LncRNA MCTP1-AS1在宮頸癌組織中的表達及對宮頸癌細胞增殖和侵襲的作用機制

[摘要] 目的" 探討長鏈非編碼RNA MCTP1-AS1對宮頸癌細胞增殖和侵襲的影響及相關機制。方法 采用癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫分析MCTP1-AS1在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的表達，分析MCTP1-AS1表達水平與宮頸癌患者病理分期的相關性。檢測宮頸癌細胞系HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A和宮頸正常上皮細胞H8中MCTP1-AS1的表達。將pcDNA-Ctrl質(zhì)粒（Ctrl組）和pcDNA-MCTP1-AS1質(zhì)粒（MCTP1-AS1組）分別轉(zhuǎn)染Hela細胞。檢測Hela細胞的增殖和侵襲能力，檢測Hela細胞中增殖蛋白CDK2、Cyclin A及侵襲蛋白N-cadherin、ZEB1表達，驗證MCTP1-AS1與miR-10a-5p的靶向關系。檢測Hela細胞中miR-10a-5p的表達。結(jié)果 與正常宮頸組織比較，宮頸癌組織中MCTP1-AS1表達明顯降低（Plt;0.01）。MCTP1-AS1表達水平與宮頸癌患者的病理分期呈負相關（Plt;0.01）。與H8細胞比較，宮頸癌細胞系HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A中MCTP1-AS1表達均明顯降低，pcDNA-MCTP1-AS1質(zhì)?？娠@著增加Hela細胞中MCTP1-AS1表達，過表達MCTP1-AS1能顯著降低Hela細胞的增殖和侵襲能力（Plt;0.01）。與Ctrl組比較，過表達MCTP1-AS1可顯著降低Hela細胞中增殖蛋白CDK2、Cyclin A及侵襲蛋白N-cadherin、ZEB1。MCTP1-AS1可直接結(jié)合miR-10a-5p（Plt;0.01）。與Ctrl組比較，MCTP1-AS1組Hela細胞中miR-10a-5p表達明顯降低（Plt;0.01）。結(jié)論 宮頸癌組織和細胞中的MCTP1-AS1低表達，且MCTP1-AS1表達與宮頸癌患者的病理分期呈負相關，MCTP1-AS1通過靶向miR-10a-5p抑制宮頸癌細胞的增殖和侵襲能力。

[關鍵詞] 宮頸腫瘤；MCTP1-AS1；miR-10a-5p；細胞增殖；細胞侵襲

[中圖分類號] R737.33" """"[文獻標識碼] A """""[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.20.001

Expression of lncRNA MCTP1-AS1 in cervical cancer tissues and its regulatory mechanism on proliferation and invasion of cervical cancer cells

CAO Linyan¹， LIU Fang¹， HAN Jing¹， XIA Xinyi¹， GAO Jie²， ZHOU Jiayan¹

1.Department of Gynecology， Jiaxing Second Hospital （Second Affiliated Hospital of Jiaxing University）， Jiaxing 314000， Zhejiang， China; 2.Department of Gynecology， The Second Hospital of Shandong University， Jinan 250033， Shandong， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of long noncoding RNA MCTP1-AS1 on the proliferation and invasion of cervical cancer cells and its related mechanisms. Methods The Cancer Genome Atlas database was used to analyze the expression of MCTP1-AS1 in cervical cancer tissues and normal cervical tissues， and the correlation between the expression level of MCTP1-AS1 and the pathological stage of cervical cancer patients was analyzed. The expression of MCTP1-AS1 in cervical cancer cell lines HCC1106， HCC94， SiHa， Hela， C33A and normal cervical epithelial cells H8 was detected. Hela cells were transfected with pcDNA-Ctrl plasmid （Ctrl group） and pcDNA-MCTP1-AS1 plasmid （MCTP1-AS1 group）， respectively. the proliferation and invasion ability of Hela cells were detected， respectively. the expression of proliferation proteins CDK2 and Cyclin A and invasion proteins N-cadherin and ZEB1 in Hela cells were detected， the targeting relationship between MCTP1-AS1 and miR-10a-5p were verified. The expression of miR-10a-5p in Hela cells was detected. Results Compared with normal cervical tissue， the expression of MCTP1-AS1 in cervical cancer tissue was significantly decreased （Plt;0.01）. The expression level of MCTP1-AS1 was negatively correlated with the pathological stage of cervical cancer patients （Plt;0.01）. Compared with H8 cells， the expression of MCTP1-AS1 in cervical cancer cell lines HCC1106， HCC94， SiHa， Hela， and C33A were significantly decreased （Plt;0.01）. Compared to Ctrl group， overexpression of MCTP1-AS1 significantly reduced the levels of proliferative proteins CDK2 and Cyclin A， as well as invasive proteins N-cadherin and ZEB1 in Hela cells. MCTP1-AS1 directly binds to miR-10a-5p （Plt;0.01）. Compared to Ctrl group， MCTP1-AS1 group showed a significant decrease in miR-10a-5p expression in Hela cells （Plt;0.01）. Conclusion MCTP1-AS1 expression is downregulated in cervical cancer tissues and cells， and MCTP1-AS1 expression is negatively correlated with the pathological stage of cervical cancer patients. MCTP1-AS1 inhibits the proliferation and invasion of cervical cancer cells by targeting miR-10a-5p.

[Key words] Cervical tumor; MCTP1-AS1; miR-10a-5p; Cell proliferation; Cell migration

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤之一。目前，宮頸癌的發(fā)病機制并未完全明確^[1]。研究證實長鏈非編碼RNA（long chain non-coding RNA，lncRNA）在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展中具有重要調(diào)控作用^[2]。越來越多的lncRNA被證明在宮頸癌組織中高表達或低表達，且其表達與宮頸癌細胞的轉(zhuǎn)移潛能（如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移）有關^[3-5]。LncRNA表達改變與宮頸癌的患病風險相關，不同病理分型的宮頸癌組織中l(wèi)ncRNA表達不同^[6-8]。因此，lncRNA在宮頸癌進展中的機制研究有助于發(fā)現(xiàn)新的治療策略。MCTP1-AS1是一個新發(fā)現(xiàn)的lncRNA，其編碼基因位于人染色體5q15區(qū)域，MCTP1-AS1已被證明在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞系中低表達，可直接抑制子宮內(nèi)膜癌細胞的惡性生物學行為^[9]。本研究旨在分析宮頸癌組織中的MCTP1-AS1表達水平及其表達與宮頸癌患者病理分期的相關性，觀察過表達MCTP1-AS1對宮頸癌細胞增殖和侵襲的影響并探討其分子機制。

1 "材料與方法

1.1 "細胞系與主要試劑

人宮頸癌細胞系HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A和正常宮頸上皮細胞H8購于美國ATCC公司；胎牛血清和細胞培養(yǎng)基均購于美國Gibco公司；pcDNA-Ctrl質(zhì)粒和pcDNA-MCTP1-AS1質(zhì)粒購于上海吉凱基因公司；基質(zhì)膠購于美國Santa Cruz公司；Lipofectamine^TM 3000試劑和Transwell小室購于美國Invitrogen公司；miR-NC、miR-10a-5p購于上海碧云天生物科技有限公司；熒光報告載體質(zhì)粒pMIR購于美國Promega公司；一抗CDK2兔抗、Cyclin A兔抗、α-tubulin兔抗、N-cadherin兔抗、ZEB1兔抗購于美國BD Biosciences公司。

1.2 "生物信息學分析

采用癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫分析MCTP1-AS1在宮頸癌組織和正常宮頸組織的表達，分析MCTP1-AS1表達與宮頸癌患者病理分期的相關性。采用生物信息學LncRNADisease v2.0和lncACTdb軟件預測MCTP1- AS1的靶miRNA。

1.3 "細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

將H8細胞在含11%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A細胞在含11%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將對數(shù)生長期的Hela細胞分為Ctrl組和MCTP1-AS1組，按照Lipofectamine^TM 3000試劑說明，分別將pcDNA-Ctrl質(zhì)粒和pcDNA-MCTP1-AS1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進Hela細胞。

1.4 "檢測MCTP1-AS1和miR-10a-5p表達

提取細胞總RNA，將2μg RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。定量聚合酶鏈反應（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）引物序列見表1，GAPDH和U6分別為內(nèi)參。反應條件：94℃預變性3min，94℃變性30s；59℃退火25s，71℃延伸25s，共31個循環(huán)。以2^-ΔΔCt法計算MCTP1-AS1和miR-10a-5p的相對表達。

1.5 "檢測Hela細胞能力與增殖和侵襲蛋白的表達

將Ctrl組和MCTP1-AS1組的Hela細胞以150μl/孔接種至6孔板，每孔1.5×10³個細胞。每2d更換培養(yǎng)基，孵育14d。用100%甲醇固定45min，在0.5%結(jié)晶紫溶液中染色45min。流水洗去多余結(jié)晶紫溶液，室溫下拍照并計數(shù)。在Transwell小室預鋪基質(zhì)膠，培養(yǎng)箱中凝固1.5h。用不含血清的培養(yǎng)基重懸兩組Hela細胞并分別以150μl/孔接種至上室。將750μl含11%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基加入下室。孵育24h，用100%甲醇固定45min，在0.5%結(jié)晶紫溶液中染色45min。無菌棉簽擦拭未穿膜的Hela細胞，光學顯微鏡拍照并計數(shù)。

采用RIPA裂解液分離Ctrl組和MCTP1-AS1組的Hela細胞總蛋白，定量濃度后加熱變性。凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜，用6%脫脂牛奶封閉50min。加入一抗CDK2（1：3000）、Cyclin A（1：3000）、α-tubulin（1：4000）、N-cadherin（1：2000）、ZEB1（1：1000），8℃下孵育10h。洗膜后，加入二抗（1：8000），室溫孵育50min。洗膜后，加入ECL試劑曝光并顯影。

1.6 "驗證MCTP1-AS1與miR-10a-5p的靶向關系

將MCTP1-AS1野生型序列（MCTP1-AS1-WT）和突變型序列（MCTP1-AS1-MUT）插入熒光報告載體并分別將MCTP1-AS1-WT、MCTP1-AS1-MUT熒光報告載體與miR-NC或miR-10a-5p共轉(zhuǎn)染Hela細胞，孵育43h。按照雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)操作步驟測定各組Hela細胞的相對熒光素酶活性。

1.7 "統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，計量資料以均數(shù)±標準差（"）表示，組間比較采用t檢驗與單因素方差分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 "結(jié)果

2.1 "MCTP1-AS1在宮頸癌組織中的表達及其與患者病理分期的關系

TCGA數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果顯示，MCTP1-AS1在宮頸癌組織中的表達明顯低于正常宮頸組織（Plt;0.01），見圖1。MCTP1-AS1表達越低的宮頸癌患者病理分期越差（Plt;0.01），見圖2。

2.2 "宮頸癌細胞中的MCTP1-AS1表達

與H8細胞比較，宮頸癌細胞HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A中MCTP1-AS1表達均顯著降低（Plt;0.01），Hela細胞中MCTP1-AS1表達最低（Plt;0.01），見圖3。所以選擇Hela細胞進行研究。

2.3 "過表達MCTP1-AS1對Hela細胞的影響

Ctrl組與MCTP1-AS1組中MCTP1-AS1相對表達分別為（1.03±0.24）和（9.40±0.68），與Ctrl組比較，MCTP1-AS1組的Hela細胞中MCTP1-AS1表達明顯升高（Plt;0.01）。Ctrl組和MCTP1-AS1組集落形成數(shù)分別為（132.30±9.74）個和（72.58±9.14）個，過表達MCTP1-AS1可顯著降低Hela細胞的增殖能力（Plt;0.01）。Ctrl組和MCTP1-AS1組的侵襲細胞數(shù)分別為（147.90±14.10）個和（49.53±8.79）個，過表達MCTP1-AS1可顯著降低Hela細胞的侵襲能力（Plt;0.01）。Western blot法檢測結(jié)果顯示，與Ctrl組比較，過表達MCTP1-AS1后Hela細胞中增殖蛋白CDK2、Cyclin A表達降低，侵襲蛋白N-cadherin、ZEB1表達降低，見圖4。

2.4 "MCTP1-AS1與miR-10a-5p的靶向關系

MCTP1-AS1與miR-10a-5p具有互補序列，見圖5。雙熒光素酶報告實驗顯示，與miR-NC組比較，過表達miR-10a-5p可明顯抑制轉(zhuǎn)染攜帶MCTP1- AS1基因的MCTP1-AS1-WT細胞的熒光素酶活性（Plt;0.01）。

2.5 "過表達MCTP1-AS1對Hela細胞中miR-10a-5p表達的影響

Ctrl組與MCTP1-AS1組Hela細胞中miR-10a-5p表達分別為（6.94±0.47）和（1.05±0.46），過表達MCTP1-AS1可顯著抑制Hela細胞中miR-10a-5p表達（Plt;0.01）。

3 "討論

LncRNA是一種長度超過200個堿基的RNA分子，其表達水平與宮頸癌患者的臨床分期、總生存率及無病生存率有關^[10-12]。研究表明lncRNA能雙向調(diào)控宮頸癌的進展，即致癌性lncRNA促進宮頸癌的發(fā)展，抑癌性lncRNA抑制宮頸癌的進展^[13-15]。如lncRNA HOTAIR在宮頸癌組織和細胞系中表達顯著上調(diào)，敲低lncRNA HOTAIR可顯著降低宮頸癌細胞的生長、遷移和侵襲能力；miR-331-3p是lncRNA HOTAIR的靶基因^[16]。在宮頸癌中l(wèi)ncRNA AATBC表達顯著上升，且lncRNA AATBC表達水平與宮頸癌患者的病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關，敲低lncRNA AATBC通過促進miR-1245b-5p表達抑制宮頸癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移^[17]。Gao等^[9]研究表明子宮內(nèi)膜癌組織和細胞系中MCTP1-AS1表達下調(diào)，MCTP1-AS1表達與子宮內(nèi)膜癌組織大小、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及患者總生存期密切相關；過表達MCTP1-AS1可顯著抑制子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。MCTP1-AS1在宮頸癌中的表達和作用值得研究。

本研究表明宮頸癌組織中的MCTP1-AS1表達降低，且MCTP1-AS1表達水平與宮頸癌患者的病理分期呈負相關，提示MCTP1-AS1可能參與調(diào)控宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。同時，本研究證實宮頸癌細胞系HCC1106、HCC94、SiHa、Hela、C33A中MCTP1-AS1表達均下調(diào)，且過表達MCTP1-AS1可抑制宮頸癌Hela細胞的增殖和侵襲，這提示MCTP1-AS1可抑制宮頸癌的進展。已有研究表明lncRNA通過與靶miRNA的活性區(qū)域堿基配對，影響miRNA表達水平，進而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生命活動^[18-20]。LncRNA CARMN通過靶向降低miR-92a-3p表達抑制宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲，并增加細胞的凋亡率^[21]。本研究結(jié)果顯示miR-10a-5p可能是MCTP1-AS1的靶基因。雙熒光素酶報告實驗進一步證實MCTP1- AS1可直接結(jié)合miR-10a-5p，后者已被證明在胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膀胱癌等惡性腫瘤中高表達，并與晚期腫瘤分級、較差的組織學分級等有關，miR-10a-5p高表達的腫瘤患者生存率較低，敲低miR-10a-5p可降低腫瘤細胞的增殖和侵襲能力^[22-24]。Gu等^[25]研究顯示宮頸癌組織和細胞中miR-10a-5p表達明顯升高，敲低miR-10a-5p可有效抑制宮頸癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移，促進宮頸癌細胞凋亡，miR-10a-5p可能是宮頸癌臨床治療的潛在靶點。本研究中過表達MCTP1-AS1能抑制Hela細胞中miR-10a-5p的表達，說明MCTP1-AS1通過調(diào)控Hela細胞中miR-10a-5p表達發(fā)揮作用。

綜上，MCTP1-AS1在宮頸癌組織中低表達，MCTP1-AS1表達水平與宮頸癌患者的病理分期呈負相關，過表達MCTP1-AS1通過靶向抑制miR-10a-5p表達降低宮頸癌細胞的增殖和侵襲能力。這可能為開發(fā)新的宮頸癌治療策略提供依據(jù)，MCTP1-AS1可能成為宮頸癌潛在的治療靶點。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1]"" BEGLIARZADE S， BEILERLI A， SUFIANOV A， et al. Long non-coding RNAs as promising biomarkers and therapeutic targets in cervical cancer[J]. Noncoding RNA Res， 2023， 8（2）： 233–239.

[2]"" RANGA S， YADAV R， CHHABRA R， et al. Long non-coding RNAs as critical regulators and novel targets in cervical cancer： Current status and future perspectives[J]. Apoptosis， 2023， 28（7-8）： 925–942.

[3]"" LV X， ZHANG M， XU W. The value of emerging prostate cancer-associated lncRNA PCGEM1 in various tumors[J]. Mini Rev Med Chem， 2023， 23（22）： 2090–2096.

[4]"" ASWATHY R， SUMATHI S. Defining new biomarkers for overcoming therapeutical resistance in cervical cancer using lncRNA[J]. Mol Biol Rep， 2023， 50（12）： 10445–10460.

[5]"" WANG X， GU Y， ZHANG L， et al. Long noncoding RNAs regulate intrauterine adhesion and cervical cancer development and progression [J]. Semin Cell Dev Biol， 2024， 154（Pt C）： 221–226.

[6]"" AN L， DONG K， CHI S， et al. LncRNA UCA1 promotes tumor progression by targeting SMARCD3 in cervical cancer[J]. Mol Carcinog， 2024， 63（3）： 384–399.

[7]"" RAJABI A， DASTMALCHI N， SHOKRI N， et al. Expression level of lncRNA CYTOR in iranian cervical cancer patients[J]. Rep Biochem Mol Biol， 2023， 12（1）： 120–126.

[8]"" YANG T， TIAN S， ZHAO J， et al. LncRNA ABHD11-AS1 activates EGFR signaling to promote cervical cancer progression by preventing FUS-mediated degradation of ABHD11 mRNA[J]. Cell Cycle， 2023， 22（23-24）： 2538–2551.

[9]"" GAO Q， HUANG Q， LI F， et al. LncRNA MCTP1-AS1 regulates EMT process in endometrial cancer by targeting the miR-650/SMAD7 axis[J]. Onco Targets Ther， 2021， 14： 751–761.

[10] YU M， XUE S， CHEN X， et al. Long non-coding RNA UCA1a promotes proliferation via PKM2 in cervical cancer[J]. Reprod Sci， 2023， 30（2）： 601–614.

[11] DASTMALCHI N， AKBARZADEH S， AMINI F， et al. Alterations in the expression levels of long intergenic non-coding RNA APOC1P1-3 in cervical cancer tissue samples[J]. Nucleos Nucleot Nucl， 2023， 42（6）： 495–505.

[12] MODABBER N， MAHBOUB S S， KHOSHRAVESH S， et al. Evaluation of long non-coding RNA （lncRNA） in the pathogenesis of chemotherapy resistance in cervical cancer： Diagnostic and prognostic approach[J]. Mol Biotechnol， 2024， 66（10）： 2751–2768.

[13] YU B， LI X， YAN W， et al. Post-transcriptional regulation of tumor suppressor gene lncRNA CARMN via m（6）A modification and miRNA regulation in cervical cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol， 2023， 149（12）： 10307–10318.

[14] SUN Y H， CHEN L J， WANG C H， et al. Impact of LINC00673 genetic variants on uterine cervical cancer clinicopathologic characteristics[J]. J Cancer， 2023， 14（13）： 2529–2537.

[15] LIU X， ZHANG W， WAN J， et al. Landscape and construction of a novel N6-methyladenosine-related lncRNAs in cervical cancer[J]. Reprod Sci， 2023， 30（3）： 903–913.

[16] BURANJIANG G， ABUDUWANKE A， LI X， et al. LncRNA HOTAIR enhances RCC2 to accelerate cervical cancer progression by sponging miR-331-3p[J]. Clin Transl Oncol， 2023， 25（6）： 1650–1660.

[17] LIU Y Q， LIU C， BAI Y， et al. LncRNA AATBC indicates development and facilitates cell growth and metastasis of cervical cancer as a sponge of miR-1245b- 5p[J]. Kaohsiung J Med Sci， 2023， 39（2）： 115–123.

[18] WANG S， QIAO C， FANG R， et al. LncRNA CASC19： A novel oncogene involved in human cancer[J]. Clin Transl Oncol， 2023， 25（10）： 2841–2851.

[19] HU C. LncRNA DSCAM-AS1： A pivotal therapeutic target in cancer[J]. Mini Rev Med Chem， 2023， 23（5）： 530–536.

[20] AZIZIDOOST S， GHAEDRAHMATI F， SHEYKHI- SABZEHPOUSH M， et al. The role of lncRNA MCM3AP-AS1 in human cancer[J]. Clin Transl Oncol， 2023， 25（1）： 33–47.

[21] WANG L， ZHAO H， FANG Y， et al. LncRNA CARMN inhibits cervical cancer cell growth via the miR-92a-3p/ BTG2/Wnt/β-catenin axis[J]. Physiol Genomics， 2023， 55（1）： 1–15.

[22] FEI X， JIN H Y， GAO Y， et al. Hsa-miR-10a-5p promotes pancreatic cancer growth by BDNF/SEMA4C pathway[J]. J Biol Regul Homeost Agents， 2020， 34（3）： 927–934.

[23] WANG R， WANG J， WANG Y， et al. LncRNA TUSC7 sponges miR-10a-5p and inhibits BDNF/ERK pathway to suppress glioma cell proliferation and migration[J]. Aging （Albany NY）， 2023， 15（8）： 3021–3034.

[24] YANG L， SUN H F， GUO L Q， et al. MiR-10a-5p： A promising biomarker for early diagnosis and prognosis evaluation of bladder cancer[J]. Cancer Manag Res， 2021， 13： 7841–7850.

[25] GU Y， FENG X， JIN Y， et al. Upregulation of miRNA-10a-5p promotes tumor progression in cervical cancer by suppressing UBE2I signaling[J]. J Obstet Gynaecol， 2023， 43（1）： 2171283.

（收稿日期：2025–02–16）

（修回日期：2025–06–09）

基金項目：國家自然科學基金（81902882）

通信作者：劉芳，電子信箱：15988375291@163.com