD + 中劑量山楂提取物組與HFD + 阿托伐他汀組Th17細胞比例下降（ Plt;0.01 ），Treg、Tfh細胞比例上升 Plt;0.01. 。詳見圖 5～ 圖10。

（A為各組小鼠 CD₃₆ 蛋白表達條帶圖；B為各組小鼠PPARγ蛋白表達條帶圖。

a為正常對照組;b為HFD組;c為HFD+高劑量山楂提取物組;d為HFD+中劑量山楂提取物組；e為HFD + 低劑量山楂提取物組；f為HFD十阿托伐他汀組）

a為正常對照組;b為HFD組;c為HFD+高劑量山楂提取物組;d為HFD+中劑量山楂提取物組；e為HFD + 低劑量山楂提取物組；f為HFD + 阿托伐他汀組。與正常對照組相比，* Plt;0.01 ；與HFD組相比，# Plt;0.01 ）

圖4各組小鼠 CD₃₆"和PPARγ蛋白表達比較

（A為正常對照組;B為HFD組;C為HFD十高劑量山楂提取物組；D為HFD + 中劑量山楂提取物組；E為HFD十低劑量山楂提取物組；F為HFD + 阿托伐他汀組。與正常對照組相比， ?Plt;0.01 ；與HFD組相比，# Plt;0.01 ）

（A為正常對照組；B為HFD組；C為HFD + 高劑量山楂提取物組；D為HFD + 中劑量山楂提取物組；E為HFD十低劑量山楂提取物組；F為HFD十阿托伐他汀組。與正常對照組相比， ?Plt;0.01 ；與HFD組相比，# Plt;0.01 ）

3討論

血脂異常作為臨床常見的脂質(zhì)代謝紊亂性疾病，與腦血管疾病、ASCVD、糖尿病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)?！吨袊难芙】蹬c疾病報告2020》顯示，血脂異常發(fā)病率逐年升高，我國40歲以上居民血脂異?；疾÷蔬_ 43% 。在引發(fā)血脂異常的諸多因素中，高脂飲食是導(dǎo)致脂蛋白代謝不平衡的重要因素。近年來，隨著人民物質(zhì)生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了很大的變化。同時大量研究顯示，長期高脂飲食會刺激炎癥反應(yīng)，誘發(fā)機體代謝紊亂，進而導(dǎo)致肥胖、冠心病、非酒精性脂肪性肝病、糖尿病等一系列代謝性疾病的發(fā)生[12-14]

中醫(yī)古籍對于“血脂異?！彪m無直接論述，但不乏相關(guān)記載，如《靈樞·衛(wèi)氣失常》云：“人有肥、有膏、有肉”“脂者，其血清，氣滑少”。這里的“膏”“脂”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中提到的脂質(zhì)相似。此外《素問·通評虛實論》中也提到：“凡治消、仆擊肥貴人則高粱之疾也”，指出了飲食不節(jié)不僅與血脂異常的發(fā)病密切相關(guān)，還會導(dǎo)致消渴病、中風(fēng)、半身不遂等諸多疾病的產(chǎn)生。過食肥甘厚味，飲食不節(jié)，日久則會傷及中焦，致使脾失健運，聚濕生痰，進而影響“膏脂”代謝，形成血脂異常。中醫(yī)學(xué)認為，血脂異常按臨床癥狀歸于“痰飲”“血瘀”“眩暈\"等范疇，主要由痰、熱、瘀、滯所致，與肝、脾、腎失調(diào)密切相關(guān)，屬本虛標(biāo)實之證，臨床治療上針對其病機，多采用活血化瘀、補益肝腎、健脾益氣、消食化痰等方法。

山楂為薔薇科植物山里紅（CrataeguspinatifidaBge.var.major N.E.Br.）或 山 楂（Crataegus pinnatifida Bge.）的干燥成熟果實，始載于《本草經(jīng)集注》，其味酸、甘，性微溫，歸脾、胃、肝經(jīng)，功效消食健胃、行氣散、化濁降脂，具有抗動脈粥樣硬化、抗肝損傷、降血脂、抗炎、抗氧化應(yīng)激的作用[15]。山楂作為藥食同源的代表之一，具有藥源廣、毒性小、不良反應(yīng)少等獨特優(yōu)勢，自古以來被認為具有良好的調(diào)脂作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山楂提取物所含化學(xué)成分種類繁多，包括黃酮類、黃烷及其聚合物、五環(huán)三萜類、單萜類、木脂素類等。其中，黃酮類化合物為山楂的主要活性成分，能夠顯著降低動脈粥樣硬化大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，還可以通過激活腺苷酸活化蛋白激酶 α （AMP-activatedproteinkinase， AMPKα ）和抑制下游蛋白CCAAT/增強子結(jié)合蛋白 α（C/EBPα） 與脂肪酸合酶（fattyacidsynthase，F(xiàn)AS）的表達，參與調(diào)控脂質(zhì)氧化與脂肪生成，進而改善脂質(zhì)沉積與脂代謝紊亂[15-16]。此外，山楂所含的三萜酸能夠抑制腸道乙酰輔酶A-膽固醇轉(zhuǎn)移酶（ACTC）活性來降低膽固醇水平[17]；山楂膳食纖維能夠下調(diào)腸道pH值，降低游離氨、酚等有害物質(zhì)的濃度，抑制腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等繁殖，為耐酸有益菌乳酸桿菌、雙歧桿菌等益生菌提供有利的增殖環(huán)境，對有害微生物繁殖引起的相關(guān)腸道疾病起到預(yù)防作用\"；山楂果酸還能夠上調(diào)低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（lowdensity lipoproteinreceptor，LDLR）和下調(diào)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMG-CoAreductase，HMGCR）的蛋白質(zhì)和基因表達來抑制人肝細胞癌細胞系（HepG2）細胞中的脂質(zhì)積累，并通過激活核因子E2相關(guān)因子（Nrf2）/血紅素加氧酶1（HO-1）信號通路來保護肝細胞，改善血脂異常及相關(guān)氧化損傷[19]。

PPARγ是一類經(jīng)配體激活的核受體超家族成員，其激活后通過調(diào)控基因，轉(zhuǎn)錄參與脂質(zhì)代謝、血管炎癥和增殖的關(guān)鍵蛋白質(zhì)基因表達，在脂質(zhì)儲存、能量代謝、炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[20-22]。巨噬細胞表面的清道夫受體可攝取和降解脂質(zhì)，其中B類清道夫受體CD₃₆ 是一種高度糖基化的細胞表面單鏈跨膜糖蛋白（88kDa）的單鏈跨膜糖蛋白，其作為脂肪酸轉(zhuǎn)位酶能夠參與脂肪酸的攝取，其氨基酸序列位點的原因易與氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlowdensitylipoprotein，OX-LDL）結(jié)合，促進細胞泡沫化，觸發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致動脈粥樣硬化等代謝疾病的發(fā)生[20.23-24]。

研究發(fā)現(xiàn)，免疫調(diào)節(jié)作為動脈粥樣硬化、血脂異常、糖尿病等代謝性疾病的治療方法具有較大的潛力[25-27]。Treg是 CD₄⁺T 細胞的高度免疫抑制性細胞亞群，可通過分泌抗炎細胞因子（如IL-10）轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）以及細胞間接觸調(diào)節(jié)靶細胞，從而有效抑制促炎細胞的募集與活化，防止慢性炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)生[28-29]；Th17被認為是分泌促炎細胞因子的主要動力之—[30]。Th17細胞能夠分泌和誘導(dǎo)如IL-17、IL-6、IL-21、IL-22等促炎細胞因子，參與動脈壁巨噬細胞累積以及T淋巴細胞活化，促進自身免疫性疾病的發(fā)生[30-31]；Tfh細胞在體液免疫介導(dǎo)及相關(guān)自身免疫性疾病進展中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。Tfh細胞能夠通過IL-21、IL-6、IL-12和IL-27細胞因子刺激分化，分泌IL-21、IL-4和/或干擾素 γ （interferony， |FNγ? 細胞因子來幫助B細胞，驅(qū)動自身免疫性生發(fā)中心反應(yīng)和自身抗體反應(yīng)，在體液免疫介導(dǎo)及相關(guān)自身免疫性疾病進展中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[32-3]

本研究顯示，高脂飲食小鼠體質(zhì)量，心臟組織PPARγ 、 CD₃₆ mRNA及蛋白表達水平，脾臟組織Treg、Th17、Tfh細胞比例均發(fā)生明顯變化。與正常對照組相比，高脂小鼠體質(zhì)量明顯增加；心臟組織 PPARγ 、CD₃₆ mRNA及蛋白表達上調(diào)；脾臟組織Th17細胞比例升高，Treg、Tfh淋巴細胞比例顯著降低，證明血脂異常模型小鼠制備成功。

與HFD組小鼠相比，經(jīng)高、中、低劑量山楂提取物以及西藥阿托伐他汀所干預(yù)的血脂異常小鼠 CD₃₆ 和PPARγ mRNA與蛋白表達水平明顯減少；Th17淋巴細胞比例顯著降低，Treg、Tfh淋巴細胞比例顯著升高。提示山楂提取物能夠通過調(diào)控T細胞免疫及脂代謝，減輕T細胞免疫失調(diào)與脂質(zhì)沉積，改善血脂異常。此外，應(yīng)用不同劑量山楂提取物干預(yù)各組后結(jié)果表明，其作用強度呈藥物濃度依賴性，且高劑量山楂提取物效果更佳，接近于西藥阿托伐他汀。

綜上所述，山楂提取物可以通過調(diào)節(jié)T細胞免疫及脂代謝調(diào)控高脂飲食帶來的機體T淋巴細胞亞群失衡及脂代謝紊亂，從而有效防治血脂異常。本研究能夠為臨床上山楂提取物防治血脂異常提供理論依據(jù)的同時，對中藥山楂的利用及血脂異常的新藥研制與治療具有重要的科學(xué)意義。

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（本文編輯鄒麗）