新生兒異常Hb Q的家系分析*

葛艷芬 劉均如 黃革 李廣華 周茂華 林婷 冼璐樺

血紅蛋白病是因血紅蛋白質(zhì)和量的缺陷而導(dǎo)致的一類常染色體隱性遺傳性疾病，其可分為兩類：一類是異常血紅蛋白病，是血紅蛋白發(fā)生結(jié)構(gòu)上的異常而引發(fā)溶血癥，通常是由于α-或β-珠蛋白鏈單個氨基酸替換產(chǎn)生異常血紅蛋白，即功能和質(zhì)量改變；另一類是地中海貧血（簡稱地貧），是由某種珠蛋白合成受抑制引起的貧血，即數(shù)量缺失[1]。常表現(xiàn)為溶血性貧血，主要類型有α-、β-和δ-地貧等。據(jù)報道，廣州地區(qū)地貧基因的攜帶率為11.25%，其中α-地貧基因攜帶率為7.76%，β-地貧基因攜帶率為3.02%，α-地貧復(fù)合β-地貧基因攜帶率為0.49%，廣東省異常血紅蛋白的發(fā)病率0.368%[2-3]。在我國南方地區(qū)，較常見的異常血紅蛋白病主要以Hb Q、Hb E及Hb New York為主[4]。其中Hb Q是一種少見的α鏈變異的異常血紅蛋白，本研究分析了5例新生兒Hb Q家系，現(xiàn)報道如下。

資料與方法

1 一般資料 先證者1-5均為1 d的新生兒，其中先證者1-2為男，3-5為女；先證者1、3、4和5及其父母籍貫分別為遼寧、廣東、江西、甘肅，均為其母生產(chǎn)后正常送檢新生兒血樣本，經(jīng)血紅蛋白電泳發(fā)現(xiàn)其S區(qū)含有異常血紅蛋白區(qū)帶；先證者2及其父母籍貫廣東。其父母在產(chǎn)檢時發(fā)現(xiàn)為α地貧攜帶者，被告知胎兒可能患有Hb H病。家系成員的受檢樣品均行血常規(guī)檢測，Heinz小體試驗，Hb電泳與α、β地中海貧血基因檢測。

2 儀器與試劑 Capillarys 2 flex- piercing全自動毛細(xì)管電泳儀及其配套試劑購自法國Sebia公司。

Beckman LH 750、Sysmex XS-800i全自動血液分析儀及其配套試劑分別由相應(yīng)公司提供。

3 毛細(xì)管電泳分析 按照Capillarys 2 flex- piercing全自動毛細(xì)管電泳儀的操作要求完成質(zhì)控。將ACD管抗凝血樣品3 000 r/min離心2 min，將血漿和血細(xì)胞配成1∶1，搖勻后放入全自動毛細(xì)管電泳儀，進(jìn)行血紅蛋白電泳。在9.8 kV電壓、pH 9.4的堿性緩沖液條件下，于石英毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行血紅蛋白電泳，用415 nm波長檢測各種血紅蛋白的百分比，進(jìn)而對血紅蛋白定量。

4 血常規(guī)檢測 按照Beckman LH 750、Sysmex XS-800i全自動血液分析儀操作要求完成定標(biāo)與質(zhì)控，將EDTA-K2管抗凝血直接上機檢測。

5 地中海貧血檢測 地中海貧血基因：采用深圳益生堂公司的缺失型α-地中海貧血基因診斷試劑盒，運用 gap-PCR技術(shù)，以基因組DNA為模板，應(yīng)用單管四重PCR/瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，檢測--SEA、-α3.7、-α4.2三種常見的缺失型α-地貧基因型，同時選用反向斑點雜交（RDB）法檢測3種常見的非缺失型α-地中海貧血基因型： -αCS、-αQS、-αWS。β地中海貧血基因：采用反向斑點雜交（RDB）法檢測17種常見的突變及其正常序列： CDs41－42M、IVS2－654M、－28M、CD17M、CDs71－72M、βEM、CDs27－28M、－29M、CDs14－15M、CD43M、IVS1－1M、IVS1－5M、IntM、－30M、CD31M、－32M、CAP。

結(jié) 果

1 血液學(xué)與地貧基因分析結(jié)果 先證者1 MCV：90.4 fL，MCH：29.8 pg，其父MCV：76.1 fL，MCH：25.6 pg，先證者1及其父α基因型均為-α4.2/αα；先證者2 MCV：75.1 fL，MCH：22.6 pg，其父MCV：66.3 fL，MCH：20.5 pg，先證者2及其父、母α基因型分別為--SEA /-α4.2、--SEA /αα、-α4.2/αα。先證者3 MCV：93.0 fL，MCH：32.5 pg，其母MCV：80.3 fL，MCH：26.1 pg，兩者α基因型均為-α4.2/αα。先證者4 MCV：92.9 fL，MCH：30.3 pg，其母MCV：76.2 fL，MCH：25.1 pg，兩者α基因型均為-α4.2/αα。先證者5 MCV：89.4 fL，MCH：29.9 pg，其母MCV：78.9 fL，MCH：26.8 pg，兩者α基因型均為-α4.2/αα。見表1。

表1 先證者及其父母血液學(xué)及基因檢測結(jié)果

2 Hb電泳分析圖譜 先證者1的Hb電泳在S區(qū)含有19.2%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.5%，Hb A：21.0%，Hb F：59.3%。其父為異常Hb Q1含量：28.9%，Hb A：68.6%，Hb A2：1.8%，Hb Q2：0.7%；先證者2的Hb電泳在S區(qū)含有46.3%的區(qū)帶，Hb Bart's：26.9%，Hb F：25.7%，未見Hb A；其母為異常Hb Q1含量：28.5%，Hb A：69.1%，Hb A2：1.7%，Hb Q2：0.7%；其父Hb A：97.5%，Hb A2：2.5%。先證者3的Hb電泳在S區(qū)含有23.2%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.3%，Hb A：11.6%，Hb F：64.9%；其母為異常Hb Q1含量：27.9%，Hb A：69.6%，Hb A2：1.8%，Hb Q2：0.7%。先證者4的Hb電泳在S區(qū)含有24.0%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.5%，Hb A：8.1%，Hb F：67.4%；其母為異常Hb Q1含量：29.1%，Hb A：68.2%，Hb A2：1.9%，Hb Q2：0.8%。先證者5的Hb電泳在S區(qū)含有21.9%的區(qū)帶，Hb Bart's：1.4%，Hb A：13.8%，Hb F：62.9%；其母為異常Hb Q1含量：27.9%，Hb A：69.7%，Hb A2：1.7%，Hb Q2：0.7%。見圖1-5。3 Heinz小體試驗結(jié)果 先證者2的Heinz小體試驗陽性，陽性率為0.5%，其父亦為陽性，因量少，未計算陽性率。余受檢者均未檢出。

圖1 先證者1、父、母Hb電泳圖譜

圖2 先證者2、父、母Hb電泳圖譜

圖3 先證者3、父、母Hb電泳圖譜

圖4 先證者4、父、母Hb電泳圖譜

圖5 先證者5、父、母Hb電泳圖譜

討 論

異常Hb Q是我國少見的一種異常血紅蛋白變異體，屬于α鏈變異，其α1鏈N端第74位天冬氨酸被組氨酸取代，最早在新加坡一個華人家庭中發(fā)現(xiàn)[5]，中國最先由曾溢滔等[6]發(fā)現(xiàn)。與其他異常血紅蛋白不同的是，其常與-α4.2/αα缺失型的α地中海貧血連鎖攜帶[7-8]。絕大部分異常血紅蛋白雜合子臨床表型不明顯或者無臨床表型，血常規(guī)無法檢出，一般都是通過血紅蛋白電泳檢出異常帶。目前較好的實驗室檢測方法為全自動毛細(xì)管電泳，全自動毛細(xì)管電泳不僅能篩查出常見地貧患者產(chǎn)生的異常血紅蛋白條帶，而且對罕見的地貧基因攜帶者產(chǎn)生的異常血紅蛋白條帶敏感，能有效地分離和準(zhǔn)確定量Hb Q、Hb E、Hb J、Hb D、Hb New York、Hb CS、Hb H和Hb Bart's等異常血紅蛋白[9]。值得注意的是，目前實驗室所使用的地貧基因檢測試劑盒無法檢出Hb Q，而只能檢測出其連鎖的-α4.2缺失型。若不進(jìn)行血紅蛋白電泳，極易將患者誤判為只有-α4.2缺失雜合子，導(dǎo)致異常血紅蛋白的漏檢。

本研究先證者1 Hb電泳發(fā)現(xiàn)在S區(qū)含有19.2%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.5%，Hb A：21.0%，Hb F：59.3%。其父為異常Hb Q1：28.9%，Hb A：68.6%，Hb A2：1.8%，Hb Q2：0.7%。先證者2其母為異常Hb Q1含量：28.5%，Hb A：69.1%，Hb A2：1.7%，Hb Q2：0.7%。先證者3 Hb電泳發(fā)現(xiàn)在S區(qū)含有23.2%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.3%，Hb A：11.6%，Hb F：64.9%。其母為異常Hb Q1：27.9%，Hb A：69.6%，Hb A2：1.8%，Hb Q2：0.7%。先證者4 Hb電泳發(fā)現(xiàn)在S區(qū)含有24.0%的區(qū)帶，Hb Bart's：0.5%，Hb A：8.1%，Hb F：67.4%。其母為異常Hb Q1：29.1%，Hb A：68.2%，Hb A2：1.9%，Hb Q2：0.8%。先證者5 Hb電泳發(fā)現(xiàn)在S區(qū)含有21.9%的區(qū)帶，Hb Bart's：1.4%，Hb A：13.8%，Hb F：62.9%。其母為異常Hb Q1：27.9%，Hb A：69.7%，Hb A2：1.7%，Hb Q2：0.7%。先證者1、3、4和5有Hb Bart's區(qū)帶且量較少，推測其為靜止型的α地貧。根據(jù)連鎖遺傳規(guī)律、地貧基因和家系分析，初步判斷先證者1及其父親、先證者2其母、先證者3-5及其母為Hb Q合并靜止型的α4.2地貧。Hb Q雜合子有部分紅細(xì)胞參數(shù)正常，當(dāng)合并地貧時，Hb Q雜合子可表現(xiàn)出紅細(xì)胞平均體積和平均血紅蛋白含量降低或不同程度貧血，與輕型地貧血液學(xué)參數(shù)類似[10-11]。先證者1、2、3、4和5的MCV值分別為90.4、75.1、93.0、92.9及89.4 fL（新生兒正常參考范圍一般＞100 fL），先證者1其父，先證者3-5其母MCV值分別為76.1、80.3、76.2及78.9 fL，MCH為25.6、26.1、25.1及26.8 pg，均提示減低，與文獻(xiàn)報道相一致[12-13]。

該基因攜帶者與--SEA/αα地中海貧血基因攜帶者結(jié)合時，25%發(fā)生Hb Q-H病，先證者2為Hb Q-H病患者，由于Hb Q穩(wěn)定且攜氧能力不低，不會加重患者的臨床癥狀。因此，Hb Q-H病與Hb H病在癥狀上相似，另也有文獻(xiàn)報道其可能會加重地貧患者的貧血程度，但Hb Q-H合并β地貧時臨床癥狀可減輕[14-15]。Hb Q-H病是有三個α基因缺失，剩下一個α直接變成αQ，因此Hb電泳圖是沒有Hb A。先證者2就屬于這種情況。新生兒的Hb H病，Hb Bart's量一般大于15%，先證者2 Hb Bart's量達(dá)到26.9%，Heinz小體0.5%，可以初步推斷是Hb H病，且基因結(jié)果為--SEA /-α4.2，證實其是Hb H病。結(jié)合Hb電泳S區(qū)含有26.9%區(qū)帶，分析其為Hb Q-H病。

同樣異常Hb Q，先證者1-5的Hb電泳位置在S區(qū)，其父或母在F區(qū)，可能新生兒主要以Hb F為主，而成人以Hb A為主，導(dǎo)致電泳位置有所不同。由此可見新生兒異常Hb Q很容易誤判為Hb S，尤其對于初學(xué)者應(yīng)引起關(guān)注，需根據(jù)家系分析其異常Hb。異常Hb可通過DNA測序技術(shù)確診，而常規(guī)地貧基因無法檢測。但因條件所限，尤其基層醫(yī)院，毛細(xì)管電泳是可行的檢測方法，其可對人群異常血紅蛋白進(jìn)行篩查，并根據(jù)圖譜推測疑似Hb屬于α鏈或β變異，為基因測序方法順利進(jìn)行提供依據(jù)。

綜上所述，廣東地區(qū)地貧高發(fā)，將導(dǎo)致Hb Q復(fù)合地貧可能性增大，因此要求醫(yī)務(wù)人員在日常工作中務(wù)必重視Hb Q患者及其他異常Hb攜帶者，做好患者遺傳咨詢，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育目的。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突