不同皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)速溶蘆筍粉改善睡眠作用

馬淑鳳 ， 王 芳 ， 李漢臣 ， 王周平 *， 黃云祥

（1.食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)試驗(yàn)室 江南大學(xué)，江蘇 無錫 214122；2.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；3.河北科技師范學(xué)院 食品學(xué)院，河北 秦皇島 066600；4.河北省蘆筍工程技術(shù)研究中心，河北 秦皇島 066600）

蘆筍（Asparagus officinalis L.）俗稱石刁柏、龍須菜，系百合科天門冬屬雌雄異株宿根性多年生草本植物[1]。蘆筍中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和活性成分，其中皂苷是其主要活性成分之一[2]，其屬于甾體類化合物[3]。近年來，蘆筍皂苷的活性功能受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，甾體皂苷具有多種生物學(xué)活性，如抗腫瘤、抗真菌、防治心血管疾病、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等[4-5]。苷類也是近年來在鎮(zhèn)靜催眠類報(bào)道中出現(xiàn)較多的天然成分之一[6-10]，黃勝英[11]，王旭峰[12]等證明酸棗仁皂苷具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用。目前國內(nèi)外對蘆筍皂苷改善睡眠功能的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中發(fā)現(xiàn)，皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的速溶蘆筍粉具有改善睡眠作用。因此，作者以酸棗仁皂苷為陽性對照，研究不同皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)蘆筍速溶粉對于改善睡眠作用的影響，旨在初步探討不同皂苷含量的速溶蘆筍粉改善睡眠的差異性并確定速溶蘆筍粉的最佳作用劑量范圍，為開發(fā)新型蘆筍保健食品提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)選用清潔級健康昆明種小鼠320只，體質(zhì)量20±2 g，單一雄性，上海斯萊克試驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK（滬）2007-0005。試驗(yàn)條件保持溫度為20～25℃ ，相對濕度為40%～70%，試驗(yàn)動物使用許可證普通環(huán)境許可證號：SYXK（蘇）2012-0001。

1.2 受試物與主要試劑

速溶蘆筍粉A（皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%）：秦皇島長勝農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司提供；速溶蘆筍粉B（皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%）：中科院過程所提供；酸棗仁皂苷：純度2%，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司；巴比妥鈉、戊巴比妥鈉：Sigma公司。

1.3 動物分組與處理

試驗(yàn)設(shè)置一個空白對照組、速溶蘆筍粉A三個劑量組、速溶蘆筍粉B三個劑量組和2%酸棗仁皂苷陽性對照組。速溶蘆筍粉A推薦劑量為成人（按60 kg體質(zhì)量計(jì)）每日人1 g，相當(dāng)于16.67 mg（四舍五入取17 mg）/日kg·體質(zhì)量。試驗(yàn)分別設(shè)人體推薦量的 5、10、30 倍，即每日為：85、170、510 mg/kg。 速溶蘆筍粉B推薦劑量為成人 （按60 kg體質(zhì)量計(jì)）每日人300 mg，相當(dāng)于5 mg每日kg·體質(zhì)量。試驗(yàn)分別設(shè)人體推薦量的5、10、30倍，即每日為：25、50、150 mg/kg。

1.4 測定指標(biāo)和試驗(yàn)方法

試驗(yàn)設(shè)三個部分：戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)和延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗(yàn)。每個試驗(yàn)組根據(jù)動物體質(zhì)量隨機(jī)分為五組，每組12只（其中兩只用于確定巴比妥鈉和戊巴比妥鈉注射劑量，數(shù)據(jù)不計(jì)入統(tǒng)計(jì)結(jié)果中）。設(shè)空白對照組、蘆筍速溶粉A低、中、高三個劑量組、蘆筍速溶粉B低、中、高三個劑量組和一個酸棗仁陽性對照組，灌胃處理30 d[13]。

1.4.1 直接睡眠試驗(yàn) 以動物的翻正反射消失超過60 s判為進(jìn)入睡眠，翻正反射恢復(fù)即為動物覺醒。

1.4.2 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后，給各組動物按31 mg/kg·體質(zhì)量 劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1 mL/10 g·體質(zhì)量，以小鼠翻正反射消失達(dá)1 min以上作為入睡判斷標(biāo)準(zhǔn)，記錄各組入睡動物數(shù)和睡眠發(fā)生率。

1.4.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后，給各組動物按290 mg/kg·體質(zhì)量 劑量腹腔注射巴比妥鈉，注射量為0.1 mL/10g·體質(zhì)量，以小鼠翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試物能否縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期。

1.4.4 延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后，給各組動物按43 mg/kg·體質(zhì)量 劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1 mL/10 g·體質(zhì)

量，以小鼠翻正反射消失為睡眠指標(biāo)，觀察受試物能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和多重比較，顯著水平為p＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對小鼠體質(zhì)量的影響

試驗(yàn)前，根據(jù)小鼠體質(zhì)量隨機(jī)分組，試驗(yàn)結(jié)束時，各組小鼠的體質(zhì)量經(jīng)統(tǒng)計(jì)，差異不顯著 （p＞0.05），即速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對小鼠的體質(zhì)量增長均無影響，結(jié)果見表1。

表1 受試物對小鼠體質(zhì)量的影響（±SE，n=10）Table 1 Effect data of test drug on body weight of mice

表1 受試物對小鼠體質(zhì)量的影響（±SE，n=10）Table 1 Effect data of test drug on body weight of mice

注：同列數(shù)值中標(biāo)注不同字母表示對應(yīng)組別間差異顯著（p＜0.05）；反之，標(biāo)注相同字母表示對應(yīng)組別間差異不顯著（p＞0.05）。

?

從表1可以看出，速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B的低、中、高劑量組試驗(yàn)小鼠初始體質(zhì)量和終體質(zhì)量與空白對照組比較差異均不顯著（p＞0.05），與陽性對照組比較差異也不顯著，表明速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對小鼠的體質(zhì)量增長均無影響。

2.2 速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對小鼠直接睡眠的影響

各組小鼠在給予受試物 60 min內(nèi)，均未發(fā)現(xiàn)有直接睡眠現(xiàn)象。

2.3 速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)的影響

按國標(biāo)方法對速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B進(jìn)行巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)，研究其對小鼠睡眠發(fā)生率的影響，結(jié)果見表2。

從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，皂苷純度為15%的速溶蘆筍粉A的低、中、高劑量組的睡眠發(fā)生率均顯著高于空白對照組（p＜0.05），睡眠發(fā)生率隨著劑量的增加呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢。皂苷純度為50%速溶蘆筍粉B的低、中、高劑量組的睡眠發(fā)生率均顯著高于空白對照組（p＜0.05），睡眠發(fā)生率隨著劑量的增加也呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢；并且速溶蘆筍粉B受試組的各個劑量組的睡眠發(fā)生率均略低于速溶蘆筍粉A對應(yīng)劑量組的睡眠發(fā)生率。速溶蘆筍粉A的高劑量組睡眠發(fā)生率與陽性對照組相當(dāng)。以上結(jié)果表明速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B均能顯著增加戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠發(fā)生率，具有催眠作用，但速溶蘆筍粉A的催眠效果比速溶蘆筍粉B效果更顯著。

表2 受試物對戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠發(fā)生率的影響（n=10）Table 2 Effect data of test drug with subthreshold of pentobarbital sodium on sleeping rate of mice

2.4 速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

從表3可以看出，皂苷純度為15%的速溶蘆筍粉A低、中、高劑量組與空白對照組比較，均能顯著（p＜0.05）縮短小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期，促進(jìn)小鼠入睡作用良好，并隨著劑量的增加，其促進(jìn)睡眠效果增強(qiáng)，但各組間差異不顯著。皂苷純度為50%的速溶蘆筍粉B受試物的低、中、高劑量組的睡眠潛伏期與空白對照組比較，呈現(xiàn)隨著劑量的增加睡眠潛伏期逐漸縮短的趨勢，但低、中劑量組的差異不顯著，高劑量組差異顯著（p＜0.05）。速溶蘆筍粉A的各個劑量組均比速溶蘆筍粉B所對應(yīng)的低、中、高劑量組的促進(jìn)睡眠效果好。速溶蘆筍粉A高劑量組的睡眠潛伏期與陽性對照組相當(dāng)。根據(jù)國標(biāo)并結(jié)合以上試驗(yàn)結(jié)果，判定速溶蘆筍粉A能顯著縮短小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期，其促進(jìn)睡眠效果顯著。速溶蘆筍粉B在試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，其促進(jìn)睡眠效果呈增加趨勢，但不顯著。

表3 受試物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（±SE，n=10）Table 3 Effects of tested drug on mice sleeping delitescence

表3 受試物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（±SE，n=10）Table 3 Effects of tested drug on mice sleeping delitescence

注：同列數(shù)值中標(biāo)注不同字母表示對應(yīng)組別間差異顯著（p＜0.05）；反之，標(biāo)注相同字母表示對應(yīng)組別間差異不顯著（p＞0.05）。

?

2.5 速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B對戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間的影響

從表4可以看出，皂苷純度為15%的速溶蘆筍粉A的低、中、高劑量組與空白對照組比較，小鼠睡眠時間呈顯著性差異（p＜0.05），各組間差異也顯著，中劑量組的睡眠時間最長。皂苷純度為50%的速溶蘆筍粉B的中、高劑量組與空白對照組比較，小鼠睡眠時間呈顯著性差異（與對照組相比，p＜0.05），中劑量組的睡眠時間最長，低劑量組差異不顯著。速溶蘆筍粉A的各個劑量組均比速溶蘆筍粉B所對應(yīng)劑量組的睡眠時間長。以上結(jié)果表明，速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B均對延長注射戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時間具有促進(jìn)作用，但速溶蘆筍粉A的延長睡眠效果比速溶蘆筍粉B顯著。

表4 受試物對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響（±SE，n=10）Table 4 Effect of tested drug to pentobarbital sodium-induced sleep in mice

表4 受試物對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響（±SE，n=10）Table 4 Effect of tested drug to pentobarbital sodium-induced sleep in mice

注：同列數(shù)值中標(biāo)注不同字母表示對應(yīng)組別間差異顯著（p＜0.05）；反之，標(biāo)注相同字母表示對應(yīng)組別間差異不顯著（p＞0.05）。

?

3 結(jié)語

本研究結(jié)果表明，經(jīng)口給予小鼠不同的受試物30 d，空白對照組、皂苷純度為15%的速溶蘆筍粉A和皂苷純度為50%的速溶蘆筍粉B以及酸棗仁皂苷陽性對照組小鼠在60 min內(nèi)，均未發(fā)現(xiàn)有直接睡眠現(xiàn)象，并且兩種速溶蘆筍粉對小鼠的體質(zhì)量增加無影響。在巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)中，速溶蘆筍粉A和速溶蘆筍粉B的低、中、高劑量組與空白對照組比較，小鼠入睡率呈顯著性差異（與空白對照組相比，p＜0.05），表明其對注射閾下劑量巴比妥鈉小鼠的入睡率的提高具有促進(jìn)作用，且該作用隨著劑量的增加呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢。速溶蘆筍粉A的低、中、高劑量組與空白對照組比較，可以顯著縮短小鼠睡眠潛伏期；而速溶蘆筍粉B的低、中劑量組縮短小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期作用不顯著。對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響，速溶蘆筍粉A各劑量組對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間均有延長作用，各劑量組與空白對照組比較均存在顯著差異，中劑量組的效果最顯著。速溶蘆筍粉B的速溶蘆筍粉受試物的中、高劑量組與空白對照組比較，小鼠睡眠時間呈顯著性差異（p＜0.05），中劑量組的睡眠時間最長，

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）對改善睡眠保健食品的判定標(biāo)準(zhǔn)可知，皂苷純度為15%速溶蘆筍粉A具有良好的改善睡眠功能作用。皂苷純度為50%的速溶蘆筍粉B具有一定的改善睡眠作用。

在本試驗(yàn)中，經(jīng)對比分析得出，皂苷純度為15%速溶蘆筍粉A比皂苷純度為50%的速溶蘆筍粉B的改善睡眠作用好。由于溶蘆筍粉B是速溶蘆筍粉A經(jīng)分離純化后制得的，表明在分離純化過程中，部分功效成分損失。但速溶蘆筍粉A和溶蘆筍粉B在以上三個實(shí)驗(yàn)中所表現(xiàn)出作用趨勢和規(guī)律是一致的，表明發(fā)揮改善睡眠作用的主要功效成分經(jīng)過分離純化絕大部分仍保留在受試物中。據(jù)此推測，改善睡眠作用的主要成分可能為蘆筍皂苷。以上試驗(yàn)結(jié)果也說明：對于不同皂苷含量的速溶蘆筍粉來說，不是皂苷純度越高其改善睡眠功能就越好。因此，采用皂苷純度為15%速溶蘆筍粉A進(jìn)行功能食品的研發(fā)其應(yīng)用效果更顯著。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，速溶蘆筍粉A的劑量與改善睡眠作用各個指標(biāo)間均未呈現(xiàn)正線性關(guān)系。從受試物的劑效角度考慮，確定速溶蘆筍粉A的推薦作用劑量為85 mg/kg·bw。

[1]王春輝，王君虹，陳新峰，等.蘆筍的活性成分及其生物學(xué)功能[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，12（2）：23-25.WANG Cun-hui，WANG Jun-hong，CHEN Xin-feng，et al.Study progress on the bioactive eomponents and biological function of Asparagus officinalis[J].Auhui Agricultural Science Bulletin，2006，12（2）：23-25.（in Chinese）.

[2]顧關(guān)云，蔣昱.蘆筍的化學(xué)成分和生物活性[J].國外醫(yī)藥-植物藥分冊，2007，22（2）：47-50.GU Guan-yun，JIANG Yu.Research of chemical composition and biological activity of asparagus[J].World Phytomedicines，2007，22（2）：47-50.（in Chinese）

[3]張若潔，王魯峰，徐永霞，等.蘆筍中甾體皂苷結(jié)構(gòu)和功能特性的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2011，32（1）：291-296.（in Chinese）ZHANG Ruo-jie，WANG Lu-feng，XU Yong-xia，et al.Research progress on structures，functional characteristics of steroidal saponins in Asparagus officinalis[J].Food Science，2011，32（1）：291-296.（in Chinese）.

[4]張存莉，吳戰(zhàn)庫，惠玲，等.甾體皂苷的生物活性研究進(jìn)展[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18（2）：95-100.ZHANG Cun-Li，WU Zhan-ku，HUI Ling，et al.The Development of the studies on the natural steroidal saponins biological activities[J].Journal of Nournal of Northwest Forestry Univesity，2003，18（2）：95-100.（in Chinese）.

[5]王芳，馬淑鳳，李漢臣，等.蘆筍醇提取物免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2012，29（3）：390-394.WANG Fang，MA Shu-feng，LI Han-chen，et al.Studies on immune regulation effect of ethanol extract from Asparagus[J].Journal of Food Science and Biotechnology，2012，29（3）：390-394.（in Chinese）.

[6]楊國愉，皇甫恩，苗丹民，等.人參皂甙對睡眠剝奪大鼠行為的影響[J].中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2001，10（2）：84-86.YANG Guo-yu，HUANG Pu-en，MIAO Dan-min，et al.Effects of ginsenosides on behaviors of rats in sleep deprivation[J].Chinese Journal of Behavioral Medical Science，2001，10（2）：84-86.（in Chinese）.

[7]李求實(shí)，王升旭.刺五加總皂甙穴位貼敷抗睡眠剝奪作用的試驗(yàn)研究[J].華南國防醫(yī)學(xué)雜志，2002，16（2）：11.LI Qiu-shi，WANG Sheng-xu.Protective effects of eleutherosides acupiont appcication on rats with sleep peprivation[J].Miletary Medical Journal of South China，2002，16（2）：11.（in Chinese）.

[8]徐露，董志，黃彥.絞股藍(lán)總皂甙催眠作用的試驗(yàn)研究[J].重慶科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，8（4）：19-20.XU Lu，DONG Zhi，HUANG Yan.The experimental research on hypnogenetic effects of gypenosides[J].Journal of Chongqing University of Science and Technology：Natural Science Edition，2006，8（4）：19-20.（in Chinese）.

[9]MA T C，YU Q H，CHEN M H.Effect of ginsengstem-leaves saponins on one-way avoidance behavior in rats[J].Acta PharmacoLogica，1991，12（5）：403-406.

[10]郝昭琳，江璐，車會蓮，等.梔子苷和梔子黃色素改善睡眠作用的研究[J].食品科學(xué)，2009，30（15）：208-210.HAO Zhao-Lin，JIANG Lu，CHE Hui-Lian，et al.Evaluation of sedative effects of geniposide and gardenia yellow extracted from cape Jasmine fruit on mice[J].Food Science，2009，30（15）：208-210.（in Chinese）

[11]黃勝英，謝世榮，黃彩云，等.酸棗仁皂甙的鎮(zhèn)靜作用研究[J].大連大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23（4）：90-92.HUANG Sheng-ying，XIE Shi-ying，HUANG Cai-yun，et al.Studies on tranquillizing effect of jujuboside[J].Journal of Dalian University，2002，23（4）：90-92.（in Chinese）

[12]王旭峰，何計(jì)國，陳陽，等.酸棗仁皂苷的提取及改善睡眠功效的研究[J].食品科學(xué)，2006，27（4）：226-229.（in Chinese）WANG Xu-feng，HE Ji-guo，CHEN Yang，et al.Method of ultrasonic extraction of total jujuboside from Ziziphus jujuba mill in mice test[J].Food Science，2006，27（4）：226-229.（in Chinese）

[13]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.