驢鞭肽輔助修復(fù)SD雄性大鼠性功能損傷作用的研究

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）10-0040-07

DOI： 10.3969/j .issn.1007-8517.2025.10.zgmzmjyyzz202510008

Study on the Effect of Donkey Whip Peptide on the Repair of Sexual Function Injury in SD Male Rats

ZHENG Liping'YAN Yongqiu2YU Xindi2WANG Pengze2MA Yurong'ZHANG Haixin'CUIPengleil*LI Guoming1* 1.BeijingEngineringResearchCenterofProteinandFunctionalPeptides，ChinaNationalResearchIstiuteofFodamp;Fetation Industries，Beijing 10015，China；2.Ningbo Yufangtang Biology Technology Co.，Ltd.，Ningbo 315012，China

Abstract：ObjectiveToinvestigatetherepairefectof donkeywhippeptideonmaleratswithsexualdysfunction.MethodThe amino acidcompositionandmolecular weight distributionofdonkeywhippeptidewere aalyzed.SDratswereselectedtoestablisha maleratmodelofsexualdysfunction.Diferentconcentrationsofdonkeyhippeptidewereusedtointervneinthismodel.Theweight oftheratswasrecorded，andthetesticularandrenalindiceswere measured.Enzymelinkedimmunosorbentassaywasusedtodetect thelevelsofT，LH，andNOintheserumofrats.Tepathologicalmorphologyof kidneyandtestistisuesinratswasobservedby hematoxylin eosin（HE）staining.Results Donkeywhippeptidehasarichvarietyofamino acids，with argininecontentof 7.52% （20 and molecular weight below 1OoO u accounted for 79. 44% .Compared with the model group，the intervention group with donkey whip peptideshowedanincreaseinbodyweight，testicularindex，andrenalindex，aswellasasignificantincreaseinserumlevelsofT， LH，andNO.Thepathological morphologyof thekidneysandtesteswasalsoimproved.ConclusionDonkeywhippeptidehasarich aminoacidcomposition，highnutritonalvalue，andiseasytoabsorb.Itcaniprovethsexualelatedrganindexofatswithexual dysfunction，promotethsecretioofserumeutralelatedfactos，mproveideyandtesticularlsios，andhavetefeofs sisting in repairing sexual dysfunction.

KeyWords：DonkeyWhip Peptide；Sexual Dysfunction；Testosterone；Nitric Oxide；Luteinizing Hormone

男性性功能衰退現(xiàn)已成為常見病癥，如射精功能異常、勃起異常、性欲低下等，嚴(yán)重者會(huì)對生育功能造成影響[1-2]。男性性功能障礙直接影響患者身心健康和生活幸福指數(shù)，開發(fā)有效改善男性性功能障礙的食品原料尤為重要[3-4]。驢鞭作為驢的雄性生殖器官，營養(yǎng)價(jià)值極高，具有滋陰補(bǔ)陽、強(qiáng)筋健骨等功效，《本草綱目》言其“強(qiáng)陰壯筋”，《四川中藥志》言其“滋腎壯陽，治陽痿不舉，筋骨酸軟及腎囊現(xiàn)冷”[5]。食源性低聚肽是由2＼～20個(gè)氨基酸殘基組成的小分子多肽，在食物中常被發(fā)現(xiàn)并參與多種生理功能，且這種小分子肽具有更好的生物活性，便于人體吸收[6-7]。驢鞭肽作為在驢鞭中提取出的食源性低聚肽，在輔助修復(fù)男性性功能損傷方面具有巨大潛力，目前對于驢鞭肽輔助修復(fù)男性性功能損傷功能的研究較少，因此本研究以驢鞭肽為研究對象，探討其氨基酸組成及分子質(zhì)量分布情況，建立SD雄性大鼠性功能損傷模型，研究驢鞭肽對模型鼠的睪丸指數(shù)、腎臟指數(shù)，血清中T、LH、NO含量，睪丸及腎臟病理形態(tài)等的影響，為驢鞭肽的開發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)，為其在補(bǔ)腎壯陽產(chǎn)品中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與儀器6周齡SPF級健康雄性SD大鼠體重（ 220±20 ） g ，斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，注射用環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），西地那非（美國Sigma公司），NO測定試劑盒（北京盒子生物科技有限公司），游離睪酮測定試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司），促黃體生成素測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

SpectraMaxRiD5型多功能酶標(biāo)儀（美國Mo-lecularDevices公司）；ZS-MV-IA大鼠吸入麻醉機(jī)（北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司）；LAT-MMB-2EVC大鼠飼養(yǎng)系統(tǒng)（北萊艾特科技發(fā)展有限公司）；3K-15型冷凍離心機(jī)（德國Sigma公司）；L-8900日立全自動(dòng)氨基酸分析儀［天美（中國）科學(xué)儀器有限公司]；G560E渦旋振蕩器[東方化玻（北京）科技有限公司]；SI-114電子天平（美國DenverInstrument公司）；Formo，995，651L超低溫冰箱（美國賽默飛世爾科技公司）；BX53電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（德國耶拿分析儀器股份公司）。

1. 2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1驢鞭肽的制備取驢鞭制備勻漿，酶解后使用陶瓷膜過濾，將得到的產(chǎn)物進(jìn)行濃縮和進(jìn)一步的活性炭過濾，經(jīng)噴霧干燥后即得到驢鞭肽粉（本文簡稱“驢鞭肽”）。

制備流程：驢鞭 $$ 勻漿 $$ 酶解 $$ 濃縮 $$ 均質(zhì) $$ 滅菌 $$ 噴霧干燥 $$ 驢鞭肽

1.2.2理化指標(biāo)測定依據(jù)GB5009.3－2016《食品中水分的測定》、GB5009.4－2016《食品中灰分的測定》、GB5009.5－2016《食品中蛋白質(zhì)的測定》、GB/T22492－2008《大豆肽粉》檢測驢鞭肽中的水分、灰分、蛋白質(zhì)和肽含量。

1.2.3氨基酸組成分析和分子質(zhì)量分布測定氨基酸組成分析：依據(jù) GB/T5009.124-2003 《食品中氨基酸的測定》4方法，采用 L-8900 日立全自動(dòng)氨基酸分析儀對驢鞭肽中的氨基酸組成進(jìn)行測定。分子質(zhì)量分布占比測定：將樣品用流動(dòng)相溶解后并經(jīng)孔徑 0.2μm 聚四氟乙烯過濾膜過濾，然后通過高效液相色譜儀進(jìn)行測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品的分子質(zhì)量分布范圍，利用峰面積歸一化法計(jì)算得出分子質(zhì)量分布占比。

1.2.4大鼠分組飼養(yǎng)和模型制備將50只SD雄性大鼠動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，自由進(jìn)食進(jìn)水，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（ 23±2）^eC ，濕度 50%～60% ，明暗交替 12h：12h 。將大鼠隨機(jī)分為5組，分別為：空白對照組、模型組、陽性對照組、樣品低劑量組、樣品高劑量組?？瞻讓φ战M每天腹腔注射生理鹽水，其余組每天腹腔注射環(huán)磷酰胺，注射體積保持一致，持續(xù)5d，建立性功能損傷模型，之后其他各組每周補(bǔ)注射一次環(huán)磷酰胺（ 40mg/kg ）以維持模型。

1.2.5給藥干預(yù)模型建立成功后，空白對照組和模型組每天灌胃飲用水，陽性對照組每天灌胃5mg/kg 的西地那非陽性藥物，樣品低劑量組每天灌胃 0.3g/kg 驢鞭肽，樣品高劑量組每天灌胃0.6g/kg 驢鞭肽，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及灌胃量見下表1。持續(xù)灌胃6周，期間每周對每只鼠進(jìn)行稱重，用以記錄干預(yù)期間大鼠體質(zhì)量的變化。

1.2.6 指標(biāo)檢測

1.2.6.1腎臟和睪丸指數(shù)大鼠末次灌胃處理后，禁食不禁水 ^12h ，稱量并記錄體質(zhì)量，用于計(jì)算器官指數(shù)；摘取眼球進(jìn)行眼眶取血后處死大鼠，采集腎臟和睪丸，并對腎臟和睪丸進(jìn)行稱重記錄。計(jì)算公式如下[8-9]：

1.2.6.2 血清指標(biāo)檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠血清中T、LH、NO。

1.2.6.3腎臟、睪丸組織病理學(xué)檢測采用HE染色法制備大鼠腎臟和睪丸組織切片，于顯微鏡下觀察組織病理形態(tài)變化。

1.3數(shù)據(jù)處理采用 SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，GraphPadPrism9繪制圖形。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)誤（mean Ω_±SEM ）表示， N=3 ，采用單因素方差分析（one-wayANOVA）對不同實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1理化性質(zhì)根據(jù)國標(biāo)對驢鞭肽的各理化性質(zhì)進(jìn)行檢測得到結(jié)果見表2。

由表2可知，驢鞭肽蛋白質(zhì)含量高，水分和灰分含量低，適合作為低聚肽的提取原料。

2.2驢鞭肽的氨基酸組成和分子質(zhì)量分布通過全自動(dòng)氨基酸分析儀的分析，得到驢鞭肽的氨基酸組成；通過高效液相色譜儀進(jìn)行測定得出驢鞭肽分子質(zhì)量分布。結(jié)果見表3、表4和圖1。

由表3可知，驢鞭肽中含有7種人類必需氨基酸以及組氨酸和精氨酸（半必需氨基酸），其中精氨酸占比 8.51% 。研究[10-13]表明，精氨酸作為NO合成的底物，能通過上調(diào)NO含量，促進(jìn)精子的合成，且具有較的高營養(yǎng)價(jià)值，有預(yù)防腎相關(guān)疾病、改善心血管疾病和增強(qiáng)免疫力等諸多功效，因此推測驢鞭肽可能具有改善性功能損傷的效果。

人體攝入的蛋白質(zhì)多以短肽的形式被吸收，且短肽的相對分子質(zhì)量通常低于 1000u^[14] 。由表4和圖1結(jié)果可知， 79.40% 的驢鞭肽分布于 1000u 以下，這表明驢鞭肽中的肽大多以小分子肽的形式存在，較易被人體吸收。

2.3性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)過程中體質(zhì)量的變化性功能的損傷會(huì)對大鼠緊造成緊張、焦慮、食欲不振等負(fù)面影響[15」，性功能狀態(tài)的損傷程度在體重上會(huì)有一定體現(xiàn)。用藥干預(yù)期間各組大鼠每周體重情況以及體重增加量如圖2和圖3所示：模型組與空白對照組相比，體重增長緩慢，用藥期間的體重增加量顯著低于空白對照組，陽性對照組以及樣品組的體重增長情介于空白對照組和模型組之間；體重增加量低于空白對照組，高于模型組，且均具有顯著性［本研究采用單因素檢驗(yàn)法進(jìn)行多重分析，同一柱形圖中標(biāo)注的不同小寫字母表示組間差異顯著（ Plt;0.05 ）]。

2.4性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后器官指數(shù)的變化性器官的壯大程度與性激素的分泌情況密切相關(guān)，性激素分泌越多，越刺激性器官發(fā)育壯大，腎臟指數(shù)、辜丸指數(shù)和胸腺指數(shù)能反映出藥物在激素分泌方面的作用，常用于判定樣品是否具有改善性功能的效果[16-17]。腎臟指數(shù)、睪丸指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化情況如圖4中（a）（b）和（c）所示：模型組的腎臟指數(shù)、辜丸指數(shù)和胸腺指數(shù)都顯著低于空白對照組，陽性對照組和樣品組的腎臟指數(shù)顯著高于模型組，其水平趨近于空白對照組，樣品組的睪丸指數(shù)和胸腺指數(shù)高于模型組，但無顯著性差異。

2.5性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后血清中睪酮含量的變化睪酮由睪丸間質(zhì)細(xì)胞在酶的作用下進(jìn)行合成，其含量與性功能密切相關(guān)，其含量高低能體現(xiàn)出大鼠性功能的強(qiáng)弱[18-19]。驢鞭肽干預(yù)后各組血清中睪酮含量如圖5所示：模型組血清中睪酮的含量顯著低于空白對照組和陽性對照組，說明模型組大鼠因性功能損傷，睪酮分泌能力下降；驢鞭肽樣品組的睪酮含量顯著高于模型組和空白對照組，樣品高低劑量組之間無顯著差異，說明受試樣品的攝人促進(jìn)了性功能損傷大鼠辜酮的分泌，具有增強(qiáng)大鼠性功能的作用，在一定劑量范圍內(nèi)與劑量相關(guān)性不高。

2.6性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后血清中NO含量的變化NO能夠調(diào)節(jié)性相關(guān)因子的合成，促進(jìn)血液泵入海綿竇引起陰莖勃起，NO的生物活性受損是引起性功能障礙的發(fā)病機(jī)制之一[20-21]。通過對干預(yù)后大鼠血清中NO含量的比較可以表明樣品對大鼠陰莖勃起功能的影響[15]。驢鞭肽干預(yù)后各組大鼠血清中NO的含量如圖6所示：模型組的NO的含量顯著低于空白對照組，說明模型組大鼠因性功能損傷，NO水平下降；陽性對照組以及樣品組的NO水平顯著高于模型組，樣品高低劑量組之間無顯著差異，說明因陽性藥物、樣品的攝入，性功能損傷大鼠血清中NO的水平提高，陽性藥物和受試樣品均具有修復(fù)大鼠性功能損傷的作用，在一定劑量范圍內(nèi)與劑量相關(guān)性不高。

2.7性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后血清中LH含量的變化LH由下丘腦-垂體合成，作用于辜丸間質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)睪酮的分泌[22-24]。LH的含量在一定程度上可以反映樣品對大鼠睪酮生成能力的影響。驢鞭肽干預(yù)后各組大鼠血清中LH的含量如圖7所示：模型組LH含量顯著低于空白對照組；說明模型組大鼠因性功能損傷，LH水平下降；陽性對照組和樣品組LH含量高于模型組，樣品高劑量組LH含量高于樣品低劑量組，均無顯著性差異，說明樣品對于性功能損傷大鼠血清中LH含量的影響較小。

2.8性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后腎臟組織病理形態(tài)的變化腎臟健康狀況與性功能狀態(tài)密切相關(guān)，腎主生殖，袁青等[25]認(rèn)為男子性功能障礙多與腎精虛損有關(guān)。腎臟病理切片可以反映出性功能的損傷情況。驢鞭肽干預(yù)后各組大鼠腎臟病理切片如圖8所示：空白對照組腎臟結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列緊密，腎小球無病變。模型組大鼠腎臟腎小管縮小，出現(xiàn)空泡且伴隨局灶性節(jié)段性腎小球硬化，腎小球毛細(xì)血管叢部分玻璃樣變，有明顯炎癥浸潤；說明模型組大鼠因性功能損傷，腎臟發(fā)生病變。陽性對照組無極顯著病變，高劑量組與陽性相差不大，腎小管上皮細(xì)胞液泡變性降低，腎小球只有極輕微變形，低劑量組相較于模型組有改善，腎小球大小形態(tài)接近正常組，腎小管較明顯擴(kuò)大和空泡；說明陽性藥物以及受試樣品均具有改善性功能損傷大鼠腎臟的病變狀況，驢鞭肽在一定程度上可以改善性功能損傷大鼠的腎臟病理形態(tài)。

2.9性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后睪丸組織病理形態(tài)的變化睪丸作為主要生殖器官，其病理形態(tài)可直觀反映鼠的性功能狀況；驢鞭肽干預(yù)后各組大鼠睪丸病理切片如圖9所示：空白對照組睪丸細(xì)胞形態(tài)大小正常，類肌細(xì)胞包裹性好，各級精細(xì)胞生長狀態(tài)良好，生精小管排列整齊，細(xì)胞狀態(tài)充盈飽滿。模型組睪丸細(xì)胞中生精小管排列雜亂，數(shù)量稀少，細(xì)胞內(nèi)空腔較大，細(xì)胞形態(tài)較干癟，支持細(xì)胞較小，各級精母細(xì)胞儲(chǔ)備較少；說明大鼠因性功能損傷，睪丸發(fā)生了顯著病變。陽性對照組細(xì)胞狀態(tài)與空白對照組類似，低劑量組與模型組相比略有恢復(fù)，生精小管排列較為整齊，類肌細(xì)胞脫落，睪丸間質(zhì)與生精小管間有較大空隙，高劑量組睪丸細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)較好，睪丸間質(zhì)中有少量空泡，基本與空白對照組相同；說明陽性藥物以及受試樣品均具有改善性功能損傷大鼠睪丸的病變狀況，驢鞭肽在一定程度上可以改善性功能損傷大鼠的睪丸病理形態(tài)。

3結(jié)論

驢鞭肽的氨基酸組成豐富，營養(yǎng)價(jià)值高且利于吸收，具有改善性功能的潛力。性功能損傷大鼠在驢鞭肽干預(yù)后，體質(zhì)量和性器官指數(shù)下降的情況得以改善，同時(shí)驢鞭肽在一定程度上能提高血清中T、NO以及LH等性相關(guān)因子的含量，表明驢鞭肽能起到改善大鼠性功能損傷情況的作用。通過對腎臟和睪丸組織的病理切片觀察對比發(fā)現(xiàn)，驢鞭肽能改善性功能障礙大鼠性器官的損傷情況，進(jìn)一步證實(shí)了驢鞭肽具有改善大鼠性功能障礙的效果。本研究為驢鞭肽的開發(fā)以及其在功能性食品上的利用提供了一定的理論支持。

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