不同產(chǎn)地紫蘇梗中總黃酮含量比較及其提取工藝的考察

王蕓 張玥莉

摘 要 目的：比較不同產(chǎn)地紫蘇梗中總黃酮含量，為紫蘇梗藥材的選用提供基礎(chǔ)。方法：石油醚超聲脫脂后采用紫外分光光度法測(cè)定不同產(chǎn)地紫蘇梗中的總黃酮含量。以乙醇濃度、提取時(shí)間和次數(shù)、固液比為單因素進(jìn)行提取工藝考察。結(jié)果：不同地區(qū)紫蘇梗中總黃酮含量有較大差異，其含量排序?yàn)楹幽?江蘇>山東，經(jīng)單因素試驗(yàn)考察，得最佳提取工藝為：乙醇濃度70%；提取時(shí)間90 min；固液比1∶10；提取次數(shù)2次。結(jié)論：該試驗(yàn)為紫蘇梗藥材產(chǎn)地篩選提供了參考價(jià)值，其提取工藝可為紫蘇梗的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 紫蘇梗 不同產(chǎn)地 提取工藝 總黃酮

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）13-0076-04

Comparison of the content of total flavonoids in the stem of Perilla frutescens from different region and the study on extracting process*

WANG Yun**，ZHANG Yueli***

（Shanghai Green Valley Pharmaceutical Co.， Ltd， Shanghai 201707， China）

ABSTRACT Objective： To compare the content of total flavonoids in the stem of Perilla frutescens from different region so as to provide foundation for the selection and use of the stem of Perilla frutescens. Methods： The content of the total flavonoids was determined by UV-spectrophotometry after ultrasonic degreasing with petroleum ether. The process for its exaction was studied by the single factor such as ethanol concentration， extraction time and frequency， solid-to-liquid ratio. Results： There existed significant differences in the content of total flavonoids in the stem of Perilla frutescens from different region and the order of highest content was Henan>Jiangsu>Shandong. The optimal process for the extraction of total flavonoids was as follows： extraction for 90 min with 70% ethanol at solid-to-liquid ratio 1：10 and extraction twice by single factor experiment. Conclusion： This study can provide a reference for the selection and use of the stem of Perilla frutescens and the extraction process can be used as a theoretical basis for further development and utilization of the stem of Perilla frutescens.

KEY WORDS Perilla frutescens； different district； extracting process； total flavonoids

紫蘇梗為唇形科紫蘇屬植物紫蘇 （Perilla frutescens（L.）Brit）的干燥莖，梗性溫，味辛，氣味芳香，具有理氣寬中、止痛、安胎等功效[1]。紫蘇的地上部分主要含揮發(fā)油類，黃酮及其苷類，萜類，類脂等多種化學(xué)成分[2]。其中，黃酮是植物中普遍含有的一類成分，紫蘇黃酮具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗血栓、抗菌等藥理作用[3-4]。研究表明紫蘇莖中黃酮類化合物與葉中成分相似，均含有黃酮類、二氫黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮醇類等多種黃酮類化合物[5]，然而目前國(guó)內(nèi)紫蘇黃酮的提取部位多集中于紫蘇葉，且目前國(guó)內(nèi)對(duì)紫蘇成分的報(bào)道多集中于迷迭香酸類，本文對(duì)不同產(chǎn)地的紫蘇梗中的總黃酮含量進(jìn)行對(duì)比，為藥材篩選提供參考，并對(duì)其提取工藝進(jìn)行考察，為紫蘇梗的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 儀器

UV-1700紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó) Perkin Elmer公司）；UV-2600 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；AR2130電子天平（美國(guó)Ohaus公司）；TC-15恒溫電熱套（海寧市華星儀器廠）；LXJ-ⅡB低速大容量多管離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；TDP-600強(qiáng)力破碎機(jī)（天津市渤海鑫茂制藥設(shè)備有限公司）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司 500W）；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦有限公司）。

1.2 試劑與藥材

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：10080-201409）；其他化學(xué)試劑均為市售商品。

不同產(chǎn)地紫蘇梗藥材見(jiàn)表1。經(jīng)烘干，粉碎過(guò)篩，得到藥材粗粉。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

稱取紫蘇梗藥材粗粉100 g，加500 ml石油醚，用玻璃棒攪拌浸濕，超聲提取30 min，過(guò)濾，此操作重復(fù)進(jìn)行3次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上進(jìn)行濃縮，濃縮液揮干溶劑，剩余藥渣用水浴鍋蒸干稱重待用，即得紫蘇梗藥材脫脂殘?jiān)?/p>

稱取6.67 g 無(wú)水三氯化鋁，加入500 ml無(wú)水乙醇，室溫下超聲，混勻即得三氯化鋁顯色劑（0.1 mol/L）。

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg，用50%乙醇定容至50 ml，充分搖勻，即得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.1 mol/ml）。

1.3.2 不同產(chǎn)地總黃酮含量比較

精密稱取不同產(chǎn)地紫蘇梗藥材脫脂殘?jiān)? g于適當(dāng)容器，加入50 ml 50%乙醇溶液，采用冷凝加熱回流提取120 min；以相同方法再提取1次，抽濾，合并兩次上清液，即得供試品溶液。將所得供試品溶液用50%乙醇溶液定容至100 ml，稀釋4倍，各取1 ml用三氯化鋁顯色劑定容至50 ml，搖勻，靜置10 min后在λ 405 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出總黃酮的百分含量后進(jìn)行比較。

1.3.3 方法學(xué)考察

1.3.3.1 線性關(guān)系考察

精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于25 ml容量瓶中，用三氯化鋁顯色劑定容至標(biāo)準(zhǔn)刻度，混勻，靜置10 min，即得不同梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。以三氯化鋁顯色劑為空白，在λ 405 nm波長(zhǎng)下按照紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定吸光度值Y，以Y為縱坐標(biāo)，蘆丁溶液濃度為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3.2 精密度試驗(yàn)

1.3.3.2.1 中間精密度試驗(yàn)

同一檢驗(yàn)人員在同一實(shí)驗(yàn)室用移液槍取1 ml供試液溶液，進(jìn)行顯色反應(yīng)后在不同的紫外檢測(cè)設(shè)備上分別平行測(cè)吸光度6次，記錄其吸光度，計(jì)算兩次檢驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.3.2.2 重復(fù)性試驗(yàn)

用移液槍取1 ml的供試品溶液6份進(jìn)行顯色反應(yīng)，記錄其吸光度，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取一份供試品溶液進(jìn)行顯色反應(yīng)，分別在 0、15、30、45和60 min后測(cè)定吸光度，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.3.4 回收率試驗(yàn)

根據(jù)重復(fù)性得知紫蘇梗黃酮含量，稱取紫蘇梗藥材5份，每份精密加入相同質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行溶液制備，得回收率測(cè)定用供試液，然后測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算得平均回收率以及RSD值。

1.3.4 提取工藝考察

1.3.4.1 乙醇濃度的考察

在提取時(shí)間60 min、提取次數(shù)1次、固液比1∶10的條件下，比較乙醇濃度分別為30%、50%、70%、90%對(duì)紫蘇梗中總黃酮含量的影響。

1.3.4.2 提取時(shí)間的考察

在乙醇濃度30%、提取次數(shù)1次、固液比1∶10的條件下，比較提取時(shí)間分別為30、60、90、120 min對(duì)紫蘇?？傸S酮含量的影響。

1.3.4.3 固液比的考察

在乙醇濃度30%、提取次數(shù)1次、提取時(shí)間90 min的條件下，比較固液比分別為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20對(duì)紫蘇?？傸S酮含量的影響。

1.3.4.4 提取次數(shù)的考察

在乙醇濃度30%、提取時(shí)間60 min、固液比1∶10的條件下，比較提取次數(shù)分別為1次、2次、3次對(duì)紫蘇梗總黃酮含量的影響。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察

以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=27.475X+0.058 9，r=0.999 3，線性濃度范圍為：3.7～22.2 mg/ml。

2.2 精密度試驗(yàn)

2.2.1 中間精密度

經(jīng)過(guò)同一人員在不同檢測(cè)儀器上分別進(jìn)行6次重復(fù)吸光度檢測(cè)結(jié)果，測(cè)得RSD=0.37%，表明實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)方法精密度較好。

2.2.2 重復(fù)性試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)6次平行檢測(cè)結(jié)果，測(cè)得RSD=1.13%，表明實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

經(jīng)過(guò)60 min樣品吸光度檢測(cè)，測(cè)得RSD =1.29%， 表明在60 min 內(nèi)樣品較穩(wěn)定， 滿足一般的檢測(cè)時(shí)間。

2.4 回收率試驗(yàn)

測(cè)得平均回收率99.43%，RSD=1.42%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.5 不同產(chǎn)地總黃酮含量比較

不同地區(qū)紫蘇梗中總黃酮含量有較大差異（表2），其中山東、江蘇、河南紫蘇梗中的含量較高，且順序?yàn)椋汉幽?gt;江蘇>山東，采用河南紫蘇梗進(jìn)行下一步單因素優(yōu)化設(shè)計(jì)。

2.6 提取工藝考察結(jié)果

脫脂后，隨乙醇濃度的提高，紫蘇梗總黃酮含量呈上升趨勢(shì)，乙醇濃度為70%后含量變化趨緩；紫蘇?？傸S酮含量隨提取時(shí)間的變化的趨勢(shì)為先升高后下降，在90 min時(shí)含量達(dá)到峰值；提取固液比從1∶5至1∶10，紫蘇?？傸S酮含量先隨之升至最高，隨后變化基本保持穩(wěn)定；提取次數(shù)考察結(jié)果則表明，最佳提取次數(shù)為2次（表3）。

2.7 總黃酮含量

綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合考慮經(jīng)濟(jì)因素，進(jìn)一步優(yōu)化最佳提取工藝為：乙醇濃度70%、提取時(shí)間90 min、固液比1∶10、提取次數(shù)2次。在此條件下提取測(cè)得的紫蘇?？傸S酮平均含量為3.55%。

3 討論

黃酮類化合物（flavonoids）是一類在自然界廣泛存在的、以2-苯基色原酮（flavone）為基本結(jié)構(gòu)的化合物[6]。絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類化合物，主要包括：黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷醇、異黃酮、二氫異黃酮、花青素等[7]。目前總黃酮的提取方法有：微波一超聲協(xié)同提取、乙醇提取、甲醇一超聲協(xié)同提取、甲醇索氏回流提取等[8]，本試驗(yàn)用了傳統(tǒng)的溶劑提取法進(jìn)行優(yōu)化，其結(jié)果更符合工業(yè)化生產(chǎn)實(shí)際。

黃酮類物質(zhì)其生理活性廣泛，具有如降壓降脂、抗炎抗過(guò)敏、保肝、抗菌抗病毒、解痙、抗氧化等作用[9]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)紫蘇梗的研究主要集中在迷迭香酸上，對(duì)其黃酮類化學(xué)成分的研究尚未深入，且無(wú)法確定其黃酮化合物的具體種類。并且大部分文獻(xiàn)旨在研究紫蘇及其不同部位的總黃酮量[10-12]，未對(duì)紫蘇梗有進(jìn)一步的研究和開(kāi)發(fā)。因此，本試驗(yàn)在考察藥材產(chǎn)地的基礎(chǔ)上，進(jìn)行單因素設(shè)計(jì)，考察提取紫蘇?？傸S酮的乙醇濃度、提取時(shí)間、固液比、提取次數(shù)并測(cè)定其含量；在設(shè)計(jì)方法上，本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)進(jìn)行考察，該設(shè)計(jì)具有不受因素水平多寡的限制，優(yōu)化結(jié)果省時(shí)、經(jīng)濟(jì)、結(jié)果可靠，且能夠比較明顯地檢查出各因素最佳水平[13]，為進(jìn)一步的多因素設(shè)計(jì)優(yōu)化提供參考范圍。本試驗(yàn)可為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用紫蘇梗黃酮提供參考。

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