40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑液相色譜分析

＊馬睿 邱立鶴

（1.山東中科睿譜技術(shù)有限公司 山東 250000

2.山東科諾瑪檢測(cè)技術(shù)有限公司 山東 250000）

聯(lián)苯肼酯英文通用名稱bifenazate，化學(xué)分子式C17H20N2O3，是一種γ-氨基丁酸（GABA）抗結(jié)劑，主要防治活動(dòng)期葉螨，速效性好，對(duì)幼螨和稱、若螨效果好，對(duì)一些其它螨類，尤其對(duì)二斑葉螨具有殺卵作用。乙螨唑英文通用名etoxazole，化學(xué)分子式NC21H23F2NO2，對(duì)螨卵胚胎的形成和幼螨到成螨的蛻皮過(guò)程具有抑制作用，該抑制機(jī)制在成螨中無(wú)顯著效果，但在螨卵及幼卵中作用顯著。40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑既有速效性，又有很好的持效期，可減緩害蟲抗性的生產(chǎn)，還可以提高對(duì)作物的安全性?，F(xiàn)有國(guó)行標(biāo)分析方法中，《農(nóng)藥分析手冊(cè)》為聯(lián)苯肼酯、乙螨唑的單成分析方法，T/ZNX 009-2021為聯(lián)苯肼酯單劑分析方法、T/SDNY 034-2022為對(duì)乙螨唑的單劑分析方法。為同時(shí)高效準(zhǔn)確快速的分析聯(lián)苯肼酯、乙螨唑兩種成分，本文開發(fā)了液相色譜分析方法，并確認(rèn)了該方法的精密度和準(zhǔn)確度均滿足分析要求。該方法可對(duì)40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的有效成分準(zhǔn)確定值。

1.試驗(yàn)部分

(1)儀器和試劑

儀器：島津SPD-20A高效液相色譜儀：PDA檢測(cè)器；島津LC solution工作站；色譜柱：250mm×4.6mm（i.d.）C18不銹鋼柱，粒徑5μm；萬(wàn)分之一天平；超聲波振蕩器；抽濾裝置；孔徑為0.45μm的尼龍濾膜。乙腈：合勒化學(xué)，色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品：上海農(nóng)藥研究院，99.0%；乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)品：上海農(nóng)藥研究院，99.0%；40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑為本公司留樣復(fù)測(cè)樣品。

(2)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

圖1 乙螨唑光譜圖

圖2 聯(lián)苯肼酯光譜圖

圖3 聯(lián)苯肼酯、乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜圖

圖4 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的高效液相色譜圖

通過(guò)PDA檢測(cè)器對(duì)聯(lián)苯肼酯、乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)溶液在190nm～600nm波長(zhǎng)下進(jìn)行掃描，其中，乙螨唑在190nm～300nm有吸收，聯(lián)苯肼酯在190nm～330nm有吸收，詳細(xì)吸收情況見圖1、圖2。

綜合考慮助劑、溶劑的波長(zhǎng)干擾及聯(lián)苯肼酯、乙螨唑的響應(yīng)值，最終選擇200nm作為本次分析的波長(zhǎng)。

(3)流動(dòng)相的選擇

考慮聯(lián)苯肼酯、乙螨唑在不同溶劑中溶解度、色譜分離程度、保留時(shí)間等因素，選擇乙腈+水=80+20（V+V）作為分析時(shí)的流動(dòng)相。

(4)典型色譜圖

流動(dòng)相：乙腈:水=80:20（V+V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣體積：5μL；柱溫：（30±1）℃。在上述色譜條件下：聯(lián)苯肼酯的保留時(shí)間約：4.117min；乙螨唑的保留時(shí)間約：9.600min。典型液相色譜圖見圖3、圖4。

(5)標(biāo)樣及被試物的配制

①標(biāo)樣溶液的配制

依次稱取聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)樣品0.05g（精確至0.0002g），乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)樣品0.03g（精確至0.0002g），將上述兩次稱量的標(biāo)準(zhǔn)品置于同一100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超聲震蕩至標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解后，冷卻至室溫，再加入乙腈溶液稀釋至刻度線，備用。

②精密度被試物溶液的配制

稱取0.2g（精確至0.0002g）被試物，置于100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超聲震蕩至被試物完全溶解后，冷卻至室溫，再加入乙腈溶液稀釋至刻度線，經(jīng)孔徑為0.45μm有機(jī)過(guò)濾頭過(guò)濾后備用。

③準(zhǔn)確度被試物溶液的配制

稱取0.1g（精確至0.0002g）被試物，聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)樣品0.025g（精確至0.00002g），乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)樣品0.017g（精確至0.00002g），置于同一100mL容量瓶中，加入10mL乙腈于容量瓶中，超聲震蕩至被試物完全溶解后，冷卻至室溫，再加入乙腈溶液稀釋至刻度線，經(jīng)孔徑為0.45μm有機(jī)過(guò)濾頭過(guò)濾后備用。

(6)測(cè)定過(guò)程

①分析方法的線性相關(guān)性測(cè)定

分別配制5個(gè)濃度的聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）標(biāo)準(zhǔn)品溶液，通過(guò)典型色譜圖的色譜條件進(jìn)行分析，平行測(cè)定每個(gè)濃度點(diǎn)2次，每個(gè)濃度點(diǎn)取平行測(cè)定兩次的峰面積均值進(jìn)行線性擬合。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，橫坐標(biāo)為聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）濃度，縱坐標(biāo)為峰面積均值。

②分析方法的精密度測(cè)定

按照上述試劑溶液配制5組被試物溶液，按照典型色譜圖的色譜參數(shù)設(shè)置液相色譜儀，穩(wěn)定一段時(shí)間后，觀察儀器基線，待基線平穩(wěn)后，測(cè)試數(shù)針標(biāo)樣溶液，觀察標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖中聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積，當(dāng)相鄰兩針聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.5%后，溶液順序按照標(biāo)準(zhǔn)樣品、被試物、被試物、標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定。采用色譜峰面積外標(biāo)法對(duì)聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）含量進(jìn)行計(jì)算。統(tǒng)計(jì)5次測(cè)定結(jié)果的RSD。

③分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

按照上述試劑溶液配制5組被試物溶液，按照典型色譜圖的色譜參數(shù)設(shè)置液相色譜儀，穩(wěn)定一段時(shí)間后，觀察儀器基線，待基線平穩(wěn)后，測(cè)試數(shù)針標(biāo)樣溶液，觀察標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖中聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積，當(dāng)相鄰兩針聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.5%后，溶液順序按照標(biāo)準(zhǔn)樣品、被試物、被試物、標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定，共測(cè)定5組，采用色譜峰面積外標(biāo)法對(duì)聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）含量進(jìn)行計(jì)算并計(jì)算回收率。統(tǒng)計(jì)5次測(cè)定結(jié)果的回收率。

(7)結(jié)果計(jì)算

按照上述的方法平行測(cè)定兩次，被試物中聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X（%）按式（1）計(jì)算：

式中：A1-標(biāo)樣溶液中，聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積的平均值；

A2-被試物溶液中，聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）峰面積的平均值；

m1-聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2-被試物的質(zhì)量，g；

P-標(biāo)樣中聯(lián)苯肼酯（乙螨唑）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

(8)允許差

要求聯(lián)苯肼酯測(cè)定結(jié)果差≤0.5%、乙螨唑測(cè)定結(jié)果差≤0.3%。

2.結(jié)果與討論

(1)分析方法的線性相關(guān)性

聯(lián)苯肼酯線性回歸方程y=6658.2x+699.77，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9998；乙螨唑線性回歸方程：y=11200x+44665，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9998，相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，表示線性關(guān)系良好（如下見圖5、圖6）。

圖5 聯(lián)苯肼酯線性關(guān)系圖

圖6 乙螨唑線性關(guān)系圖

(2)分析方法的精密度

表1 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑精密度測(cè)定

聯(lián)苯肼酯5次測(cè)定的RSD為0.63%＜1.65%和乙螨唑5次測(cè)定的RSD為0.35%＜1.77%（如下見表1）。RSD均滿足NY/T 2887-2016中的要求，該方法精密度良好。

(3)分析方法的準(zhǔn)確度

最終測(cè)得聯(lián)苯肼酯的回收率為99.23%～100.00%，平均回收率99.56%；乙螨唑的回收率為99.40%～100.56%，平均回收率99.76%（如下見表2）。回收率在98%～102%之間，均滿足NY/T 2887-2016中的要求，該方法準(zhǔn)確度良好。

表2 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑準(zhǔn)確度測(cè)定

3.結(jié)論

上述試驗(yàn)表明，40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法，可同時(shí)分析聯(lián)苯肼酯、乙螨唑兩種有效成分，可節(jié)約分析成本且快速；另外，該方法結(jié)果準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)性好，可準(zhǔn)確定值同類型產(chǎn)品。綜上，該方法經(jīng)濟(jì)高效，且操作性強(qiáng)，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中有良好應(yīng)用。