DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白在早期胃腺癌中的表達(dá)及臨床意義

DOI：10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2025.04.014

[關(guān)鍵詞]早期胃腺癌;DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白;錯(cuò)配修復(fù)缺陷 [中圖分類(lèi)號(hào)]R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號(hào)] 1674-7887（2025）04-0379-05

Expression and clinical significance of DNA mismatch repair protein in earlygastricadenocarcinoma*

SONG Li^?* ，ZHANGXunlei，PANGuanwen2，MIAOXiaobing*** （'Departmentof Oncology，Affiliated TumorHospital of NantongUniversityNantongTumorHospital，Jiangsu226361;SchoolofMedicine，NantongUniversity;Departmentof Pathology，Affiliated Tumor Hospital ofNantongUniversity，Nantong Tumor Hospital）

[Abstract]Objective：To analyzeexpresionand clinical significanceofDNA mismatchrepair（MMR）protein inearlygastric adenocarcinoma.Methods：Theexpressonof thefourMMR（MLH1，MSH2，MSH6，andPMS2）wereexaminedbyimmunohisto chemistry in172 casesof early gastricadenocarcinomaspecimens.Therelationship between defective mismatchrepair （dMMR）andpathologicalcharacteristicsandprognosiswerealsoanalyzed.Results：Ofthe172casesofearlygastricadenocarcinoma patients， 124（72.1%） patients had proficientmismatch repair（pMMR），while48（27.9 % ）patientsdisplayeddMMR. Among patients with dMMR， 15（8.7%） patients displayed loss of one MMR protein，33（19.2 % ）patients showed loss of at least twoMMR proteins.Statistical analysisrevealed a significantcorrelation between MMR status andpatients’gender（ P lt;0.001）， infiltration depth（ P =0.001），tumor diameter（ P =0.006）and TNM staging（ P =0.001），whereas no significant correlation was observedbetween MMRstatusandage，lymphnodemetastasis，Laurenclasification，tumordiffrentiationandotherclinico pathologicalcharacteristics.Kaplan-Meiersurvivalanalysisdemonstratedthattherewasnostatisticallsignificantdiference in overall survival（OS） between the dMMR group and pMMR group（ P =0.982）.Further analysis revealed that patientswith pMMR tumorsreceiving postoperative chemotherapy hadsignificantly beterOS than thosenot receiving postoperative chemotherapy group（ P =0.007）.However，in patients with dMMR tumors，there was no significant diffrence in OS between the postoperative chemotherapy group and the non-chemotherapy group（ P =0.746）.Univariate and multivariate Cox regression analysis showed that postoperativechemotherapywasaprognostic factor inearly gastric adenocarcinoma patients with pMMR tumors.Conclusion：Earlygastricadenocarcinomapatients withpMMRtumors havedistinctiveclinicopathologicalcharacteristics，includingfemalepredominance，lowerTstage，andsmalltumorlesions.Postoperativechemotherapysignificantlymproves thesurvivaloutcomesof earlygastricadenocarcinoma patients withpMMR tumors.However，postoperativechemotherapydid not affect the prognosis of EGC patients with dMMR tumors. [Key words] early gastric adenocarcinoma; DNA mismatch repair protein; defective mismatch repair

胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均較高[I-2。根據(jù)2022年中國(guó)惡性腫瘤流行情況分析，胃癌新發(fā)病例35.87萬(wàn)例，死亡26.04萬(wàn)例。胃癌的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，除了環(huán)境和遺傳因素外，分子亞型的研究逐漸揭示了其異質(zhì)性。隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，2014年TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果將胃癌分為4種亞型：EB病毒陽(yáng)性型、微衛(wèi)星不穩(wěn)定（microsatelliteinsta-bility，MSI）型、基因組穩(wěn)定型和染色體不穩(wěn)定型4。

MSI型是由于錯(cuò)配修復(fù)缺陷（defectivemismatchrepair，dMMR）導(dǎo)致微衛(wèi)星區(qū)域出現(xiàn)堿基插人或丟失，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究[5-7顯示，MSI型胃癌與微衛(wèi)星穩(wěn)定（microsatellite stability，MSS）型相比，具有不同的臨床病理特征及化療反應(yīng)性，且與患者預(yù)后相關(guān)。本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)172例早期胃腺癌組織中DNA 錯(cuò)配修復(fù)（mismatch repair，MMR）蛋白的表達(dá)情況，分析其在早期胃腺癌中的臨床意義。

1資料和方法

1.1臨床資料選取2007年1月—2015年12月在南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除、術(shù)后病理證實(shí)為胃腺癌，并按美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AmericanJointCommitteeonCancer，AJCC）胃癌分期標(biāo)準(zhǔn)為I＼～Ⅱ期的患者172例，術(shù)前均未行放、化療和其他抗腫瘤治療。其中男130例，女42例；年齡39＼～80歲，平均 （63.6±9.5） 歲；腫瘤直徑 gt;5cm 37 例， ?5cm135 例；組織學(xué)類(lèi)型：高/中分化113例，低分化59例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移116例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例；TNM分期I期57例，Ⅱ期115例；術(shù)后行輔助化療（方案以氟尿嘧啶類(lèi)為主）85例，未行輔助化療87例。所有患者均簽署知情同意書(shū)并經(jīng)南通大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（LW2025008）。

1.2免疫組化檢測(cè)及結(jié)果判讀免疫組化染色采用EnVision兩步法，一抗MLH1（克隆號(hào)ES05，貨號(hào)ZM-0154）、MSH2（克隆號(hào)RED2，貨號(hào)ZA-0622）、MSH6（克隆號(hào)EP49，貨號(hào)ZA-0541）及PMS2（克隆號(hào)EP51，貨號(hào)ZA-0542）均購(gòu)自北京中杉金橋公司，二抗（貨號(hào)K5007）及DAB（貨號(hào)K3468）購(gòu)自DAKO公司。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判讀：MLH1、MSH2、MSH6及PMS2蛋白均定位于細(xì)胞核，核呈黃色或棕褐色判定為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) lt;10% 判定為陰性，在腫瘤組織中4個(gè)MMR蛋白均陽(yáng)性表達(dá)，則為錯(cuò)配修復(fù)正常（proficient mismatch repair，pMMR）型;任1種MMR蛋白缺失即為dMMR型，提示微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定（microsatellite instability-high，MSI-H）。所有患者采取電話(huà)或門(mén)診復(fù)查的方式進(jìn)行隨訪(fǎng)，截止時(shí)間為2020年4月30日，所有患者具有完整的隨訪(fǎng)資料，隨訪(fǎng)生存期超過(guò)5年。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析 °χ² 檢驗(yàn)用于評(píng)價(jià)dMMR與臨床病理特征的關(guān)系。生存分析用Kaplan-Meier法和Log-rank 檢驗(yàn)。單因素及多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸進(jìn)一步分析早期胃腺癌患者臨床病理參數(shù)是否為預(yù)后的影響因素。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1早期胃腺癌患者M(jìn)MR蛋白表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均定位于腫瘤細(xì)胞核，細(xì)胞核呈棕褐色或黃色，見(jiàn)圖1。在172例早期胃腺癌中，pMMR組124例 （72.1%） ，dMMR組48例 （27.9%） ，其中僅1種MMR蛋白表達(dá)缺失15例（8.7%） ，兩種及以上MMR蛋白同時(shí)缺失33例 （19.2%） 。2.2MMR狀態(tài)與早期胃腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果顯示，dMMR與性別 （Plt;0.001） 、浸潤(rùn)深度_{（P=0.001）} 、腫瘤直徑 _{（P=0.006）} 及TNM分期 （P=0.001） 相關(guān)，與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Lauren分型、分化程度等臨床病理特征無(wú)關(guān) （P50.05） ，見(jiàn)表1。

2.3MMR狀態(tài)與早期胃腺癌患者生存期的關(guān)系生存分析顯示dMMR組患者總體生存期（overallsurvival，OS）與pMMR組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P=0.982） ，進(jìn)一步分析顯示，在pMMR組中，術(shù)后進(jìn)行輔助化療患者的OS明顯優(yōu)于未化療患者 _{（P=0.007）} ，而在dMMR組，術(shù)后輔助化療患者的OS與未化療患者者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P=0.746） ，見(jiàn)圖2。

2.4早期胃腺癌臨床病理特征對(duì)預(yù)后的影響單因素及多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸顯示在172例早期胃腺癌患者中術(shù)后輔助化療是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因子，見(jiàn)表2。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑和術(shù)后輔助化療是pMMR組患者預(yù)后的獨(dú)立影響因子，見(jiàn)表3；然而在dMMR組化療并非影響預(yù)后的獨(dú)立影響因子，見(jiàn)表4。

注：A，MLH1;B，MSH2;C，MSH6;D，PMS2。 Bar=50μm （204號(hào)

3討論

胃癌是一類(lèi)高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，主要有Lauren分型和WHO分型兩種分型系統(tǒng)。2014年，TCGA研究人員將胃癌分為4個(gè)亞型，為指導(dǎo)臨床治療提供一定的依據(jù)，其中MSI型胃癌具有特征性的臨床表現(xiàn)和高度突變、高度甲基化等表觀(guān)遺傳學(xué)改變，且具有較好的免疫治療反應(yīng)性。目前，針對(duì)胃癌微衛(wèi)星相關(guān)的檢測(cè)方法主要有免疫組化（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）、PCR（NR-27、NR-21、BAT-26、BAT-25、NR-24、MONO-27），兩種PCR檢測(cè)方法對(duì)評(píng)估腫瘤的MSI狀態(tài)具有較高的一致性[8-10]。

本研究利用免疫組化檢測(cè)了172例早期胃腺癌中MMR蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示pMMR組124例（72.1%） ，dMMR組48例 （27.9%） ，其中僅1種MMR蛋白表達(dá)缺失15例 （8.7%） ，兩種及以上MMR蛋白同時(shí)缺失33例 （19.2%） 。與文獻(xiàn)[11]報(bào)道 8%～39.5% 的胃癌存在MSI結(jié)果相符。進(jìn)一步分析結(jié)果顯示，dMMR與性別 （Plt;0.001） 、浸潤(rùn)深度 _{（P=0.001）} 、腫瘤直徑 _{（P=0.006）} 及TNM分期 （P=0.001） 相關(guān)。D.MAR-RELLI等研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者中MSI-H占 23.5% ，且以老年人、女性，胃竇部、腸型胃癌、分期較早為主，與本研究結(jié)果基本相似，但本研究結(jié)果顯示dMMR與年齡、分化程度、Lauren分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)等臨床病理特征無(wú)關(guān)，分析存在的原因可能受人群異質(zhì)性、腫瘤分期或者分子亞型（如幽門(mén)螺桿菌感染、EB病毒感染）等混雜因素的影響，未來(lái)還需結(jié)合多組學(xué)數(shù)據(jù)（如空間轉(zhuǎn)錄組或單細(xì)胞測(cè)序）進(jìn)一步探索MSI-H胃癌中轉(zhuǎn)移相關(guān)通路的特異性改變。

對(duì)于MSI狀態(tài)在胃癌預(yù)后預(yù)測(cè)中的作用仍存在爭(zhēng)議[12-13]，有研究[4發(fā)現(xiàn)MSI-H胃癌患者OS優(yōu)于MSI-L及MSS胃癌患者，但對(duì)氟尿嘧啶類(lèi)藥物則不如MSI-L、MSS胃癌患者敏感，化療效果欠佳。本研究顯示dMMR型早期胃腺癌患者的OS與pMMR型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一結(jié)果可能與樣本量較小有關(guān)，未來(lái)需要更大規(guī)模的研究來(lái)驗(yàn)證這一結(jié)論。值得注意的是，在pMMR組中，術(shù)后行輔助化療患者的OS明顯優(yōu)于未行輔助化療患者"_{（P=0.007）}"，提示在臨床診療過(guò)程中，MMR蛋白表達(dá)狀態(tài)可能是選擇治療方案的重要依據(jù)。

由于胃癌具有高度異質(zhì)性，是一個(gè)多步驟、多階段及多基因參與的過(guò)程，即使同一臨床分期，患者的預(yù)后也大相徑庭[15-id]。本研究發(fā)現(xiàn)，dMMR型早期胃腺癌具有獨(dú)特的臨床病理表現(xiàn)。生存分析顯示，在pMMR型早期胃腺癌患者中，接受化療患者的預(yù)后顯著優(yōu)于未化療患者，而dMMR型患者的生存結(jié)局與化療干預(yù)無(wú)顯著相關(guān)性。因此，檢測(cè)MMR蛋白狀態(tài)有助于甄別從化療中獲益的早期胃腺癌人群，對(duì)MMR狀態(tài)的精準(zhǔn)評(píng)估或可為早期胃腺癌患者的個(gè)體化化療決策提供重要參考依據(jù)。由于本實(shí)驗(yàn)收集的早期胃腺癌樣本量較小，還需要后續(xù)更深入的研究和大樣本數(shù)據(jù)驗(yàn)證。此外，MMR缺失與胃癌的免疫逃逸機(jī)制也值得進(jìn)一步研究。

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