山桔葉水提物急性毒性試驗

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）09-0037-04

DOI：10.3969/j. issn.1007-8517.2025.09. zgmzmjyyzz202509009

Acute Toxicity Experiment of Glycosmis parviflorae（Sims）Kurz Water Extract

ZHANG Wentao MA Wenfang HUANG Lizhen* GuangxiUniversity of ChineseMedicine，Nanning53O2OO，China

Abstract：ObjectiveToevaluate theacutetoxicityof Glycosmis paruflorae（Sims）Kurz water extract inmice.Methods The maximum dosage（MAD）wasused inthe acute toxicityexperiment on mice.40 KMmice，2O malesand2O females，were selected andrandomlydividedintotwogroups with2Omiceineachgroup.Thetreat groupwasgiventhewaterextractofGlycosmisparviflore at a volume of 40mL/kg by gavage，and the control group was given equivalent pure water， observed and recorded general condition of mice（toxicreaction，body weightanddeath）within14days.After14days，theserum wastakentodetectthebloodbiochemical indexes，observedthepathologicalchangesinthemainorgansadcaleulatedtheorganindex.Inadition，histopathologicalchangs inthe organ wereanalyzedby hematoxylinandeosin method.ResultsThere werenoobvious toxic symptoms inthetreat group，and nosignificantdiferenceintebdyweights，matologicalandochemicalparametersaswellasistopatologyinorganshncompared with thecontrol group.Conclusion The MAD of water extractof Glycosmis paruflorae（（Sims）Kurz for mice was 218g/kg ， which was 872 times of the recommended dosage for adults （ 60kg ）.Indicatedt hat Glycosmis parviflorae（Sims）Kurz was high safety.

Key Words： Water Extract of Glycosmis parviflorae （Sims） Kurz； Acute Toxicity Experiment；Maximum Does

山桔葉為蕓香科山小橘屬小花山小橘Glycosmisparviflorae（Sims）Kurz的干燥葉，別名野沙柑、酒餅木、山油甘等，具有止咳、化痰、消積、破瘀消腫的功效，在廣西、廣東、福建、臺灣等均有分布[1-2]。民間常用于治療感冒咳嗽、食積脹痛等?；瘜W研究[3-7]表明，山桔葉主要含萜類、甾體類、黃酮苷類、脂肪酸類化合物。而其藥理作用報道較少，僅見抗炎、鎮(zhèn)痛相關報道[8-9]?；诖耍狙芯繉⒊醪教接懮浇廴~水提物的急性毒性，為臨床上合理、安全使用山桔葉提供參考。

1材料與方法

1.1材料谷草轉氨酶（aspartate amino transferase，GOT/AST，批號：20220621），谷丙轉氨酶（alanineamino transferase，GPT/ALT，批號：20220615），超氧化物歧化酶（auperooxidedismutase，SOD，批號：20220624），谷胱甘肽過氧化物酶（glutathioneperoxi-dase，GSH-PX，批號：20220704）。

山桔葉采自廣西南寧市伊嶺巖，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室蔡毅教授鑒定為蕓香科植物小花山小橘Glycosmisparviflorae（Sims）Kurz的干燥葉。

1.2儀器BSA224S型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；HWS－26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司）；TGL-16G型高速離心機（上海安亭科學儀器廠）； M200Pro 型連續(xù)波長檢測儀（TECAN帝肯）。

1.3動物KM種小鼠，體重（ 20±2 ）g，雌雄各半，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（湘） 2019-0004 。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫 20～30^°C ，相對濕度 60%～80% 。廣西中醫(yī)藥大學實驗動物中心資質號：SYXK桂 2019-0001 。

1.4方法

1.4.1山桔葉水提液制備取干燥的山桔葉藥材1500g ，加12倍量水煎煮3次，提取時間依次為2h、 ¹h 、1h，提取液濾過合并，減壓濃縮至以灌胃針能通過的最大濃度（ 5.45g 生藥/ ΔmL ）的山桔葉水提濃縮液。

1.4.2小鼠急性毒性實驗預實驗取20只KM種小鼠，體重（ 20±2 ） g ，雌雄各半，隨機分為空白對照組及給藥組，每組10只，給藥前禁食不禁水 ^16h ，給藥組采用最大藥物量（ 5.45g 生藥/mL），按給藥體積 40mL/kg 進行灌胃給藥，空白對照組灌胃等量純水，觀察小鼠的毒性反應癥狀及死亡情況，并連續(xù)觀察 7d 。

1.4.3小鼠最大給藥量（MAD）實驗取40只KM種小鼠，體重（ 20±2 ） g ，雌雄各半，隨機分為空白對照組及給藥組，每組20只，給藥組采用最大藥物量（ 5.45g 生藥/ ），按給藥體積40mL/kg 進行灌胃給藥，空白對照組灌胃等量純水，觀察14d，記錄小鼠行為表現(xiàn)、飲食、外觀、排泄物以及死亡情況，在1d、4d、7d、11d、14d記錄小鼠體重。第14天觀察期結束后摘眼球取血，3000rpm 離心 10min ，取血清檢測AST、ALT、SOD、GSH-PX含量，肉眼觀察主要臟器變化。稱取心、肝、脾、肺、腎臟器濕重，計算臟器指數(shù)，并進行HE染色、組織病理學觀察。臟器指數(shù)（%）= 臟器濕重（g）/小鼠重量 Π（g）×100 。小鼠最大耐受倍數(shù) σ=σ （小鼠的最大給藥量/小鼠的平均體重的） × （成人標準體重/成人用藥劑量）。

1.5統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以均數(shù)加減標準差（ 表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用 χ_t 檢驗， P?0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1小鼠急性毒性實驗預實驗由表1所示，觀察7d ，兩組小鼠均無死亡，小鼠的外觀、攝食攝水、行為活動、呼吸表現(xiàn)等未見異常，無法測出其 LD₅₀ 。

2.2小鼠最大給藥量（MAD）實驗

2.2.1實驗小鼠給藥后一般情況實驗期間，空白對照組的小鼠表現(xiàn)得活潑好動，未發(fā)現(xiàn)任何異常情況，小鼠的肢體靈敏，口腔、鼻子、耳朵和皮膚未有異常分泌物，呼吸平穩(wěn)，毛發(fā)整潔光亮，飲食和排泄情況正常。與空白對照組比較，山桔葉水提物組小鼠未有異?，F(xiàn)象。山桔葉水提物組、空白組小鼠均無死亡情況，

2.2.2山桔葉對小鼠體重的影響由表2 可知，與空白對照組比較，山桔葉水提物組小鼠體重無明顯差異（ Pgt;0.05！ 。

2.2.3山桔葉對小鼠臟器的影響解剖后肉眼觀察，與空白對照組比較，山桔葉水提物組小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟均未見明顯病變。且臟器指數(shù)（心、肝、脾、肺及腎臟）均無顯著性差異（ Pgt;0.05 ），說明在最大給藥量下，山桔葉水提物未對小鼠臟器造成明顯損傷。

2.2.4山桔葉對小鼠生化指標的影響由表4可知，與空白對照組比較，山桔葉水提物組對小鼠血清中AST、ALT、SOD及GSH-PX含量無明顯影響，差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0.05 。

2.2.5小鼠組織病理學觀察如圖1所示，空白對照組小鼠肺臟組織中肺泡完整，肺部上皮，管壁細胞形態(tài)正常、結構完整，管壁厚，未發(fā)現(xiàn)炎癥浸潤。心肌細胞形態(tài)正常、結構緊密，肌肉纖維排列有序，未發(fā)現(xiàn)有炎癥細胞。肝臟整體結構正常，輪廓明顯可見，肝細胞排列緊密、結構完好，細胞核大小、形態(tài)正常，細胞圍繞中央靜脈排列分布形成肝板，肝血竇間隙正常，肝部未見明顯炎癥反應。脾臟中整體結構完整，可見淋巴細胞正常，未有變性，脾小梁和淋巴鞘結構清晰，白髓和紅髓分布明顯，脾臟組織未見明顯炎癥。小鼠腎臟組織可見腎小球和腎小管結構完整，形態(tài)正常，毛細血管無擴張和充血現(xiàn)象，未見明顯炎癥反應。與空白對照組比較，山桔葉水提物組小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟器官組織無異常情況，各器官組織結構完整、形態(tài)正常，未發(fā)現(xiàn)明顯病理學變化、損傷或病變。

a空白組肺臟；b.山桔葉組肺臟；c.空白組心臟；d.山桔葉組心臟；e.空白組肝臟；f.山桔葉組的肝臟；g.空白組脾臟；h.山桔葉組脾臟；i.空白組腎臟；j.山桔葉組腎臟

3討論

急性毒性實驗是指受試動物1次或 24h 內多次染毒后出現(xiàn)毒性反應的實驗[10]。急性毒性試驗是藥物安全性評價的第一步[11-12]，常用方法有半數(shù)致死量（ LD₅₀ ）、最大給藥量（MAD）測定。LD₅₀ 是評價藥物急性毒性實驗的一個重要指標，可有效評價藥物的急性毒性， LD₅₀ 越大，表明該藥物毒性越低[13]。最大給藥量MAD是指在合理的給藥濃度及給藥容量的下，1日內單次或多次（2～3次）允許給予實驗動物的最大給藥劑量，在一定時間內出現(xiàn)的毒性反應[10] 。

山桔葉是廣西常用民間食用的中草藥，在民間有悠久的使用歷史[14]。對于感冒咳嗽，食積脹痛等治療效果良好，且資源豐富，應用前景廣闊。但目前有關其藥理藥效方面研究甚少，且缺乏相關的安全性研究報道。

本研究對山桔葉水提物進行了小鼠急性毒性試驗，預實驗確定無法采用 LD₅₀ 法進行，從而選用了MAD法。實驗結果顯示，以 40mL/kg 對小鼠灌胃濃度為 5.45g （生藥） /mL 山桔葉水提物濃縮液，14d內小鼠未發(fā)現(xiàn)任何異常情況，小鼠的肢體靈敏，口腔、鼻子、耳朵和皮膚沒有異常分泌物，呼吸平穩(wěn)，毛發(fā)整潔光亮，飲食和排泄情況正常，無動物死亡，體重無明顯變化；肉眼觀察小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟均無明顯病變，各主要臟器指數(shù)均無顯著性差異。本實驗以生化檢測指標中AST、ALT、SOD、GSH-PX的活性水平作為衡量指標，評價藥物是否對機體及組織產(chǎn)生病理變化等影響，以及衡量藥物對組織的功能損傷[15-16]，結果表明，血清中 AST、ALT、SOD及GSH-PX含量無明顯影響。動物臟器HE染色組織病理切片可以映射出小鼠的各臟器病理變化與病變程度深淺情況[17]，鏡下觀察顯示，藥后小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟器官組織無異常情況，各器官組織結構完整、形態(tài)正常，未發(fā)現(xiàn)明顯病理學變化、損傷或病變。結果顯示，山桔葉水提物最大給藥劑量為 218g/kg ，實驗劑量相當于 60kg 成人日用劑量的872倍[18-19]，在此劑量下未發(fā)現(xiàn)明顯的急性毒性作用，說明山桔葉通過口服給藥具有較高的安全性。

綜上所述，本研究為山桔葉的安全用藥提供了一定的參考，但其可能還存在慢性毒性或亞慢性毒性，因而對于山桔葉的安全性評價還需進行綜合評價。此外，為進一步開發(fā)利用山桔葉，還需對其化學成分以及藥理藥效等方面進行深入研究。

參考文獻

[1］廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局：廣西壯族自治區(qū)壯藥質量標準（第1卷）［S]．南寧：廣西科學技術出版社，2008：38.

[2」更成就．中國租物志（第43卷弟2分冊）［M」．北京：科學出版社，1997：117－126.

［3］馬雯芳，蔡少芳，趙芯芝，等．小花山小橘葉及莖化學成分初步研究［J]．時珍國醫(yī)國藥，2013，24（2）：336-337.

[4］馬雯芳，朱小勇，蔡毅，等．水蒸汽蒸餾法與超臨界二氧化碳萃取法提取山桔葉揮發(fā)油成分分析［J]．中國醫(yī)院藥學雜志，2013，33（15）：1244－1246.

[5］馬雯芳，朱意麟，賈智若，等．小花山小橘葉、莖揮發(fā)油GC－MS分析［J]．中國實驗方劑學雜志，2013，19（1）：95-98.

[6］姜建萍，侯寧寧，趙航，等．不同處理方法對山桔葉揮發(fā)油成分的影響研究［J]．時珍國醫(yī)國藥，2015，26（8）：1903 -1905.

[7］侯寧寧．山桔葉化學成分及質量標準研究［D]．南寧：廣西中醫(yī)藥大學，2016.

[8］黃麗貞，侯寧寧，馬雯芳，等．山桔葉水提物鎮(zhèn)痛抗炎作用［J]．醫(yī)藥導報，2016，35（3）：233-236.

[9］黃麗貞，侯寧寧，馬雯芳，等．山桔葉醇提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究［J]．華西藥學雜志，2016，31（3）：251 -253.

[10］魏泓．醫(yī)學動物實驗技術［M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2016：74-87.

[11］向蓉，李亞暉，高原，等．牡荊水提物急性毒性與30d喂養(yǎng)試驗研究［J]．中國畜牧獸醫(yī)，2021，48（6）：2262-2270.

[12］韋芊含，雷偉偉，陳昕，等．飼用黃絲藻粉的急性毒性和亞慢性毒性試驗［J]．中國畜牧獸醫(yī)，2020，47（5）：1602-1610.

[13］范文彤．海藻多糖急性毒性試驗考察［J]．中國醫(yī)藥科學，2020，10（23）：77-82.

[14］朱華，蔡毅．中國壯藥原色圖譜［M］．南寧：廣西民族出版社，2002：152.

[15］吳海港，張夢瑤，胡玉妍，等．苦參堿急性毒性試驗及對小鼠血液生理生化指標影響［J]．中國飼料，2020，（23）：40-43.

［16］莫尊匯，陳美先，王鵬程，等．活心丸對小鼠的急性毒性研究［J]．中國藥物警戒，2021，18（10）：924-929.

[17］李韻峰，馬俊峰．影響實驗動物臟器重量及臟器系數(shù)因素分析［J]．畜牧業(yè)環(huán)境，2020（10）：39.

[18］孫旭，李得堂，黃育生，等．補腎致遠片急性毒性實驗研究［J]．今日藥學，2021，31（3）：187－190.

[19］陳奇．中藥藥理研究方法［M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：107－116.