復(fù)方磺胺氯吡嗪鈉—二甲氧芐啶混懸液對雞的安全性試驗

趙莎莎+徐亞亞

摘要：選取40羽（雌雄各半健康的15日齡揚(yáng)州黃羽肉雞，隨機(jī)分成4組，每組10羽。試驗雞分別以0 mg/kg、推薦劑量（300 mg/kg、3倍推薦劑量（900 mg/kg、5倍推薦劑量（1 500 mg/kg的磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液連續(xù)給藥 5 d，給藥方式為自由飲水，5 d后根據(jù)各組雞平均增質(zhì)量、血液學(xué)和血液生化學(xué)參數(shù)及組織病理學(xué)檢查結(jié)果，評價磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液對雞的安全性。

關(guān)鍵詞：磺胺氯吡嗪鈉；二甲氧芐啶混懸液；血液學(xué)；血液生化；安全性評價

中圖分類號： S85979+6文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（201412-0262-04

磺胺氯吡嗪屬于磺胺類廣譜抗菌藥，臨床主要用于治療由艾美耳屬球蟲感染引起的雞球蟲病和特定的細(xì)菌性疾病。二甲氧芐啶為獸醫(yī)專用抗菌增效劑，內(nèi)服吸收很少，含DVD的復(fù)方制劑主用于防治禽、兔球蟲病及畜禽腸道感染[1]。本試驗所用的復(fù)方磺胺氯吡嗪鈉-二甲氧芐啶混懸液臨床擬用于治療由艾美耳屬球蟲感染引起的雞球蟲病，推薦的給藥方案為1 L水加入本品1～2 mL，連用3～5 d。筆者參照美國FDA《新獸藥靶動物安全性試驗指南》（Guideline No 33中禽的毒性研究內(nèi)容，結(jié)合該藥物擬推薦的臨床使用劑量設(shè)計并進(jìn)行了本次試驗，以提供磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液在雞的組織病理學(xué)和臨床病理學(xué)方面的研究數(shù)據(jù)，了解該產(chǎn)品對擬用靶動物的安全性。

1材料與方法

11供試藥品

磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液，含量200%+40%，規(guī)格為200 mL，由中牧南京動物藥業(yè)有限公司提供。

12試驗儀器與試劑

121儀器及其他

OLYMPUS Au2700 全自動生化分析儀，生物顯微鏡，離心機(jī)；其他器具有血細(xì)胞計數(shù)板、離心管、載玻片、蓋玻片等。

122試劑試驗中所用試劑主要有瑞士染液、結(jié)晶紫染液、中性紅染液等。

13試驗動物及飼養(yǎng)地點(diǎn)

1日齡黃羽肉雞100羽，購自中國家禽研究所孵化場，每天由專人定時喂料不含任何藥物的全價日糧（中國家禽研究所提供，自由飲食。育雛及試驗期間如需保溫則采用油汀或白熾燈保溫。

14試驗動物入選和剔除標(biāo)準(zhǔn)

入選的15日齡雞在試驗前1 d必須經(jīng)獸醫(yī)檢查確認(rèn)為臨床健康。試驗前處于瀕死的雞以及生病或受傷的雞不得作為試驗動物用于本次試驗。

15方法

151試驗分組與給藥方案

試驗前1 d從100羽飼養(yǎng)至14日齡的雛雞中選擇40羽健康雛雞，稱重后按體質(zhì)量進(jìn)行均衡隨機(jī)分組，共分4組，每組10羽雞（公母兼有。試驗雞采用翅號和籠號進(jìn)行標(biāo)記識別。

根據(jù)該藥物擬推薦的臨床給藥劑量，自15日齡起各組雞分別按推薦應(yīng)用水平的倍數(shù)，即0、1、3、5倍的最大推薦劑量進(jìn)行自由飲水給藥。試驗持續(xù)期為藥物推薦使用的最長持續(xù)時間，共計5 d。具體給藥方案：對照組0 mg/kg、最大推薦劑量組300 mg/kg、3倍最大推薦劑量組900 mg/kg和5倍最大推薦劑量組1 500 mg/kg，連用5 d。

152安全性試驗評價指標(biāo)

1521臨床觀察

試驗期間每天對試驗動物進(jìn)行細(xì)致而周密的觀察，描述靶動物對藥物有毒劑量產(chǎn)生的反應(yīng)。具體觀察項目取決于藥物的已知特性和受試家禽的種類：（1與藥物有關(guān)的發(fā)病率和死亡率；（2增重和飼料轉(zhuǎn)化，試驗前和試驗結(jié)束后各測定1次；（3其他不良反應(yīng)。

1522大體病理學(xué)檢查

對試驗中死亡的所有雞都要剖檢，對與藥物毒性、疾病或其他原因有關(guān)的死亡率通過可接受的診斷技術(shù)加以確認(rèn)，并記錄死亡日期，對疑似與藥物相關(guān)的大體損傷進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1523臨床病理學(xué)檢查（血液學(xué)和血液生化學(xué)檢查[3-4]

在試驗結(jié)束時對每組試驗雞頸動脈放血并分別采集血樣進(jìn)行血液生化學(xué)檢查和血常規(guī)檢查。檢測的參數(shù)有：（1血常規(guī)參數(shù)。包括紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白數(shù)量、白細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞數(shù)量、異嗜性粒細(xì)胞數(shù)量、單核細(xì)胞數(shù)量、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞含量、異嗜性粒細(xì)胞含量、單核細(xì)胞含量、嗜酸性粒細(xì)胞含量、嗜堿性粒細(xì)胞含量。（2血液生化學(xué)參數(shù)。包括白蛋白含量、總蛋白含量、球蛋白含量、白球比值、直接膽紅素含量、總膽紅素含量、間接膽紅素含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、乳酸脫氫酶活性、堿性磷酸酶活性、葡萄糖含量、尿素氮含量、肌酐含量、鈣含量、磷含量、鉀含量、鈉含量、氯含量。

1524組織病理學(xué)檢查

試驗結(jié)束時每組試驗雞進(jìn)行組織學(xué)檢查。其中對肝臟、腎臟、脾臟和肺等組織進(jìn)行常規(guī)檢查，根據(jù)出現(xiàn)的毒性情況決定是否對其他組織進(jìn)行檢查。如果與不給藥的對照組相比，來自較高劑量試驗組雞的組織未出現(xiàn)與藥物相關(guān)的組織病理學(xué)變化，則較低濃度劑量組的雞組織則不必進(jìn)行組織學(xué)檢查。

1525數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用SPSS應(yīng)用軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗。采用t檢驗比較試驗組與對照組間平均增質(zhì)量、料肉比（飼料利用率、血液學(xué)和血液生化學(xué)等各項指標(biāo)的顯著性差異[5]。

2結(jié)果與分析

21一般臨床觀察

整個試驗期間，對照組、推薦劑量組和3倍推薦劑量組中的所有試驗動物健康狀況良好，飲水和采食均正常。5倍劑量組中有個別雞在給藥3 d時出現(xiàn)精神沉郁、采食量下降、羽毛蓬亂等現(xiàn)象；其他各試驗組雞在試驗期間未觀察到任何臨床癥狀。試驗期間各組動物均無死亡。

22增質(zhì)量與飼料利用率

試驗結(jié)束時各組平均增質(zhì)量及飼料利用率結(jié)果分別見表1與表2。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果（表1表明，推薦劑量、3倍推薦劑量組雞平均增質(zhì)量略有下降，但與對照組平均增質(zhì)量差異不顯著（P>005；5倍推薦劑量組與對照組和其他用藥劑量組相比，平均增質(zhì)量顯著下降（P<005。[FL]endprint

[F（W8][HT6H][J][WTH]表1試驗結(jié)束時各組雞的平均增質(zhì)量（n=20[WTB][HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W15，W30，W15W]組別[B（][BHDWG12，W30W]體質(zhì)量（g[BHDWG12，W15。2W][XXSX2-SX292]試驗前（15日齡試驗后（21日齡[BW]平均增質(zhì)量（g

[BHDG12，W15Q1，W15。3W]對照組（0 mg/kg20390±105738700±2348a18310±1838a

[BHDW]推薦劑量組（300 mg/kg20010±102737330±2152a17320±1581a

3倍推薦劑量組（900 mg/kg19300±153636200±2722b16900±1612a

5倍推薦劑量組（1 500 mg/kg20060±166734150±3363c1409±1954b[HJ][BGF]

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（P<005。下表同。[F]

[FL（22]與對照組相比，推薦劑量組和3倍推薦劑量組的料肉比變化不明顯，但5倍推薦劑量組料肉比增高，表明磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶溶液在使用劑量過高時會降低飼料的利用率，這與其對增質(zhì)量的影響一致（表2。

[F（W7][HT6H][J]表2試驗結(jié)束時各組試驗雞的料肉比[HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W14，W5。3W]組別消耗飼料量（g增質(zhì)量（g料肉比

[BHDG12，W14Q0，W5。3W]對照組（0 mg/kg4 16081 831227

[BHDW]推薦劑量組（300 mg/kg3 79091 732219

3倍推薦劑量組（900 mg/kg3 56501 690211

5倍推薦劑量組（1 500 mg/kg3 54661 409252[HJ][BG）F][F）]

23血液學(xué)參數(shù)

[JP2]由表3可見，隨著劑量增加，3倍推薦劑量組和5倍推薦劑量組的一些血液學(xué)指標(biāo)顯示出增加或減少的趨勢。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明，推薦劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較對照組有所增加（P<005；3倍推薦劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較對照組有所增加（P<005，單核[JP3]細(xì)胞數(shù)量有所減少（P<005；5倍推薦劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)飽和單核細(xì)胞數(shù)量與對照組差異顯著（P<005。

24血液生化學(xué)參數(shù)

試驗結(jié)束時血液生化學(xué)檢測結(jié)果分別見表4。

25病理學(xué)檢查

試驗試驗結(jié)束后分別將每組雞撲殺，所有劑量組經(jīng)肉眼觀察均未發(fā)現(xiàn)任何異?；蚩梢刹∽?。對5倍推薦劑量組內(nèi)的所有雞進(jìn)行組織病理學(xué)切片，檢查結(jié)果表明，所有雞的肝、脾、肺和腎均未發(fā)現(xiàn)顯微病理學(xué)變化（圖1、圖2、圖3、圖4、圖5、圖6、圖7、圖8。

3結(jié)論與討論

本試驗所采集的數(shù)據(jù)包括體質(zhì)量、健康狀況、食欲情況以[FL]

[F（W13][HT6H][J][WTH]表3試驗結(jié)束時各組試驗雞的血液學(xué)指標(biāo)（n=10[WTB][HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W72。8W]組別紅細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL血紅蛋白含量（g/L白細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL淋巴細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL異嗜性粒細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量（萬個/μL

[BHDG12，W72Q0，W72。7W]對照組23610±2141a8740±1197a3300±0330a0893±0100a2280±0230a0055±0007a0019±0002a

[BHDW]推薦劑量組23750±1060a8390±672a3410±0524a0920±0148a2370±0362a0065±0012b0022±0003c

3倍推薦劑量組22950±2232a8270±819a3400±0457a0940±0135a2350±0317a0066±0010c0022±0003c

5倍推薦劑組23730±2579a8320±791a3300±0283a0840±0097a2300±0211a0072±0006c0021±0002b

及血液學(xué)、臨床生化學(xué)等參數(shù)。推薦劑量組、3倍推薦劑量組的試驗雞健康狀況、食欲情況以及可能的毒性反應(yīng)與對照組差異不顯著，部分血液學(xué)參數(shù)有不同程度的變化，但在正常范圍內(nèi)；少數(shù)血液生化指標(biāo)與對照組的差異可能和儀器分析有關(guān)。與對照組相比，推薦劑量和3倍推薦劑量組的增質(zhì)量未受顯著影響，飼料利用率也未顯著改變。

5倍推薦劑量組在用藥3 d后個別雞出現(xiàn)輕度臨床不耐受現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為精神沉郁、采食量下降、羽毛蓬亂等現(xiàn)象。

[F（W12][TPSS11tif；S+3mm][F]

但試驗結(jié)束時這些不良反應(yīng)明顯減少，表現(xiàn)出適應(yīng)現(xiàn)象，且病理剖檢未見相關(guān)組織呈現(xiàn)明顯病理變化，但部分臨床血液學(xué)、生化參數(shù)指標(biāo)，如嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量、葡萄糖含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、Na含量和Cl含量等檢測指標(biāo)與未用藥對照組之間差異顯著（P<005。

鑒于本試驗在較熱的季節(jié)進(jìn)行，試驗期間雞的飲水量增加對藥物的不良反應(yīng)和試驗結(jié)果可能會有一定的影響。

[CM（24]本試驗結(jié)果表明，南京中牧動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的磺[CM）]

[F（W11][TPSS44tif][F]

[F（W12][TPSS33tif][F]

[F（W13][TPSS55tif][F]

胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液至少以3倍最大推薦劑量對雞連續(xù)給藥5 d，并未觀察到對雞有毒性作用和死亡現(xiàn)象發(fā)生，雞精神狀況良好，食欲和糞便正常。說明磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液至少以3倍最大推薦劑量對靶動物雞連續(xù)飲水給藥5 d是安全的。

綜合本次試驗結(jié)果，建議在使用磺胺氯吡嗪鈉、二甲氧芐啶混懸液飲水給藥時，連續(xù)用藥不得超過5 d，炎熱季節(jié)可適當(dāng)降低混飲藥物的濃度。

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doi：1015889/jissn1002-13022014120endprint