• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    電感耦合等離子體質譜法分析海蟹中的砷元素分布特征

    2019-07-05 02:13:32梅光明常家琪張小軍孟春英
    食品科學 2019年12期
    關鍵詞:海蟹青蟹無機

    嚴 國,梅光明*,常家琪,張小軍,顧 捷,孟春英

    (1.浙江海洋大學食品與醫(yī)藥學院,浙江 舟山 316021;2.浙江省海洋水產研究所,浙江 舟山 316021;3.浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室,浙江 舟山 316021)

    砷(As)是自然界中廣泛分布的一種重要的類金屬元素,可與肌體細胞中的酶結合,使許多酶失活,造成代謝障礙[1]。自然界中的砷元素通常由地表徑流等方式進入海水中,又通過食物鏈在海產品富集,因此海產品攝入成為人體暴露砷元素的主要途徑之一[2-3]。海產品中的砷分為無機砷和有機砷兩大類,其中無機砷主要指砷酸根(arsenate,As(V))和亞砷酸根(arsenite,As(III)),有機砷主要指一甲基砷(monomethyl arsenic acid,MMA)、二甲基砷(dimethyl arsenic acid,DMA)、砷甜菜堿(arsenobetaine,AsB)、砷膽堿(arsenocholine,AsC)、砷糖和砷脂等[4]。砷的生物毒性不僅與其總含量相關,更大程度上與其存在的形態(tài)種類相關[5],以半致死量(LD50)計,毒性依次為As(III)>As(V)>MMA>DMA>AsB>AsC[6-7]。無機砷是砷元素化合物致畸、致癌及致突變的主要來源,有機砷通常被認為是低毒或者無毒的,海產品中砷化合物的含量較高,但主要以無毒或低毒的AsB和砷糖的形式存在[4]。

    目前砷形態(tài)分析的方法主要有高效液相色譜-原子熒光光譜(high performance liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry,HPLC-AFS)法[8-10]、高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜(high performance liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spectrometry,HPLC-ICP-MS)法[11-14]以及毛細管電泳-ICP-MS法[15-17]等。HPLC-ICP-MS因結合了HPLC的高效分離性能和ICP-MS的超強元素分析能力,具有線性范圍寬、檢出限低、靈敏度高且干擾少等優(yōu)點,已成為目前砷形態(tài)分析最有力的方法,廣泛應用于食品[3,14,18-19]、藥品[20-21]、環(huán)境[22-23]中砷化合物的測定。GB 5009.11—2014《食品中總砷及無機砷的測定》[24]中第一法HPLC-AFS法最多只能測定As(III)、As(V)、MMA和DMA這4 種砷形態(tài)分析物,不能測定AsB等(因其無法轉化成含砷的氣態(tài)氫化物而被AFS測定)。該標準中的第二法使用HPLC-ICP-MS測定了5 種砷形態(tài),但在實際樣品中也很難將AsB和DMA分開,嚴重影響二者定性和定量準確性要求。海蟹因具有味道鮮美、低脂肪、高蛋白等優(yōu)點,深受消費者喜愛,但同時作為一種營養(yǎng)級別較高的甲殼類海產生物,其富集砷元素能力較強,已有文獻中有關不同品種海蟹及蟹體不同組織中砷元素的分布特征的研究報道較少。本實驗運用優(yōu)化后的ICP-MS法對4 種海蟹(青蟹、三疣梭子蟹、日本鱘和細點圓趾蟹)及其不同組織(蟹肌肉、蟹鉗肉、蟹鰓、肝胰腺和性腺)中的砷元素分布特征進行測定,為海蟹砷污染風險評估及消費者食用建議提供參考依據。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    青蟹、三疣梭子蟹、日本鱘和細點圓趾蟹均購于浙江省舟山市超市或集貿市場,按照GB/T 30891—2014《水產品抽樣規(guī)范》[25]處理后作為待測樣品。

    AsB溶液標準物質(GBW 08670)、MMA溶液標準物質(GBW 08668)、DMA溶液標準物質(GBW 08669)、As(V)溶液標準物質(GBW 08667)、As(III)溶液標準物質(GBW 08666) 中國計量科學研究院;砷單元素標準溶液(1 000 μg/mL,GSB04-1714-2004) 國家有色金屬及電子材料分析測試中心;扇貝粉(GBW10023)和紫菜粉(GBW10050)生物成分分析標準物質 地球物理地球化學勘查研究所;金槍魚組織中砷形態(tài)標準物質(BCR-627) 歐洲標準局。

    (NH4)2CO3、NH4H2PO4、(NH4)2HPO4(均為色譜純)德國Sigma公司;甲醇、正己烷(均為色譜純) 德國Merck公司;硝酸(優(yōu)級純) 美國J.T.Baker公司;過氧化氫、氨水(均為分析純) 國藥集團化學試劑有限公司;質譜調諧液(10 μg/L Ce、Co、Li、Tl、Y)、內標液(100 μg/mL Bi、Ge、In、Li、Lu、Rh)美國Agilent公司;實驗用水為Milli-Q制備超純水(電阻率≥18.2 MΩ·cm)。

    1.2 儀器與設備

    AcquityTMH-class超高效液相色譜儀 美國Waters公司;7900型ICP-MS儀 美國Agilent公司;Centrifuge 5810高速離心機 德國Eppendorf公司;MS2旋渦混合器德國IK公司;AL204型電子天平 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司;超聲清洗機 寧波海曙科生超聲設備有限公司;pH計 德國Sartorius公司;ETHOS 1型微波消解儀 意大利Milestone公司。

    1.3 方法

    1.3.1 溶液配制

    砷形態(tài)物標準儲備溶液:將5 種不同形態(tài)砷(AsB、MMA、DMA、As(III)、As(V))的標準物質溶液取適量分別準確轉移至5 mL容量瓶中,用超純水分別定容至5 mL,其質量濃度分別為14.72、9.54、22.17、28.78、6.88 μg/mL,于4 ℃避光保存,備用。

    砷形態(tài)物混合標準使用液:分別準確移取5 種不同形態(tài)砷(AsB、MMA、DMA、As(III)、As(V))的標準儲備溶液340、524、226、174、727 μL于5 mL容量瓶中,用超純水容至5 mL,使各組分質量濃度均為1.0 μg/mL,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    砷形態(tài)標準曲線系列:分別準確移取砷形態(tài)物混合標準使用溶液50、100、250、500 μL用流動相定容至5 mL,使標準溶液質量濃度為10、20、50、100 μg/L,現(xiàn)用現(xiàn)配。

    砷單元素標準曲線系列溶液:將1 000 μg/L砷單元素標準溶液用1%硝酸溶液逐級稀釋到1.0、5.0、10.0、30.0、50.0、100.0、300 μg/L,超純水定容至5 mL備用。

    硝酸溶液(0.15 mol/L):準確量取10 mL硝酸,溶于水并稀釋至1 000 mL。

    (NH4)2CO3溶液(50 mmol/L):稱取2.450 3 g(精確至0.000 1 g)(NH4)2CO3,溶于500 mL水中,用氨水調節(jié)pH 9.5,經0.45 μm水相濾膜過濾后超聲脫氣30 min,備用。

    1.3.2 樣品前處理

    1.3.2.1 總砷測定前處理

    準確稱量0.5 g(精確至0.000 1 g)均質后的待測螃蟹樣品于聚四氟乙烯消解罐中,依次加入6.0 mL硝酸、2.0 mL過氧化氫溶液,搖勻后加蓋放置過夜,使樣品進行預消解。次日將消解罐放入微波消解系統(tǒng)中,設置適宜的微波消解程序(表1),按照相關消解步驟進行消解。消解完畢后,180 ℃于趕酸架上加熱趕酸至1~2 mL,冷卻至室溫后用超純水定容至50 mL,采用ICP-MS上機測定。同時做試劑空白實驗,采用扇貝粉和紫菜粉作為質控樣進行結果質量控制。

    表1 微波消解程序Table 1 Microwave digestion procedure

    1.3.2.2 砷形態(tài)前處理

    準確稱量均質后的待測樣品0.5~1.0 g(精確至0.000 1 g)于50 mL離心管中,加入20 mL 0.15 mol/L硝酸溶液,3 000 r/min渦旋1 min,置于氣浴恒溫振蕩器中,在50 ℃、150 r/min過夜振蕩提取,提取完畢后次日取出,冷卻至室溫,3 000 r/min渦旋30 s,6 000 r/min離心8 min。移取5 mL上清液于15 mL離心管中,加入正己烷3 mL,3 000 r/min渦旋1 min后再6 000 r/min離心8 min,棄去正己烷層。吸取下層清液,經0.22 μm水相濾膜過濾后上HPLC-ICP-MS分析。按相同操作方法做試劑空白實驗,同時檢測BCR-627標準物質進行結果質量控制。

    1.3.3 方法

    1.3.3.1 總砷含量測定

    表2 ICP-MS工作參數(shù)Table 2 Working parameters of ICP-MS

    使用1.0 μg/L Ce、Co、Li、Tl、Y的調諧液在線優(yōu)化ICP-MS各項參數(shù),使分辨率和靈敏度等各項儀器性能達到最佳??偵楹繙y定時采用1.0 μg/mL89Y溶液在線加入內標,用于校正儀器響應信號強度的變化。優(yōu)化后ICPMS的主要參數(shù)見表2。將砷元素標準曲線系列溶液從低濃度到高濃度依次于ICP-MS中進樣,測定相應的信號值。以標準溶液質量濃度為橫坐標、信號強度(CPS計數(shù))為縱坐標繪制標準曲線,外標法定量,測定4 種海蟹及其不同部位中總砷含量。

    1.3.3.2 砷形態(tài)測定

    色譜條件:Dionex IonPac As19陰離子交換柱(250 mm×4 mm,10 μm)及保護柱(50 mm×4 mm);進樣量50 μL;樣品室溫度10 ℃,柱溫40 ℃;流動相為50 mmol/L、pH 9.5的(NH4)2CO3溶液;等度洗脫;流速1.0 mL/min。

    質譜條件:瞬時信號采集模式,其他參數(shù)見表2所示。

    1.4 數(shù)據統(tǒng)計與分析

    采用Origin 9.1和Excel 2007軟件對數(shù)據進行處理并作圖,實驗數(shù)據取平行實驗的均值。

    2 結果與分析

    2.1 總砷含量測定

    選用GBW10050紫菜粉和GBW10023扇貝粉作為質控樣品進行總砷測定的結果質量控制,質控樣標準值、測定值和相對標準偏差見表3。結果顯示2 種質控樣品的總砷測定值都在標準值范圍內,說明采用的ICP-MS測定方法準確度高、精密度好。

    表4為4 種海蟹及其不同組織中總砷含量的測定結果:從平均值進行比較,除蟹腮、殼后的整蟹中總砷測定值依次為細點圓趾蟹(4.75 mg/kg)<青蟹(6.18 mg/kg)<三疣梭子蟹(10.52 mg/kg)<日本鱘(16.80 mg/kg);同一品種的海蟹分組織部位來看,總砷含量均值基本都呈現(xiàn)出性腺(雌)>肝胰腺>蟹胸肌肉>蟹鉗肉>蟹鰓的變化趨勢。后續(xù)進一步對來自同一個樣品的分部位總砷測定值進行分析,也呈現(xiàn)出同樣的規(guī)律。結果表明海蟹是高富集砷海洋生物,性腺和肝胰腺是海蟹富集砷的主要部位。我國國家標準規(guī)定水產動物及其制品(魚類及制品除外)無機砷含量小于0.5 mg/kg[26],158 個海蟹總砷含量為0.37~35.81 mg/kg,因此有必要對海蟹中砷進行形態(tài)分析。

    表4 4 種海蟹及其組織中總砷含量的測定Table 4 Determination of total arsenic in four sea crabs

    2.2 海蟹中砷形態(tài)測定條件優(yōu)化

    2.2.1 色譜條件的優(yōu)化

    2.2.1.1 色譜柱的選擇

    分別采用Waters SpherisorbSAX色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)、Hamilton PRP-X100陰離子交換柱(250 mm×4.1 mm,10 μm)和Dionex IonPac As19陰離子交換柱(250 mm×4 mm,10 μm)對20 μg/L的6 種砷化合物的混合標準溶液進行分離。在嘗試多種流動相組成和梯度洗脫程序下,結果發(fā)現(xiàn):Waters SpherisorbSAX色譜柱分離出現(xiàn)干擾峰多且目標物響應值均較低(圖1A);使用Hamilton色譜柱進行分離發(fā)現(xiàn),AsB和As(III)不能很好分離(圖1B);Dionex IonPac As19對AsC和AsB不能達到基線分離(圖1C)。3 種色譜柱都很難實現(xiàn)6 種砷形態(tài)物的色譜峰完全分離。已有較多的文獻表明水產品中砷元素多以AsB存在和少量的無機砷存在,AsC基本未檢出,并且因無機砷毒性最強,As(III)、As(V)是水產品中必檢參數(shù),因此水產品砷元素形態(tài)分析檢測中必須實現(xiàn)AsB和無機砷的分離。因此最終選擇AsB、MMA、DMA、As(III)、As(V)這5 種砷形態(tài)為研究對象,采用Dionex IonPac As19色譜柱在6 min內將5 種砷形態(tài)完全分開(圖2),且峰形尖銳,響應值高,用時短且分離效果好。

    圖1 不同色譜柱分離6 種砷形態(tài)色譜圖Fig. 1 Chromatograms of six arsenic species on different columns

    圖2 Dionex IonPac As19色譜柱分離5 種砷形態(tài)色譜圖Fig. 2 Chromatograms of five arsenic species on Dionex IonPac As19 column

    2.2.1.2 流動相的選擇

    在選定的Dionex IonPac As19色譜柱下,實驗對比表5中常用的5 種流動相對5 種砷形態(tài)的洗脫效果。結果顯示,序號4中流動相為pH 6.0的25 mmol/L NH4H2PO4溶液時,AsB不能得到有效洗脫,且和DMA不能完全分離;序號1、2、3、5洗脫條件下,5 種不同砷形態(tài)化合物均能洗脫分離,但序號2條件下,分離效果最好,且使用等度洗脫條件,可以減少梯度洗脫需要的柱平衡時間,提高分析速度,6 min內5 種砷形態(tài)化合物全部洗脫且完全分離(圖2)。通過單標定性,5 種不同化合物洗脫順序依次為AsB、DMA、As(III)、MMA、As(V)。

    表5 洗脫條件的選擇Table 5 Gradient elution program of mobile phase

    2.2.1.3 樣品提取劑的選擇

    目前,常見的樣品中砷形態(tài)提取劑有水、甲醇-水(1∶1,V/V)、0.15 mol/L硝酸溶液、20 mmol/L乙酸銨溶液等。水作為提取劑時一般對基質簡單的樣品進行提取,如大米等。甲醇-水為提取劑時,能夠較好避免形態(tài)間的轉化,使化合物保持自身形態(tài)[27-28],但甲醇含量過高時會降低無機砷的提取效率和樣品測定時的靈敏度,且有機相中的碳易在ICP-MS截取錐孔處富集堆積縮短錐使用壽命和影響測定結果[3]。以HPLC-ICP-MS法測定的BCR-627金槍魚標準物質中的AsB、DMA含量與質控樣標準值的比值作為提取率來比較上述4 種溶劑的提取效果。如圖3所示,采用0.15 mol/L硝酸溶液和20 mmol/L乙酸銨溶液作為提取劑,對AsB和DMA的提取率最好,均大于70%,且0.15 mol/L硝酸溶液提取效率最佳,AsB、DMA平均提取率分別為89.7%和83%,因此選擇0.15 mol/L硝酸溶液作為海蟹樣品中砷形態(tài)測定的提取劑。

    2.2.2 質譜條件的優(yōu)化

    2.2.2.1 質譜檢測模式的選擇

    實驗考察No Gas標準模式和He模式下,5 種砷化合物分析的響應值。結果表明在No Gas標準模式下,每種砷化合物響應均是He模式的20 倍左右,且沒有出現(xiàn)目標物干擾峰(圖4)。陳紹占等[20]在分析牛黃解毒片暴露后大鼠血清中砷形態(tài)時,也同樣對兩種模式下5 種砷形態(tài)化合物檢出限高低以及對40Ar35Cl+、75As檢測信號的影響發(fā)現(xiàn),標準模式下檢出限較低且標準模式下產生的干擾峰不影響5 種砷化合物的測定。因此本實驗選擇標準模式進行5 種砷形態(tài)化合物的檢測。

    圖4 質譜檢測模式對砷形態(tài)物測定響應信號強度的影響Fig. 4 Effect of mass spectrometric test mode (He collision and No Gas mode) on signal response of arsenic species

    2.2.2.2 補償氣流量的選擇

    在使用標準模式下,進一步考察載氣流量和補償氣流量的最適值(圖5),結果表明當載氣流量為1.05 mL/min,補償氣為0 mL/min時,響應最高。陸奕娜等[29]對海產品中砷形態(tài)化合物測定時發(fā)現(xiàn),補償氣為0 mL/min時,儀器靈敏度最佳且對雙電荷及氧化物的干擾最小,本實驗選擇不使用補償氣。

    圖5 No Gas模式下Ar流速對砷形態(tài)物測定響應信號強度的影響Fig. 5 Effect of Ar velocity on signal response of arsenic species in No Gas mode

    2.3 砷形態(tài)方法學驗證

    2.3.1 方法檢出限及線性范圍

    分別配制0、10、20、50、100、300 μg/L系列砷化合物混合標準溶液,在上述優(yōu)化后的一系列實驗條件下進行分析。結果表明在0~300 μg/L范圍內,5 種砷化物的響應色譜峰面積值與質量濃度呈良好的線性關系,相關系數(shù)均大于0.998。以實際樣品測定后計算色譜圖中各目標物的峰響應信噪比(RSN),得出各砷形態(tài)物的檢出限(RSN=3)為0.008~0.014 mg/kg,定量限(RSN=10)為0.025~0.055 mg/kg(表6)。

    表6 測定曲線線性關系及方法檢出限與定量限Table 6 Calibration equations, LODs and LOQs for arsenic species

    2.3.2 方法的準確度和精密度驗證

    準確稱量BCR-627金槍魚組織中砷形態(tài)標準物質0.5 g,其中含AsB參考值為(3.9±0.225)mg/kg,DMA含量參考值為(0.15±0.022 5)mg/kg。按照本實驗方法進行的6 次平行測定結果為:AsB含量范圍為3.794~4.056 mg/kg,DMA測定值范圍為0.132 8~0.167 4 mg/kg,相對標準偏差分別為4.2%和4.6%,均在參考值范圍內。同時采用加標回收率實驗進一步驗證本方法的準確度和精密度。準確稱取青蟹肌肉樣品18 份,分別添加3 種不同質量濃度的AsB、DMA、MMA、As(III)、As(V)5 種砷化合物混合標準溶液,使得樣品添加量分別為0.40、1.00、2.00 mg/kg,每個梯度下設置6 個平行實驗,進行加標回收實驗,計算添加回收率和相對標準偏差,同時做樣品本底值測定。如表7所示,在高、中、低3 個加標水平下,5 種不同砷形態(tài)物加標回收率在70.0%~105.0%之間,相對標準偏差均小于5%,滿足分析檢測要求,進一步證實了本方法測定結果準確性好、精密度高。

    表7 青蟹肌肉樣品中5 種砷形態(tài)物的添加回收率測定(n=6)Table 7 Spike recoveries of five arsenic species in muscle of Scylla serrata (n= 6)

    2.3.3 海蟹樣品中砷形態(tài)分析

    圖6 青蟹肌肉中5 種砷化合物色譜圖Fig. 6 Chromatograms of five arsenic species in muscle of S. serrata

    表8 4 種海蟹及其組織中砷化合物測定結果Table 8 Average concentrations of total arsenic and arsenic species in whole sea crabs and their tissues

    運用HPLC-ICP-MS法測定4 種海蟹(青蟹、細點圓趾蟹、三疣梭子蟹和日本鱘)158 個樣品及其不同組織部位中砷形態(tài)分布特征。測定色譜圖及數(shù)據結果分別見圖6和表8所示,4 種海蟹樣品測定色譜圖類似,均以AsB含量最高,其次是DMA和MMA,As(III)和As(V)僅在少量樣品有檢出;整蟹(除腮、殼后)及其不同部位樣品中AsB占總砷含量的60.9%~99.4%,4 種海蟹AsB平均含量值依次為細點圓趾蟹<青蟹<三疣梭子蟹<日本鱘,同一品種的海蟹中AsB平均含量值性腺(雌)>肝胰腺>蟹胸肌肉>蟹鉗肉>蟹鰓,呈現(xiàn)的趨勢與總砷含量一致。結果表明海蟹雖作為砷高富集品種,但主要以有機砷AsB為主,無機砷含量較低,158 個海蟹樣品整蟹及分組織測定無機砷含量均值在0~0.12 mg/kg范圍內,均未超過國家食品安全標準對水產動物的無機砷限值(0.5 mg/kg)要求。AsB其結構類似甜菜堿,LD50大于10 000 mg/kg,被視為無毒的有機砷形態(tài)[5,30],在人體內不能進行代謝,直接被排出體外,通常認為不會危及人體健康[6,31],因此海蟹雖然作為砷元素高富集生物,但無機砷含量較低,食用海蟹帶來的無機砷健康風險較低。

    3 結 論

    采用優(yōu)化后的ICP-MS法和HPLC-ICP-MS法分別測定了青蟹、三疣梭子蟹、日本鱘和細點圓趾蟹4 種常見海蟹中總砷及砷形態(tài)物分布特征。結果顯示海蟹是砷高富集水產品,158 個蟹類樣品中總砷含量范圍為0.37~35.81 mg/kg;整蟹及分組織進行砷形態(tài)物測定數(shù)據表明海蟹體內以毒性較低的AsB為主,AsB占其總砷含量的60.9%~99.4%,158 個海蟹樣品無機砷含量均值在0~0.12 mg/kg;從分品種及同一品種下分組織部位的測定結果來看,總砷含量和AsB的測定均值基本都呈現(xiàn)出品種上細點圓趾蟹<青蟹<三疣梭子蟹<日本鱘、同一品種樣品下性腺(雌)>肝胰腺>蟹胸肌肉>蟹鉗肉>蟹鰓的變化趨勢,說明日本鱘富集砷能力較強,性腺和肝胰腺是海蟹富集砷的重要器官。由于無機砷含量較低,均在國家標準對水產品中無機砷的規(guī)定限量值以下,因此食用海蟹帶來的砷健康危害風險較低。

    猜你喜歡
    海蟹青蟹無機
    海蟹
    幼兒畫刊(2021年6期)2021-12-02 15:02:32
    無機滲透和促凝劑在石材防水中的應用
    石材(2020年9期)2021-01-07 09:30:04
    小海蟹
    膨化配合飼料和天然餌料對擬穴青蟹育肥的影響
    當代水產(2019年7期)2019-09-03 01:02:22
    加快無機原料藥產品開發(fā)的必要性和途徑
    家鄉(xiāng)的青蟹
    學生天地(2017年24期)2017-11-07 01:47:43
    家鄉(xiāng)的青蟹
    小海蟹
    小學生導刊(2016年2期)2016-04-11 05:25:14
    有機心不如無機心
    山東青年(2016年2期)2016-02-28 14:25:31
    餐桌上的“廝殺”
    午夜免费成人在线视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜影院在线不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产野战对白在线观看| 丝袜喷水一区| 涩涩av久久男人的天堂| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产一区二区 视频在线| 在线观看免费午夜福利视频| 国产黄色免费在线视频| 欧美激情高清一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 秋霞在线观看毛片| 真人做人爱边吃奶动态| av一本久久久久| 精品久久蜜臀av无| 国产麻豆69| 在线观看免费午夜福利视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美日韩精品网址| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一区二区免费欧美 | 免费在线观看黄色视频的| 最新的欧美精品一区二区| 日韩大码丰满熟妇| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 最近中文字幕2019免费版| 国产一区二区激情短视频 | 免费看不卡的av| 美女午夜性视频免费| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 老司机影院成人| 黄色毛片三级朝国网站| 久久99热这里只频精品6学生| 青春草亚洲视频在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 国产精品三级大全| 精品久久蜜臀av无| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久国产精品大桥未久av| 性高湖久久久久久久久免费观看| 啦啦啦 在线观看视频| 国产av一区二区精品久久| 国产又色又爽无遮挡免| 久久久欧美国产精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费看不卡的av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美黄色淫秽网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 777米奇影视久久| 一级毛片电影观看| av一本久久久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品一区在线观看国产| 一级片'在线观看视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 成人影院久久| 国产成人av激情在线播放| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲国产精品国产精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 男女午夜视频在线观看| videos熟女内射| 亚洲 欧美一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久国产精品人妻蜜桃| 我的亚洲天堂| 黄色毛片三级朝国网站| 无限看片的www在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美日韩黄片免| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲图色成人| 精品久久久精品久久久| 日日夜夜操网爽| 国产日韩欧美视频二区| 飞空精品影院首页| 亚洲伊人色综图| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女午夜性视频免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 1024视频免费在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 搡老乐熟女国产| 激情五月婷婷亚洲| 精品第一国产精品| 99久久综合免费| 一二三四在线观看免费中文在| 三上悠亚av全集在线观看| 男女午夜视频在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 九草在线视频观看| 黄频高清免费视频| 五月开心婷婷网| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品久久久久久精品古装| 99国产精品一区二区三区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产成人91sexporn| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲国产中文字幕在线视频| av在线播放精品| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲精品国产av蜜桃| 青春草视频在线免费观看| 成年动漫av网址| 91精品三级在线观看| 免费观看人在逋| 一级片免费观看大全| 一区二区三区精品91| 亚洲免费av在线视频| 青青草视频在线视频观看| av国产精品久久久久影院| 亚洲av片天天在线观看| 欧美日韩av久久| 久久久久久久国产电影| 日本91视频免费播放| 熟女av电影| 你懂的网址亚洲精品在线观看| a级毛片在线看网站| 久9热在线精品视频| 日韩大片免费观看网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品卡一卡二卡四卡免费| 韩国高清视频一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲第一青青草原| 国产欧美亚洲国产| 成年美女黄网站色视频大全免费| 大香蕉久久成人网| 青草久久国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 99热网站在线观看| 午夜久久久在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 咕卡用的链子| 亚洲精品第二区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产激情久久老熟女| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 99国产精品一区二区三区| 国产一级毛片在线| h视频一区二区三区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久中文字幕一级| 51午夜福利影视在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产一区二区在线观看av| 久久久精品94久久精品| 91九色精品人成在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品人妻1区二区| 熟女av电影| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久性视频一级片| 最新在线观看一区二区三区 | 最近手机中文字幕大全| 午夜两性在线视频| av线在线观看网站| 黄片小视频在线播放| av网站免费在线观看视频| 69精品国产乱码久久久| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久久精品94久久精品| av电影中文网址| 麻豆乱淫一区二区| 免费在线观看影片大全网站 | 女人久久www免费人成看片| 老司机影院毛片| 婷婷色麻豆天堂久久| 午夜av观看不卡| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲色图综合在线观看| av电影中文网址| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产三级黄色录像| 久久99一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 一边亲一边摸免费视频| 真人做人爱边吃奶动态| 国产亚洲av高清不卡| 午夜影院在线不卡| 看十八女毛片水多多多| 国产一区二区三区av在线| 国产精品三级大全| 99国产精品99久久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产野战对白在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲五月婷婷丁香| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 成年人午夜在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产免费又黄又爽又色| 午夜福利在线免费观看网站| 香蕉国产在线看| av一本久久久久| 99国产精品一区二区三区| 自线自在国产av| 啦啦啦 在线观看视频| 国产黄色免费在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲成人免费av在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 看免费av毛片| 日韩一区二区三区影片| 在线观看免费视频网站a站| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲av成人精品一二三区| 久久99热这里只频精品6学生| 激情视频va一区二区三区| 免费看不卡的av| 视频在线观看一区二区三区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一级a爱视频在线免费观看| 一区福利在线观看| 女人久久www免费人成看片| 国产一区二区在线观看av| 一本综合久久免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久青草综合色| 国产爽快片一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 中文字幕色久视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 视频区欧美日本亚洲| 久久久国产一区二区| 亚洲精品在线美女| www.av在线官网国产| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产国语对白av| 久久久精品免费免费高清| 波多野结衣一区麻豆| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲国产av新网站| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 成年人免费黄色播放视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美黄色淫秽网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 蜜桃在线观看..| 日本色播在线视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品一品国产午夜福利视频| 超色免费av| xxxhd国产人妻xxx| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产片内射在线| 在线观看www视频免费| av有码第一页| 少妇人妻 视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲国产看品久久| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲情色 制服丝袜| 99国产精品一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 老司机影院成人| 97在线人人人人妻| 免费高清在线观看日韩| 视频区图区小说| 又黄又粗又硬又大视频| 天天影视国产精品| 大型av网站在线播放| 国产精品免费大片| 欧美精品亚洲一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产精品 国内视频| 欧美中文综合在线视频| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 中国美女看黄片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 男女午夜视频在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 一区在线观看完整版| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品亚洲成国产av| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲男人天堂网一区| 午夜av观看不卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲伊人色综图| 欧美激情高清一区二区三区| 七月丁香在线播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 91国产中文字幕| 大片免费播放器 马上看| 精品人妻1区二区| 国产成人精品久久二区二区91| av一本久久久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人av教育| 一本大道久久a久久精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一区二区三区精品91| 亚洲精品国产色婷婷电影| 老汉色∧v一级毛片| 国产高清不卡午夜福利| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲专区国产一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 高清欧美精品videossex| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 99香蕉大伊视频| 超碰成人久久| 国产不卡av网站在线观看| 美女主播在线视频| 色播在线永久视频| 新久久久久国产一级毛片| 国产成人精品久久久久久| 在线观看国产h片| 丝瓜视频免费看黄片| 久久99一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 婷婷色av中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 多毛熟女@视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品 欧美亚洲| 午夜视频精品福利| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久久精品区二区三区| 色94色欧美一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 婷婷色av中文字幕| 色网站视频免费| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 国产成人精品久久二区二区免费| 国产野战对白在线观看| 免费看十八禁软件| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产在线观看jvid| 久久九九热精品免费| 精品一区二区三区av网在线观看 | a级毛片在线看网站| 日日摸夜夜添夜夜爱| 波多野结衣av一区二区av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲第一青青草原| 亚洲人成电影免费在线| 午夜福利影视在线免费观看| 男女无遮挡免费网站观看| 久久精品成人免费网站| 9191精品国产免费久久| 国产欧美日韩一区二区三 | 成年美女黄网站色视频大全免费| 日韩中文字幕视频在线看片| 另类精品久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 男女国产视频网站| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久精品成人免费网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久av网站| 国产成人欧美在线观看 | 999精品在线视频| 国产成人精品久久久久久| 久久久久久久精品精品| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩一本色道免费dvd| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲人成电影免费在线| www日本在线高清视频| 岛国毛片在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产成人欧美| 国产成人精品久久久久久| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲国产看品久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇 在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| av一本久久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 91国产中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲av美国av| 婷婷丁香在线五月| 亚洲精品国产区一区二| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产1区2区3区精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲人成电影免费在线| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲第一av免费看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品一区二区精品视频观看| 在线天堂中文资源库| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品日本国产第一区| 岛国毛片在线播放| 一边亲一边摸免费视频| 中文字幕制服av| 久久免费观看电影| 午夜福利影视在线免费观看| 国产在线视频一区二区| 国产精品三级大全| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一区二区三区av在线| 精品少妇内射三级| 久久亚洲精品不卡| 免费不卡黄色视频| 黄色 视频免费看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 丝袜美足系列| 久久久欧美国产精品| 一级毛片 在线播放| 美女视频免费永久观看网站| 久久99一区二区三区| 国产av国产精品国产| 免费在线观看完整版高清| 国产一区亚洲一区在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 人成视频在线观看免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产伦理片在线播放av一区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 十分钟在线观看高清视频www| 咕卡用的链子| 国产精品国产av在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲精品乱久久久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 成在线人永久免费视频| 丝袜美足系列| 黄色一级大片看看| 制服人妻中文乱码| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 男人操女人黄网站| 欧美精品亚洲一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 99热网站在线观看| 成年av动漫网址| 国产精品av久久久久免费| 久久综合国产亚洲精品| 好男人电影高清在线观看| 久久99精品国语久久久| 精品福利观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 中文字幕最新亚洲高清| 精品视频人人做人人爽| 亚洲成国产人片在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 免费看十八禁软件| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲七黄色美女视频| 在现免费观看毛片| 日本a在线网址| 婷婷色综合www| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 在线观看免费高清a一片| 在线精品无人区一区二区三| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 尾随美女入室| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲av美国av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 热99久久久久精品小说推荐| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久久国产欧美日韩av| 国产成人免费观看mmmm| www.自偷自拍.com| 亚洲国产av新网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 少妇人妻 视频| 成年av动漫网址| 国产成人av教育| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 高清黄色对白视频在线免费看| av电影中文网址| 亚洲七黄色美女视频| 99国产精品一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲第一av免费看| 国产成人欧美在线观看 | 九草在线视频观看| 国产99久久九九免费精品| www.999成人在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 91精品伊人久久大香线蕉| 成年人免费黄色播放视频| 青青草视频在线视频观看| 国产一卡二卡三卡精品| 久久热在线av| 精品人妻在线不人妻| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美久久黑人一区二区| 久久av网站| 伦理电影免费视频| 一个人免费看片子| 少妇的丰满在线观看| 丁香六月天网| 一级毛片 在线播放| 成人国产一区最新在线观看 | 悠悠久久av| 日韩伦理黄色片| 99久久人妻综合| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 国产野战对白在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 日日摸夜夜添夜夜爱| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品久久久久成人av| 满18在线观看网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产最新在线播放| 成人免费观看视频高清| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产精品久久久久久人妻精品电影 | av不卡在线播放| 中文字幕人妻丝袜制服| 婷婷色综合www| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品自拍成人| 99热全是精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲三区欧美一区| 嫁个100分男人电影在线观看 | 男女边摸边吃奶| 久久国产精品影院| 久久99精品国语久久久| 少妇粗大呻吟视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 晚上一个人看的免费电影| av福利片在线| 老司机亚洲免费影院| 精品福利永久在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 日本a在线网址| 黄色a级毛片大全视频| 99re6热这里在线精品视频| 中国国产av一级| h视频一区二区三区| 男女高潮啪啪啪动态图| 宅男免费午夜| 校园人妻丝袜中文字幕| 高清视频免费观看一区二区| 美女福利国产在线| 黑丝袜美女国产一区| a 毛片基地| 电影成人av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜|