海洋真菌Penicillium oxalicum SCSGAF 0023的次生代謝產(chǎn)物及其抗污損和酶抑制活性研究

孫玉林，陳 茵，徐新亞，張曉勇，鄭智慧，農(nóng)旭華，鮑 潔，漆淑華*

1中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所中國(guó)科學(xué)院海洋生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣州 510301;2中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 100049;3深圳市第九人民醫(yī)院，深圳 518116;4華北制藥集團(tuán)新藥研究開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司，石家莊 050011

海洋是生命的起源，蘊(yùn)藏著豐富的微生物資源。海洋微生物由于受其特殊的生存環(huán)境影響(高鹽、高壓、低溫及寡營(yíng)養(yǎng)等)，在進(jìn)化過(guò)程中形成了特異的遺傳背景和代謝途徑 ，從而產(chǎn)生并積累了大量的具有特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理活性的物質(zhì)，是開(kāi)發(fā)新藥的重要資源［2］。海洋真菌是海洋微生物的重要組成部分，其次生代謝產(chǎn)物的化學(xué)研究工作雖然起步較晚，但發(fā)展迅速。1945年，Giuseppe Brotzu從一株海洋來(lái)源的頂頭孢霉 (Acremonium chrysogenum)中分離得到了具有抗菌活性的化合物cephalosporin C標(biāo)志著海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物研究的開(kāi)始［3］。從1991開(kāi)始，海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)入一個(gè)活躍時(shí)期，到2002年已發(fā)現(xiàn)新天然產(chǎn)物272個(gè)，2005年約達(dá)到400個(gè)，2011年則已經(jīng)超過(guò)1300個(gè)，化合物的類型涉及到聚酮、生物堿、萜類、肽類、甾體等［4，5］，其中一些表現(xiàn)出良好的抗菌、抗腫瘤、抗病毒等生物活性?；诮Y(jié)構(gòu)和生物活性的多樣性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)南海柳珊瑚Dichotella gemmacea的一株共附生真菌Penicillium oxalicum SCSGAF 0023的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究。有研究表明:柳珊瑚棲息在海洋而不被其它污損生物附著，與其共附生微生物分泌的次生代謝產(chǎn)物有關(guān)，這些代謝產(chǎn)物有可能成為開(kāi)發(fā)成天然的防污劑［6］。此外，酶抑制劑作為一種工具，能更好的理解疾病的代謝途徑和確定靶標(biāo)位點(diǎn)，如蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶PTPIB在胰島素信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中起負(fù)調(diào)節(jié)作用［7］，次黃嘌呤單磷酸脫氫酶(IMPDH)能特異地抑制T B淋巴細(xì)胞的增值，對(duì)各種有絲分裂素引起的細(xì)胞分裂也具有抑制作用［8］，組織蛋白酶Cathepsin B存在各種動(dòng)物組織的細(xì)胞內(nèi)，起到催化苯甲酰-L-精氨酰胺的水解和具有內(nèi)切酶的作用［9］。本文對(duì)分離到的化合物進(jìn)行了上述的活性測(cè)試，期望能尋找到具有較好活性的先導(dǎo)化合物。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Brucker Avance DRX 500型核磁共振波譜儀(500/125 MHz，TMS為內(nèi)標(biāo));高效液相色譜儀:島津LC-20A，YMC-Pack，ODS S-5μ 250×10 mm i.d，SPD-M20A檢測(cè)器;SephadexLH-20(Pharmacia Biotech Sweden);柱色譜用硅膠 (100～200目，200～300目)、TLC及PTLC(GF254)硅膠板均為煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn)，所用試劑均為分析純產(chǎn)品。

真菌Penicillium oxalicum SCSGAF 0023從南海柳珊瑚Dichotella gemmacea中分離得到，該樣品采自于中國(guó)海南三亞 (18°11'N，109°25'E)，水深5～10 m，菌種保存于中國(guó)科學(xué)院海洋微生物中心，保藏號(hào)為:JN850988。

PDA液體培養(yǎng)基:葡糖糖2%，土豆20%，3%海鹽，121℃滅菌30 min備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的鑒定

真菌 Penicillium oxalicum SCSGAF 0023的總DNA按照文獻(xiàn)［10］被提取出來(lái)，分別用引物ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')，ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')對(duì)總DNA中的ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，回收純化PCR產(chǎn)物，在連接到PCR2.1載體(Invitrogen)中，16S rRNA基因序列由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司測(cè)定，將測(cè)出來(lái)的16S rRNA基因序列進(jìn)行BLAST分析(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)發(fā)現(xiàn)與Penicillium oxalicum strain F3(JF793525.1)相似度為99%。

1.2.2 菌株的發(fā)酵培養(yǎng)

從PDA固體培養(yǎng)基的平板上，用接種環(huán)刮取2環(huán)該菌株的孢子于500 mL的三角瓶中 (內(nèi)含150 ml的PDA液體培養(yǎng)基)，共接種200瓶，28℃靜置30 d。

1.2.3 發(fā)酵產(chǎn)物的提取與分離

將30 L發(fā)酵液用八層紗布過(guò)濾，分成菌液和菌絲體兩部分，菌液直接用乙酸乙酯進(jìn)行萃取濃縮，菌絲體先用80%丙酮-水浸泡，接著用細(xì)胞破碎儀進(jìn)行破壁，之后超聲30 min，減壓濃縮，將剩下的水相再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，最后將兩部分的乙酸乙酯濃縮產(chǎn)物合并稱重，共得到浸膏16 g。

將乙酸乙酯萃取的浸膏16 g經(jīng)硅膠(80～100目)柱層析，以氯仿/甲醇 (1∶0～0∶1)系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合薄層色譜 (TLC)點(diǎn)板情況，合并為六個(gè)流分 (Fr 01～Fr 06)。

流分Fr 01(3 g)經(jīng)硅膠 (100～200目)柱層析，以氯仿/丙酮 (20∶1～0∶1)梯度進(jìn)行洗脫，得到4個(gè)亞流分 (Fr 0101～Fr 0104)，亞流分Fr 0101經(jīng)反相硅膠 (RP-18，80～100 μ)柱層析，以甲醇/水(v/v 20∶80～80∶20)進(jìn)行梯度洗脫得到化合物1(v/v 80∶20，6 mg)，亞流分 Fr 0102 經(jīng)硅膠 (200 ～300目)柱層析，以石油醚/氯仿(v/v 9∶1)進(jìn)行等度洗脫，得到化合物2(46 mg)。

流分Fr 03(2.4 g)經(jīng)硅膠(100～200目)柱層析，以氯仿/丙酮 (9∶1～0∶1)系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到5個(gè)亞流分 (Fr 0301～Fr 0305)，亞流分Fr 0302(478.6 mg)再經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20柱層析，得到化合物 3(6 mg)和 4個(gè)亞流分 (Fr 030202～Fr 030205);亞流分Fr 030202～Fr 030205分別經(jīng)半制備HPLC進(jìn)一步純化，得到化合物6(YMC-Pack，ODS S-5μ 250 × 10 mm i.d.，3 mL/min，甲醇/水(v/v 77∶23)，tR=9.5 min，2.5 mg)、5(甲醇/水(v/v 74∶26)，tR=8.9 min，3.5 mg)、4(甲醇/水(v/v 78∶24)，tR=21.5 min，3.5 mg);亞流分 Fr 0303(717.2 mg)經(jīng)Sephadex LH-20柱層析，得到4個(gè)亞流分 (Fr 030301～Fr 030304)，亞流分 Fr 030302經(jīng)反相硅膠(RP-18，80 ～100 μ)柱層析，以甲醇/水(v/v 15∶85～45∶55)進(jìn)行梯度洗脫，在甲醇/水(v/v 35∶65)流分中得到化合物16(4.5 mg)，亞流分Fr 030304經(jīng)半制備HPLC進(jìn)一步純化得到化合物 7(乙腈/水(v/v 70∶30)，tR=21.5 min，3 mg);亞流分Fr 0304通過(guò)制備型薄層板進(jìn)行制備，得到化合物8(氯仿∶甲醇 =20∶1展開(kāi)，Rf=0.55，10 mg);亞流分Fr 0305通過(guò)重結(jié)晶得到化合物10(3.5 mg)，

流分 Fr 04(3 g)經(jīng)反相硅膠 (RP-18，80～100 μ)柱層析，以甲醇/水 (v/v 15∶85 ～75∶25)6 個(gè)梯度進(jìn)行洗脫，得到6個(gè)亞流分 (Fr 0401～Fr0406)。亞流分Fr 0402～Fr0404經(jīng)半制備HPLC進(jìn)一步純化，得到差向異構(gòu)體11和12 1:1)的混合物(乙腈/水(v/v 15∶75)，tR=34.0 min，9.4 mg)、差向異構(gòu)體13和14(1:1)的混合物(乙腈/水(v/v 20∶80)，tR=33.5 min，21.6 mg)、以及化合物15(乙腈/水(v/v 20∶80)，tR=29.3 min，21.6 mg)，亞流分 Fr 0405通過(guò)重結(jié)晶得到化合物9(8 mg)。

1.2.4 抗污損和酶抑制劑活性測(cè)定

抗草苔蟲幼蟲附著活性測(cè)定方法參考文獻(xiàn)［6］，蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶PTPIB抑制率測(cè)定方法參考文獻(xiàn)［7］，次黃嘌呤單磷酸脫氫酶 (IMPDH)抑制率測(cè)定方法參考文獻(xiàn)［8］，組織蛋白酶Cathepsin B抑制率測(cè)定方法參考文獻(xiàn)［9］。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 化合物1～16的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1-16

化合物1 n-butyl isobutyl terephthalate:為黃色油狀物;UV(max)(MeOH)220，251，314 nm;1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH7.55(1H，dd，J=2.0，5.5 Hz，H-2)，7.75(1H，dd，J=2.0，5.5 Hz，H-3)，7.75(1H，dd，J=2.0，5.5 Hz，H-5)，7.55(1H，dd，J=2.0，5.5 Hz，H-6)，4.10(2H，d，J=6.5 Hz，H-9)，4.32(2H，t，J=6.5 Hz，H-9')，2.06(1H，m，H-10)，1.72(2H，m，H-10')，1.02(3H，d，J=6.5 Hz，H-11)，1.45(2H，m，H-11')，1.01(3H，d，J=6.5 Hz，H-12)，0.98(3H，t，J=7.5 Hz，H-12');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC132.5(C，C-1)，130.9(CH，C-2)，128.9(CH，C-3)，132.5(C，C-4)，128.9(CH，C-5)，130.9(CH，C-6)，167.7(C，C-7)，167.7(C，C-7')，71.8(CH2，C-9)，65.6(CH2，C-9')，27.8(CH，C-10)，30.7(CH2，C-10')，19.2(CH3，C-11)，30.7(CH2，C-11')，19.2(CH3，C-12)，13.7(CH3，C-12');(+)-HRESIMS m/z［M+H］+279.1615(calcd.for C16H23O4，279.1591)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)［11，12］發(fā)現(xiàn)該化合物與 dibutyl terephthalate唯一的區(qū)別在于C-9位取代基的不同，故鑒定該化合物為n-butyl isobutyl terephthalate。

化合物2 dibutyl terephthalate:為黃色油狀物;UV(max)(MeOH)219，255，315 nm;1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH7.52(1H，dd，J=3.5，6.0 Hz，H-2)，7.70(1H，dd，J=3.5，6.0 Hz，H-3)，7.70(1H，dd，J=3.5，6.0 Hz，H-5)，7.52(1H，dd，J=3.5，6.0 Hz，H-6)，4.21(4H，m，H-9，9')，1.68(4H，m，H-10，10')，1.40(4H，m，H-11，11')，0.90(6H，t，J=7.0 Hz)。上述氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定該化合物為dibutyl terephthalate。

化合物3 1，3，7-trihydroxy-6-methylanthraquinone:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)221，250，279 and 439 nm;1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH6.67(1H，s，H-2)，7.05(1H，s，H-4)，7.47(1H，s，H-5)，7.62(1H，s，H-8)，2.31(3H，s，H-11)，12.29(1H，brs，OH-1)，12.12(1H，brs，OH-3 or OH-7);(+)-ESIMS m/z 227.4［M+Na］+。上述氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)［13］一致，故鑒定該化合物為 1，3，7-trihydroxy-6-methylanthraquinone。

化合物4 1，6，7-trihydroxy-3-methoxy-anthraquinone:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)225，274 and 442 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH6.09(1H，s，H-2)，6.81(1H，s，H-4)，7.63(1H，s，H-5)，8.10(1H，s，H-8)，4.11(3H，s，H-11)，12.90(1H，brs，OH-1)，12.30(1H，brs，OH-6 or OH-7)。上述氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］比對(duì)，確定該化合物為 1，6，7-trihydroxy-3-methoxy-anthraquinone。

化合物5 Isorhodoptilometrin:為桔黃色粉末;［α］20D+16.8(c 0.19，MeOH)，UV(max)(MeOH)225，290，and 450 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH7.17(1H，d，J=1.0 Hz，H-2)，7.53(1H，d，J=1.0 Hz，H-4)，7.10(1H，d，J=2.5 Hz，H-5)，6.57(1H，d，J=2.5 Hz，H-7)，2.72(2H，m，H-1')，3.89(1H，m，H-2')，1.09(3H，d，J=6.0 Hz，H-3');13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC161.0(C，C-l)，113.8(C，C-1a)，124.6(CH，C-2)，149.5(C，C-3)，120.8(CH，C-4)，132.5(C，C-4a)，109.8(CH，C-5)，162.4(C，C-6)，107.9(CH，C-7)，164.6(C，C-8)，189.0(C，C-9)，112.6(C，C-9a)，181.4(C，C-10)，134.8(C，C-10a)，45.0(CH2，C-1')，66.5(CH，C-2')，23.4(CH3，C-3');(+)-ESIMS m/z 315［M+H］+，m/z 337.1［M+Na］+，分子式為C17H14O6。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定該化合物為isorhodoptilometrin。其中C-2'的絕對(duì)構(gòu)型可通過(guò)比較化合物5和化合物(1，3，6，8-tetrahydroxyanthraquinoe congener)［16］的旋光數(shù)據(jù)得以確定:化合物5的［α］20D+16.8(c 0.19，MeOH)，1，3，6，8-tetrahydroxyanthraquinoe congener的［α］20D+151.5(c 0.1，EtOH)，兩者的旋光值均為+，故推測(cè) C-2'的絕對(duì)構(gòu)型為 R，本文是第一次報(bào)道 isorhodoptilometrin中2-羥基丙基片段上C-2'的絕對(duì)構(gòu)型。

化合物6 Citreorosein:為桔黃色粉末;UV(max)(MeOH)221，253，266，289 and 425 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH7.21(1H，s，H-2)，7.61(1H，s，H-4)，6.99(1H，s，H-5)，6.36(1H，s，H-7)，4.59(2H，brs，H-11)。上述氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定該化合物為 citreorosein。

化合物7 Emodin:為桔黃色粉末;UV(max)(MeOH)202，231，250，270 and 430 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH7.52(1H，s，H-2)，7.20(1H，s，H-4)，7.13(1H，d，J=2.0 Hz，H-5)，6.61(1H，d，J=2.0 Hz，H-7)，2.38(3H，s);(-)-ESIMS m/z 269.1［M-H］-，分子式為C15H10O5。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定該化合物為emodin。

化合物8 methyl-3，8-dihydroxy-6-methyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylate:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)197，238，256，309 and 387 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH6.93(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.84(1H，d，J=2.0 Hz，H-4)，6.86(1H，s，H-5)，6.84(1H，s，H-7)，2.38(3H，s，H-11)，3.87(3H，s，H-12)，12.29(1H，brs，OH-8);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6) δC134.8(C，C-1)，110.9(CH，C-2)，165.0(C，C-3)，107.1(CH，C-4)，155.1(C，C-4a)，157.6(C，C-4b)，103.0(CH，C-5)，148.3(C，C-6)，105.6(C，C-7)，160.4(C，C-8)，108.3(C，C-8a)，178.7(C，C-9)，113.1(C，C-9a)，168.2(C，C-10)，21.7(CH3，C-11)，52.4(CH3，C-12);(+)-ESIMS m/z 301.1［M+H］+;分子式為C16H12O6。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］一致，故鑒定該化合物為 methyl-3，8-dihydroxy-6-methyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylate。

化合物9 Pinselin:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)197，238，266，297 and 393 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH7.45(1H，d，J=9.0 Hz，H-3)，7.60(1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，6.87(1H，s，H-5)，6.63(1H，s，H-7)，2.37(3H，s，H-11)，3.83(3H，s，H-12)，10.44(1H，brs，OH-2)，12.15(1H，brs，OH-8);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC120.6(C，C-1)，151.2(C，C-2)，125.7(CH，C-3)，117.5(CH，C-4)，149.6(C，C-4a)，155.9(C，C-4b)，107.9(CH，C-5)，149.3(C，C-6)，106.4(CH，C-7)，160.8(C，C-8)，111.2(C，C-8a)，180.7(C，C-9)，117.7(C，C-9a)，167.3(C，C-10)，22.5(CH3，C-11)，52.7(CH3，C-12);(+)-ESIMS m/z 323.1 ［M+Na］+;分子式為C16H12O6。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］一致，故鑒定該化合物為pinselin。

化合物10 secalonic acid D:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)244，269 and 388 nm;1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH7.37(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，3')，6.56(2H，d，J=8.5 Hz，H-4，4')，3.82(2H，d，J=10.5 Hz，H-5，5')，2.34(2H，m，H-6，6')，2.65(2H，dd，J=6.0，19.0 Hz，H-7a，7'a)，2.25(2H，dd，J=10.5，19.0 Hz，H-7b，7b')，1.08(6H，d，J=6.6 Hz，H-11，11')，3.66(6H，s，H-13，H-1');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC159.2(C，C-1，1')，117.9(C，C-2，2')，140.1(CH，C-3，3')，107.5(CH，C-4，4')，76.8(CH，C-5，5')，29.5(CH，C-6，6')，36.2(CH2，C-7，7')，177.6(C，C-8，8')，187.1(C，C-9，9')，17.9(CH3，C-11，11')，170.6(C，C-12，12')，53.1(CH3，C-13，13')，158.5(C，C-4a，4a')，101.5(C，8a，8a')，106.7(C，9a，9a')，84.9(C，10a，10a')。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定該化合物為secalonic acid D。

化合物11 quinolactacin C1:為白色粉末;UV(max)(MeOH)215，248，259，315 and 328 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH8.36(1H，brs，2-NH)，7.87(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，7.82(1H，dd，J=8.5，7.0 Hz，H-6)，7.49(1H，dd，J=8.0，7.0 Hz，H-7)，8.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，4.04(3H，s，4-Me)，7.03(1H，brs，OH-3)，2.25(1H，m，H-1')，2.00(1H，m，H-2'a)，1.13(1H，m，H-2'b)，0.93(3H，d，J=7.0 Hz，H-3')，0.52(3H，d，J=6.5 Hz，1'-Me);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC167.1(s，C-1)，89.3(s，C-3)，163.9(s，C-3a)，141.9(s，C-4a)，117.8(d，C-5)，133.3(d，C-6)，125.2(d，C-7)，126.2(d，C-8)，128.9(s，C-8a)，172.1(s，C-9)，109.4(s，C-9a)，35.2(q，4-CH3)，41.4(d，C-1')，23.8(t，C-2')，12.8(q，C-3')，13.6(q，1'-CH3);(+)-HRESIMS給出的分子式為C16H19N2O3(m/z 287.1420［M+H］+，calcd.for C16H19N2O3，287.1390)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］一致，故鑒定該化合物為quinolactacin C1。

化合物12 quinolactacin C2:為白色粉末;UV(max)(MeOH)215，248，259，315 and 328 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH8.29(1H，brs，2-NH)，7.87(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，7.82(1H，dd，J=8.5，7.0 Hz，H-6)，7.49(1H，dd，J=8.0，7.0 Hz，H-7)，8.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，4.04(3H，s，4-Me)，7.03(1H，brs，OH-3)，2.17(1H，m，H-1')，2.00(1H，m，H-2'a)，1.13(1H，m，H-2'b)，0.70(3H，d，J=7.0 Hz，H-3')，1.11(3H，d，J=6.5 Hz，1'-Me);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC166.9(s，C-1)，89.0(s，C-3)，163.9(s，C-3a)，141.9(s，C-4a)，117.8(d，C-5)，133.3(d，C-6)，125.2(d，C-7)，126.2(d，C-8)，128.9(s，C-8a)，172.1(s，C-9)，109.4(s，C-9a)，35.2(q，4-CH3)，41.2(d，C-1')，22.9(t，C-2')，11.9(q，C-3')，13.1(q，1'-CH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］一致，故鑒定該化合物為quinolactacin C2。

化合物13 quinolactacin A1:為白色粉末;UV(max)(MeOH)216，250，259，316 and 329 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH8.08(1H，brs，NH-2)，4.89(1H，brs，H-3)，7.80(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，7.77(1H，dd，J=7.0，8.5 Hz，H-6)，7.46(1H，dd，J=7.0，7.5 Hz，H-7)，8.23(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)，3.81(3H，s，4-Me)，2.15(1H，m，H-1')，1.58(1H，m，H-2')，1.40(1H，m，H-2')，0.99(3H，t，J=7．5 Hz，H-3')，0.43(3H，d，J=6.5 Hz，1'-Me)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］一致，故鑒定該化合物為 quinolactacin A1。

化合物14 quinolactacin A2:為白色粉末;UV(max)(MeOH)216，250，259，316 and 329 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH8.15(1H，brs，NH-2)，4.82(1H，brs，H-3)，7.82(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，7.79(1H，dd，J=7.0，8.5 Hz，H-6)，7.48(1H，dd，J=7.0，7.5 Hz，H-7)，8.25(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)，3.84(3H，s，4-Me)，2.18(1H，m，H-1')，0.80(1H，m，H-2')，0.85(1H，m，H-2')，0.63(3H，t，J=7.5 Hz，H-3')，1.12(3H，d，J=6.5 Hz，1'-Me)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］一致，故鑒定該化合物為 quinolactacin A2。

化合物15 quinolactacin B1:為白色粉末;UV(max)(MeOH)214，249，259，316 and 327 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH8.13(1H，brs，2-NH)，4.81(1H，s，H-3)，7.82(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，7.81(1H，dd，J=8.5，7.0 Hz，H-6)，7.48(1H，dd，J=8.0，7.0 Hz，H-7)，8.25(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，3.83(3H，s，4-Me)，2.44(1H，m，H-1')，0.44(3H，d，J=7.0 Hz，H-2')，1.13(3H，d，J=7.0 Hz，1'-Me);13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC168.7(C，C-1)，58.6(C，C-3)，164.3(C，C-3a)，141.3(C，C-4a)，117.1(CH，C-5)，132.6(CH，C-6)，125.2(CH，C-7)，125.8(CH，C-8)，128.0(C，C-8a)，171.7(C，C-9)，110.0(C，C-9a)，36.0(CH3，4-CH3)，29.0(CH，C-1')，13.7(CH3，C-2')，20.6(CH3，1'-CH3)。上述氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［20］一致，故鑒定該化合物為quinolactacin B1。

化合物16 3-methyl-1H-indole-2-carboxylic acid:為黃色粉末;UV(max)(MeOH)205，230 and 295 nm;1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH9.04(1H，brs，NH-1)，7.81(1H，d，J=6.5 Hz，H-4)，6.75(1H，dd，J=7.0，6.5 Hz，H-5)，7.40(1H，dd，J=7.0，7.5 Hz，H-6)，6.86(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)，9.91(1H，s，2-COOH)，1.91(3H，s，3-Me)。上述氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］一致，故鑒定該化合物為3-methyl-1H-indole-2-carboxylic acid。

3 結(jié)果與討論

活性篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物5和7有強(qiáng)抗草苔蟲幼蟲附著活性，其EC50值分別為3.8和6.0 μg/ml，且 LC50/EC50值分別為 ＞15.0 和 ＞16.5;化合物5，10，15對(duì)PTPlB有一定的抑制作用，其IC50值分別為67.8，24.0，185.2 μM;化合物5，6 對(duì) IMPDH有一定的抑制作用，其 IC50值分別為318.5，122.7 μM;化合物10，差向異構(gòu)體12 和13(1∶1)的混合物，以及15對(duì)cathepsin B有一定的抑制作用，其 IC50值分別為156.7，68.5，16.0 μM;而其它化合物則沒(méi)有明顯活性。通過(guò)比較化合物11～15的結(jié)構(gòu)和酶抑制活性，推測(cè)在它們化學(xué)結(jié)構(gòu)的基本骨架上C-3上的羥基取代將可能顯著降低其對(duì)cathepsin B的抑制活性。

1 Saleem M，Ali MS，Hussain S，et al.Marine natural products of fungal origin.Nat Prod Rep，2007，24:1142-1152.

2 Newman DJ，Hill RT.New drugs from marine microbes:the tide is turning.J Ind Microbiol Biot，2006，33:539-544.

3 Newton GGF，Abraham EP.Cephalosporin-C，a New Antibiotic Containing Sulphur and D-Alpha-Aminoadipic Acid.Nature，1955，175:548-548.

4 Bugni TS，Ireland CM.Marine-derived fungi:a chemically and biologically diverse group of micro-organisms.Nat Prod Rep，2004，21:143-163.

5 Rateb ME，Ebel R.Secondary metabolites of fungi from marine habitats.Nat Prod Rep，2011，28:290-344.

6 Qi SH，Xu Y，Xiong HR，et al.Antifouling and antibacterial compounds from a marine fungus Cladosporium sp.F14.World J Microb Biot，2009，25，399-406.

7 Montalibet J，Skorey KI，Kennedy BP.Protein tyrosine phosphatase:enzymatic assays.Methods，2005，35，2-8.

8 Nimmesgern E，Black J，F(xiàn)uter O，et al.Biochemical Analysis of the Modular Enzyme Inosine 5'-Monophosphate Dehydrogenase.Protein Expres Purif，1999，17，282-289.

9 Halangk W，Lerch MM，Brandt-Nedelev B，et al.Role of cathepsin B in intracellular trypsinogen activation and the onset of acute pancreatitis.J Clin Invest，2000，106，773-781.

10 Lai X，Cao L，Tan H，et al.Fungal communities from methane hydrate-bearing deep-sea marine sediments in South China Sea.Isme J，2007，1:756-762.

11 Mark H，Huntersville NC，Phillip WT，et al.Low-melting mixtures of di-n-butyl and diisobutyl terephthalate.Patent US7361779.Apr 22，2008.

12 Niu F(牛鋒)，Xie GB(謝光波)，Cui Z(崔征)，et al.Chemical constituents from Roots of Semiaquilegia adoxoides.J Chin Pharm Sci(中國(guó)藥學(xué)，英文版)，2006，15:251-254.

13 Hosoe T，Nozawa K，Udagawa S，et al.An anthraquinone derivative from dihotomophthora-lutea.Phytochemistry，1990，29:997-999.

14 Wang DY，Ye Q，Li B G，et al.A new anthraquinone from Gladiolus gandavensis.Nat Prod Res，2003，17:365-368.

15 Ren H，Tian L，Guo QQ，et al.Secalonic acid D;A Cytotoxic Constituent from Marine Lichenderived Fungus Gliocladium sp.T3.Arch Pharm Res，2006，29:59-63.

16 Gernot B，Edrada RA，Ebel R，et al.Anthraquinones and Betaenone Derivatives from the Sponge-Associated Fungus Microsphaeropsis Species:Novel Inhibitors of Protein Kinases.J Nat Prod，2000，63:739-745.

17 Siddiqui IN，Zahoor A，Hussain H，et al.Diversonol and blennolide derivatives from the endophytic fungus Microdiplodia sp.:absolute configuration of diversonol.J Nat Prod，2011，74:365-373.

18 Mikio Y，Emi O.Isolation and Structures of Oxaphenalenone Dimers from Talaromyces bacillosporus.Chem Pham Bull，1980，28:3649-3655.

19 Clark B，Capon R J，Lacey E，et al.Quinolactacins revisited:from lactams to imide and beyond.Org Biomo Chem，2006，4:1512-1519.

20 Zhang XQ，Jiang WQ，Sui ZH.Concise enantioselective syntheses of quinolactacins A and B through alternative Winterfeldt oxidation.J Org Chem，2003，68:4523-4526.

21 Gutierrez-Lugo MT，Woldemichael GM，Singh MP，et al.Isolation of three new naturally occurring compounds from the culture of Micromonospora sp.P1068.Nat Prod Res，2005，19:645-52.