梵凈山石斛林下仿野生撫育試驗(yàn)及其多糖和甘露糖含量測(cè)定

中圖分類號(hào)S567. 23⁺9 （20 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A 文章編號(hào) 0517-6611（2025）11-0167-05

d oi;10.3969/j . issn. 0517-6611.2025.11. 036

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Experimental StudyonImitation WildTendingof Dendrobium fanjingshanenseintheForestandDeterminationofContentsof Its Polysaccharide and Mannose

CHENG Yun¹ ，WANG Hai1，TANShan-cai2 etal（1.Tongren Agricultural andRural Bureau，Tongren，Guizhou 5543O0;2.Tongren Poly technic College，Tongren，Guizhou 554300）

AbstractObjetie]TostudythegrowthcharacteriticsofDendrobmfanjngshanensefromimitationwildtendingintheforestanddeter minethecontentofplsaccharideandmaose.MethodUsinghangingots，achedtresandatachedstonsuderteforsttosilate thewildabitatgothofndrobfjgshestntentofolahadsiDendrobmfjgsheseasdtdbol sulfuricacidmetho，ndthemaoseontentwasdeterinedbyprecolunderivatizationultra-highpeforanceliquidhoatgaphy （UPLC）.ResultTheeight，freshweightanddryweightofDendrobmfajingshnensegrowninhangingpotsundertheforestweresignificantly higher than those grown in attached stones and trees （ Plt;0.05 ）. The polysaccharide and mannose contents of Dendrobium fanjingshanense grown in hanging pots were 20.41% and 14.23% ，respectively. Compared with Dendrobium fanjingshanense grown in attached stones andtrs，thepolysaccarideandmaosecontentsofDendrobiumfanjingshanensegrownihangingpotsweresignificantlydiernt（ Plt; 0.05）.[Conclusion]Hangingpotsundertheforestforurturingisanfeiewaytoiitatonwildtendingandcultivatehigualityand high-yielding of Dendrobium fanjingshanense.

Key wordsImitation wild tending;Dendrobium fanjingshanense;Growth characteristics;Polysaccharide;Mannose

梵凈山石斛（Dendrobium fanjingshanense Z.H. Tsi ex X.H.JinetY.W.Zhang）屬于蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Den-drobium）多年附生草本植物，葉生于莖的上部，先端稍鈍、稍有鉤轉(zhuǎn)，花苞片在基部或近中部具有一赤褐色斑塊，花黃色，花被片反卷，為石斛屬特征明顯的物種[1，是2001年在貴州省梵凈山海拔 800～1450m 的高大樹枝上以及山谷和林緣的巖石上發(fā)現(xiàn)的新種[2]，2010年在浙江省遂昌九龍山發(fā)現(xiàn)有少量分布，附生于海拔 500～700m 闊葉林中的毛紅椿樹上或山體巖石上[3]。梵凈山石斛種子在自然狀態(tài)下繁殖率極低，分布區(qū)域狹窄[4]，以及人為過度采挖，僅在梵凈山黑灣河懸崖及高大樹枝上偶有發(fā)現(xiàn)，正面臨著瀕危狀態(tài)，國家林業(yè)和草業(yè)局以及農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將梵凈山石斛列入《國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》二級(jí)[5]。《貴州中草藥資源研究》記載：梵凈山石斛具有清熱養(yǎng)陰、潤肺生津、益腎養(yǎng)胃和明自強(qiáng)腰的功效，主治口干煩渴、熱病傷津、肺熱干咳、腰膝軟弱、陰傷目暗等，是貴州珍稀特有的藥用植物[6?？梢姡e極探索梵凈山石斛仿野生撫育對(duì)保護(hù)種質(zhì)資源和開發(fā)應(yīng)用藥用價(jià)值具有重要的意義。

目前針對(duì)梵凈山石斛的研究主要聚焦于以種子和帶節(jié)莖段為外植體建立快速繁殖體系[7-8]，以及梵凈山石斛營養(yǎng)成分、礦質(zhì)元素、多糖、石斛堿等含量的測(cè)定[9-10]，林下仿野生撫育是珍稀瀕危梵凈山石斛保護(hù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但報(bào)道較少，且活性成分甘露糖的檢測(cè)也鮮見研究。仿野生撫育是物種保護(hù)、野生資源再生利用和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的最有效措施，也是名貴中藥材產(chǎn)業(yè)發(fā)展的方向[\"]。石斛適宜在涼爽、濕潤和空氣暢通的半陰半陽的環(huán)境中生長[12]，筆者利用林下吊盆、附樹和附石仿野生撫育梵凈山石斛，開展不同撫育方式的梵凈山石斛生長特性及其活性成分多糖和甘露糖含量的評(píng)價(jià)，為建立梵凈山石斛物種保護(hù)基地和利用空間高效發(fā)展林下經(jīng)濟(jì)提供參考。

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1試材。梵凈山石斛，購自，1.5年生組織培養(yǎng)馴化苗，由胡美忠教授鑒定為蘭科植物石斛屬梵凈山石斛。1.1.2試劑。D-甘露糖對(duì)照品，北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院，批號(hào)BWJ4319，純度 ?99.9% ；鹽酸氨基葡萄糖，上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)B214382，純度 ?98% ;D-葡萄糖對(duì)照品，北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院，批號(hào)BWJ4289-2016，純度 ?99.7% ;乙晴，色譜純，美國FisherScientific公司：1-苯基-3甲基 ÷5- 吡唑啉酮（PMP），上海凜恩科技發(fā)展有限公司；氫氧化鈉、苯酚、三氯甲烷、硫酸、甲醇、乙酸銨、鹽酸、乙醇為化學(xué)純。

1.1.3儀器。ACQUITYUPLCTMI-Class系統(tǒng)，美國Waters公司;ACQUITY UPLC BEH C₁₈（100mm×2.1mm，1.7μm） 色譜柱，美國Waters公司；T-10紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；TDZ5-WS低速離心機(jī)，東旺化玻儀器有限公司；DELTA 320pH 計(jì)，梅特勒-托利多儀器有限公司；BXH-210G電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；NewHumanPowerI超純水儀，上海圣科儀器設(shè)備有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1梵凈山石斛林下仿野生撫育。試驗(yàn)地點(diǎn)為貴州省的松樹林下同一區(qū)域，海拔 840m 遮陰度在 70%～75% ，林下安裝自動(dòng)噴灌設(shè)施，確保林下濕度70% 左右[13]；安裝智能變頻多功能超聲波驅(qū)蟲器，確保無蟲害。試驗(yàn)分林下吊盆撫育、附石撫育和附樹撫育3組，每組15叢，每叢3株。

1.2.1.1林下吊盆撫育。選擇直徑約 8cm 粗細(xì)、耐腐爛、強(qiáng)承受力的塑料管，沿水平方向的松樹以無紡布棉繩索和竹釘將其固定在松樹主莖上，距地面約 80cm ，將裝有松鱗和碎石（比例 8：2 ）[14]均勻混合基質(zhì)、底部具網(wǎng)狀小孔塑料花盆掛于塑料管上，塑料花盆盆底距地面 50cm 左右，梵凈山石斛植于基質(zhì)中，基質(zhì)表面覆蓋青苔，每盆1叢，盆間距 25cm 。

1.2.1.2林下附石撫育。將梵凈山石斛塞入巖石縫中，用碎石和青苔將其基部塞緊，或?qū)㈣髢羯绞踩胍汛蚝玫氖蹆?nèi)，基部和根用碎石和青苔均勻地壓實(shí)，應(yīng)力求穩(wěn)固，以風(fēng)吹不倒為宜，確保種苗牢固地貼在石頭上，每窩1叢，窩間距25cm 。

1.2.1.3林下附樹撫育。選擇樹干粗大、樹冠較茂盛、樹皮較厚疏松、有縱裂溝的松樹，采用無紡布棉繩索和竹釘進(jìn)行雙重固定，確保梵凈山石斛須根、植株以及青苔于樹干上，防正風(fēng)力和雨水沖刷，從而促進(jìn)新根的生長并使其緊貼樹干，距地面 120cm ，沿松樹主桿水平方向1周3叢，沿松樹主桿方向叢間距 40cm 。

1.2.2林下不同撫育方式的梵凈山石斛高度和質(zhì)量測(cè)定。選擇1.5年生梵凈山石斛馴化苗（保留須根5根和葉片5片）開展林下吊盆、林下附石和林下附樹仿野生撫育，每株暴露在空氣中高度 10cm 左右。自2022年3月17日開始撫育，撫育時(shí)間1.5年，于2023年9月17日剪下暴露在空氣中梵凈山石斛植株，測(cè)定每株梵凈山石斛高度，計(jì)算每組梵凈山石斛平均株高；測(cè)定每組梵凈山石斛總重，計(jì)算每組每株梵凈山石斛平均鮮重；將梵凈山石斛在 50^qC 下鼓風(fēng)干燥烘干，計(jì)算每組每株梵凈山石斛平均干重。

1.2.3梵凈山石斛多糖樣品制備。

1.2.3.1梵凈山石斛樣品處理。將1.5年生的梵凈山石斛 剪去葉、花梗和須根，洗凈，得梵凈山石斛鮮莖。鮮莖在鼓風(fēng) 干燥箱中 50^qC 下干燥，待梵凈山石斛莖較干變得柔軟，將其 在超凈工作臺(tái)上人工揉搓去掉莖上的鞘膜，凈制后的梵凈山 石斛莖切段 5～6mm ，再干燥至含水分 5% 以內(nèi)，用藥碾粉粹， 過40目藥篩，得梵凈山石斛藥材粉末樣品。

1.2.3.2梵凈山石斛多糖提取。分別精確稱取等質(zhì)量 （0.5g） 的吊盆、附石和附樹仿野生撫育的梵凈山石斛藥材 粉末樣品，分別置于 250mL 三角瓶中，按料液比 1：300 （g： mL）添加超純水，采用熱回流提取法在 70% 下提取 2h ，提取 液過濾后，加超純水定容至 250mL 容量瓶，得梵凈山石斛多 糖提取液。每種梵凈山石斛藥材粉末樣品做3個(gè)平行樣。

1.2.3.3梵凈山石斛多糖純化。將 2mL 梵凈山石斛多糖 提取液和 10mL 無水乙醇加入離心管中，混合搖勻，冷藏靜 置 60min，4000r/min 離心 20min 后，用移液管吸去上清液， 用 2mL 無水乙醇反復(fù)清洗沉淀3次，在 50^qC 下鼓風(fēng)干燥至 恒重，得梵凈山石斛多糖樣品。

1.2.4不同仿野生撫育方式的梵凈山石斛多糖含量測(cè)定。

1.2.4.1葡萄糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。精確稱取干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品 9.5mg ，置于 100mL 容量瓶中，加超純水至刻度線，得到 95μg/mL 對(duì)照品溶液，搖勻、冷藏，備用。分別精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 于 10mL 具塞試管，加超純水補(bǔ)足 1mL ，參考苯酚-硫酸法利用紫外分光光度計(jì)在 488nm 處測(cè)定不同濃度對(duì)照品溶液的吸光度A，建立葡糖糖對(duì)照品溶液吸光度 （y） -濃度 （x） 對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程[15]

1.2.4.2梵凈山石斛多糖含量的測(cè)定。精密量取梵凈山石斛多糖樣品溶液 1mL 于 10mL 具塞試管，參考用苯酚-硫酸法利用紫外分光光度計(jì)在 488nm 處測(cè)定林下不同撫育方式的梵凈山石斛多糖樣品溶液的吸光度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算梵凈山石斛多糖含量。

1.2.5梵凈山石斛中單糖分析。

1.2.5.1內(nèi)標(biāo)液和對(duì)照品溶液的配制。準(zhǔn)確稱取鹽酸氨基葡萄糖 0.3g ，置于 25mL 容量瓶中，加超純水混合溶解，定容至刻度，搖勻、靜置，得到 12mg/mL 的鹽酸氨基葡萄糖溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液;精確稱取甘露糖 0.5g ，置于 100mL 容量瓶中，加超純水混合溶解，定容至刻度，搖勻、靜置，得到5mg/mL 的 D- 甘露糖對(duì)照品溶液；精確稱量D-葡萄糖32.5mg ，置于 25mL 容量瓶中，加超純水混合溶解，定容至刻度，搖勻、靜置，得到 1.3mg/mL 的葡萄糖對(duì)照品溶液。

1.2.5.2超高效液相色譜（UPLC）條件。色譜柱為ACQU-ITYUPLC BEH C₁₈ （ 100mm×2. 1mm，1. 7μm） ，以乙腈-0.02mol/L 乙酸銨溶液（ 20：80 ）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長250nm ，流速 0.3mL/min ，進(jìn)樣量 1μL ，柱溫和進(jìn)樣器的溫度維持 35^°C 。

1.2.5.3校正因子 （f） 測(cè)定。準(zhǔn)確量取 5mg/mL 甘露糖對(duì)照品溶液 10mL 于 100mL 容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL ，加超純水至刻度，充分混合，得 0. 12mg/mL 鹽酸氨基葡萄糖和 0.5mg/mL 甘露糖內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液。依次吸取內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液 400μL，0.5mol/L 衍生劑PMP甲醇溶液 400μL 和 0.3mol/L 氫氧化鈉溶液 400μL 于 5mL 離心管中，混合搖勻，在 70% 水浴中衍生化反應(yīng) 100min 后，于室溫條件下，加 0.3mol/L 鹽酸溶液 500μL 中和，加入三氯甲烷 2mL 洗滌除去游離的衍生劑PMP，棄去三氯甲烷，重復(fù)3＼～4次后，水層離心、過濾。濾液按“1.2.5.2”色譜條件進(jìn)樣、檢測(cè)。根據(jù)鹽酸氨基葡萄糖內(nèi)標(biāo)溶液和甘露糖對(duì)照品溶液的色譜峰面積和濃度，按以下公式計(jì)算校正因子 （f） ：

式中： ?：A_s=1_s 為內(nèi)標(biāo)物峰面積； A_r 為甘露糖峰面積; C_s 為內(nèi)標(biāo)物濃度（ mg/mL \" C_r 為甘露糖濃度（ ）°

1.2.5.4甘露糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密移取 5mg/mL 甘露糖對(duì)照品溶液 2，4，10，20 和 40mL ，分別置于 100mL 容量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 1mL ，加超純水至刻度，搖勻，得 0.12mg/mL 鹽酸氨基葡萄糖和 0.1、0.2、0.5、1.0 2.0mg/mL 甘露糖內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液。自“1.2.5.3”中“依次吸取內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液 400μL ”起，依次操作，根據(jù)鹽酸氨基葡萄糖內(nèi)標(biāo)溶液和甘露糖對(duì)照品溶液的色譜峰面積和濃度，計(jì)算校正因子 （f） ，以甘露糖對(duì)照品校正濃度（C） 為橫坐標(biāo)、色譜峰面積 （A） 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5.5梵凈山石斛多糖樣品溶液的水解。將梵凈山石斛多糖樣品加 2mL 熱水溶解，置安瓿瓶中，加 3.0mol/L 鹽酸溶液 0.5mL ，封口，均勻混合，將安瓿瓶密閉封口后，置于110^°C 水溶環(huán)境中水解1h，待冷卻后，用 3.0mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至中性，加入 2mL 鹽酸氨基葡萄糖內(nèi)標(biāo)液，轉(zhuǎn)移至 10mL 容量瓶，加超純水定容至刻度，得含內(nèi)標(biāo)液的梵凈山石斛多糖樣品水解液。

1.2.5.6 梵凈山石斛單糖組成。將鹽酸氨基葡萄糖和甘露糖內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液、鹽酸氨基葡萄糖和葡萄糖內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液、梵凈山石斛多糖樣品水解液，自“1.2.5.3”中“依次吸取內(nèi)標(biāo)-對(duì)照品混合溶液 400μL^′ 起，分別依次操作，按\"1.2.5.2”色譜條件進(jìn)樣、檢測(cè)。對(duì)比鹽酸氨基葡萄糖校準(zhǔn)品、甘露糖對(duì)照品、葡萄糖對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間，分析梵凈山石斛單糖組成；根據(jù)甘露糖和葡萄糖色譜峰面積，計(jì)算甘露糖和葡萄糖色譜峰面積比值（ S_####：S_####： ;利用甘露糖色譜峰面積，按照甘露糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算不同撫育方式下的梵凈山石斛中甘露糖含量，以探究林下仿野生撫育的適宜方式。

1.3數(shù)據(jù)處理利用SPSS23.0 軟件對(duì)林下不同仿野生撫育方式的梵凈山石斛株高、鮮重、干重、折干率以及多糖和甘露糖含量進(jìn)行組間差異性分析， Plt;0.05 為顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1林下不同仿野生撫育方式對(duì)梵凈山石斛生長特性的影 響從表1可以看出，林下吊盆、附樹和附石撫育的梵凈山 石斛生長特性在株高、鮮重、干重和折干率方面表現(xiàn)出一定 的差異性。林下不同仿野生撫育的梵凈山石斛株高和鮮重 從大到小依次為吊盆 gt; 附石 gt; 附樹，吊盆、附石、附樹撫育的 梵凈山石斛株高和鮮重之間均具有顯著差異（ Plt;0.05， ；與 附石和附樹撫育的梵凈山石斛比較，吊盆撫育的梵凈山石斛 干重具有顯著差異（ Plt;0.05 ），而附石和附樹撫育的梵凈山 石斛干重差異不顯著（ Pgt;0.05） ；與附石撫育的梵凈山石斛 比較，吊盆和附樹撫育的梵凈山石斛折干率具有顯著差異 0 Plt;0.05） ，而吊盆和附樹撫育的梵凈山石斛折干率差異不 顯著（ Pgt;0.05） 。

由此可見，從梵凈山石斛株高和鮮重來評(píng)價(jià)，林下吊盆仿野生撫育長勢(shì)優(yōu)于附石和附樹撫育，附石仿野生撫育長勢(shì)優(yōu)于附樹撫育;從凈產(chǎn)量（干重）來評(píng)價(jià)，林下吊盆仿野生撫育優(yōu)于附石和附樹撫育，附石和附樹仿野生撫育沒有顯著差異。

2.2林下不同仿野生撫育方式對(duì)梵凈山石斛多糖含量的影

響根據(jù)葡萄糖對(duì)照品溶液吸光度 （y） -濃度 （x） 對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 y=0. 055 8x+0. 13 97（ R²=0.9995 ）[15]計(jì)算林下不同撫育梵凈山石斛多糖含量。從表1可以看出，林下吊盆、附石和附樹仿野生撫育多糖含量分別為 20.41%.18.58% 和 18.27% ，與附石、附樹撫育的梵凈山石斛比較，吊盆撫育的梵凈山石斛多糖含量具有顯著差異（ Plt;0.05 ，而附樹和附石撫育的梵凈山石斛多糖含量沒有顯著差異（ ）

從多糖含量來評(píng)價(jià)，林下吊盆仿野生撫育優(yōu)于附石和附樹撫育。

綜上考慮，從梵凈山石斛多糖含量和干重綜合評(píng)價(jià)，林下吊盆撫育優(yōu)于附石和附樹撫育。林下吊盆撫育以松樹皮和碎石為主要基質(zhì)，表面覆有青苔，有利于保濕和保存養(yǎng)料；附石撫育和附樹撫育的梵凈山石斛根裸露在空氣中，得不到充足的養(yǎng)分和水分，生長緩慢。仿野生撫育方式的不同使多糖含量和干重表現(xiàn)明顯差異，可能與撫育基質(zhì)的保濕、保存養(yǎng)料有關(guān)。

2.3林下不同仿野生撫育方式對(duì)梵凈山石斛甘露糖含量的影響該試驗(yàn)利用超高效液相色譜法（UPLC）分離、鑒定和定量分析多糖水解液樣品中甘露糖，提高了分離鑒定效率；以鹽酸氨基葡萄糖為內(nèi)標(biāo)物，采用內(nèi)標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定甘露糖的含量，消除由于進(jìn)樣量、儀器波動(dòng)等因素引起的誤差，從而提高定量的準(zhǔn)確性。

如圖1所示，梵凈山石斛多糖由單糖甘露糖和葡萄糖組成，林下吊盆、附石和附樹仿野生撫育的梵凈山石斛甘露糖和葡萄糖色譜峰面積比值分別為11.13、10.97和11.20，林下不同仿野生撫育方式對(duì)甘露糖和葡萄糖色譜峰面積比值影響差異不顯著（ Pgt;0.05） 。2020年版《中國藥典》規(guī)定鐵皮石斛甘露糖和葡萄糖色譜峰面積比值必須符合 2.4～8.0 的要求[16]，梵凈山石斛甘露糖和葡萄糖色譜峰面積比值超出了該規(guī)定，說明梵凈山石斛單糖主要為甘露糖。

在\"1.2.5.2”色譜條件下，樣品中甘露糖和葡萄糖色譜峰出峰時(shí)間分別為4.28和 7.76min ，比羅秋蓮等[17]報(bào)道的鐵皮石斛甘露糖和葡萄糖出峰時(shí)間分別少4.61 和 8.35min 比譚善財(cái)?shù)萚15]報(bào)道的鐵皮石斛甘露糖和葡萄糖出峰時(shí)間分別少6.52和 5.05min 。可見，在該試驗(yàn)的色譜條件下，石斛中甘露糖和葡萄糖能實(shí)現(xiàn)較好分離，節(jié)約時(shí)間，提高分離效率。

“1.2.5.3”中的公式計(jì)算出校正因子 f 為6.51。根據(jù)鹽酸氨基葡萄糖內(nèi)標(biāo)溶液和甘露糖對(duì)照品溶液的色譜峰面積、濃度、校正因子 （f） ，計(jì)算甘露糖校正濃度，建立了甘露糖色譜峰面積 （y）- 甘露糖校正濃度 （x） 的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 y=4x 10⁶x+19063 （ R²=0.9992 ），表明甘露糖校正濃度在 0.038～ 0.433mg/mL 與其對(duì)應(yīng)的色譜峰面積具有較好的線性關(guān)系（圖2）。

根據(jù)梵凈山石斛多糖樣品水解液中甘露糖色譜峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算林下吊盆、附樹和附石不同撫育方式的梵凈山石斛中甘露糖含量，分別為 14.23%.13.30% 13.11% ，與附石和附樹撫育的梵凈山石斛比較，吊盆撫育的梵凈山石斛甘露糖含量具有顯著差異（ Plt;0.05） ，而附石和附樹撫育的梵凈山石斛多糖含量沒有顯著差異（ Pgt;0.05） 0從甘露糖含量來評(píng)價(jià)，林下吊盆仿野生撫育優(yōu)于附石和附樹撫育。2020年版《中國藥典》規(guī)定鐵皮石斛甘露糖含量應(yīng)為13.0%～38.0% ，林下不同撫育方式的梵凈山石斛甘露糖含量均大于 13.0% ，說明林下?lián)嵊髢羯绞歉事短翘崛〉奶烊粌?yōu)質(zhì)資源。

綜上，梵凈山石斛多糖和甘露糖在林下吊盆、附石和附 樹培育過程中呈現(xiàn)出相似的變化趨勢(shì)，表明培育基質(zhì)、養(yǎng)分、 水分等外部環(huán)境因素對(duì)梵凈山石斛多糖和甘露糖含量的調(diào) 控作用較為顯著。

3結(jié)論與討論

在林下野生生境開展梵凈山石斛人工馴化苗吊盆、附樹和附石仿野生栽培，利用自動(dòng)噴灌系統(tǒng)保濕、超聲波驅(qū)蟲器防蟲等人為干擾措施，模擬野生生境，探索林下仿野生撫育，為建立梵凈山石斛保護(hù)基地提供參考。從梵凈山石斛產(chǎn)量、多糖和甘露糖含量以及資源開發(fā)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展等綜合評(píng)價(jià)，林下吊盆撫育優(yōu)于附石和附樹撫育，是仿野生撫育及優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培的有效方式；從操作復(fù)雜程度和珍稀瀕危物種保護(hù)的角度評(píng)價(jià)，林下附石和附樹撫育也是有效措施。

2023年國家衛(wèi)生健康委員會(huì)和國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局將鐵皮石斛納入藥食同源物質(zhì)目錄[18]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果顯示，石斛多糖和甘露糖是鐵皮石斛的主要活性物質(zhì)，在醫(yī)藥、保健、食品和化妝品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景[19-26] 。該試驗(yàn)研究結(jié)果表明，林下仿野生撫育的梵凈山石斛中多糖含量在 18.27%～20.41% ，未能達(dá)到2020年版《中國藥典》規(guī)定的鐵皮石斛多糖含量標(biāo)準(zhǔn)（不低于 25.0% ），也是天然多糖提取的重要原料，具有一定的開發(fā)價(jià)值；甘露糖含量在13.11%～14.23% ，達(dá)到了2020年版《中國藥典》規(guī)定的鐵皮石斛中甘露糖含量標(biāo)準(zhǔn)（ 13.0%～38.0% ；甘露糖和葡萄糖的色譜峰面積比值在 10.97～11.20 ，高于2020年版《中國藥典》規(guī)定的鐵皮石斛中甘露糖與葡萄糖的色譜峰面積比值（2.4～8.0） ，說明梵凈山石斛中單糖主要為甘露糖，可以做天然甘露糖純化的重要原料。

發(fā)揮梵凈山地理優(yōu)勢(shì)，模擬野生生境，開展林下仿野生撫育，建立仿野生梵凈山石斛基地，能提高梵凈山石斛品質(zhì)和產(chǎn)量，實(shí)現(xiàn)物種保護(hù)、生態(tài)建設(shè)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展相融合[27-29]，為其資源開發(fā)利用提供原材料。

參考文獻(xiàn)

[1]金效華，黃璐琦.中國石斛類藥材的原植物名實(shí)考[J].中國中藥雜志，2015，40（13） ：2475-2479.

[2]金效華，張玉武，肖麗萍.中國石斛屬一新種[J].植物分類學(xué)報(bào)，2001，39（3）：269-271.

[3]葉喜陽，吳棣飛，李根有，等.浙江2種種子植物新記錄[J].浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27（3）：478-479.

[4]楊傳東，石磊，雷孝平.貴州梵凈山國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)野生藥用植物資源多樣性調(diào)查及保護(hù)對(duì)策研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2017，28（3）：712-716.

[5]動(dòng)植物司.國家林業(yè)和草原局農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告（2021年第15號(hào)）（國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄）[EB/0L].（2021-09-08）[2024-06-25].https：//www.forestry. gov.cn/c/www/lczc/10746. jhtml.

[6]何順志，徐文芬.貴州中草藥資源研究[M].貴陽：貴州科技出版社，2007：772.

[7]余水生，付雙彬，鄭英茂，等.梵凈山石斛無菌播種及快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，59（8）：1334-1336，1346.

[8]劉芳，任啟飛，胡世俊，等.梵凈山石斛快速繁殖技術(shù)研究[J].種子，2024，43（10） ：148-156.

[9]楊天友，楊文明，楊業(yè)勤，等.梵凈山石斛營養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)[J].食品工業(yè)，2020，41（7）：344-348.

[10]余水生，劉菊蓮，王怡娟，等.梵凈山石斛與鐵皮石斛礦質(zhì)元素及有效成分比較[J].江蘇林業(yè)科技，2018，45（1）：32-35.

[11］萬明香，何順志.梵凈山自然保護(hù)區(qū)珍稀瀕危及特有藥用植物種質(zhì)資源的調(diào)查與保護(hù)[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（11）：23-27.

[12]毛云飛，付紅梅，尹植明.梵凈山石斛適生環(huán)境研究[J].江蘇林業(yè)科技，2019，46（5） ：51-53.

[13]孔德棟，鐘遠(yuǎn)香，沈宏亮.水分與光照互作對(duì)鐵皮石斛生長、光合特性及可溶性糖含量的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，34（5）：19-24.

[14］譚善財(cái)，譚長金，鄔小蘭.以平菇菌渣為主復(fù)合基質(zhì)栽培鐵皮石斛的試驗(yàn)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，50（12）：149-152.

[15]譚善財(cái)，譚長金，鄔小蘭，等.鐵皮石斛多糖水解工藝優(yōu)化及甘露糖含量的測(cè)定[J].食品工業(yè)科技，2022，43（19）：220-227.

[16]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：2020年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：295-296.

[17]羅秋蓮，唐專輝，張雪鳳，等.鐵皮石斛多糖的分離純化及其結(jié)構(gòu)研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，41（6）：2060-2066.

[18]國家衛(wèi)生健康委員會(huì)，國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.黨參等9種物質(zhì)納入按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質(zhì)目錄[EB/OL].（2023-11-17）[2024- 05 - 17]. htp：//www.nhc.gov.cn/sps/s7892/202311/fOd6ef3033b54333a882e3d009f49bf.shtml.

[19]黃俊彬，丁婕，朱海媚，等.三個(gè)不同種源的鐵皮石斛多糖比較及其初步的藥理活性評(píng)價(jià)[J].食品工業(yè)科技，2022，43（5）：71-78.

[20]張淼.鐵皮石斛低聚糖制備、結(jié)構(gòu)鑒定、生物活性及應(yīng)用研究[D].南寧：廣西民族大學(xué)，2024.

[21]于靜，段博文，趙佩，等.鐵皮石斛粗多糖對(duì)刀豆蛋白A誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].中藥藥理與臨床，2019，35（1）：82-87.

[22] ZHANG D F，CHIA C，JIAO X，et al. D-mannose induces regulatory Tcells and suppresses immunopathology[J]. Nature medicine，2O17，23（9） ：1036-1045.

[23]SHARMA V，SMOLIN J，NAYAK J，et al. Mannose alters gut microbiome，prevents diet-induced obesity，and improves host metabolism[J]. Cell re-ports，2018，24（12） ：3087-3098.

[24]SPAULDING CN，KLEIN RD，RUERS，et al.Selective depletion of uro-pathogenic E.coli from the gut by a FimH antagonist[J]. Nature，2017，546（7659） ：528-532.

[25]HU X，SHI Y N，ZHANG P，et al. d-Mannose：Properties，production，andapplications：An overview [J]. Comprehensive reviews in food science andfood safety，2016，15（4） ：773-785.

[26]SCHMIDT R R，F(xiàn)ORTNA R H，BEYER H H.Mild skin cleansing aerosolmousse with skin feel and moisturization benefits： US19890379702[P].1991-03-26.

[27]陳士林，魏建和，黃林芳，等.中藥材野生撫育的理論與實(shí)踐探討[J].中國中藥雜志，2004，29（12）：1123-1126.

[28]羅曉青，吳明開，申剛，等.貴州喀斯特地區(qū)鐵皮石斛回歸保育與可持續(xù)利用[J].中國野生植物資源，2013，32（6）：47-50.

[29]余方純.林下經(jīng)濟(jì)中藥材鐵皮石斛的培育技術(shù)及經(jīng)濟(jì)效益[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2024，27（11）：166-168.root-rot Panax notoginseng[J].Appl Soil Ecol，2016，107：99-107.