高效液相色譜法測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量

方宗華, 何 勇, 高永好, 吳宗好

(合肥華方醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230088)

甲磺酸多沙唑嗪控釋片是一種長效的選擇性α1腎上腺素能受體阻滯劑，具有降低血壓和改善良性前列腺增生患者的癥狀并對血脂產(chǎn)生有利影響的喹唑啉類衍生物[1-3]。本文采用高效液相色譜法對研制的甲磺酸多沙唑嗪控釋片的含量進(jìn)行測定并對其方法進(jìn)行驗證，通過樣品的前處理和色譜條件的優(yōu)化，消除了高分子輔料PEO等對含量測定的干擾，實驗證明該法用于甲磺酸多沙唑嗪控釋片的質(zhì)量控制專屬可行。

1 儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀(20AD,紫外檢測器)；日本GL Sciences lnc WondaSil?C18色譜柱(150×4.6 mm，5μm)；日本紫外可見分光光度計(UV-1700)；METTLER TOLEDO分析天平(AG135)；甲磺酸多沙唑嗪控釋片(實驗室自制)；甲磺酸多沙唑嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所) ；乙腈(色譜純) ；水為純化水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18；流動相：水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL與三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)；檢測波長：246nm；流速：1.0 mL/mL；柱溫:室溫；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)：按多沙唑嗪峰計算不得小于2000，分離度：多沙唑嗪峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2.0。

2.2 專屬性試驗

2.2.1 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪控釋片1片，用刀片切碎，全量轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加甲醇75mL，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10mL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白輔料溶液的制備

取空白輔料混合粉末約291.89 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入75 mL甲醇，超聲使溶散，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 測定法

精密量取上述3種溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各色譜圖見圖1～3。

圖1 空白輔料色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 對照品色譜圖

2.2.5 結(jié)論

空白輔料在此條件下無干擾，多沙唑嗪峰前后無其他雜質(zhì)峰影響。由以上試驗結(jié)果可知，本法專屬性強(qiáng)、操作簡便，適合本品含量測定。

2.3 線性關(guān)系與線性范圍

精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品10.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上清液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取該對照品溶液1、5、10、15、20、30μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量(ng) 對峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。結(jié)果見表1及圖4。

表1 甲磺酸多沙唑嗪線性回歸方程

圖4 甲磺酸多沙唑嗪含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

結(jié)果表明：甲磺酸多沙唑嗪進(jìn)樣量在21.62 ng～648.60 ng的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

精密量取上述同一甲磺酸多沙唑嗪對照品溶液(21.62μg/mL)10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值(%)，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果(n=6)

結(jié)果表明，本法精密度良好。RSD(%)=0.30%<2.0%。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

取甲磺酸多沙唑嗪控釋片1片，用刀片切碎，置100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，加流動相至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

精密量取上述供試品溶液10μL立即進(jìn)樣，并在2、6、10、24、36 h后，分別進(jìn)樣10μL測定，以峰面積計算RSD(%)，結(jié)果見表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明，供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD(%)=0.64%<2.0%。

2.6 中間精密度試驗

2.6.1 供試品溶液的制備

取同一批號(170801)甲磺酸多沙唑嗪控釋片10片(共6份)，分別將每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.6.2 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約21 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.6.3 測定法

精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算各份樣品的含量，即得。分別由不同的人，不同儀器，不同時間，依法測定含量，試驗結(jié)果見表4。

由上述試驗結(jié)果可知：同一供試品(170801)，由不同的人，不同儀器，不同時間，依法測定含量，最低含量為104.13%，最高含量為105.30%，平均含量為104.65%， RSD=0.45%<2.0%，表明用該法測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量，中間精密度良好。

表4 中間精密度試驗試驗結(jié)果

2.7 準(zhǔn)確度試驗

采用加樣回收法，精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品8.17、8.36、8.51、10.02、10.15、10.07、12.41、12.09、12.03 mg共9份，分別置250 mL量瓶中，再精密稱處方量的空白輔料約589 mg(共9份)分別置同一250 mL量瓶中，加185mL甲醇，超聲振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品適量(約相當(dāng)于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪與多沙唑嗪的換算因子為0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

分別精密量取對照品溶液與供試品溶液(9份)各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表5。

表5 準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

結(jié)果表明，平均回收率為99.59%，RSD(%)=0.58%<2.0%。說明本方測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量準(zhǔn)確度高。

2.8 耐用性試驗

為了考察變動因素對含量測定的影響，選擇調(diào)節(jié)不同波長、不同流動相比例及不同柱溫，來考察在不同的色譜條件下測定的含量數(shù)據(jù)。耐用性試驗結(jié)果見表6。

表6 甲磺酸多沙唑嗪控釋片在不同條件下試驗結(jié)果

試驗結(jié)果：在不同的色譜條件下測定，平均含量為105.52， RSD(%)=0.60%<2.0%。試驗結(jié)果表明，流動相的比例在(73∶27)～(63∶37)范圍內(nèi)變化、柱溫在25～35℃范圍內(nèi)變化、檢測波長在244～248 nm范圍內(nèi)變化，對供試品溶液含量測定影響不大，表明本方法耐用性良好。

2.9 重復(fù)性試驗

2.9.1 供試品溶液的制備

取同一批號(170801)甲磺酸多沙唑嗪控釋片10片(共6份)，分別將每片用刀片切碎，置1000 mL量瓶中，加甲醇750 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.9.2 對照品溶液的制備

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約10.19 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.9.3 測定法

精密量取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算各份樣品的含量，即得。試驗結(jié)果見表7。

表7 重復(fù)性試驗試驗結(jié)果

由上述試驗結(jié)果可知：同一供試品(170801)重復(fù)測定6次，最低含量為102.50%，最高含量為106.33%%，平均含量為104.15%， RSD=1.58%<2.0%，表明用該法測定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量重復(fù)性良好。

2.10 三批樣品的含量測定

取本品10片，分別將每片用刀片切碎，各全量轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加甲醇75 mL，密塞，放置過夜，超聲振搖使溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心(必要時濾過)，精密量取上清液10 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取甲磺酸多沙唑嗪對照品適量(約相當(dāng)于多沙唑嗪16 mg，甲磺酸多沙唑嗪與多沙唑嗪的換算因子為0.8245)，置100 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算每片中C23H25N5O5的含量并計算10片的平均含量，即得。結(jié)果見表8。

表8 三批樣品的含量測定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相的選擇

參照有關(guān)文獻(xiàn)[2-3]中HPLC法測定甲磺酸多沙唑嗪含量選用的流動相為，經(jīng)試驗摸索，我們選用以水(每1000 mL水中含冰醋酸6 mL與三乙胺3 mL)-乙腈(68∶32)為流動相，所得峰形較好，專屬性強(qiáng)，溶劑、輔料無干擾。

3.2 檢測波長的選擇

取甲磺酸多沙唑嗪對照品約12.32 mg，置100 mL量瓶中，加流動性適量，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2015年版四部通則0401)，以流動相為空白溶劑，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果甲磺酸多沙唑嗪溶液在246.5nm波長處有最大吸收，故選用246 nm作為甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量測定(HPLC法)的檢測波長。。

3.3 色譜填充柱的選擇[2-3]

參考有關(guān)文獻(xiàn)[2-3]，其HPLC法測定甲磺酸多沙唑嗪含量，色譜柱均選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。本方法所用的色譜柱為GL Sciences公司生產(chǎn)的(150 mm×4.6 mm，5μm)WondaSil?C18色譜柱。