Huntington舞蹈病一家系4例遺傳分析

王艷鴿，婁 強，董 爍

（河南大學 醫(yī)學院，河南 開封475004）

1 研究對象和方法

1.1 研究對象

Huntington舞蹈病家系：一個家族性Huntington舞蹈病家系由本院遺傳咨詢門診提供。

1.2 研究方法

對患者家系進行家系調(diào)查和分析，觀察患者癥狀，對患者進行醫(yī)院常規(guī)檢查及實驗室遺傳學分析。

2 家系分析及遺傳學檢查

2.1 先證者

先證者，男，32歲，小學教師，因近半年手部肌肉不自主震顫于2010年12月在河南大學東京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診，后轉(zhuǎn)入遺傳咨詢門診。主訴癥狀：患者半年來，發(fā)現(xiàn)手部肌肉不自主震顫，在上課寫板書時不流利，吃飯時會有夾不穩(wěn)菜的情況，通過意志控制不住癥狀的發(fā)生，影響工作和生活，其他沒有異樣癥狀。父親及其姐妹均有此癥狀，且比較嚴重，伴有一定癡呆和精神障礙，父母非近親結(jié)婚。因患者家庭里有類似病例，懷疑是遺傳病，擔心會傳遞給自己的子女，所以前來就診。

體格檢查：身體健康，智力正常，發(fā)育正常，系統(tǒng)檢查未見異常。

頭顱CT及MRI檢查：正常

實驗室檢查：血、尿、糞常規(guī)及肝、腎功能均正常。

2.2 家系調(diào)查

系譜繪制：根據(jù)先證者提供情況繪制系譜。

2.3 遺傳學檢查

基因診斷：按照知情同意原則抽取家系成員外周血，采用酚氯仿抽提法提取基因組DNA。參照文獻［1］及NCBI，向上海英駿公司訂購2條引物（上游引物：5′-CGACCCTGGAAAAGCTGATG-3′；下游引物：5′-GGCTGAGGAAGCTGAGGAG-3′），采 用兩步法進行PCR擴增，95℃下進行預變性5min：然后進入循環(huán)。條件為95℃40s.68℃60s循環(huán)30次，最后72℃下延伸10min。取5μLPCR產(chǎn)物在含溴化乙錠的體積分數(shù)為2%瓊脂糖凝膠上電泳之后在紫外燈下觀察擴增片段。

2.4 診斷

Huntington舞蹈病。

3 家系分析及遺傳學檢查結(jié)果

3.1 系譜分析結(jié)果（見圖1）

家系中無近親結(jié)婚者，3代（第IV代咨詢，除去）20人中共有4人（男2人，女2人）患有類似疾病。其中第I代中先證者的祖母和第II代中先證者的姑姑均死于本?。ㄏ茸C者回憶）。其他患者均得到實驗室確診。

發(fā)病年齡：I 2為45歲（先證者回憶）；II 2為45歲，II 5為42歲，II 7為43歲；III 1為42歲，III 6為32歲。

圖1 Huntington舞蹈病家系圖

3.2 臨床檢查結(jié)果（見表1）

表1 Huntington舞蹈病家系臨床資料

續(xù)表1

3.3 基因診斷結(jié)果（見圖2）

陰性對照Neg為和患者家族毫無關(guān)聯(lián)的健康人，帶有2個正?；颍?80bp左右有1條條帶，提示CAG重復次數(shù)在20次左右。

患者的正常同胞II 3以及正常同胞的子女III 4、III 5都顯示1條帶，說明都沒有攜帶致病基因。

患者II 5、II 7除在180bp左右顯示1條帶外，另外在300bp左右顯示另1條帶，說明有1個正?；?，1個致病基因，CAG重復次數(shù)在60次左右。

患者子女根據(jù)條帶可以判斷出III 1、III 2、III 6、III 8、III 9為致病基因的攜帶者，提示病情輕微和無癥狀只是延遲顯性的結(jié)果。III 3、III 7、III 10、IV 1為正常基因，后代也不會再患此病。

圖2 家系成員IT15基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

3 討論

Huntington舞蹈?。℉untington disease，HD）是一種以神經(jīng)系統(tǒng)退行性改變?yōu)橹饕卣鞯某Ｈ旧w顯性遺傳?。?］，幾乎任何年齡都可發(fā)病，但通常是在35～50歲起?。?］。臨床上HD主要表現(xiàn)為不受控制的舞蹈樣動作伴認知障礙和精神異常，呈進行性加重，患者一般在癥狀首次出現(xiàn)后15～20a死亡。

本病臨床癥狀、體征和病理改變較為典型，臨床診斷較為明確，尤其對于有家族史者，本病易于診斷。但由于目前臨床缺乏有效治療方法，且患者多于成年后發(fā)病，發(fā)病前往往已經(jīng)生育子女，故本病的癥狀前、產(chǎn)前及植入前診斷顯得尤為重要。

HD 基因定位于 4p16.3［4－5］，被命名為IT15 基因，該基因開放閱讀框5′端該基因的不穩(wěn)定突變，即該基因5′端編碼區(qū)（CAG）n三核苷酸的異常擴增是HD的遺傳學基礎(chǔ)［6］，因此基因診斷是HD確診的最可靠依據(jù)，特別是對于臨床上的類似癥狀病例的區(qū)分顯得尤為重要。

本病例家族中連續(xù)3代共有4人發(fā)病，無隔代遺傳現(xiàn)象，發(fā)病無性別差異（2男2女），符合常染色體顯性遺傳，這與劉娜等［7］報道的1個家系6例患者、趙育海等［8］報道的2個家系3名患者遺傳方式相同。本病例報道的發(fā)病年齡在32～45歲之間，與國內(nèi)目前報道的家系發(fā)病年齡一般為30～50歲基本一致。

本家系先證者父親II 5 42歲時開始出現(xiàn)不自主舞蹈樣動作，且隨年齡增加病情加重，出現(xiàn)認知障礙和精神異常，而先證III 6 32歲出現(xiàn)癥狀，呈現(xiàn)典型的遺傳早現(xiàn)現(xiàn)象。先證者的姑姑II 2 45歲出現(xiàn)癥狀，但其女兒III 1出現(xiàn)癥狀并沒有提前太多（42歲），這提示有遺傳印記現(xiàn)象發(fā)生，同樣的基因通過男性和女性向下一代傳遞時出現(xiàn)了不同的表現(xiàn)。

本家系先證者的兄弟姐妹根據(jù)知情同意原則都做了基因診斷，確診出3名癥狀前患者（III 2、III 8、III 9），表現(xiàn)出延遲顯性，對于該家系中尚未婚育的風險者而言具有重要意義。

總之，Huntington舞蹈病的遺傳學檢查，不但可以獲得準確的基因診斷結(jié)果，為家系成員提供科學客觀的遺傳咨詢，還可以為相關(guān)基因的診斷項目向臨床廣泛推廣提供技術(shù)保障，對后續(xù)HD發(fā)病機制及實驗治療研究提供重要參考。

［1］Stevanin G，F(xiàn)ujigasaki H，Lebre A S，et al.Huntington’s disease-like phenotype due to trinucleotide repeats expansions in the TBP and JPH3genes［J］.Brain，2003，12（6）：1 599－1 603.

［2］Xuereb J H，MacMillan J C，Snell R，et al.Neuropathological diagnosis and CAG repeat expansion in Huntington’s disease［J］.J Neurol Neurosurg Psychiatry，1996，60（1）：78－81.

［3］王曄，顧振綸，秦正紅.Huntingtin聚合與 Huntington舞蹈?。跩］.中國臨床神經(jīng)科學，2006，14（1）：106－112.

［4］Spires T L，Hannan A J.Molecular mechanisms mediating pathological plasticity in Huntington’s disease and Alzheimer＇s disease［J］.J Neurochem，2007，100（4）：874－82.

［5］Huntington’s Disease Collaborative Research Group.A novel gene containing a trinucleotide repeat that is expanded and unstable on Huntington’s disease chromosomes［J］.Cell，1993，72（4）：971－983.

［6］Ross C A，Margolis R L.Huntington’s disease［J］.Clin Neurosci Res，2001（1）：142－152.

［7］劉娜，楊志杰，樊東升，等.Huntington舞蹈病一家系六例報告［J］.中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志，2011，18（2）：145－145.

［8］趙育海，叢琳，潘鈺，等.遼寧地區(qū)Huntington舞蹈病兩家系IT15基因的分子分析［J］.中國醫(yī)科大學學報，2003，32（4）：355－357.