環(huán)境因子對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響

關(guān)鍵詞囊體；環(huán)境因子；生長(zhǎng)；球形棕囊藻中圖分類號(hào)Q178 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 0517-6611（2025）13-0056-08doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.13.012開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effectsof Environmental Factors on the Growth of Phaeocystis globosa Colonies

WUXiao-yu1，Uhe-chn12HEYngqietal（1.JangsuKeyLaboratoryofarineioresoresndEcoenvirontg OceanUniversityigngJg;.gsuKyboatoyfiotguaUvesiyiag Jiangsu ）

AbstractObective]ToexploretherelationshipsbetweenthegrowthofPhaeocstisglobosacoloesandthenvironmentalfactos.et odTefectsalcschhtsitympauedsss colonies，thedaerflodmbeofcelsioloalyd.esultUderlbatoryoiios globosacoloniesreachedastablegrowthstageat8daysandadeclineperiodat12days.Whentheconditonsoflightintensityof （204號(hào) 62.5μmol/（m²?s） and above，temperature range of 20-26°C ，inoculation size of 1%-4% ，higherinitial NO₃^- concentration （ 128- （204號(hào) 440μmol/L and PO₄^3- concentration （ 8-24μmol/L ），Phaeocystis globosa colonies could grow rapidly，with higher the number of colonies， largerthespeificgrowthateorgtameterofolosadteumbrofgalcelsieolos.Coclusio]higlightin tensity，temperature，inoculation amount，initial NO₃^- concentration，and certain initial PO₄^3- concentration could promote the growth of colonies，which provided basic data for the early warning of red tide by Phaeocystis globosa colonies.

KeyWordsColony;Environmental factor;Growth;Phaeocystis globosa

球形棕囊藻（Phaeocystisglobosa Scherffel）分布廣泛[1]，具有游離單細(xì)胞和囊體2種形態(tài)[2]，藻華時(shí)主要以囊體形態(tài)存在[3]。多糖類物質(zhì)把囊體細(xì)胞聚集到一起，大量囊體細(xì)胞被包裹在膠質(zhì)包被里面[4]，在球形棕囊藻藻華時(shí)，隨著囊體的生消會(huì)危害到海洋其他浮游動(dòng)物的正?；顒?dòng)，海洋生態(tài)平衡帶來(lái)巨大挑戰(zhàn)[5]。從1997年至今，我國(guó)沿海地區(qū)暴發(fā)球形棕囊藻藻華50多起，總面積大于 10 000km² ，嚴(yán)重影響了海水養(yǎng)殖業(yè)和海洋生態(tài)環(huán)境[

囊體有助于球形棕囊藻藻華的發(fā)生和持續(xù)[7]。目前，球形棕囊藻囊體的研究主要集中在細(xì)胞形態(tài)[8-9]、充氣攪動(dòng)[10] CO₂ 濃度[1]等非生物因素，攝食壓力[12]和浮游動(dòng)物釋放的化學(xué)信息[13]等生物因素，以及光合作用[14]和碳源分配[15]等代謝途徑，不同環(huán)境條件對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響較少[16-18]，致使球形棕囊藻赤潮預(yù)警缺乏數(shù)據(jù)支撐?；诖耍P者研究了光照強(qiáng)度、溫度、接種量、初始氮和磷濃度等環(huán)境因子對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響，以期為球形棕囊藻赤潮預(yù)警提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1藻種培養(yǎng)球形棕囊藻由大連理工大學(xué)張議文老師團(tuán)隊(duì)提供。球形棕囊藻在 f/2 培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度20% ，光照強(qiáng)度為 50μmol/（m²?s） ，光暗比 ，白色冷光源。選取指數(shù)生長(zhǎng)期的球形棕囊藻囊體細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

除營(yíng)養(yǎng)鹽試驗(yàn)所用海水為人工海水，其他試驗(yàn)所用海水均為天然海水（海水鹽度為 30‰ ），使用前經(jīng) 0.22μm 雙面親水聚四氟乙烯（PTFE）過(guò)濾膜過(guò)濾， 121^°C 高壓下滅菌20min ，待冷卻后使用。

1.2光照強(qiáng)度試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)光照強(qiáng)度，分別為50.0、62.5、75.0、87.5和 100.0μmol/（m²?s） ，每組試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)平行，接種量為 3% ，接種體積為 300mL ，其余培養(yǎng)條件同“1.1”，培養(yǎng) 16d 。

1.3溫度試驗(yàn)溫度設(shè)定為 20，22，24，26°C ，每組試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)平行，光照強(qiáng)度為 75. 0μmol/（m²?s） ，接種體積為300mL ，接種量為 3% ，其余培養(yǎng)條件同\"1.1”，培養(yǎng) 16d 。

1.4接種量試驗(yàn)將培養(yǎng) 10d 的球形棕囊藻接種到 f/2 培養(yǎng)基中，接種量設(shè)置為 1%.2%.3%.4%.5% ，每組試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)平行，培養(yǎng)溫度為 20% ，光照強(qiáng)度為 75.0μmol/（m²?s） 接種體積為 300mL ，其余培養(yǎng)條件同\"1.1”，培養(yǎng) 16d 。

1.5 營(yíng)養(yǎng)鹽試驗(yàn)

1.5. 1 氮鹽。設(shè)定 NO₃^- 濃度為880、512、440、256和

128μmol/L（f/2 培養(yǎng)基中 NO₃^- 濃度為 880μmol/L ）， PO₄^3- 濃度均為 32μmol/L ，每組試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)平行，光照強(qiáng)度為75.0μmol/（m²?s） ，溫度為 22‰ ，接種量為 3% ，其余培養(yǎng)條件同\"1.1”，培養(yǎng) 16d 。

1.5.2磷酸鹽。設(shè)定 PO₄^3- 濃度為32、24、16、8和 4μmol/L （ f/2 培養(yǎng)基中 PO₄^3- 濃度為 32μmol/L ）， NO₃^- 濃度均為880μmol/L ，每組試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)平行，光照強(qiáng)度為75.0μmol/（m²?s） ，溫度為 22‰ ，接種量為 3% ，其余培養(yǎng)條件同\"1.1”，培養(yǎng) 16d 。

1.6藻細(xì)胞密度測(cè)定直徑大于 0.4cm 的囊體用刻度尺手動(dòng)測(cè)量其直徑，其余囊體在倒置顯微鏡下進(jìn)行直徑測(cè)量。從培養(yǎng)第4天開(kāi)始，每隔2d固定時(shí)間取 2mL 藻樣加 30μL 盧戈氏碘液至6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)囊體數(shù)量、測(cè)量直徑。參照王錦秀等[9前期建立的囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量與囊體直徑的回歸曲線方程 Y=0. 007 9X^{2.127 1}（R²= 0.9710），根據(jù)囊體直徑換算得出囊體內(nèi)藻細(xì)胞總數(shù)。

1.7數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均用Excel2021整理，采用Origin2021作圖。通過(guò)SPSS26進(jìn)行單因素方差（ANOVA）分析，若差異顯著（ Plt;0.05） ，再進(jìn)行LSD法多重比較，并通過(guò)SPSS26對(duì)囊體生長(zhǎng)參數(shù)和環(huán)境因子進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。囊體生長(zhǎng)速率計(jì)算公式為 。式中： N_t?N₀ 分別為 時(shí)刻的藻細(xì)胞數(shù)； 為不同的培養(yǎng)時(shí)間 σ_;μ 為比生長(zhǎng)速率。

2 結(jié)果與分析

2.1囊體生長(zhǎng)曲線從圖1可以看出，球形棕囊藻在培養(yǎng)4d出現(xiàn)囊體，在4＼～8d囊體生長(zhǎng)快速，囊體數(shù)量和直徑明顯增加。在 10～12d ，進(jìn)入囊體生長(zhǎng)穩(wěn)定期，囊體數(shù)量不再增加，但囊體直徑繼續(xù)增加。14d時(shí)囊體開(kāi)始破碎（圖2），進(jìn)入生長(zhǎng)衰亡期，囊體數(shù)量開(kāi)始降低。盡管囊體數(shù)量在 14～ 16d 明顯下降，但囊體直徑仍明顯高于前12d的囊體直徑。

2.2光照強(qiáng)度對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響由圖3A和圖3B 可知，球形棕囊藻囊體數(shù)量在4＼～8d顯著增加（ Plt;0.05） 。其中，62.5和 100.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組中，囊體數(shù)量在8d時(shí)達(dá)到最大值，分別為24和23colonies/ ，囊體比生長(zhǎng)速率分別為0.413和 0.381d^-1 。在培養(yǎng)8d后，所有試驗(yàn)組囊體數(shù)量出現(xiàn)不同程度下降，特別是 50.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組中囊體數(shù)量下降尤為顯著（ Plt;0.05） ，而 100.0μmol/（Ωm²?s） 試驗(yàn)組中囊體數(shù)量在8＼～14d維持在較高水平，并高于其他光照強(qiáng)度試驗(yàn)組的囊體數(shù)量。

由圖3C可知，囊體直徑隨培養(yǎng)時(shí)間的增加而顯著增加中 （Plt;0.05） 。除光照強(qiáng)度62.5和 87.5μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組外，其余試驗(yàn)組囊體直徑均在 16d 時(shí)達(dá)到最大值，囊體直徑均超過(guò) 1895.9μm 。整體來(lái)看， 75.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組囊體直徑高于其他光照強(qiáng)度試驗(yàn)組，特別是在培養(yǎng)12d后，這種現(xiàn)象尤為明顯（ ?Plt;0.05） 0

由圖3D可知，囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量與囊體直徑的變化趨勢(shì)相似。在 12～16d，75.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組囊體內(nèi)細(xì)胞數(shù)量最多，顯著高于其他試驗(yàn)組（ Plt;0. 05， 。16d時(shí)，75.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量達(dá)到196 797 cells/colony 。

上述結(jié)果表明，在試驗(yàn)設(shè)定的光照強(qiáng)度內(nèi)，較高的光照強(qiáng)度有利于球形棕囊藻囊體的生長(zhǎng)。62.5、75.0和100.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組的囊體數(shù)量、囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量總體高于 50.0μmol/（m²?s） 試驗(yàn)組。王艷等[21]研究也表明過(guò)低的光照強(qiáng)度[低于 50.0μmol/（m²?s）] 下球形棕囊藻并不形成囊體。

2.3溫度對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響由圖4A和圖4B可知，較高培養(yǎng)溫度試驗(yàn)組的囊體數(shù)量較多。在24和 26^°C 試驗(yàn)組中，囊體數(shù)量在4＼～6d迅速增長(zhǎng)并達(dá)到最大值，分別為291和449colonies/mL;隨后，囊體數(shù)量顯著降低（ Plt;0.05） 。在20% 試驗(yàn)組中， 4～6d 囊體數(shù)量緩慢增長(zhǎng)，囊體數(shù)量顯著低于其他3個(gè)試驗(yàn)組（ Plt;0. 05^′ ），在10d時(shí)達(dá)到最大值（240colonies/mL），囊體數(shù)量維持到 12d 。相比其他培養(yǎng)溫度而言， 20% 試驗(yàn)組囊體有最大的比生長(zhǎng)速率，為 0.486d^-1 。

由圖4C可知，在 4～10d，4 組培養(yǎng)溫度（20、22、24、26^°C ）下囊體直徑隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增大； 14d 時(shí)，20% 試驗(yàn)組囊體直徑降至 256.7μm ，且顯著低于其他3個(gè)試驗(yàn)組（ Plt;0.05， 16d 時(shí)， 20，22，24，26°C 這4組培養(yǎng)溫度下囊體直徑分別為

由圖4D可知，在 4～10d，4 組培養(yǎng)溫度下囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，溫度越高，囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量越多。16d時(shí)，20、22、24和 26^°C 囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量分別增大至 1672、6277、8558 和 5 440 cells/colony。

整體來(lái)看，培養(yǎng)初期較高培養(yǎng)溫度下囊體數(shù)量、囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量明顯高于較低的培養(yǎng)溫度，而較低培養(yǎng)溫度下囊體生長(zhǎng)更快。李杰等[22研究發(fā)現(xiàn)，在 24^°C 時(shí)囊體直徑雖然與16和 28^°C 時(shí)接近，但囊體內(nèi)藻細(xì)胞密度最少。但該研究發(fā)現(xiàn)，16d時(shí) 24^°C 時(shí)囊體直徑最大，囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量也最多，這可能與球形棕囊藻株系有關(guān)。在試驗(yàn)設(shè)定溫度范圍內(nèi)，球形棕囊藻的囊體直徑均明顯大于文獻(xiàn)報(bào)道的 16～24^°C 球形棕囊藻的囊體直徑[23]

2.4接種量對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響由圖5A和圖5B可知，接種量在 1%～4% ，囊體比生長(zhǎng)速率隨接種量增加而增大；在接種量為 4% 時(shí)，囊體比生長(zhǎng)速率達(dá)到最大值，為1% 接種量時(shí)囊體比生長(zhǎng)速率的1.95倍；當(dāng)接種量繼續(xù)增加時(shí)囊體比生長(zhǎng)速率略微下降。不同接種量下，囊體數(shù)量與囊體比生長(zhǎng)速率的變化趨勢(shì)類似，即在培養(yǎng)4＼～8d，高接種量（ 4% 和 5% ）試驗(yàn)組的囊體數(shù)量顯著高于較低接種量試驗(yàn)組（ Plt;0.05） 。8d時(shí)， 1%1%1.2%3%4%5% 接種量試驗(yàn)組的囊體數(shù)量分別為 479，858，918，1073 和1 266 colonies/mL。

由圖5C可知，接種量對(duì)囊體直徑的影響不同于其對(duì)囊體數(shù)量的影響，較大接種量試驗(yàn)組的囊體直徑反而較??； 6～ 16d，1% 接種量試驗(yàn)組的囊體直徑均高于其他接種量試驗(yàn)組的囊體直徑; 10d 時(shí)， 1%.2%.3%.4%.5% 接種量試驗(yàn)組的囊體直徑分別為529、496、424、282和 239μm 。不同接種量對(duì)囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量的影響（圖5D）類似于其對(duì)囊體直徑的影響。結(jié)果表明，較大的接種量能獲得更高的囊體數(shù)量，但囊體直徑小、囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量也較少。

2.5營(yíng)養(yǎng)鹽對(duì)囊體生長(zhǎng)的影響

2.5.1不同初始 NO₃^- 濃度對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響。由圖6A可知，較高初始 NO₃^- 濃度試驗(yàn)組囊體數(shù)量低于較低初始 NO₃^- 濃度試驗(yàn)組，尤其在培養(yǎng) 10d 后，囊體數(shù)量顯著低于較低初始 NO₃^- 濃度（128和 256μmol/L 試驗(yàn)組（ Plt; 0.05）。由圖6B可知，囊體比生長(zhǎng)速率隨初始 NO₃^- 濃度降低呈現(xiàn)先下降后增長(zhǎng)的趨勢(shì)，整體來(lái)看，較高初始 NO₃^- 濃度試驗(yàn)組囊體比生長(zhǎng)速率較大。

由圖6C和圖6D可知，初始 NO₃^- 濃度對(duì)囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量的影響不同于其對(duì)囊體數(shù)量的影響?？傮w來(lái)看，較高初始 NO₃^- 濃度試驗(yàn)組囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量明顯高于較低 NO₃^- 濃度試驗(yàn)組。14d時(shí)，在880μmol/L 試驗(yàn)組，最大的囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量分別為 462.5μm 和 3 690.31 cells/colony。

研究表明，在氮限制條件下球形棕囊藻囊體受到明顯抑制[21]。在暴發(fā)球形棕囊藻海域 NO₃^- 濃度為 42μmol/L^[24] ，該研究設(shè)定的初始 NO₃^- 濃度均超過(guò)此數(shù)值。莫鈺等[25]研究指出，一次性加入 40μmol/L 的氮，并不利于在欽州灣外灣球形棕囊藻囊體直徑及囊體細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而，在該研究設(shè)定的初始 NO₃^- 濃度范圍內(nèi)，均明顯有利于球形棕囊藻囊體的生長(zhǎng)，這應(yīng)該是與球形棕囊藻株系有關(guān)。

此外，值得注意的是，初始 NO₃^- 濃度為 512μmol/L 試驗(yàn)組的囊體比生長(zhǎng)速率為 0.206d^-1 ，顯著低于其他4個(gè)試驗(yàn)組（ Plt;0.05） ，排除囊體生長(zhǎng)的不穩(wěn)定性外，可能的原因是此時(shí)試驗(yàn)組N/P（初始 NO₃^- 濃度為 512μmol/L 時(shí)，初始 PO₄^3- 濃度設(shè)定為 32μmol/L，N/P=16 為Redfield比值（ 16：1） 。研究表明，浮游植物在 N/P 接近Redfield比值時(shí)具有更高的生物量[26]。因此，這個(gè)條件下球形棕囊藻可能更傾向于游離單細(xì)胞狀態(tài)，從而囊體比生長(zhǎng)速率低于其他試驗(yàn)組。

注：不同小寫字母表示差異顯著（ Plt;0.05） °

Note：Different lowercase lettersindicate significant differences （Plt;0.05）

圖6不同初始 NO₃"濃度下球形棕囊藻囊體數(shù)量（A）、囊體比生長(zhǎng)速率（B）、囊體直徑（C）和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量（D）的變化

Fig.6Changesof tenumberofPheocystisglobosacolony（A）specificgrowthrate（B），thediameterofcolonies（C）andtheberofalgal cells in thecolonies （D） under different initial NO₃^-"concentrations

2.5.2不同初始 PO₄^3- 濃度對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響。該研究設(shè)定的初始 PO₄^3- 濃度均為P限制條件，初始 PO₄^3- 濃度明顯影響了球形棕囊藻囊體數(shù)量（圖7A），當(dāng) PO₄^3- 濃度降低至 4μmol/L 時(shí)， 8d 時(shí)囊體幾乎全部死亡;在4＼～6d，初始PO₄^3- 濃度在 8～24μmol/L 時(shí)囊體數(shù)量也較多。這表明在 P 限制條件下，相對(duì)較高的 PO₄^3- 濃度能促進(jìn)囊體生長(zhǎng)。與初始 PO₄^3- 濃度對(duì)囊體數(shù)量的影響不同，囊體比生長(zhǎng)速率隨初始 PO₄^3- 濃度降低而明顯升高（圖7B）。從圖7C和圖7D可以看出，初始 PO₄^3- 濃度對(duì)囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量影響的趨勢(shì)一致，即隨初始 PO₄^3- 濃度降低，囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量明顯減小。莫鈺等[25]研究指出，添加 0.5μmol/L 磷能促進(jìn)囊體增長(zhǎng)，但囊體在8d后大量衰敗，這也表明較低磷濃度不利于囊體維持。

上述結(jié)果表明，氮限制條件（ NO₃^- 濃度在 128～ 440μmol/L，N/P 在 4.00～13.75 ）和磷限制條件下（ PO₄^3- 濃度在 8～24μmol/L，N/P 在 36.67～110.00 ，球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)更快，這與已有報(bào)道的研究結(jié)果相符[27]

2.6球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)和環(huán)境因子的關(guān)系將囊體數(shù)據(jù)與環(huán)境因子進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，結(jié)果如表1＼～3所示。

從表1＼～3可以看出，囊體數(shù)量與接種量呈現(xiàn)正相關(guān)性；囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量與溫度、初始 PO₄^3- 濃度之間均呈正相關(guān)性。

3討論

球形棕囊藻自1997年在我國(guó)暴發(fā)后，近30年已經(jīng)形成了由南到北的擴(kuò)張趨勢(shì)，包括福建、廣東、廣西、海南、青島、河北及天津等?。ㄊ校┑暮Ｓ蚓l繁暴發(fā)[28-31]。與全球其他海區(qū)相比，我國(guó)近海在內(nèi)的東亞至南亞沿岸海域，膠質(zhì)囊體可達(dá)到厘米級(jí)[28]，具有高度遺傳多樣性[32]。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)影響球形棕囊藻囊體形成的因素有營(yíng)養(yǎng)[33]、光照[34]、攝食[35]和硅藻[36]等。其中，營(yíng)養(yǎng)和光照研究主要集中在我國(guó)沿岸海域的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查與分析[30]，缺乏實(shí)驗(yàn)室條件下環(huán)境因子對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響研究[37-38]；并且，由于球形棕囊藻株系差異，現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查獲得的營(yíng)養(yǎng)和光照水平并不完全接近，獲得一個(gè)寬泛的營(yíng)養(yǎng)和光照等環(huán)境因子對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)影響的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)能為赤潮預(yù)警提供可靠的支撐。該研究所用球形棕囊藻為北海株，目前實(shí)驗(yàn)室條件下環(huán)境因子對(duì)其囊體生長(zhǎng)的影響研究很少[17，27]，基于此，該研究分析了光照強(qiáng)度、溫度、接種量、不同初始 NO₃^- 和 PO₄^3- 濃度對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響。

光照強(qiáng)度能對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)產(chǎn)生影響[21，39]。在該研究中， 62.5μmol/（m²?s） 及以上光照強(qiáng)度時(shí)，在培養(yǎng)10＼～14d，球形棕囊藻囊體的數(shù)量和比生長(zhǎng)速率以及囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量整體上高于較低光照強(qiáng)度組。王艷等[21]研究也發(fā)現(xiàn)在 500μmol/（m²?s） 光照強(qiáng)度下能長(zhǎng)出囊體，囊體數(shù)量達(dá)到404.67colonies/mL，而在 50μmol（m²?s） 的弱光條件下幾乎不形成囊體。國(guó)內(nèi)外不同海域的球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)均與光照強(qiáng)度呈正相關(guān)性[21，39]。此外，還發(fā)現(xiàn)光照強(qiáng)度對(duì)球形棕囊藻不同株系影響不同。在100.0μmol/（m²?s） 光照強(qiáng)度下，球形棕囊藻汕頭株囊體數(shù)量可高達(dá)1140colonies/ mL^[40] ，而該研究中球形棕囊藻囊體數(shù)量未超過(guò)50colonies/ ΔmL ，這表明不同株系對(duì)光照強(qiáng)度響應(yīng)存在明顯差異。

溫度是影響球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的重要因素，在 20% 時(shí)球形棕囊藻主要以囊體形態(tài)存在，當(dāng)溫度高于 24^°C 時(shí)，游離單細(xì)胞占主體地位[23]。該研究表明， 20% 時(shí)球形棕囊藻具有最大的比生長(zhǎng)速率，在 20～26^°C ，培養(yǎng)前14d囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量隨溫度升高而明顯增大，球形棕囊藻囊體表現(xiàn)出了較高的溫度適應(yīng)范圍。與該研究結(jié)果不同的是，Wang等[23]研究發(fā)現(xiàn)球形棕囊藻囊體直徑隨溫度的升高而減小。這可能與球形棕囊藻株系相關(guān)，他們所用球形棕囊藻（CCMP1528）來(lái)源于南太平洋。另外，這也可能是球形棕囊藻適應(yīng)環(huán)境的結(jié)果。采自欽州灣近岸的球形棕囊藻藻株經(jīng)過(guò)梯度升溫，在實(shí)驗(yàn)室設(shè)定 32% 培養(yǎng)18d后仍然有超過(guò)500colonies/mL的囊體[38]。球形棕囊藻香港株的最適生長(zhǎng)溫度在 20～25°C ，而汕頭株的適宜溫度接近 ，這些研究都表明球形棕囊藻囊體具有較廣泛的溫度適應(yīng)性。

接種量對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)同樣有明顯影響，較高的接種量能獲得較多的囊體數(shù)量和更高的囊體比生長(zhǎng)速率。不過(guò)，此時(shí)囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量則較小/較少。分析原因，認(rèn)為這可能是因?yàn)橛捎跔I(yíng)養(yǎng)和空間限制，囊體在增加數(shù)量時(shí)以降低囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞為“代價(jià)”，從而出現(xiàn)囊體數(shù)量越多，其直徑和內(nèi)部藻細(xì)胞數(shù)量越少的現(xiàn)象。目前，國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)接種量對(duì)球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)的影響報(bào)道。

該研究培養(yǎng)球形棕囊藻囊體過(guò)程中，沒(méi)有加入硅酸鹽但依據(jù)已有文獻(xiàn)提出的營(yíng)養(yǎng)鹽限制因素標(biāo)準(zhǔn)[41]，即 N/Plt; 16，NO₃^- 為N限制因子；或 N/Pgt;16，PO₄^3- 為 P 限制因子來(lái)對(duì)比，該研究設(shè)定的初始氮、磷濃度分別處于氮限制和磷限制狀態(tài)。已有報(bào)道指出，氮限制條件下球形棕囊藻仍能形成囊體[42]，硝酸鈉是促進(jìn)球形棕囊藻囊體形成的氮源[33.43]。在磷酸鹽充足條件下，硝酸鹽利于囊體的形成[43]。在該研究中， 256：32（N：P=8） 和 128：32（N：P=4） 均為氮限制，前者囊體數(shù)量在培養(yǎng)期內(nèi)均高于后者，其囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量在培養(yǎng) 8～16d 也大于/多于后者。在磷限制條件下，磷濃度過(guò)低時(shí)球形棕囊藻囊體無(wú)法形成。在該研究設(shè)定的初始 PO₄^3- 濃度范圍內(nèi)，未見(jiàn)球形棕囊藻囊體無(wú)法形成的現(xiàn)象。但是，在 4μmol/L 低磷濃度時(shí)，形成的球形棕囊藻囊體提前進(jìn)入衰亡期（培養(yǎng)8d）， 10d 時(shí)在培養(yǎng)體系中已經(jīng)觀察不到完整囊體。當(dāng)初始 PO₄^3- 濃度升高至 8μmol/L 時(shí)，球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)恢復(fù)正常;初始 PO₄^3- 濃度在 8～24μmol/L 囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量隨磷濃度升高而明顯增大/增多。蘇芯瑩等[44]研究指出洲島海域球形棕囊藻藻華期間水體中溶解有機(jī)磷含量與囊體密度呈顯著正相關(guān)，這與該研究結(jié)果相符。

4結(jié)論

光照強(qiáng)度、溫度、接種量、初始 NO₃^- 和 PO₄^3- 濃度均能影響球形棕囊藻囊體數(shù)量、囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量的變化。在較高光照強(qiáng)度 ≥62.5μmol/（m²?s） （2 ，20～26%，1%～ 4% 接種量、氮限制條件（ NO₃^- 濃度在 128～440μmol/L，N/P 在 4.00～13.75 和磷限制條件（ PO₄^3- 濃度在 8～24μmol/L N/P在 36.67～110.00 ）等環(huán)境條件下，球形棕囊藻囊體生長(zhǎng)很快，具有更高的囊體數(shù)量、更大的囊體比生長(zhǎng)速率或者更大的囊體直徑和囊體內(nèi)藻細(xì)胞數(shù)量。

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