傣藥“雅解沙把”對(duì)金色葡萄球菌誘導(dǎo)大鼠乳腺炎的作用機(jī)制研究

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.6 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007－8517（2025）09－0041-0

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517. 2025.09. zgmzmjyyzz202509010

Study onthe Mechanism of Dai Medicine“Yajie Shaba”in Treating Staphylococcus Aureus-induced Mastitis inRats

LIWenyan1 LIBenfa2 CHEN Wanyil YANG Canru1 HUANG Min *

1.Yunnan UniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650ooo，China；2.Yunnan HospitalofTraditionalChinese Medicine The First Afiliated Hospital of Yunnan Universityof Traditional Chinese Medicine，Kunming 650oooo，China

Abstract：ObjectiveToexplore the efect and mechanismof dai medicine“Yajie Shaba”on Staphylococcus aureus mastitis in rats.Method SDratswererandomlydivided into5groups：blank control group，aureusrat mastitis modelgroup，and“Yajie Shaba”low，medium and high dose group （ 0.3g/kg ， 0.6g/kg ， 0.9g/kg ），and each group had 3mice.After the molding，theblank controlgroupndthemodelgroupwereinfusedwithnormalsaline，andtherestof thegroupwas giventhecorrespondingdoseof“Yajie Shaba”once a day，the changes of CRP， IL-Iβ ， 1L-6 and IL-8 in serum and the pathological changes of breast tissue in each group were observed.Results There wasnobreast massformation intheblank control group，but breastmass formationintheother groups；thehistopathologicalsectionobservedthatthebreastdamagedegreeinthemodelgroupwassignificantlyhigherthanthatofthe low，medium and high dose group；the content of CRP， 1L-1β ， 1L-6 and 1L-8 in the serum of each group was significantly higher than that of the blank control group.After treatment，the expression of CRP， 1L-1β ， 1L-6 and 1L-8 in serum decreased in the experimental group（The changes in the values in the high- dose group were all Plt;0.05 ，the expressions of 1L-1β and IL ^-6 in the middle- dose group were decreased， It was statistically significant， Plt;0.05 ， and the expression of 1L-6 in the low - dose group wasstatistically significant， Plt;0.05 ）.Conclusion“Yajie Shaba”can reduce the inflammation of acute mastitis inrats，and its mechanismofactionmayberelatedtotheibitionofproinflammatoryctokines-I-1β，I-6，I-expresionandtasi cal pathway of" N F "- B "signaling pathway.

KeyWords：Yajie Shaba；Staphylococcus Aureus Mastitis；Acute Mastitis；Dai Medicine；Cytokine

急性乳腺炎（acutemastitis，AM）是常見(jiàn)的一種發(fā)生于產(chǎn)后哺乳期的乳腺疾病，其臨床表現(xiàn)主要為患側(cè)乳腺的紅腫、疼痛、腫塊，部分患者可伴有發(fā)熱等全身癥狀。乳腺膿腫是乳腺炎最常見(jiàn)的并發(fā)癥[1]，乳腺膿腫、破潰可造成乳房外形的不良影響。金黃色葡萄球菌感染是急性乳腺炎的常見(jiàn)病原菌，在運(yùn)用抗生素治療時(shí)有藥性強(qiáng)和多重耐藥等特點(diǎn)，部分抗生素可通過(guò)血乳屏障進(jìn)入乳汁對(duì)嬰兒造成影響，使用時(shí)需中斷哺乳[]。長(zhǎng)期使用抗生素還可造成乳房“僵塊”形成，造成急性乳腺炎遷延難愈，延長(zhǎng)病程的同時(shí)增加患者焦慮、恐慌等不良情緒[3]。因此開(kāi)發(fā)其他安全高效的AM治療方案對(duì)于希望繼續(xù)進(jìn)行規(guī)律哺乳的患者來(lái)說(shuō)意義重大。

傣藥“雅解沙把”是西雙版納傣族自治州傣醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，主要以多種“解藥”配伍而成，包括百樣解、葛根、傣百解、定心藤、大黃藤、奶子藤、白花臭牡丹根等[4]。組方以傣醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，通過(guò)調(diào)平“四塔五蘊(yùn)”功能，清除人體的各種毒素，使人正常的生理功能平衡、協(xié)調(diào)。研究[5-8]表明，“雅解沙把”具有抗炎、保護(hù)肝臟，增強(qiáng)肝臟的解毒能力、清除機(jī)體自由基、降血脂、抗過(guò)敏的作用。譚志剛等通過(guò)口服雅解沙把、外敷擺麻夯（酸角葉）鮮品加歪亮（紅糖）結(jié)合硫酸鎂、青霉素治療急性乳腺炎12例，取得了較好的療效。根據(jù)其明確的抗炎作用，本實(shí)驗(yàn)在“雅解沙把”目前已有的研究基礎(chǔ)上，通過(guò)研究“雅解沙把”對(duì)大鼠金黃色葡萄球菌性乳腺炎的影響，為其治療急性乳腺炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為進(jìn)一步研究其抗炎的作用機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物清潔級(jí)SD雌性大鼠，8周齡，分娩后5～7d ，體質(zhì)量 200～220g ，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司［生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010；使用許可證號(hào)：SYXK（滇）K2020- 0006]。

1.2實(shí)驗(yàn)菌株金黃色葡萄球菌，分離自云南省中醫(yī)醫(yī)院乳腺外科急性乳腺炎患者膿液

1.3實(shí)驗(yàn)藥物 “雅解沙把”（百解膠囊），滇藥制字（Z）20082252K， 0.2g×60 粒/瓶，口服，5粒/次，每日3次，自西雙版納州傣醫(yī)院購(gòu)入。參照人和動(dòng)物的體表面積計(jì)算方法，根據(jù)人每天服用傣藥“雅解沙把”的劑量，計(jì)算出大鼠每天服用“雅解沙把”的劑量，計(jì)算如下：成人體重按照 70kg 計(jì)算，其平均體表面積為 1.73m² ；大鼠體重按照 200g 計(jì)算，其平均體表面積為 305cm² 0面積與體重比成人為 1.73m²/70kg≈0.02471 ，大鼠為 305cm²/200g=1.525 ，大鼠劑量/人的劑量 ≈ 6.2，成人每日服用“雅解沙把”劑量為 3g/70kg ≈0.043g/kg ，則大鼠每日服用“雅解沙把”劑量為 0.043g/kg×6.2≈0.3g/kg ，設(shè)置低劑量為0.3g/kg ，中劑量為 0.6g/kg ，高劑量為 0.9g/kg 。將“雅解沙把”按各組需求量與 1mL 無(wú)菌生理鹽水混勻，在 4^°C 的條件下保存以備使用。

1.4實(shí)驗(yàn)試劑及器材大鼠Elisa試劑盒（欣博盛生物）， 4% 多聚甲醛（廣東光華科技股份有限公司），高速低溫離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）， -80^°C 冰箱（海爾集團(tuán)）， 4^° 冰箱（海爾集團(tuán)），水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），制冰機(jī)（常熟市學(xué)科電器有限公司），電子分析天平（天津精科天平廠），隔水式培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司），高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）， Elx800 酶標(biāo)儀（自帶電腦）（EIx800），紫外分光光度計(jì)（JINGHCLA），電熱恒溫培養(yǎng)箱（紹興昇輝儀器有限公司），掌上離心機(jī)（SCILO-GEX），渦旋混勻儀（武漢賽維爾科技有限公司），20μL 、 200μL 、 1000μL 槍頭（Axygen公司），伊紅染色液（索萊寶），蘇木素（賽維爾）。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1大鼠金黃色葡萄球菌性乳腺炎模型構(gòu)建和分組給藥大鼠飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組（3只/組），即空白對(duì)照組、金黃色葡萄球菌大鼠乳腺炎模型組、雅解沙把低劑量組、雅解沙把中劑量組和雅解沙把高劑量組。

模型構(gòu)建：除空白對(duì)照組，其余大鼠均在麻醉后仰臥并固定于體視顯微鏡下，備皮后用 75% 酒精消毒腹部乳腺及其周?chē)つw。使大鼠第4對(duì)乳腺雙側(cè)乳頭充分暴露，使用無(wú)菌眼科剪將乳頭尖端約 1mm 左右的組織剪除使乳導(dǎo)管露出。使用30G平端針頭 100μL 微量注射器向乳導(dǎo)管灌注金黃色葡萄球菌菌種懸液，每側(cè)注射 100μL ?？瞻捉M和模型組灌胃生理鹽水，其余組給予對(duì)應(yīng)劑量雅解沙把灌胃，每天1次，持續(xù) 14d 。

2.2 相關(guān)指標(biāo)觀察

2.2.1一般指標(biāo)造模前后均對(duì)5組大鼠乳房進(jìn)行觀察及測(cè)量，觀察大鼠癥狀、體征。

2.2.2ELISA分別在治療前造模 24h 后、治療14d后收集并檢測(cè)各組大鼠血液，血液經(jīng)離心后收集上層血清。按Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)定血清CRP、IL-1β、IL-6、IL-8。

2.2.3乳腺組織病理學(xué)檢測(cè)治療 14d 后頸椎脫白處死深麻醉狀態(tài)下的大鼠，消毒后剪開(kāi)大鼠腹部皮膚暴露第4對(duì)乳腺組織，剝離完整的乳腺組織并用 4% 的多聚甲醛浸泡固定 24～48h ，各組標(biāo)本進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋、切片處理制作石蠟切片，經(jīng)蘇木素復(fù)染、伊紅染色等步驟完成HE染色后的切片放置在顯微鏡下，用100倍、400倍放大倍數(shù)觀察其病理變化。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用prism軟件t檢驗(yàn)單因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以 Plt;0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Plt;0.01 為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3結(jié)果

3.1雅解沙把對(duì)大鼠乳腺腫塊的影響造模 24h 后除空白對(duì)照組，其余各組大鼠乳腺均有腫塊，提示造模成功。 14d 后高劑量組腫塊明顯消退，具體如圖1所示。取各組大鼠乳腺腫塊作比較，經(jīng)數(shù)據(jù)分析，模型組腫塊最大，與模型組相比，低、中、高劑量組較小，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體如圖2所示。表明經(jīng)雅解沙把干預(yù)后，大鼠乳房外形呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性恢復(fù)。

3.2雅解沙把對(duì)乳腺炎大鼠乳腺組織影響鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組大鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)；金黃色葡萄球菌大鼠乳腺炎模型組腺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，有大量炎細(xì)胞，漿細(xì)胞聚集，纖維化加重；與雅解沙把高劑量組相比，雅解沙把中劑量組腺泡減少并伴有大量炎癥細(xì)胞、漿細(xì)胞；與雅解沙把高劑量組相比，雅解沙把低劑量組腺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；與雅解沙把低劑量組相比，雅解沙把中劑量組腺泡結(jié)構(gòu)較完好，炎癥細(xì)胞、漿細(xì)胞減少，具體如圖3所示。

3.3雅解沙把對(duì)乳腺炎大鼠血清中CRP、 IL-1β 、IL-6、IL-8的影響結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌大鼠乳腺炎模型組與空白對(duì)照組相比表達(dá)升高（ Plt;0.05， ；治療14d后，雅解沙把高劑量組與模型組相比表達(dá)均降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt; 0.05）；雅解沙把中劑量組與模型組相比表達(dá)均降低， L-1β 、IL-6差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt; 0.05）；雅解沙把低劑量組與模型組相比表達(dá)均降低，IL-6差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05） ；雅解沙把給藥劑量越高，炎性細(xì)胞因子水平下降越明顯。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

4討論

AM是哺乳期婦女的常見(jiàn)疾病，乳汁淤積、病原菌入侵并擴(kuò)散引發(fā)炎癥反應(yīng)是發(fā)病的重要因素，抗生素治療易使局部結(jié)成僵塊，部分抗生素可通過(guò)乳汁對(duì)嬰兒造成潛在影響。處理不及時(shí)還會(huì)形成乳腺膿腫，需外科手術(shù)切開(kāi)排膿，手術(shù)疼痛、術(shù)后護(hù)理及術(shù)后瘢痕均會(huì)給患者帶來(lái)身心壓力。

目前中醫(yī)綜合治療的有效性、安全性和不需中斷哺乳、無(wú)耐藥性的優(yōu)勢(shì)已使其成為治療AM的首選方案，清熱解毒藥是AM乳房紅腫熱痛，全身炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈時(shí)的常用藥[10]。民族醫(yī)藥作為中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的一部分，其有效性已在臨床實(shí)踐中得到了驗(yàn)證，但作用機(jī)理的研究仍具有巨大的空間。“雅解沙把”作為傣醫(yī)學(xué)中的重要解毒藥物，其解熱毒的作用與清熱解毒藥物相契合，并在西醫(yī)學(xué)研究中展示出對(duì)炎癥疾病的治療潛力。方中百樣解、傣百解、大黃藤、葛根、定心藤性寒涼，為主藥，入四塔，具有調(diào)四塔、解百毒、消療瘡之功。臨床中認(rèn)為傣百解具有清熱解毒、消腫止痛的功效，提示其可能具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)生物活性，在傅錦鋒等\"的實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)了傣百解的抗炎作用。有研究[12表明，定心藤具有良好的抗炎作用，且無(wú)細(xì)胞毒性；大黃藤在民間常用于外傷感染，瘡毒引起的慢性潰瘍，其抗炎作用明確，大黃藤的各類(lèi)制劑早已成熟，并已收錄在《中華人民共和國(guó)藥典》中；白花臭牡丹根、奶子藤、甘草性涼，入風(fēng)、火、水、土塔，具有清火解毒的功效，可加強(qiáng)主藥的作用，全方合用，可調(diào)平四塔，清熱解毒[13]。雅解沙把在治療急性乳腺炎方面的有效性及其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

細(xì)胞因子由多種活化的免疫細(xì)胞產(chǎn)生，促炎性細(xì)胞因子的過(guò)度產(chǎn)生導(dǎo)致炎癥。本研究顯示，IL-1β 、IL-6、IL-8在金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的乳腺炎中顯著增加，雅解沙把治療AM的機(jī)制可能涉及降低促炎細(xì)胞因子（如 IL-1β 、IL-6和IL-8）的活性，且有效性呈劑量依賴(lài)性。

CRP是在臨床運(yùn)用廣泛的一種炎癥標(biāo)志物，其水平的升高與機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)的激活密切相關(guān)。當(dāng)機(jī)體被病原體入侵時(shí)，炎癥介質(zhì)釋放和白細(xì)胞活化增加，免疫系統(tǒng)被激活，CRP會(huì)迅速合成并釋放到血液中，激活補(bǔ)體系統(tǒng)并促進(jìn)病原體的清除，當(dāng)炎癥反應(yīng)緩解后，其水平可快速降低。因此CRP對(duì)于感染性疾病診斷、預(yù)后評(píng)估具有一定價(jià)值[14-15] 。

促炎癥細(xì)胞因子 IL-1β 由多種細(xì)胞類(lèi)型（包括巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞）產(chǎn)生，推動(dòng)著炎癥反應(yīng)、促進(jìn)發(fā)熱、細(xì)胞增殖和分化、細(xì)胞黏附和遷移以及組織修復(fù)和重塑等多重作用[16]。 IL-1β 的產(chǎn)生不但介導(dǎo)了炎癥反應(yīng)，而且可能會(huì)對(duì)乳腺的增殖和發(fā)育造成不利影響，故 IL-1β 的降低對(duì)于急性乳腺炎的治療有重大意義[17]

IL-6可參與全身的應(yīng)激和免疫反應(yīng)，促進(jìn)了抗原呈遞、T細(xì)胞激活、急性相蛋白合成，并增加炎癥細(xì)胞遷移，是起到促炎作用、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等分泌的多功能炎性細(xì)胞因子，還能促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白及T細(xì)胞的增殖與分化，與受體結(jié)合后通過(guò)糖蛋白激活酪氨酸蛋白激酶，從而活化絲氨酸/蘇氨酸激酶，促進(jìn)相關(guān)基因活化而催化炎癥反應(yīng)[18]，在IL-6的刺激下CRP合成分泌[19]，本研究中治療后CRP、IL-6均有下降，其中IL-6水平的降低最為敏感，低劑量時(shí)也可明顯降低I-6水平。因此雅解沙把降低大鼠血清CRP可能與降低大鼠血清IL-6水平密切相關(guān)。IL-6是參與在炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后全過(guò)程的重要促炎癥細(xì)胞因子，雅解沙把或可成為以IL-6為靶點(diǎn)治療炎性疾病的藥物。

乳腺上皮細(xì)胞可分泌大量的I-8，誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞（PMN）從血液遷徙到乳腺中，通過(guò)黏附分子CD11/CD18家族與內(nèi)皮細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、內(nèi)皮細(xì)胞間黏附分子-2（ICAM-2）和內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞黏附分子-1（ELAM-1）相結(jié)合，在患側(cè)乳腺充當(dāng)吞噬細(xì)胞，發(fā)揮更強(qiáng)的抑菌效果[20]。IL－8水平升高反映機(jī)體炎癥加重，促進(jìn)病情發(fā)[21] 。

TNF- α 、I-1β、I-6的水平可反映機(jī)體炎癥反應(yīng)程度。金黃色葡萄球菌入侵機(jī)體引起炎癥反應(yīng)主要受 NF-κB 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。 NF-κB 是一種可以參與免疫和炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子。I-1β等促炎細(xì)胞因子信號(hào)出現(xiàn)后，會(huì)和相應(yīng)的胞膜受體結(jié)合， NF-κB 激酶等會(huì)通過(guò)相應(yīng)的膜受體激活[22]。雅解沙把或可通過(guò)抑制 NF-κB 信號(hào)通路的激活來(lái)降低促炎因子的產(chǎn)生，以此對(duì)金黃色葡萄球菌性乳腺炎起到治療作用。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)乳腺腫塊體積、ELisa檢測(cè)血清、病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，使用不同劑量的雅解沙把后，大鼠觀察指標(biāo)較模型組均有改善，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，雅解沙把低、中、高劑量組均有治療效果，治療效果低劑量組 lt; 中劑量組 lt; 高劑量組，效果與給藥劑量呈正比，高劑量組給藥量或可作為雅解沙把治療大鼠金黃色葡萄球菌性乳腺炎的常用量。雅解沙把治療AM的作用機(jī)制可能通過(guò)抑制促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8表達(dá)及NF一 κB 信號(hào)通路經(jīng)典途徑相關(guān)，具體量-效關(guān)系和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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