38%2甲4氯·滅草松可溶液劑的高效液相色譜分析

錢忠海

（江蘇省農(nóng)藥總站，南京 210036）

38%2甲4氯·滅草松可溶液劑為廣譜、高效的低毒類除草劑，能迅速殺死雜草地下根莖，有效防除常見闊葉雜草和螢藺、荊三棱、三棱草等惡性雜草，其選擇性強(qiáng)、持效期長(zhǎng)、防除效果顯著[1-5]。但有關(guān)2甲4氯和滅草松混配制劑采用HPLC同時(shí)檢測(cè)的方法，無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者建立采用Agilent ZORBAX SB-Phenyl不銹鋼柱和紫外檢測(cè)器，以甲醇-水-磷酸溶液為流動(dòng)相的高效液相色譜分析方法，對(duì)有效成分2甲4氯和滅草松同時(shí)進(jìn)行定量分析。旨在為簡(jiǎn)便快捷地測(cè)定38%2甲4氯·滅草松可溶液劑的有效成分含量提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

具全自動(dòng)進(jìn)樣器及紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器的高效液相色譜儀U3000；甲醇（色譜純）；Millipore超純水制備系統(tǒng)；2甲4氯對(duì)照物（98.3%）、滅草松對(duì)照物（99.0%），國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（沈陽）；38%2甲4氯·滅草松可溶液劑，江蘇農(nóng)墾生物化學(xué)有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Phenyl不銹鋼柱（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；流動(dòng)相：甲醇＋水（體積比44∶56），每1 000 mL水中加入1 mL磷酸；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：25℃；保留時(shí)間：滅草松約為11.0 min，2甲4氯約為15.5 min。高效液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 2甲4氯和滅草松對(duì)照物高效液相色譜圖

圖2 38%2甲4氯·滅草松可溶液劑高效液相色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1 對(duì)照物溶液的配制

稱取2甲4氯對(duì)照物約0.04 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶，用甲醇溶液稀釋，超聲使其溶解，待溫度降至室溫，進(jìn)行定容，搖勻后備用。稱取滅草松對(duì)照物約0.05 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶，移取10 mL上述2甲4氯對(duì)照物溶液于此容量瓶中，用甲醇溶液稀釋，超聲使其溶解，待溫度降至室溫，進(jìn)行定容，搖勻后經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后備用。

1.3.2 被試物溶液的配制

稱取被試物約0.15 g（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶，用甲醇溶液稀釋，超聲使其溶解，待溫度降至室溫，進(jìn)行定容，搖勻后經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后備用。

1.3.3 測(cè)定

在優(yōu)化的色譜條件下，待儀器穩(wěn)定后，使參照物溶液連續(xù)進(jìn)樣，直至相鄰兩次有效成分峰面積的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，依照參照物溶液、被試物溶液、被試物溶液、參照物溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將檢測(cè)所得的兩次被試物溶液和被試物前后兩次對(duì)照物溶液中檢測(cè)成分的峰面積分別進(jìn)行平均。被試物中各檢測(cè)成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按式（1）計(jì)算。

式中：A1為參照物溶液中2甲4氯（滅草松）峰面積的平均值，mAU；A2為被試物溶液中2甲4氯（滅草松）峰面積的平均值，mAU；m1為參照物溶液中2甲4氯（滅草松）的質(zhì)量，g；m2為被試物2甲4氯（滅草松）的質(zhì)量，g；P為參照物中2甲4氯（滅草松）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

利用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)，采集被試物2甲4氯和滅草松在波長(zhǎng)為190～400 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜曲線。經(jīng)與參照物紫外吸收光譜圖比對(duì)，同時(shí)考慮溶劑吸收干擾以及各組分的靈敏度，最后優(yōu)化選擇的檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。

2.2 線性相關(guān)性

按照確定的色譜條件，配制不同濃度的參照物溶液測(cè)定線性相關(guān)性。以2甲4氯（滅草松）的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制線性關(guān)系圖（圖3、圖4）。2甲4氯和滅草松的線性回歸方程分別為y=0.211 7x-1.325 2，y=0.216 3x＋6.360 8；相關(guān)系數(shù)分別為0.999 2、0.999 7。2甲4氯和滅草松定量線性關(guān)系在濃度為60～500 mg/L范圍內(nèi)良好。

圖3 2甲4氯線性關(guān)系圖

圖4 滅草松線性關(guān)系圖

2.3 方法的精密度

采用3批次的被試物38%2甲4氯·滅草松可溶液劑，重復(fù)測(cè)定5次，考察定量分析方法的精密度（表1）。結(jié)果表明，2甲4氯和滅草松的變異系數(shù)分別為0.64%、0.58%，符合樣品定量分析的要求。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

2.4 方法的準(zhǔn)確度

在產(chǎn)品制劑空白中添加2甲4氯參照物、滅草松參照物，合成5批次組成與被試物38%2甲4氯·滅草松可溶液劑相似的模擬被試物，作為準(zhǔn)確度測(cè)定的被試物溶液，進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，2甲4氯和滅草松的平均添加回收率為99.74%、99.68%，方法的準(zhǔn)確度較高，符合定量分析的要求。

表2 準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本研究建立的HPLC檢測(cè)方法可同時(shí)快速檢測(cè)38%2甲4氯·滅草松可溶液劑中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，具有適中的保留時(shí)間以及較高的精密度與準(zhǔn)確度，可有效用于質(zhì)量檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)企業(yè)對(duì)2甲4氯和滅草松混配制劑的質(zhì)量監(jiān)控[6]。