• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法結合自動解卷積技術分析葛根中的揮發(fā)性成分

    2019-07-05 02:13:18張鵬云陳麗斯林淑綿
    食品科學 2019年12期
    關鍵詞:總峰葛根揮發(fā)性

    張鵬云,李 蓉*,陳麗斯,林淑綿,楊 芳,張 峰

    (1.中山出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心,廣東 中山 528400;2.廣東藥科大學公共衛(wèi)生學院,廣東 中山 528458;3.中國檢驗檢疫科學研究院食品安全研究所,北京 100176)

    葛根(Pueraria Radix)是豆科植物野葛(P. lobata Willd. Ohwi)的干燥根,主要種植于我國河南、河北、湖南、遼寧、廣東、浙江等地[1]。葛根含有豐富的淀粉、膳食纖維、糖類等物質(zhì),還含有多種黃酮類化合物,如大豆素、葛根素、黃豆苷、葛根素木糖苷等[2-3]?!渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載其味甘、辛,涼。歸脾、胃、肺經(jīng)。有解肌退熱,生津止渴,透疹,升陽止瀉,通經(jīng)活絡,解酒毒等功效[4]。現(xiàn)代藥理學研究表明,葛根具有改善心腦血管疾病、降血糖、降血脂、抗腫瘤、解酒等作用,在臨床上可用于治療高血壓、心絞痛、冠心病、偏頭疼、糖尿病、腸道病變等疾病[5-6]。

    目前國內(nèi)外對葛根的研究與開發(fā)主要集中在葛根多糖[7]、葛根素[8]、異黃酮類化合物提取[9]等方面,而對其揮發(fā)性化學成分的研究鮮有報道。為更好開發(fā)利用葛根,本研究采用頂空固相微萃取的方式,直接萃取葛根樣品中的揮發(fā)性成分,然后利用氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測分析。與傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法相比,頂空固相微萃取技術具有簡單便捷、靈敏度高、節(jié)約成本、無需溶劑等優(yōu)點[10],能夠更加真實地反映出樣品中的揮發(fā)性成分,在揮發(fā)性物質(zhì)分析中具有顯著優(yōu)勢。由于色譜的分離能力有限,一些結構、極性相似的組分色譜峰會發(fā)生部分或完全重疊,此時按照常用的NIST譜庫檢索方法無法得到準確的匹配結果[11]。而自動質(zhì)譜退卷積定性系統(tǒng)(automated mass spectral deconvolution and identification system,AMDIS)能夠對揮發(fā)性物質(zhì)的總離子流圖進行自動解卷積處理,可以提取未知組分更“純凈”的質(zhì)譜圖,此時再通過譜庫檢索結合保留指數(shù)來匹配化合物[12-13],使定性結果更加準確。

    本研究以葛根為研究對象,采用頂空固相微萃取技術結合氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜對其揮發(fā)性成分進行檢測,并對其萃取條件進行優(yōu)化,并利用AMDIS和保留指數(shù)對各組分進行定性分析。該方法自動化程度高、操作簡單、快速、結果準確可靠,可為葛根的進一步研究與開發(fā)提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    葛根干藥材(產(chǎn)自廣西) 中山市中智大藥房連鎖有限公司;正構烷烴混合標準品(C7~C40) 美國O2si公司。

    1.2 儀器與設備

    TSQ 8000氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(配電子電離源及Xcalibur數(shù)據(jù)處理系統(tǒng))、TRIPLUS RSH自動進樣器、20 mL頂空樣品瓶、固相微萃取自動進樣手柄美國Thermo公司;50/30 μm二乙基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷(divinylbenzene/carboxen/polydimethylsiloxane,DVB/CAR/PDMS)固相微萃取頭 美國Supelco公司。

    1.3 方法

    1.3.1 頂空固相微萃取

    準確稱取葛根碎塊3.0 g置于20 mL頂空瓶中(配有聚四氟乙烯墊的螺紋密封蓋),自動進樣器將頂空瓶放在具有一定溫度的孵化爐中平衡數(shù)分鐘后,將已老化的50/30 μm DVB/CAR/PDMS固相微萃取頭迅速插入樣品瓶頂空部分進行熱吸附,然后將吸附后的萃取頭插入氣相色譜進樣口,在250 ℃條件下進行解吸,進入氣相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)進行分離檢測。

    1.3.2 氣相色譜-質(zhì)譜檢測條件

    色譜條件:TR-PESTICIDE彈性石英毛細柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);升溫程序:初始溫度40 ℃,保持1.0 min,然后以5 ℃/min的速率升溫至200 ℃,保持2 min,再以15 ℃/min的速率升溫至250 ℃并保持2.0 min;分流比10∶1;進樣口溫度250 ℃;載氣為99.999%高純度氦氣;流速1.2 mL/min。

    質(zhì)譜條件:電子電離源;離子源溫度280 ℃;傳輸線溫度280 ℃;電子能量70 eV;掃描方式為全掃描;質(zhì)量掃描范圍m/z 35~400。

    1.3.3 揮發(fā)性成分計算

    在單因素試驗和正交試驗中,扣除總離子流圖中的雜質(zhì)和柱流失的峰后,對揮發(fā)性物質(zhì)的峰進行積分,再利用軟件導出到Excel表格中,得到各條件下的葛根揮發(fā)性物質(zhì)的總峰面積和峰數(shù)目。

    應用AMDIS對葛根中揮發(fā)性物質(zhì)總離子流圖自動進行反卷積處理,所分辨的質(zhì)譜在NIST 2.2標準譜庫中檢索,根據(jù)匹配度、保留指數(shù)和文獻已報道物質(zhì)進行核對,只選擇正匹配和反匹配均大于800的物質(zhì),并用峰面積歸一化法計算葛根各揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量。

    保留指數(shù)是C7~C40正構烷烴混標在和葛根樣品相同的分析條件下進樣后,AMDIS根據(jù)正構烷烴的保留時間,自動計算出各揮發(fā)性組分的保留指數(shù)。

    1.3.4 單因素試驗

    頂空固相微萃取法的萃取效果受萃取時間、萃取溫度、平衡時間、解吸時間、樣品體積等條件的影響[14],本研究在預實驗基礎上,選取揮發(fā)性物質(zhì)的總峰面積和峰數(shù)目為考察指標,比較不同萃取溫度、平衡時間、萃取時間、解吸時間對葛根揮發(fā)性物質(zhì)萃取效果的影響,并確定優(yōu)化參數(shù)。

    在預實驗的基礎上,稱取葛根碎塊3.0 g,放入20 mL頂空瓶中,并使用50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭在萃取時間30 min、平衡時間10 min、解吸時間5 min的條件下,考察不同萃取溫度(50、60、70、80、90 ℃)的萃取效果,每個樣品重復3 次;在確定萃取溫度的基礎上,研究不同平衡時間(4、7、10、13、16 min)的萃取效果,其余條件不變,每個樣品重復3 次;在確定萃取溫度、平衡時間的基礎上,研究不同萃取時間(30、40、50、60 min)的萃取效果,其余條件不變,每個樣品重復3 次;在最佳條件下,研究不同解吸時間(3、5、7、9 min)的萃取效果,其余條件不變,每個樣品重復測定3 次。

    1.3.5 正交試驗設計

    在單因素試驗結果基礎上,平衡時間固定為13 min,選擇萃取溫度、萃取時間和解吸時間3 個影響因素,利用SPSS 19.0設計3因素3水平正交試驗,優(yōu)化試驗參數(shù),L9(34)正交試驗設計如表1所示。

    表1 正交試驗因素與水平Table 1 Factors and coded levels used in orthogonal array design

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)統(tǒng)計和圖像處理采用Microsoft Excel軟件完成。根據(jù)1.3.3節(jié)得到各條件下葛根揮發(fā)性組分的總峰面積和峰數(shù)目,計算各條件下3 次平行實驗結果的總峰面積,結果以±s表示。

    2 結果與分析

    2.1 單因素試驗結果

    2.1.1 萃取溫度對萃取效果的影響

    圖1 萃取溫度對葛根揮發(fā)性成分萃取效果的影響Fig. 1 Effect of extraction temperature on the recovery of volatile compounds from Pueraria Radix

    如圖1所示,隨著萃取溫度的升高,葛根揮發(fā)性物質(zhì)的總峰面積和峰數(shù)目都不斷增加。當溫度超過70 ℃時,總峰面積先急劇升高后緩慢增加;而峰數(shù)目在50~70 ℃時上升趨勢顯著,超過70 ℃時,變化不大。這說明,當萃取溫度到達80 ℃時,葛根中的絕大部分揮發(fā)性物質(zhì)已經(jīng)揮發(fā)出來,并被萃取頭吸附。這是因為揮發(fā)性物質(zhì)在低溫條件下?lián)]發(fā)速度慢,達到動態(tài)平衡所需時間長;而當溫度升高時加快了揮發(fā)性組分的運動速率,促進了萃取頭對目標物的富集吸附[15-16]。但是高溫下低沸點組分在與高沸點化合物的競爭吸附中處于劣勢地位,使得部分低沸點化合物流失[17]。另外,高溫還可能使部分揮發(fā)性化合物發(fā)生變性或裂解[16]。綜合考慮,本研究選擇萃取溫度為80 ℃。

    2.1.2 平衡時間對萃取效果的影響

    圖2 平衡時間對葛根揮發(fā)性成分萃取效果的影響Fig. 2 Effect of equilibration time on the extraction of volatile compounds from Pueraria Radix

    葛根中的揮發(fā)性物質(zhì)在氣相中達到平衡所需要的時間即為平衡時間[18]。如圖2所示,隨著平衡時間的延長,揮發(fā)性成分的總峰面積先不斷增大后減小,在13 min時達到了最大值。當延長平衡時間時,揮發(fā)性組分的數(shù)目先緩慢增加后略有減少,在13 min時達到最高值,總體差異不明顯。由此表明,當平衡時間為13 min時,揮發(fā)性物質(zhì)在氣相中達到了較平衡的狀態(tài),萃取效果穩(wěn)定,有利于萃取頭吸附。所以本研究將平衡時間設定為13 min。

    2.1.3 萃取時間對萃取效果的影響

    圖3 萃取時間對葛根揮發(fā)性成分萃取效果的影響Fig. 3 Effect of extraction time on the recovery of volatile compounds from Pueraria Radix

    頂空固相微萃取是一個動態(tài)平衡過程,當分析物在萃取頭、頂空和樣品3 相中達到平衡時的萃取效果最好,所需時間即為萃取時間[19]。由圖3可知,隨著萃取時間的延長,總峰面積呈先增加后降低的趨勢,而峰數(shù)目變化不大。當萃取時間達到50 min時,總峰面積和峰數(shù)目均達到最大值,說明此時揮發(fā)性物質(zhì)達到較平衡狀態(tài),萃取頭處于飽和吸附狀態(tài);當萃取時間超過50 min時,總峰面積和峰數(shù)目均有減小的趨勢,萃取效果降低。這是由于隨著萃取時間的延長,揮發(fā)性物質(zhì)逐漸在3 相中達到平衡狀態(tài),然后被萃取頭吸附。萃取時間過短時,揮發(fā)性化合物被吸附不充分;萃取時間過長時,已經(jīng)被萃取頭吸附的組分可能逸出,出現(xiàn)解吸附現(xiàn)象,大大降低了萃取效果[20]。綜合考慮,本研究選擇萃取時間為50 min。

    圖4 解吸時間對葛根揮發(fā)性成分萃取效果的影響Fig. 4 Effect of desorption time on the recovery of volatile compounds from Pueraria Radix

    2.1.4 解吸時間對萃取效果的影響

    在同一解吸溫度下,解吸時間的長短與揮發(fā)性物質(zhì)從萃取頭固定相中的解吸程度直接相關。當解吸時間短,揮發(fā)性組分解吸不完全時,不但影響方法的靈敏度,還會使后續(xù)樣品分析受到污染[21];反之,當解吸時間過長時,雖然待測組分能夠完全解吸,但是會導致峰形變寬,高溫下部分組分發(fā)生氧化,并且影響萃取頭的使用

    壽命[15-16,22]。從圖4可以看出,隨著解吸時間的延長,揮發(fā)性組分的總峰面積和峰數(shù)目均呈先增加后減小的趨勢,且在5 min時均達到最大值。說明此時,揮發(fā)性組分已解吸完全,再延長時間反而會因為損害萃取頭、峰形寬等原因降低萃取效率。因此,本研究選擇解吸時間為5 min。

    2.2 正交試驗結果

    表2 正交試驗設計及結果Table 2 Results and analysis of orthogonal array experiments

    如表2所示,由直接觀察分析可知最佳組合參數(shù)為4號方案即A3B2C2,而從極差結果來看,當以總峰面積作為萃取效果的考察指標時,3 個因素對萃取效果的影響程度為A>B>C,即萃取溫度影響最大,萃取時間和解吸時間影響次之,較優(yōu)組合為A3B2C2;當以峰數(shù)目為指標時,較優(yōu)組合同樣為A3B2C2,因素主次為A>B>C。因此,在本研究中,對于不同的考察指標,3 個因素對萃取效果的影響大小順序相同,均為A>B>C,且直接分析與極差分析結果一致。因此,最終確定頂空固相微萃取法萃取葛根揮發(fā)性成分的較優(yōu)條件為:萃取溫度90 ℃、平衡時間13 min、萃取時間50 min、解吸時間5 min。

    2.3 較優(yōu)條件下葛根揮發(fā)性成分分析

    根據(jù)正交試驗優(yōu)化后的頂空固相微萃取條件,對葛根揮發(fā)性成分進行萃取并檢測分析,其揮發(fā)性物質(zhì)成分的總離子流圖見圖5,揮發(fā)性組分及相對含量如表3所示。

    圖5 葛根揮發(fā)性物質(zhì)的總離子流圖Fig. 5 Total ion chromatogram of volatile compounds in Pueraria Radix

    表3 葛根的揮發(fā)性成分Table 3 Volatile components identification from Pueraria Radix

    續(xù)表3

    由表3可知,在較佳條件下葛根揮發(fā)性成分總離子流圖共分離得到91 種組分,并鑒定出其中67 種成分,占揮發(fā)性物質(zhì)總量的88.91%,包括烯烴類、醛類、酯類、醇類、酮類及其他類化合物。其中,相對含量最高的為酯類,有11 種,占揮發(fā)性物質(zhì)總量的26.05%;其次為醛類22 種(22.16%),醇類9 種(13.85%),酮類5 種(5.59%),萜烯類8 種(2.88%)。另外相對含量從高到底排名前10的依次為廣藿香醇(9.72%)、十六酸乙酯(7.63%)、大茴香腦(6.61%)、糠醛(5.93%)、亞油酸乙酯(4.80%)、醋酸(4.28%)、7,10-十八碳二烯酸甲酯(3.70%)、十六酸甲酯(3.64%)、己醛(3.60%)和2-正戊基呋喃(3.58%),占揮發(fā)性成分總量的53.49%。

    從表3可以看出,酯類化合物是葛根的主要香氣成分,其中十六酸乙酯的相對含量最高(7.63%),呈微弱蠟香、果爵和奶油香氣;其次為亞油酸乙酯(4.80%),具有臘腸風味。

    醛類化合物一般具有良好的風味,也是本研究中葛根樣品的主要呈香物質(zhì)。其中,壬醛、己醛、苯甲醛、癸醛、庚醛等化合物具有青草香、花香和水果的甜味[23];反-2-辛烯醛、正辛醛等呈黃瓜和柑橘樣香氣[24];而2-甲基丁醛具有獨特的可可和咖啡香氣[24]。這些酮類物質(zhì)可能來源于氨基酸與葡萄糖發(fā)生降解反應所產(chǎn)生。

    葛根中的醇類呈香物質(zhì)主要為廣藿香醇(9.72%),具有較淡的廣藿香香氣;而苯乙醇具有柔和、愉快而持久的玫瑰香氣[16],相對含量為0.37%;1-辛烯-3-醇和α-松油醇分別呈現(xiàn)出蘑菇香味和樟腦氣味[21],相對含量分別為0.15%和0.09%。

    酮類物質(zhì)具有令人愉快的檸檬草香、奶香、果香等氣味,少數(shù)具有油脂氣息[23]。而相對含量較高的醚類化合物大茴香腦(6.61%)具有茴香的特殊氣味,味甜。這些具有風味的化合物構成了葛根的主要揮發(fā)性成分,對這些芳香物質(zhì)進行檢測能夠反映葛根產(chǎn)品的品質(zhì),并為葛根產(chǎn)品的鑒定和評價提供參考。

    另外本研究檢測到的檸檬烯具有抗腫瘤、抗氧化應激、抗炎等生理活性,臨床上可以用于溶解膽結石、緩解胃灼熱等治療[25];大茴香腦具有暖胃、健胃、驅寒、消炎、止痛等作用,還可當作增香劑用于糖果、牙膏、飲料等產(chǎn)品中[26];據(jù)陳曉盈[27]研究報道β-廣藿香烯具有抗炎、抗急性肺損傷的作用;廣藿香醇具有抗炎、抑制多種真菌無性繁殖的作用[28];α-松油醇對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等常見病原菌具有一定的殺滅作用[29],還具有抗痙攣[30]、抗炎[31]等作用。

    本研究鑒定出葛根揮發(fā)性組分與其他文獻報道有一定差異。李耀華等[32]采用水蒸氣蒸餾法提取四川、湖南、廣西3 個產(chǎn)地葛根中揮發(fā)油,并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測各產(chǎn)地葛根揮發(fā)油組分,結果顯示3 個產(chǎn)地葛根揮發(fā)油分別鑒定出20、24、21 種組分且含量最高的均為亞油酸。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn),本研究鑒定出的葛根揮發(fā)性成分遠多于上述文獻報道,說明該檢測方法和定性分析手段具有顯著的優(yōu)越性。

    3 結 論

    本研究通過單因素試驗和正交試驗確定頂空固相微萃取法提取葛根揮發(fā)性成分的較佳參數(shù)為:稱取葛根碎塊3.0 g,放入20 mL頂空瓶中,并使用50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭在90 ℃條件下平衡13 min,萃取50 min,最后在進樣口解吸5 min。

    采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對較佳條件下萃取的葛根揮發(fā)性物質(zhì)進行檢測,并利用AMDIS和保留指數(shù)對其組分進行定性分析,最終鑒定出67 種化合物。其中,相對含量最高的為酯類(26.05%),其次為醛類(22.16%)、醇類(13.85%)、酮類(5.59%)、萜烯類(2.88%)等,對這些揮發(fā)性化合物進行檢測能夠反映葛根產(chǎn)品的品質(zhì)。該方法自動化程度高、操作簡單、定性更加準確、結果更加可靠,為葛根品質(zhì)的鑒定和評價提供了有力支持,也為葛根產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了理論基礎。該方法也可以應用到其他藥食同源植物揮發(fā)性成分檢測分析中,為控制藥食同源產(chǎn)品質(zhì)量,促進藥食同源產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了科學支持。

    猜你喜歡
    總峰葛根揮發(fā)性
    迷迭香精油在不同蒸餾時段的化學成分及抗氧化活性
    中成藥(2022年10期)2022-12-04 09:52:12
    鈰基催化劑在揮發(fā)性有機物催化燃燒治理中的研究進展
    分子催化(2022年1期)2022-11-02 07:11:20
    藥食兩用話葛根
    頸椎病良方葛根湯
    頂空固相微萃取葡萄酒揮發(fā)性物質(zhì)的條件優(yōu)化
    中國釀造(2020年6期)2020-08-02 10:06:20
    揮發(fā)性有機物污染環(huán)保治理新思路的探討
    響應面法優(yōu)化以SPME-GC-MS技術萃取人參花揮發(fā)性成分工藝的研究
    Self-Consistent Sources Extensions of Modified Differential-Difference KP Equation?
    總峰面積對糖化血紅蛋白結果的影響及其2種方法的比較*
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定水中18種揮發(fā)性有機物
    侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久精品国产清高在天天线| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品影院久久| 少妇 在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久久国产一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 1024视频免费在线观看| 十八禁网站免费在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产高清激情床上av| 美女大奶头视频| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品在线美女| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产激情欧美一区二区| av网站在线播放免费| 亚洲九九香蕉| 国产精品国产av在线观看| 亚洲三区欧美一区| 一二三四在线观看免费中文在| 老司机深夜福利视频在线观看| 一级毛片高清免费大全| 国产在线精品亚洲第一网站| 黑人猛操日本美女一级片| 久9热在线精品视频| 亚洲五月色婷婷综合| 精品一区二区三区av网在线观看| 成人18禁在线播放| xxx96com| 黄色丝袜av网址大全| 精品久久久久久成人av| 女人被狂操c到高潮| 99riav亚洲国产免费| 麻豆国产av国片精品| 亚洲国产精品合色在线| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲视频免费观看视频| 欧美日韩乱码在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线播放国产精品三级| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美乱妇无乱码| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲熟妇熟女久久| 男人的好看免费观看在线视频 | 变态另类成人亚洲欧美熟女 | www日本在线高清视频| 色哟哟哟哟哟哟| 一区福利在线观看| 久久精品影院6| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费观看精品视频网站| 999久久久精品免费观看国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线观看66精品国产| 三上悠亚av全集在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 波多野结衣av一区二区av| 岛国视频午夜一区免费看| 香蕉丝袜av| 日韩有码中文字幕| 久久午夜综合久久蜜桃| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 黄色片一级片一级黄色片| 久久伊人香网站| 国产精品永久免费网站| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 十八禁网站免费在线| 国产精品久久视频播放| www.精华液| 色播在线永久视频| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久人人精品亚洲av| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久久久久精品吃奶| 国产成人欧美在线观看| 精品久久久精品久久久| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 免费av毛片视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 极品人妻少妇av视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 热re99久久精品国产66热6| 美女大奶头视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 怎么达到女性高潮| 一级黄色大片毛片| 国产真人三级小视频在线观看| 日本黄色日本黄色录像| www.www免费av| 桃红色精品国产亚洲av| 黄片大片在线免费观看| 老司机福利观看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久久久久久中文| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 超色免费av| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美日韩精品网址| 一区二区日韩欧美中文字幕| 日韩人妻精品一区2区三区| 少妇的丰满在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 久久久久久人人人人人| 十八禁网站免费在线| 中亚洲国语对白在线视频| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久热这里只有精品99| 欧美成人性av电影在线观看| 日韩欧美在线二视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美在线黄色| 国产精品av久久久久免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 激情在线观看视频在线高清| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产区一区二久久| 免费日韩欧美在线观看| av欧美777| 1024视频免费在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一夜夜www| 国产精品 欧美亚洲| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 国产精品 欧美亚洲| 9热在线视频观看99| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人亚洲精品av一区二区 | 国产免费现黄频在线看| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久草成人影院| 国产精品一区二区免费欧美| 免费不卡黄色视频| 另类亚洲欧美激情| av在线播放免费不卡| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲国产精品sss在线观看 | 女警被强在线播放| 桃红色精品国产亚洲av| 久久亚洲真实| 久久九九热精品免费| 免费不卡黄色视频| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产一区二区三区视频了| 亚洲精品一二三| 在线观看午夜福利视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲色图av天堂| 久久狼人影院| 这个男人来自地球电影免费观看| 成人影院久久| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜影院日韩av| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品久久蜜臀av无| 又黄又粗又硬又大视频| 国产不卡一卡二| 51午夜福利影视在线观看| 日本免费a在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av有码第一页| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品久久久av美女十八| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产亚洲欧美精品永久| 老司机在亚洲福利影院| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 超色免费av| 人人澡人人妻人| 亚洲精品国产区一区二| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | av电影中文网址| 99久久人妻综合| 十八禁网站免费在线| 一区在线观看完整版| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美日韩亚洲高清精品| 色综合站精品国产| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 最好的美女福利视频网| 亚洲九九香蕉| 在线播放国产精品三级| 不卡一级毛片| 久久久久久大精品| av网站在线播放免费| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 人人澡人人妻人| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日韩人妻精品一区2区三区| 色婷婷av一区二区三区视频| 一级a爱视频在线免费观看| 免费av毛片视频| 日韩欧美免费精品| 日本三级黄在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 两性夫妻黄色片| 怎么达到女性高潮| 嫩草影视91久久| 日本免费a在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 免费在线观看影片大全网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久精品国产综合久久久| 久久人人精品亚洲av| 男女下面插进去视频免费观看| 一进一出抽搐动态| 激情在线观看视频在线高清| 在线天堂中文资源库| www.www免费av| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲自拍偷在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲欧美激情在线| 免费高清视频大片| 最近最新中文字幕大全免费视频| 9色porny在线观看| 韩国精品一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 国产高清videossex| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久精品影院6| x7x7x7水蜜桃| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美一级毛片孕妇| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品一区二区免费欧美| 99国产精品一区二区三区| 日韩免费av在线播放| 十八禁网站免费在线| 满18在线观看网站| 亚洲精华国产精华精| 热99re8久久精品国产| 人人澡人人妻人| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产免费现黄频在线看| 中文欧美无线码| 91老司机精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 1024香蕉在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美激情久久久久久爽电影 | 男女午夜视频在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品一区二区在线不卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 一a级毛片在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久人妻av系列| 国产三级在线视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲中文av在线| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 波多野结衣高清无吗| 国产伦人伦偷精品视频| 中文字幕高清在线视频| 国产精品二区激情视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲精品在线观看二区| 国产成人av教育| 成人特级黄色片久久久久久久| 一夜夜www| 人人澡人人妻人| 国产一区在线观看成人免费| 精品久久久久久电影网| 国产高清视频在线播放一区| 黄片大片在线免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 黑丝袜美女国产一区| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜免费观看网址| 欧美中文综合在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 9色porny在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 女人被狂操c到高潮| 悠悠久久av| 一级,二级,三级黄色视频| 一本综合久久免费| 亚洲人成77777在线视频| 两个人看的免费小视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 性欧美人与动物交配| 成人av一区二区三区在线看| 超色免费av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产亚洲精品久久久久5区| 脱女人内裤的视频| 深夜精品福利| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 欧美成人午夜精品| 久久亚洲真实| 日韩精品中文字幕看吧| 精品免费久久久久久久清纯| 国产熟女xx| 成年人免费黄色播放视频| 久久影院123| 精品一区二区三卡| 少妇的丰满在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美日韩视频精品一区| 日本黄色视频三级网站网址| 日韩大码丰满熟妇| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人精品久久二区二区91| 色播在线永久视频| 日本黄色日本黄色录像| 人人澡人人妻人| 国产精品久久久人人做人人爽| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品一区av在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲五月色婷婷综合| 久久人妻熟女aⅴ| 在线观看免费高清a一片| 欧美黄色片欧美黄色片| xxx96com| 99精品欧美一区二区三区四区| 免费av中文字幕在线| 亚洲国产精品sss在线观看 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 黄色片一级片一级黄色片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲在线自拍视频| 神马国产精品三级电影在线观看 | 性色av乱码一区二区三区2| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲专区字幕在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| a在线观看视频网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产亚洲精品一区二区www| 国产av在哪里看| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲少妇的诱惑av| av有码第一页| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产激情欧美一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲一区二区三区不卡视频| avwww免费| 最近最新免费中文字幕在线| 久久伊人香网站| 久热爱精品视频在线9| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久亚洲真实| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 女性被躁到高潮视频| 啦啦啦免费观看视频1| 久久99一区二区三区| 天堂影院成人在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久亚洲精品不卡| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 丝袜美足系列| 久久人人97超碰香蕉20202| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久久国内视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 91在线观看av| 午夜免费成人在线视频| 亚洲九九香蕉| 99久久综合精品五月天人人| 手机成人av网站| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 搡老乐熟女国产| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 青草久久国产| 国产人伦9x9x在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产熟女xx| 男女下面进入的视频免费午夜 | 男人舔女人的私密视频| 国产精品二区激情视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品高清国产在线一区| 午夜影院日韩av| 久久久久久久精品吃奶| 两性夫妻黄色片| 多毛熟女@视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产1区2区3区精品| 免费看a级黄色片| 男女之事视频高清在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 在线永久观看黄色视频| 桃红色精品国产亚洲av| 脱女人内裤的视频| 精品人妻1区二区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美大码av| 好男人电影高清在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一级片'在线观看视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜福利免费观看在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日韩有码中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 午夜两性在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久久国产成人免费| 久久国产精品人妻蜜桃| 999久久久国产精品视频| 久久中文字幕一级| 黄色丝袜av网址大全| 午夜视频精品福利| 久久久国产精品麻豆| www国产在线视频色| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 黄色视频不卡| 最新在线观看一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| a级片在线免费高清观看视频| 99在线视频只有这里精品首页| 国产熟女xx| 国产精品国产av在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产成人精品久久二区二区91| 高潮久久久久久久久久久不卡| 午夜免费成人在线视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级毛片女人18水好多| 91成人精品电影| 91国产中文字幕| 麻豆一二三区av精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 性欧美人与动物交配| 亚洲精品国产区一区二| 大型av网站在线播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 涩涩av久久男人的天堂| 满18在线观看网站| 真人做人爱边吃奶动态| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 黄色a级毛片大全视频| 91成人精品电影| 桃红色精品国产亚洲av| 黑人操中国人逼视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 热99re8久久精品国产| 一二三四在线观看免费中文在| 90打野战视频偷拍视频| 在线播放国产精品三级| 村上凉子中文字幕在线| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| av有码第一页| 国产成人av激情在线播放| 亚洲美女黄片视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲午夜理论影院| 国产一卡二卡三卡精品| 女人被狂操c到高潮| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丝袜人妻中文字幕| 香蕉久久夜色| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美一区二区精品小视频在线| 桃红色精品国产亚洲av| 免费日韩欧美在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 午夜免费鲁丝| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人手机av| 757午夜福利合集在线观看| 免费在线观看完整版高清| 国产片内射在线| 一级a爱片免费观看的视频| 99香蕉大伊视频| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 手机成人av网站| 久久久久久大精品| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品久久久av美女十八| 操出白浆在线播放| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品免费久久久久久久清纯| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 啦啦啦免费观看视频1| 69精品国产乱码久久久| 午夜福利影视在线免费观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜福利,免费看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | svipshipincom国产片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 久久中文字幕人妻熟女| 免费av中文字幕在线| 超碰97精品在线观看| 一夜夜www| 亚洲国产中文字幕在线视频| 波多野结衣高清无吗| 人成视频在线观看免费观看| 色综合婷婷激情| 另类亚洲欧美激情| 99香蕉大伊视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 99国产精品免费福利视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲 国产 在线| 一级片免费观看大全| 久久 成人 亚洲| 三上悠亚av全集在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 大型黄色视频在线免费观看| 在线永久观看黄色视频| 操美女的视频在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| av视频免费观看在线观看| 两性夫妻黄色片| 日韩国内少妇激情av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 日韩欧美在线二视频| 国产99白浆流出| а√天堂www在线а√下载| 黑人操中国人逼视频| 另类亚洲欧美激情| 精品久久久久久电影网| 动漫黄色视频在线观看| 久久九九热精品免费| 水蜜桃什么品种好| 成年人免费黄色播放视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 无遮挡黄片免费观看| 麻豆av在线久日| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中出人妻视频一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美成狂野欧美在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲精品成人av观看孕妇| 在线观看午夜福利视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久久久久久午夜电影 | 亚洲成人国产一区在线观看| 99久久国产精品久久久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 十八禁网站免费在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲视频免费观看视频| www国产在线视频色| 天堂俺去俺来也www色官网| 视频在线观看一区二区三区| 日韩免费高清中文字幕av| 国产一区二区三区综合在线观看| 怎么达到女性高潮| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久国产成人精品二区 | 国产黄a三级三级三级人| 日韩欧美在线二视频| 精品电影一区二区在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 一本综合久久免费| 18禁国产床啪视频网站| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲精品在线美女| 最近最新免费中文字幕在线| 热re99久久国产66热| 99国产精品免费福利视频| 校园春色视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 桃色一区二区三区在线观看|