HPLC法測(cè)定注射用倍他米松磷酸鈉的含量和有關(guān)物質(zhì)

徐 巖

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松 3.堿破壞雜質(zhì)

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松

?

HPLC法測(cè)定注射用倍他米松磷酸鈉的含量和有關(guān)物質(zhì)

徐 巖

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

目的：建立HPLC法測(cè)定不同廠家注射用倍他米松磷酸鈉的有關(guān)物質(zhì)及含量，考查了2個(gè)規(guī)格6批產(chǎn)品的質(zhì)量差異。方法：采用反相高效液相色譜法，色譜柱為C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(1∶1)，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm和241 nm。結(jié)果：倍他米松磷酸鈉在0.66～66.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，倍他米松在0.5～50.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)。平均回收率為100.2%，RSD為0.4%(n=9)。結(jié)論：本方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

注射用倍他米松磷酸鈉，有關(guān)物質(zhì)，質(zhì)量控制，高效液相色譜法

倍他米松磷酸鈉為腎上腺皮質(zhì)激素類藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用。其原料及注射液均在《中國(guó)藥典》2010年版二部中收載[1]，目前注射用倍他米松磷酸鈉僅在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中收載，國(guó)外藥典均無收載。本文采用HPLC法對(duì)注射用倍他米松磷酸鈉的有關(guān)物質(zhì)和含量測(cè)定進(jìn)行了考查，以完善現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品安全、有效和質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

Aglient 1260 Infinity 高效液相色譜儀，倍他米松磷酸鈉對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院化學(xué)藥品檢定所，批號(hào)100180-200902，按倍他米松磷酸鈉計(jì)，含量為89.7%)；倍他米松對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院化學(xué)藥品檢定所，批號(hào)100118-200403，含量為100.0%)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品1#、2#(規(guī)格：5.26 mg，A藥廠提供，批號(hào)110314-1、110314-2)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品3#、4#(規(guī)格：2.63 mg，B藥廠提供，批號(hào)10090701、11041501)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品5#、6#(規(guī)格：5.26 mg，B藥廠提供，批號(hào)10072001、110120001)；甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，磷酸二氫鉀(分析純，天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠)，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(1∶1)；流速為1.0 ml/min；含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)為241 nm；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為20 μl。理論板數(shù)按倍他米松磷酸鈉峰計(jì)算大于2 000，倍他米松磷酸鈉峰與倍他米松峰的分離度為4.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 含量測(cè)定用溶液 取樣品10支，分別加水適量使內(nèi)容物溶解，并轉(zhuǎn)移至50 ml(規(guī)格：2.63 mg)或100 ml(規(guī)格：5.26 mg)量瓶中，用水分次洗滌容器，洗液并入量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取倍他米松磷酸鈉對(duì)照品適量，同法配制對(duì)照品溶液。

2.2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查用溶液 取本品適量(相當(dāng)于倍他米松磷酸鈉13.2 mg)，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取倍他米松對(duì)照品10 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液和供試品溶液各1 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；精密量取對(duì)照溶液1 ml置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為靈敏度測(cè)試溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 分別取樣品適量(相當(dāng)于倍他米松磷酸鈉13.15 mg)，置5個(gè)10 ml量瓶中，加水適量振搖使溶解，前3個(gè)量瓶分別加1 mol/L鹽酸溶液1 ml、1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml和30%過氧化氫溶液1 ml，搖勻，60 ℃水浴加熱1 h，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性后用水稀釋至刻度，搖勻，分別作為酸破壞、堿破壞和氧化破壞溶液；將第4個(gè)量瓶置100 ℃水浴中加熱6 h，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞溶液；將第5個(gè)量瓶用水稀釋至刻度，搖勻，日光下放置1周，作為光照破壞溶液。分別量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。試驗(yàn)表明，樣品在酸性及氧化條件下比較穩(wěn)定；在堿性條件下雜質(zhì)顯著增加；在高溫條件下倍他米松峰顯著增加；在光照條件下主峰明顯下降。在該色譜條件下，倍他米松磷酸鈉峰與相鄰雜質(zhì)峰均可以達(dá)到良好分離，表明該方法的專屬性良好，適宜有關(guān)物質(zhì)檢查。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取倍他米松磷酸鈉對(duì)照品13.2 mg和倍他米松對(duì)照品10 mg，置同一100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取適量，加流動(dòng)相稀釋制成濃度為0.66、1.32、6.6、13.2和66.0 μg/ml(按倍他米松磷酸鈉計(jì))的系列溶液。分別精密量取上述溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，倍他米松磷酸鈉線性方程為：Y=12.83X+18.60(r=0.999 9，n=5)，在0.66～66.0 μg/ml濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系(對(duì)應(yīng)雜質(zhì)限度為0.05%～5.0%)；倍他米松線性方程為Y=10.51X+13.92(r=0.999 9，n=5)，在0.5～50.0 μg/ml濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系(對(duì)應(yīng)雜質(zhì)限度為0.05%～5.0%)。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 將“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照溶液及供試品溶液在室溫下分別放置0、2、4、8、12和24 h后依法進(jìn)樣20 μl測(cè)定，觀察主峰及各雜質(zhì)峰面積的變化，RSD分別為0.6%和0.4%。試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照品溶液及供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松 3.堿破壞雜質(zhì)

圖1 酸破壞(A)堿破壞(B)氧化破壞(C)

高溫破壞(D)和光照破壞(E)HPLC色譜圖

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取5#樣品6份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，依法測(cè)定，倍他米松磷酸鈉的平均含量為101.8%，RSD為0.42%。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取倍他米松對(duì)照品10 mg置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密稱取空白輔料9份，置50 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液4、5和6 ml各3份，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。平均回收率為99.8%，RSD為0.4%(n=9)，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的測(cè)定

2.8.1 含量測(cè)定 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算每瓶的含量，并計(jì)算10支的平均含量，即得。按上述方法對(duì)6批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果分別為92.9%、93.7%、94.9%、92.9%、101.8%和99.9%。

2.8.2 有關(guān)物質(zhì)檢查 照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，檢測(cè)波長(zhǎng)為241 nm。精密量取“2.2.2”項(xiàng)下靈敏度測(cè)試溶液20 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的信噪比不小于10，再精密量取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液與對(duì)照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄供試品溶液色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍，色譜圖見圖2，結(jié)果見表2。

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松

圖2 對(duì)照品(A)

3 討論

本方法在同一色譜系統(tǒng)中測(cè)定樣品的含量及有關(guān)物質(zhì)，但檢測(cè)波長(zhǎng)不同。含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，沿用《中國(guó)藥典》2010年版二部倍他米松磷酸鈉注射液的方法。有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)為241 nm，在該波長(zhǎng)下雜質(zhì)檢出的個(gè)數(shù)和雜質(zhì)量最大。

1 中國(guó)藥典[].二部.2010:844

歡迎訂閱《天津藥學(xué)》雜志

本刊主要欄目：專論、實(shí)驗(yàn)研究、藥品質(zhì)量與檢驗(yàn)、藥物與臨床、藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)、綜述、醫(yī)藥工業(yè)、中藥、藥物制劑、安全用藥、醫(yī)藥管理等。

《天津藥學(xué)》雜志為雙月刊，雙月28日出版，全年6期，每?jī)?cè)定價(jià)10元，全年60元。《天津藥學(xué)》雜志國(guó)內(nèi)外公開發(fā)行，國(guó)內(nèi)統(tǒng)一刊號(hào)CN12-1230/R，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)刊號(hào)ISSN1006-568，國(guó)內(nèi)郵發(fā)代號(hào)6-175，歡迎醫(yī)藥衛(wèi)生單位及個(gè)人到當(dāng)?shù)剜]局訂閱。如漏訂可通過郵局匯款至雜志社(定價(jià)不變)，由編輯部負(fù)責(zé)郵寄。

《天津藥學(xué)》雜志社地址：天津市和平區(qū)沙市道同康里3-502

郵政編碼：300051 電話：(022)23346705

電子郵箱：tjyaoxue@126.com

歡迎廣大醫(yī)藥衛(wèi)生科技人員踴躍投稿！

Determination of betamethasone sodium phosphate for injection and its related substances by HPLC

Xu Yan

(Tianjin Children' Hospital,Tianjin 300074)

Objective： To establish an HPLC method for determination of the related substances and the content in betamethasone sodium phosphate for injection and evaluate the quality variations. Methods： An RP-HPLC system,including a C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) and the solution of methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate(1∶1)(mobile phase), was used. The flow rate of mobile phase was 1.0 ml/min, and detecting wavelengths were 254 nm and 241 nm. Results： The assay displayed a good linearity of betamethasone sodium phosphate over the concentration range of 0.66～66.0 μg/ml(r=0.999 9)，and a good linearity of betamethasone over the concentration range of 0.5～50.0 μg/ml(r=0.999 9).The average recoveries were 100.2% and RSD was 0.4% (n=9). Conclusion： The established method is accurate and simple，and is a guarantee for quality control of betamethasone sodium phosphate for injection.

betamethasone sodium phosphate for injection，related substances，quality control，HPLC

2015-04-07

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0012-03