桔梗炒制工藝及其炒制前后對(duì)急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用研究

中圖分類號(hào)R283；R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）13-1587-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.13.06

Studyon stir-frying processof Platycodon grandiflorumand itsprotective effect onacute lung injury in mice before and after stir-frying

HAN Xiaotian，WANG Lei， WANG Yaping，YANG Yaling，QI Bin（School of Pharmacy， Changchun University ofChineseMedicine，Changchun130117，China）

ABSTRACTOBJECTIVETooptimize the stir-fryingprocessof Platycodon grandiflorum，compare the protectiveeffectof P. grandiflorumonlunginjuryinmicebeforeandafterstir-frying，andpreliminarilyexplorethecharacteristicsof“enhancedefcacy through processing”of stir-frying P. grandiflorum. METHODS On the basis of single-factor experiment，the stir-frying time， temperatureandfrequencyweretakenasfactors，andthecomprehensivescoresofappearancetraits，platycodinDcontentand alcohol extractcontentweretakenasindexes.Box-Behnkenresponsesurfaceexperiment was designed tooptimizethestir-frying process of P. grandiflorum and verify it.The mice were divided into blank control group，model group，dexamethasone group （positive control drug， 5mg/kg ）， P. grandiflorum low-dose and high-dose groups （0.6，1.2g/kg） ，fried P. grandiflorum low and high dose groups（0.6， 1.2g/kg ），with8 mice in each group.The treatment wasgiven once a day for 1O consecutive days.After thelastadministration，acutelunginjurymodelwasestablishedbyintratrachealinsilationoflipopolysaccharide.Thelevelsof interleukin-6（IL-6），IL- 1β ，tumor necrosis factor- α （TNF- ∝ ）in serum and superoxide dismutase （SOD），myeloperoxidase （MPO）and malondialdehyde（MDA）in lungtisse were detected，lung wet/dry weightratioandthymus index werecalculated， andthepathological changesoflungtissuewereobserved.RESULTSTheoptimum processingconditions wereasfollows：stirfrying temperature of 120^°C ，stir-frying time of 12min ，stir-frying frequency of 19r/min ； the comprehensive scores of the three batches of process verification were all greater than 97 points，RSD lt;3% （ n=3 ）.The results of pharmacodynamic experiments showed that compared with blank control group，the lung dry-wet weight ratio as well as the levels of IL-6，IL- ?1β ，TNF- ∝ ，MPO and MDA in the model group were significantly increased （ _Plt;0.01 ），the thymus index and SOD level were significantly decreased 0 Plt;0.01 ），and the lung tisse was significantly damaged.Compared with model group，above indexes of the mice in each administration group were significantly improved （ Plt;0.01 ），and the lung tissue injury was significantly reduced.At the same dose，except for the lung dry-wet weight ratio，the above indexes of the mice in the stir-fried P. grandiflorum groups weresignificantly improved compared with P. grandiflorum groups （Plt;0.05） ，and the lung tissue damage was further reduced. CONCLUSIONS The optimized stir-frying process is stable and feasible.The protective effect of stir-fried P.

grandiflorum on acute lung injury in mice is better than that of raw products at the same dosage.

KEYWORDsPlatycodongrandiflorum；friedPlatycodongrandiflorum；stir-fryingprocess；lunginjury；pharmacodyamics; processing enhance curative effect

桔梗是桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorum（Jacq.）A.DC.的干燥根，在我國產(chǎn)地分布較為廣泛，是我國大宗藥材之一。桔梗首次被記載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為下品。其性平，味苦、辛，歸肺經(jīng)，有宣肺利咽、止咳平喘、祛痰排膿的功效[2-3]。其既能載諸藥上行，又能引苦泄峻下，素有“舟楫之藥\"的稱號(hào)[4。在現(xiàn)代臨床應(yīng)用中，桔梗被廣泛應(yīng)用于肺部疾病的治療，多用于風(fēng)熱、肺熱引起的咳喘[。桔梗中的各種皂苷類物質(zhì)是其主要的活性成分，有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性。

桔梗炒制后藥性變溫，去除了苦、辛味，能載藥上行，增強(qiáng)了宣肺止咳的功效，配伍使用更適用于寒咳、久咳不愈等急重癥-8]。炒桔梗在《圣濟(jì)總錄》《丹溪心法》等古籍以及2015年版《浙江省中藥炮制規(guī)范》中均有記載。炒桔梗應(yīng)用廣泛，用于治療肺部、呼吸道疾病的成方含炒桔梗的多達(dá)幾十種（如大黃桔梗湯、桔梗甘草湯等）。但現(xiàn)代對(duì)于炒桔梗的研究較少，僅在少數(shù)針對(duì)桔梗不同炮制品之間桔梗皂苷D含量差異的研究中有所提及，未見對(duì)炒桔梗工藝、藥效學(xué)/藥理學(xué)、炮制機(jī)制與內(nèi)涵的研究。鑒于此，本研究首先對(duì)桔梗炒制工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)生品桔梗和炒桔梗進(jìn)行藥效學(xué)研究，然后通過桔梗炒制前后藥效的比較，初步探索了炒桔?！芭谥圃鲂А钡奶匦?，以期為炒桔梗規(guī)范化生產(chǎn)提供理論依據(jù)，為其藥理作用機(jī)制的深人研究提供思路，同時(shí)也為后續(xù)對(duì)其炮制內(nèi)涵的深入研究打下基礎(chǔ)。

1材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有：1260infinityⅡ型高效液相色譜儀（美國Agilent公司），KQ-600E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）， Lynx6000 型離心機(jī)、ExcelsiorAS型自動(dòng)組織脫水機(jī)、HistoStar型組織包埋機(jī)、HM340型半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（美國ThermoFisherScientific公司），GrinderH24型組織研磨均質(zhì)儀（北京天根生化科技有限公司），Infinite 200Pro 型酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司），MS-5型電腦版炒貨機(jī)（常州金壇邁斯機(jī)械有限公司）。

1.2主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有：桔梗皂昔D對(duì)照品（成都德斯特生物技術(shù)有限公司，批號(hào)DST230414-015，純度 gt;98% ），白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）IL-1β、腫瘤壞死因子 ∝ （tumor necrosis factor- ??α∝ ，TNF- ??α∝ ）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）試劑盒（上海優(yōu)選生物科技有限公司，批號(hào)均為202406），超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)均為20240723）； 4% 多聚甲醛（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)R24036）；乙晴為色譜純，甲醇、正丁醇為分析純，水為屈臣氏純凈水。

桔梗飲片（批號(hào)A231213）購自毫州市永剛飲片廠有限公司，由長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院肖井雷教授鑒定為桔?？浦参锝酃?P. grandiflorum（Jacq.）A.DC.的干燥根。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為雄性SPF級(jí)KM小鼠，共42只，體重 25～30g ，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（遼）2020-0001。所有動(dòng)物均在溫度 （24±2）^°C 、相對(duì)濕度 （50±5）%.12h 光照/12h黑暗交替的環(huán)境下飼養(yǎng)。本研究通過長春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，編號(hào)為2025354。

2桔梗炒制工藝優(yōu)化

2.1 桔梗皂苷D的含量測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取桔梗皂昔D對(duì)照品 1.00mg ，加甲醇 2mL 溶解，制成每 1mL 含桔梗皂苷 D0.50mg 的對(duì)照品溶液。

2.1.2樣品溶液的制備

取過二號(hào)篩的桔梗粉末 2g ，加入 50% 甲醇 50mL 溶解，稱質(zhì)量后超聲（功率 250W ，頻率 40kHz 處理30min。放冷后再次稱質(zhì)量，以 50% 甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量。過濾，取續(xù)濾液 25mL 水浴蒸干，殘?jiān)铀?20mL 溶解后用水飽和的正丁醇溶液提取3次，每次 20mL 。合并正丁醇液后用氨液 50mL 洗滌，棄去氨液后再以水飽和的正丁醇溶液 50mL 洗滌，棄去水液，正丁醇溶液回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙?，置?5mL 容量瓶中，用甲醇定容；過 0.22μm 濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 色譜條件

采用Agilent ZORBAXEclipcePlus C₁₈（250mm× 4.6mm，5μm 色譜柱，以乙腈（A）-水（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫 28%A ： 20～21min ， 28%A?25%A ；柱溫為 30^°C ；體積流量為 0.8mL/min ;進(jìn)樣量為 10μL ；紫外檢測(cè)波長為210nm 。

2.1.4方法學(xué)考察

方法學(xué)考察的結(jié)果顯示，桔梗皂昔D的色譜峰與相鄰峰間的分離度 gt;1.5 ，理論板數(shù)不低于 3000 。線性回歸方程為 Y=2 015.7X-37.389（r=0.999 6） （式中 X 為進(jìn)樣質(zhì)量濃度，Y為峰面積），線性范圍為 1.0～6.0mg/mL 。

精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn) （24h） 的RSD均小于 3.00% 1 ξ_n 均為6）;平均加樣回收率為 98.87%（RSD=2.38%，n= 6）。以上結(jié)果提示，所建方法滿足相關(guān)的含量測(cè)定要求。

2.2 醇溶性浸出物測(cè)定

按2020年版《中國藥典》（四部）“通則2201\"中“醇溶性浸出物測(cè)定法”項(xiàng)下的“熱浸法”進(jìn)行測(cè)定，溶劑為乙醇。

2.3 外觀性狀評(píng)分

本課題組根據(jù)古籍和現(xiàn)代地方標(biāo)準(zhǔn)中“取桔梗，炒黃”“照清炒法炒至表面微黃”等標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合《中藥炮制學(xué)》中對(duì)“炒黃”的描述，設(shè)定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)如下：質(zhì)感堅(jiān)硬、顏色接近生品，或者質(zhì)感疏松、呈焦褐色且有少許焦糊味， 5～6 分；質(zhì)感堅(jiān)硬且有少許黃白色，或者質(zhì)感較疏松、呈黃褐色， 7～8 分；質(zhì)感堅(jiān)硬，呈金黃色，且有較明顯焦香味， 9～10 分。

2.4 綜合加權(quán)評(píng)分

使用綜合加權(quán)評(píng)分法對(duì)炒桔梗的質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)定，用于優(yōu)化炮制工藝。桔梗皂苷D含量與醇溶性浸出物含量是2020年版《中國藥典》（一部）“桔梗\"項(xiàng)下僅有的含量類指標(biāo)；在中藥炮制傳統(tǒng)理論中，色澤是飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)和性狀鑒別的重要指標(biāo)之一，大量的現(xiàn)代研究表明色澤與飲片的品質(zhì)和有效成分含量密切相關(guān)，有“辨色論質(zhì)\"的理論[11-12]；外觀性狀是中藥炮制學(xué)傳統(tǒng)理論知識(shí)中判斷飲片炮制程度的重要參考。同時(shí)，本課題組前期研究顯示，炒制對(duì)桔梗外觀性狀、桔梗皂苷D含量和醇溶性浸出物含量有較大影響。因此，本研究對(duì)上述3個(gè)考察指標(biāo)進(jìn)行賦權(quán)，權(quán)重系數(shù)參考文獻(xiàn)[13]并稍作修改，得出綜合評(píng)分（OD） =40× （外觀性狀評(píng)分/外觀性狀最高分） +40x （桔梗皂苷D含量/桔梗皂苷D最高含量） + 20× （醇溶性浸出物含量/醇溶性浸出物最高含量）。

2.5桔梗炒制工藝的單因素考察

2.5.1 炒制時(shí)間

稱取桔梗飲片，將炒制溫度固定為 120^°C ，翻動(dòng)頻率為 18r/min ，投藥量為 200g 。分別測(cè)定炒制時(shí)間為6、8，10，12，14min 時(shí)所得樣品的外觀性狀評(píng)分以及桔梗皂昔D和醇溶性浸出物含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，炒制時(shí)間為 8，10，12min 時(shí)的OD值較高，分別為 93.64，96.72 /91.19分。因此，本研究選取炒制時(shí)間 8，10，12min 進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。

2.5.2 炒制溫度

稱取桔梗飲片，固定炒制時(shí)間為 10min ，翻動(dòng)頻率為 18r/min ，投藥量為 200g 。分別測(cè)定炒制溫度為80、100、120、140、160℃時(shí)所得樣品的外觀性狀評(píng)分以及桔梗皂昔D和醇溶性浸出物含量。結(jié)果表明，炒制溫度為 時(shí)OD值較高，分別為 92.80，95.56 77.37分。因此，本研究選取炒制溫度 100，120，140^°C 進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。

2.5.3 翻動(dòng)頻率

稱取桔梗飲片，固定炒制時(shí)間為 10min ，炒制溫度為 120^°C ，投藥量為 200g 。分別測(cè)定翻動(dòng)頻率為6、12、18，24，30r/min 時(shí)所得樣品的外觀性狀評(píng)分以及桔梗皂苷D和醇溶性浸出物含量。結(jié)果表明，翻動(dòng)頻率為12、18.24r/min 時(shí)OD值較高，分別為 88.01，94.16，92.90 分。因此，本研究選取翻動(dòng)頻率 12，18，24r/min 進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。

2.6Box-Behnken響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化桔梗炒制工藝

2.6.1 響應(yīng)面分析

根據(jù)單因素考察結(jié)果，以炒制時(shí)間 （A，min ）炒制溫度 （B，^°C） 、翻動(dòng)頻率（ （C，r/min） 為因素，以O(shè)D值為指標(biāo)，采用Design-Expert13軟件設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表1，方差分析結(jié)果見表2，2D/3D交互圖見圖1。

采用Design-Expert13軟件分析表1中數(shù)據(jù)，得二次多項(xiàng)回歸方程為： OD=97.07-3.26A-0.5938B+2.99C- 1 1.42AB+2.55AC+1.86BC-4.44A²-4.07B²-10.47C⁶ 。通過表2中方差分析結(jié)果可知，模型 Plt;0.05 ，具有顯著性;失擬項(xiàng) Pgt;0.05 ，不具顯著性，說明所建立的模型與實(shí)際情況吻合，誤差較小、擬合度高。綜合方差分析結(jié)果和2D/3D交互圖可知，模型中一次項(xiàng) A，C 有顯著性，交互項(xiàng)AC、BC有顯著性且對(duì)結(jié)果影響較大；二次項(xiàng) A²，B²，C²"均有顯著性。比較 A，B，C 的 F 值可知，其對(duì)炮制工藝影響的重要程度順序?yàn)?Agt;Cgt;B 。綜合以上結(jié)果，可認(rèn)為該二次回歸模型擬合充分、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)可行，可用于對(duì)桔梗炮制工藝進(jìn)行預(yù)測(cè)。

Design-Expert13軟件預(yù)測(cè)出的最佳工藝為：炒制溫度117.255^°cC ，炒制時(shí)間 12.020min ，翻動(dòng)頻率 18.615r/min 結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)需要和可行性，將預(yù)測(cè)最佳工藝修正為：炒制溫度 120^°C ，炒制時(shí)間 12min ，翻動(dòng)頻率 19r/min 。

2.6.2 最佳工藝驗(yàn)證

按修正后的最佳工藝炮制3批炒桔梗（每批 200g ） 進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果（表3）顯示，3批樣品的OD值均高 于97分，RSD小于 3%（n=3） ，說明該工藝穩(wěn)定可行。

3桔梗和炒桔梗對(duì)小鼠急性肺損傷的藥效學(xué)評(píng)價(jià)

3.1 藥液制備

分別取適量桔梗和根據(jù)前文最佳工藝制備的炒桔梗，粉碎，過二號(hào)篩，加入8倍量水煎煮2次、每次1h，過濾，合并濾液后濃縮至干。取干膏，用水溶解，制備成質(zhì)量濃度為 0.5g/mL 的藥液，備用。

3.2 動(dòng)物分組與給藥

小鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。將56只小鼠稱質(zhì)量后隨機(jī)分為空白對(duì)照組（Con組），模型組（Model組），地塞米松組（陽性對(duì)照藥，Dexa組），桔梗低、高劑量組（SL、SH組）和炒桔梗低、高劑量組（FL、FH組），每組8只。Dexa組小鼠灌胃 5mg/kg 地塞米松，劑量參考文獻(xiàn)[14]及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置；SL、SH組和FL、FH組小鼠均分別灌胃0.6、1.2g/kg （炒）桔梗藥液，分別為人臨床等效劑量的0.5、1倍；Con組、Model組小鼠灌胃等體積生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù) 10d 。給藥期間小鼠正常飲食。

3.3 動(dòng)物造模

末次給藥后對(duì)小鼠禁食不禁水 24h ，參考文獻(xiàn) [15- 16]方法并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）氣管滴注法建立急性肺損傷模型：用異氟烷將小鼠麻醉后，對(duì)小鼠頸部剃毛、消毒，然后剖開小鼠頸部并暴露氣管，將留置針插進(jìn)氣管后結(jié)扎；用注射器推入LPS溶液 0.1mL （質(zhì)量濃度為2.4mg/mL ，造模劑量為 6mg/kg ，將小鼠小心豎起停置10s ，使LPS液在其肺中均勻分布；最后進(jìn)行縫合并將其放回籠中等待蘇醒。造模過程中應(yīng)使用空調(diào)適當(dāng)升高室內(nèi)溫度，防止小鼠麻醉后體溫過低。

3.4樣本取材及指標(biāo)檢測(cè)

造模2d后，取小鼠眼球血，將血樣在 4^°C 下以3500r/min 離心 15min ，吸取上層血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說明書方法操作，檢測(cè)血清中炎癥因子（IL-6、IL-1β、TNF- σ?α∝ ）水平。取小鼠左肺上葉置于 4% 多聚甲醛中固定，常規(guī)制作石蠟切片并行常規(guī)HE染色后，觀察肺組織病理學(xué)變化；取小鼠左肺中、下葉組織，制作組織勻漿，按照相應(yīng)試劑盒說明書操作，檢測(cè)肺組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)（SOD、MPO、MDA）水平；取小鼠右肺組織，稱質(zhì)量（濕重），烘干，再次稱質(zhì)量（干重），計(jì)算肺干濕重比（濕重/干重）;取小鼠胸腺組織，稱質(zhì)量，并計(jì)算胸腺指數(shù)（胸腺質(zhì)量/體重）。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中每天測(cè)量1次小鼠體重。

3.5體重變化測(cè)定結(jié)果

結(jié)果（圖2）顯示，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間，各組小鼠體重增加；給藥期間，各組小鼠體重穩(wěn)定；造模后，除Con組外其余各組小鼠體重均減輕，其中以Model組小鼠體重減輕幅度最大。

3.6肺干濕重比和胸腺指數(shù)測(cè)定結(jié)果

與Con組比較，Model組小鼠肺干濕重比顯著升高（ Φ^-（0.01 ），胸腺指數(shù)顯著降低 （Plt;0.01 ）；與Model組比較，各給藥組小鼠肺干濕重比均顯著降低 （Plt;0.01 ），胸腺指數(shù)均顯著升高 （Plt;0.01 ；與SL組比較，F(xiàn)L組小鼠胸腺指數(shù)顯著升高 （Plt;0.05 ；與SH組比較，F(xiàn)H組小鼠胸腺指數(shù)顯著升高 （Plt;0.05 。結(jié)果見表4。

3.7血清中IL-6、IL-1β、TNF- α_αα_αα_β∝α_βα_βα_βα_β 水平測(cè)定結(jié)果

與Con組比較，Model組小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF- α 水平均顯著升高 （Plt;0.01 ）；與Model組比較，各給藥組小鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著降低（ Plt; 0.01）；與SL組比較，F(xiàn)L組小鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著降低（ .Plt;0.05） ；與SH組比較，F(xiàn)H組小鼠血清中上述指標(biāo)水平均顯著降低（ Plt;0.05 。結(jié)果見表5。

3.8 肺組織中SOD、MPO、MDA水平檢測(cè)結(jié)果

與Con組比較，Model組小鼠肺組織中SOD水平顯著降低 （Plt;0.01） ），MPO、MDA水平顯著升高（ Plt; 0.01）；與Model組比較，各給藥組小鼠肺組織中SOD水平均顯著升高（ （Plt;0.01 ，MPO、MDA水平均顯著降低0 Plt;0.01 ）;與SL組比較，F(xiàn)L組小鼠肺組織中SOD水平顯著升高 （Plt;0.05） ，MPO、MDA水平均顯著降低（ Plt; 0.05）；與SH組比較，F(xiàn)H組小鼠肺組織中SOD水平顯著升高 （Plt;0.05） ，MPO、MDA水平均顯著降低 Plt; 0.05）。結(jié)果見表6。

3.9 肺組織損傷情況觀察結(jié)果

Con組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰、完整，肺泡清晰可見，無炎癥細(xì)胞浸潤。Model組小鼠肺組織多數(shù)結(jié)構(gòu)被破壞，炎癥細(xì)胞浸潤增厚、內(nèi)出血和上皮細(xì)胞脫落情況嚴(yán)重。各給藥組小鼠肺組織損傷程度均有所減輕，其中以FH組小鼠減輕程度最大，僅出現(xiàn)少量的炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞脫落，而FL組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞脫落情況比FH組小鼠嚴(yán)重；SH組小鼠肺組織出現(xiàn)輕度內(nèi)出血，存在部分炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞脫落；SL組損傷減輕程度最小，出現(xiàn)較多炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞脫落。結(jié)果見圖3。

4討論

本研究遵照2020年版《中國藥典》（一部）“桔梗\"項(xiàng)下的定量分析指標(biāo)，并結(jié)合中藥炮制的傳統(tǒng)理論知識(shí)進(jìn)行綜合評(píng)分，保證了優(yōu)化工藝的科學(xué)性和穩(wěn)定性。本研究采用Box-Behnken響應(yīng)面法，以外觀性狀評(píng)分、桔梗皂昔D含量和醇浸出物含量3個(gè)指標(biāo)的綜合評(píng)分為響應(yīng)值，優(yōu)化了桔梗炒制工藝的相關(guān)參數(shù)，得到了最佳工藝參數(shù)（炒制溫度 120^°C ，炒制時(shí)間 12min ，翻動(dòng)頻率19r/min ），并通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明了該工藝穩(wěn)定、可行。

LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜中的主要成分，能引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥因子（如IL- 1β 、TNF- σ?α∝ 和IL-6）分泌，產(chǎn)生“炎癥因子風(fēng)暴”。由于大量炎癥因子的產(chǎn)生，肺組織的氧化與抗氧化平衡也遭到破壞，而SOD、MDA、MPO均為氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，能反映肺部受氧化應(yīng)激影響的損傷程度[17-18]。本研究初步從藥效學(xué)的層面探索了炒桔梗“炮制增效”的特性，結(jié)果顯示，生品桔梗和炒桔梗均能改善小鼠體重、肺組織水腫情況并調(diào)節(jié)免疫，可顯著降低血清中IL-6、IL-1β、TNF- α_?∝ 水平和肺組織中MPO、MDA水平，并提高SOD水平，從而實(shí)現(xiàn)抗炎和調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激失衡；同時(shí)，其可減輕肺部炎癥細(xì)胞浸潤、上皮細(xì)胞脫落和內(nèi)出血。由此可知，桔梗和炒桔梗黑色箭頭：炎癥細(xì)胞浸潤增厚;紅色箭頭：內(nèi)出血;藍(lán)色箭頭：上皮細(xì)胞脫落。

圖3各組小鼠肺組織損傷顯微圖（HE染色，標(biāo)尺： 100μm ）

均可以對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠起到保護(hù)作用，且在相同給藥劑量下，炒桔梗的保護(hù)作用強(qiáng)于生品桔梗。

本研究也存在不足之處：（1）工藝優(yōu)化的考察指標(biāo)完全遵照2020年版《中國藥典》（一部）“桔梗\"項(xiàng)下的相關(guān)定量指標(biāo)，雖然保證了其科學(xué)性和穩(wěn)定性，但設(shè)計(jì)較為保守，未體現(xiàn)出藥典規(guī)定外的其他成分的變化。（2）桔梗在炒制過程中顏色、氣味均會(huì)發(fā)生變化，與此同時(shí)其內(nèi)在的多種化學(xué)成分也產(chǎn)生了量變與質(zhì)變，其變化規(guī)律和外觀性狀與內(nèi)在成分之間的聯(lián)系有待深人研究。在接下來的研究中可通過質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)一步探討桔梗炒制后各類成分的變化，運(yùn)用色度儀與電子鼻等技術(shù)對(duì)不同炒制程度桔梗的外觀與氣味進(jìn)行量化從而探究其“表里關(guān)聯(lián)”的特性，并運(yùn)用免疫熒光技術(shù)和免疫蛋白印跡技術(shù)等對(duì)其開展更深入的藥理機(jī)制研究。

綜上所述，本研究成功優(yōu)化了桔梗的炒制工藝，證明了桔梗炒制后對(duì)肺損傷小鼠的保護(hù)作用更佳，初步證明了炒桔梗具有“炮制增效”的特性，可為桔梗生產(chǎn)的規(guī)范化提供方向和科學(xué)依據(jù)，為其藥理作用機(jī)制和炮制內(nèi)涵的深入研究奠定基礎(chǔ)。

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（編輯.林靜）