市售不同產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油成分分析

呂琦+黃星雨+楊瓊梁+袁佳敏+高文雅+姜政+黃迎+李博楊+顏紅

[摘要]目的 分析比較市售湖南、江蘇、浙江三個不同產(chǎn)地鵝不食草中揮發(fā)油的化學成分。方法 采用水蒸氣蒸餾法提取鵝不食草揮發(fā)油，通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對各個色譜峰定性，并用色譜峰面積歸一法獲得各化合物的相對含量。結(jié)果 湖南產(chǎn)地檢測出77種化合物，其中主要成分有2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯（35.05%）、2-甲基-2，3-醋酸酯-5-甲基-苯丙酸酯（16.52%）、（S）-2-甲基丁酸橙花酯（6.86%）、異丁酸香葉酯（5.77%）；江蘇產(chǎn)地檢測出28種化合物，其中主要成分為2，6，6-三甲基二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯（48.40%）、4a-甲基十氫化萘-1-醇-乙酸酯（14.98%）、百里香酚（11.02%）、（E）-丁酸-3，7-二甲基-2，7-辛二烯酯（6.04%）；浙江產(chǎn)地檢測出77種化合物，其中主要成分有2，3-二甲基苯（23.47%）、9，12，15-十八碳三烯酸（16.85%）、（Z，Z）-9，12-十八二烯酸（15.91%）、2-[（9Z，12Z）-9，12-十八碳二烯氧基]乙醇（6.44%）、（R）-（-）-（Z）-14-甲基-8-十六烯-1-醇（5.42%）。結(jié)論 GC-MS法能快速、簡便、高效地檢測鵝不食草揮發(fā)油的化學成分，市售不同產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油所含成分和含量都有較大差別。

[關(guān)鍵詞]鵝不食草；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；成分分析

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）12（c）-0004-06

[Abstract]Objective To compare the chemical compounds of volatile oil from Centipeda minima in Hunan，Jiangsu and Zhejiang.Methods The volatile oil of Centipeda minima was extracted by steam distillation.The chromatographic peaks were qualitatively identified by gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS），and the relative content of each compound was obtained by the method of peak area normalization.Results 77 compositions were identified from Centipeda minima in Hunan，and the main compositions were Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol，2，6，6-trimethyl-，acetate （35.05%），Propanoic acid，2-methyl-，2-[3-[（acetyloxy） methyl] oxiranyl]-5-methylp-henyl ester（16.52%），Neryl （S）-2-methylbutanoate （6.86%），Geranyl isobutyrate （5.77%）.28 compositions were identified from Centipeda minima in Jiangsu，and the main compositions were Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol，2，6，6-trimethyl-，acetate （48.40%），Acetic acid，4a-methyld-ecahydronaphthalen-1-yl ester （14.98%），Thymol（11.02%），Butanoic acid，2-methyl-，3，7-dimethyl-2，7-octadienyl ester，（E）-（6.04%）.77 compositions were identified from Centipeda minima in Zhejiang，and the main compositions were Benzene，（2，3-dimethyldecyl）-（23.47%），9，12，15-Octadecatrienoic acid （16.85%），（Z，Z，Z）-，9，12-Octadecadienoic acid（Z，Z）-（15.91%），Ethanol，2-（9，12-octadecadienyloxy）-（6.44%），（R）-（-）-（Z）-14-Methyl-8-hexadecen-1-ol（5.42%）.Conclusion GC-MS can be used to analysis the composition of volatil-e oil quickly and effectively.The Different area Centipeda minima have different compositions of volatile oil.

[Key words]Centipeda minima；Volatile oil；Gas chromatography-mass spectrometry；Component analysis

鵝不食草又稱石胡妥、雞腸草，系菊科植物鵝不食草[Centipeda minima（L.）A.Br.etAschers.]的干燥全草[1]，主產(chǎn)于印度平原和錫蘭島，我國大部分省份亦有種植。鵝不食草性溫，味辛，歸肺、肝經(jīng)，具有通鼻竅、止咳、祛風散寒勝濕之效。研究報道，鵝不食草化學成分主要為揮發(fā)油、甾醇類、黃酮類、三萜類化合物等[2-3]，其具有廣泛的藥理作用，如抗過敏、抗炎、抗誘變、抗癌、抑菌等[4-9]，在臨床用于治療鼻炎、百日咳、結(jié)石癥、外科、頭痛、面癱、平喘、痢疾等均有良好療效[10-13]。研究顯示，鵝不食草揮發(fā)油成分主要為反式乙酸菊烯酯等[14]，不同產(chǎn)地其揮發(fā)油的成分種類及其相對含量也存在較大差異。有研究報道采用薄層色譜鑒別鵝不食草油，用氣相色譜測定其含量[15]。本文采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對市售三種不同產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油成分進行分析，旨在探討產(chǎn)地對鵝不食草揮發(fā)油成分、含量及木蘭脂素含量的影響，以期為我國鵝不食草藥材的資源開發(fā)提供參考，為鵝不食草中藥制劑研發(fā)提供理論依據(jù)。endprint

1儀器與材料

1.1儀器

島津GCMS-QP2010型本，GC-MS Solution色譜工作站，標準譜庫為美國NIST質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫；YP601N電子天平（上海恒平科學儀器有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；20～200 μl、200～1000 μl可調(diào)式移液器（大龍/DRAGONLAB）；AR11401C型電子天平（奧豪斯國際貿(mào)易有限公司）；揮發(fā)油測定器（上海玻璃儀器廠）；HDM-3000電子調(diào)溫電熱套（金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.2材料和試劑

湖南產(chǎn)地鵝不食草購自北京同仁堂，批號：2015 0601；江蘇產(chǎn)地鵝不食草購自湖南中醫(yī)藥大學附屬第一附屬醫(yī)院，批號：1311060012；浙江產(chǎn)地鵝不食草購自湖南千金大藥房，批號：20150204；經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學藥學院劉塔斯教授鑒定為菊科物鵝不食草[Centipeda minima（L.）A.Br.etAschers.]的干燥全草。無水硫酸鈉（江蘇強盛功能化學股份有限公司）；乙酸乙酯（國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純；其他試劑為分析純；重蒸水（自制）。

2方法

2.1鵝不食草揮發(fā)油的提取

取粉粹后的鵝不食草藥材200 g，加8倍量水，按《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則2204揮發(fā)油提取甲法進行提取，蒸餾5 h，收集揮發(fā)油，無水Na2SO4脫水，得淺黃色透明的揮發(fā)油，以乙酸乙酯為溶劑稀釋即得供試液。

2.2 GC-MS條件

2.2.1 GC條件 RXI-5MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫（初始溫度為60℃，最終溫度為260℃，保持5 min，升溫速度為10℃/min）；載氣為高純He；載氣流量為1.0 ml/min；恒流模式；進樣量1 μl；進樣口溫度：230℃；柱溫：60℃；分流比為50∶1。

2.2.2質(zhì)譜條件 電離源為EI，電子能量為70 eV，倍增電壓：800V，掃描質(zhì)量范圍：m/z為35～500，掃描間隔：0.25 s。

2.3樣品測定

采用GC-MS質(zhì)譜工作站，在“2.2”項色譜條件下進行檢測，檢索NIST 11.lib和NIST 11s.lib標準譜庫，結(jié)合相似度和參閱相關(guān)文獻，對樣品成分進行定性分析并根據(jù)峰面積歸一化法計算各成分的含量。

3結(jié)果與分析

3.1不同產(chǎn)地鵝不食草GC-MS分析結(jié)果

湖南、江蘇、浙江三個不同產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油的GC-MS分析結(jié)果見圖1。三個不同產(chǎn)地的鵝不食草揮發(fā)油共鑒定出168種化合物，不同產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油成分組成及含有量相差較大。

3.2不同產(chǎn)地鵝不食草樣品中揮發(fā)性成分及相對百分含量分析

由圖1及表1可知，湖南產(chǎn)地共檢測出77種化合物，其中主要成分有2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯（35.05%）、2-甲基-2，3-醋酸酯-5-甲基-苯丙酸酯（16.52%）、（S）-2-甲基丁酸橙花酯（6.86%）、異丁酸香葉酯（5.77%）等；江蘇產(chǎn)地鑒定出28種化合物，其中主要成分為2，6，6-三甲基二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯（48.40%）、4a-甲基十氫化萘-1-醇-乙酸酯（14.98%）、百里香酚（11.02%）、（E）-丁酸-3，7-二甲基-2，7-辛二烯酯（6.04%）等；浙江產(chǎn)地檢測出77種化合物，其中主要成分有2，3-二甲基苯（23.47%）、9，12，15-十八碳三烯酸（16.85%）、（Z，Z）-9，12-十八二烯酸（15.91%）、2-[（9Z，12Z）-9，12-十八碳二烯氧基]乙醇（6.44%）、（R）-（-）-（Z）-14-甲基-8-十六烯-1-醇（5.42%）等。結(jié)果顯示，湖南產(chǎn)地與江蘇產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油成分中含量最高均為2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯，此結(jié)果與文獻報道結(jié)果相一致。浙江產(chǎn)地鵝不食草揮發(fā)油也含有2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯，但是含量較低。

4討論

通過鵝不食草揮發(fā)油成分分析發(fā)現(xiàn)，湖南和江蘇產(chǎn)地的鵝不食草揮發(fā)油最主要成分均為2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯，浙江產(chǎn)地的鵝不食草揮發(fā)油最主要成分為2，3-二甲基苯。三種產(chǎn)地的鵝不食草揮發(fā)油其他主要成分有較大差異，湖南產(chǎn)地為2-甲基-2，3-醋酸酯-5-甲基-苯丙酸酯（16.52%）、（S）-2-甲基丁酸橙花酯（6.86%）、異丁酸香葉酯（5.77%）等，江蘇產(chǎn)地為4a-甲基十氫化萘-1-醇-乙酸酯（14.98%）、百里香酚（11.02%）、（E）-丁酸-3，7-二甲基-2，7-辛二烯酯（6.04%）等，浙江產(chǎn)地為2，3-二甲基苯（23.47%）、9，12，15-十八碳三烯酸（16.85%）、（Z，Z）-9，12-十八二烯酸（15.91%）、2-[（9Z，12Z）-9，12-十八碳二烯氧基]乙醇（6.44%）、（R）-（-）-（Z）-14-甲基-8-十六烯-1-醇（5.42%）等。三者共有成分僅2種，為2，6，6-三甲基-二環(huán)[3.1.1]庚-2-烯-4-乙酸乙酯、百里香酚。這些差異可能與其采收產(chǎn)地的溫濕度、土壤性質(zhì)等生態(tài)環(huán)境的不同有著極為密切的關(guān)系，也可能與藥材采收的時間[16-17]、貯藏時間有關(guān)，有待進一步研究。本實驗結(jié)果可為鵝不食草藥材的開發(fā)利用及相關(guān)制劑的研究提供實驗依據(jù)。

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