麗江黃芩根化學(xué)成分的研究

林玉萍， 付勝男， 王蒙蒙， 李欣坪， 喬 雪， 華 燕

(1.西南林業(yè)大學(xué)，西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650224；2.云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，云南 昆明 650500)

麗江黃芩ScutellarialikiangensisDiels為唇形科黃芩屬植物，生于海拔2 500～3 100 m的山地干燥灌叢或草坡上，主產(chǎn)于云南西北部，在當(dāng)?shù)爻Ｒ渣S芩地方品種進(jìn)行使用，具有清熱、消炎、解毒等功效[1-3]，可用于熱病發(fā)熱、咳嗽、痢疾、吐血等癥，其用藥歷史悠久，但關(guān)于化學(xué)成分和藥理活性的研究不夠深入。劉美蘭等[4]從麗江黃芩中分離得到6個(gè)黃酮類化合物；刁紅梅等[5]發(fā)現(xiàn)麗江黃芩與正品黃芩的化學(xué)成分具有一定差異，并且抗菌活性優(yōu)于后者。本實(shí)驗(yàn)對(duì)麗江黃芩根部95%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，利用多種色譜學(xué)手段進(jìn)行分離，波譜學(xué)方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從中分離鑒定了13個(gè)化合物，其中3、5～6、8、10～13為首次從該植物中分離得到。

1 材料

AV-400MHz型超導(dǎo)核磁共振譜儀(瑞士Bruker公司)； Mat-95質(zhì)譜儀(美國(guó)Finnigan公司)；顯微熔點(diǎn)儀(溫度未校正)(日本Yanaco公司)；柱層析硅膠(200～300、300～400目)、薄層層析硅膠H(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20柱(瑞典Pharmacia公司)；氘代試劑(美國(guó)CIL公司)。所用試劑為分析純(中國(guó)天津市化學(xué)試劑一廠)或工業(yè)純(云南汕滇藥業(yè))。

麗江黃芩于2018年采自云南省麗江市，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)張潔副教授鑒定為唇形科植物麗江黃芩ScutellarialikiangensisDiels的根。

2 提取與分離

取麗江黃芩根的粗粉0.75 kg，以8倍量90%乙醇加熱回流提取4次，回收溶劑得醇提浸膏(178.9 g)，加入適量水混懸至懸浮液，用乙酸乙酯萃取3次，合并3次萃取液，回收溶劑，得浸膏43.5 g，記為Fr.A；剩余水溶液繼續(xù)用正丁醇萃取3次，合并3次萃取液，回收溶劑，得浸膏66.8 g，記為Fr.B。

Fr.A組分經(jīng)硅膠柱，以石油醚、石油醚-乙酸乙酯(100∶1～5∶1)、三氯甲烷-甲醇(100∶1～1∶1)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢查合并劃分為9個(gè)流分A-1～A-9。A-5流分經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(40∶1～5∶1)梯度洗脫得8個(gè)流分，流分3經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(40∶1)洗脫純化，重結(jié)晶分離得化合物1(18.7 mg)；流分6經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(30∶1)洗脫純化，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，丙酮洗脫分離得化合物7(21.3 mg)；流分8經(jīng)硅膠柱，環(huán)己烷-乙酸乙酯(20∶1)洗脫純化，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，丙酮洗脫分離得化合物2(18.5 mg)。A-8流分經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(60∶1～5∶1)梯度洗脫得6個(gè)流分，流分2經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(40∶1)洗脫純化，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，三氯甲烷-甲醇(3∶2)洗脫分離得化合物12(12.6 mg)；流分4經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(10∶1)洗脫純化和重結(jié)晶，分離得化合物3(22.6 mg)；流分6經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(10∶1)洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，三氯甲烷-甲醇(3∶2)洗脫分離得化合物8(14.6 mg)。

Fr.B組分經(jīng)硅膠柱，以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(100∶1～1∶1)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢查合并劃分為9個(gè)流分B-1～B-9。B-2流分經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(100∶1～20∶1)梯度洗脫得7個(gè)流分，流分3經(jīng)硅膠柱三氯甲烷-甲醇(15∶1)洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，丙酮洗脫分離得化合物13(9.8 mg)；流分5經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(10∶1)洗脫純化，重結(jié)晶分離得化合物4(16.1 mg)。B-6流分經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(40∶1～1∶1)梯度洗脫得5個(gè)流分，流分1經(jīng)硅膠柱三氯甲烷-甲醇(15∶1)洗脫純化，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，三氯甲烷-甲醇(3∶2)洗脫分離得化合物5(13.8 mg)；流分2經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(15∶1)洗脫純化，再經(jīng)Sephadex LH-20柱純化，丙酮洗脫分離得化合物9(15.2 mg)；流分3經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(10∶1)洗脫純化，重結(jié)晶分離得化合物10(19.4 mg)。B-8流分經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(50∶1～10∶1)梯度洗脫得9個(gè)流分，流分4經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(20∶1)洗脫純化，重結(jié)晶分離得化合物11(10.3 mg)；流分6經(jīng)Sephadex LH-20柱純化三氯甲烷-甲醇(3∶2)洗脫，再經(jīng)硅膠柱，三氯甲烷-甲醇(5∶1)洗脫純化和重結(jié)晶，分離得化合物6(8.9 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：284.3[M]+，分子式C16H12O5。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.51(1H, s，5-OH)，10.80(1H，s，7-OH)，8.08(2H，d，J=6.5 Hz， H-2′，6′)，7.62(3H，m，H-3′～5′)，6.99(1H，s，H-3)，6.32(1H，s，H-6)，3.87(3H，s，8-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：163.0(C-2)，105.0(C-3)，182.0(C-4)，156.2(C-5)，99.1(C-6)，157.3(C-7)，127.7(C-8)，150.0(C-9)，103.7(C-10)，130.8(C-1′)，126.2(C-2′，6′)，129.2(C-3′，5′)，132.0(C-4′)，61.0(8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定為漢黃芩素。

化合物2：黃色結(jié)晶(丙酮)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：270.2[M]+，分子式C15H10O5。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：7.92(2H，m，H-2′，6′)，7.28(3H，m，H-3′～5′)，7.20(1H，s，H-3)，6.57(1H，s，H-8)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：164.5(C-2)，104.9(C-3)，183.1(C-4)，147.0(C-5)，130.8(C-6)，155.2(C-7)，95.3(C-8)，151.2(C-9)，105.2(C-10)，133.5(C-1′)，127.3(C-2′，6′)，129.6(C-3′，5′)，133.0(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，故鑒定為黃芩素。

化合物3：黃色粉末(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：446.4[M]+，分子式C21H18O11。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：8.07(2H，m，H-2′，6′)，7.57(3H，m，H-3′～5′)，7.04(1H，s，H-3)，6.84(1H，s，H-8)，5.23(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.04～3.18(6H，m，H-2″～6″)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：163.5(C-2)，108.2(C-3)，183.8(C-4)，152.3(C-5)，130.8(C-6)，155.5(C-7)，95.0(C-8)，153.0(C-9)，103.7(C-10)，132.6(C-1′)，127.5(C-2′，6′)，131.0(C-3′，5′)，133.2(C-4′)，100.8(C-1″)，75.1(C-2″)，77.3(C-3″)，72.8(C-4″)，77.6(C-5″)，170.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定為黃芩苷。

化合物4：黃色粉末(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：254.2[M]+，分子式C15H10O4。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.85(1H, s,5-OH)，10.93(1H，s，7-OH)，8.05(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，7.62(3H，m，H-3′～5′)，6.95(1H，s，H-3)，6.56(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.77(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：163.6(C-2)，105.7(C-3)，182.2(C-4)，161.7(C-5)，99.4(C-6)，164.8(C-7)，94.6(C-8)，158.0(C-9)，104.4(C-10)，131.2(C-1′)，126.9(C-2′，6′)，129.6(C-3′，5′)，132.4(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，故鑒定為白楊素。

化合物5：白色針狀結(jié)晶(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：430.4[M]+，分子式C21H18O10。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：7.92(2H，m，H-2′，6′)，7.48(3H，m，H-3′～5′)，7.05(1H，s，H-3)，6.94(1H，d，J=1.6 Hz，H-8)，6.11(1H，d，J=1.6 Hz，H-6)，5.35(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.73～4.47(4H，m，H-2″～5″)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：164.3(C-2)，110.1(C-3)，183.4(C-4)，163.0(C-5)，100.2(C-6)，163.6(C-7)，94.7(C-8)，156.1(C-9)，106.5(C-10)，133.2(C-1′)，126.7(C-2′，6′)，129.3(C-3′，5′)133.8(C-4′)，101.8(C-1″)，74.6(C-2″)，77.9(C-3″)，73.4(C-4″)，78.1(C-5″)，170.2(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定為白楊素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。

化合物6：白色針狀結(jié)晶(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：430.4[M]+，分子式C21H18O10。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：13.52(1H, s，5-OH)，8.19(2H，m，H-2′，6′)，7.62(1H，d，J=7.9 Hz，H-4′)，7.57(2H，d，J=7.9 Hz，H-3′，5′)，7.01(1H，s，H-3)，4.78(1H，d，J=9.9 Hz，H-1?)，4.73(1H，d，J=9.6 Hz，H-1″)，3.90(1H，m，H-2?)，3.86(1H，m，H-2″，4″)，3.78(1H，m，H-6?)，3.67(1H，m，H-5″)，3.56(1H，m，H-6?)，3.45(1H，m，H-4?)，3.31(1H，m，H-3?)，3.27(1H，m，H-5?)，3.12(1H，m，H-3″)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：163.5(C-2)，104.8(C-3)，182.4(C-4)，157.1(C-5)，108.3(C-6)，161.2(C-7)，105.3(C-8)，155.2(C-9)，104.0(C-10)，131.0(C-1′)，129.2(C-2′，6′)，126.9(C-3′，5′)132.0(C-4′)，74.1(C-1″)，69.6(C-2″)，72.8(C-3″)，68.4(C-4″)，70.1(C-5″)，73.2(C-1?)，70.9(C-2?)，78.9(C-3?)，60.4(C-4?)，81.9(C-5?)，61.2(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，故鑒定為白楊素-6-C-α-L-阿拉伯吡喃糖基-8-C-β-D-葡萄吡喃糖苷。

化合物7：黃色粉末(氯仿)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：284.3[M]+，分子式C16H12O5。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.98(1H, s，5-OH)，7.87(2H，dd，J=8.0，1.7 Hz H-2′，6′)，7.52(3H，m，H-3′～5′)，6.67(1H, s，H-3)，6.62(1H, s，H-8)，4.03(3H，s，6-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：164.4(C-2)，106.2(C-3)，183.3(C-4)，153.5(C-5)，132.1(C-6)，155.4(C-7)，93.7(C-8)，152.3(C-9)，105.5(C-10)，130.6(C-1′)，126.5(C-2′，6′)，129.3(C-3′，5′)，131.6(C-4′)，61.1(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，故鑒定為千層紙素A。

化合物8：白色針狀結(jié)晶(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：460.4[M]+，分子式C22H20O11。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：7.83(2H，d，J=7.5 Hz，H-2′，6′)，7.60(3H，m，H-3′～5′)，6.59(1H，s，H-3)，6.12(1H，s，H-8)，4.65(1H，d，J=7.4 Hz，H-1″)，4.51-4.12(4H，m，H-2″～5″)，3.78(3H，s，6-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：161.6(C-2)，100.9(C-3)，183.0(C-4)，153.6(C-5)，134.1(C-6)，156.2(C-7)，94.9(C-8)，157.2(C-9)，104.9(C-10)，132.2(C-1′)，123.0(C-2′，6′)，130.2(C-3′，5′)，133.7(C-4′)，101.0(C-1″)，74.1(C-2″)，77.6(C-3″)，70.4(C-4″)，77.9(C-5″)，169.2(C-6″)，60.7(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定為千層紙素A-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。

化合物9：黃色粉末(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：256.3[M]+，分子式C12H16O6。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.99(1H，s，5-OH)，10.83(1H，s，2′-OH)，7.86(1H，dd，J=8.5，1.8 Hz，H-6′)，7.39(1H，t，J=9.8 Hz，H-4′)，7.05(1H，d，J=8.5 Hz，H-3′)，7.04(1H，s，H-3)，6.99(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.57(1H，s，H-8)，3.76(3H， s，6-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：161.3(C-2)，108.5(C-3)，182.3(C-4)，152.6(C-5)，131.3(C-6)，157.4(C-7)，94.2(C-8)，152.6(C-9)，104.1(C-10)，117.3(C-1′)，156.7(C-2′)，117.0(C-3′)，132.7(C-4′)，119.4(C-5′)，128.5(C-6′)，59.9(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定為韌黃芩素Ⅱ。

化合物10：黃色粉末(甲醇)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：476.4[M]+，分子式C22H20O12。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.89(1H，s，5-OH)，10.85(1H，s，2′-OH)，7.89(1H，dd，J=8.0，1.7 Hz，H-6′)，7.42(1H，ddd，J=8.0，7.4，1.7 Hz，H-4′)，7.11(1H，s，H-3)，7.08(1H，d，J=7.4 Hz，H-3′)，7.06(1H，s，H-8)，7.02(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，5.59(1H，d，J=4.4 Hz，2″-OH)，5.48(1H，d，J=7.4 Hz，H-1″)，5.34(2H，dd，J=7.2，2.2 Hz，3″，4″-OH)，4.20～3.38(4H，m，H-2″～5″)，3.77(3H， s，6-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：162.0(C-2)，108.8(C-3)，182.5(C-4)，152.5(C-5)，132.4(C-6)，156.0(C-7)，93.9(C-8)，152.3(C-9)，105.9(C-10)，117.1(C-1′)，156.9(C-2′)，117.1(C-3′)，132.9(C-4′)，119.3(C-5′)，128.5(C-6′)，99.3(C-1″)，72.8(C-2″)，75.6(C-3″)，71.2(C-4″)，75.2(C-5″)，170.1(C-6″)，60.3(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定為韌黃芩素Ⅱ-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。

化合物11：淡黃色粉末(氯仿)，HCl-Mg反應(yīng)呈陽(yáng)性，EI-MSm/z：548.6[M]+，分子式C26H28O13。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：13.52(1H，s，5-OH)，8.09(2H，m，H-2′，6′)，7.05(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，7.01(1H，s，H-3)，5.03(1H，m，H-1?)，4.11～3.05(4H，m，H-2″～5″)，3.84～3.05(4H，m，H-2″～5″)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：164.2(C-2)，104.0(C-3)，182.5(C-4)，157.1(C-5)，108.3(C-6)，163.5(C-7)，105.3(C-8)，152.4(C-9)，104.8(C-10)，120.5(C-1′)，129.1(C-2′)，116.5(C-3′)，161.2(C-4′)，116.5(C-5′)，129.1(C-6′)，104.1(C-1″)，73.8(C-2″)，69.1(C-3″)，81.9(C-4″)，69.6(C-5″)，70.1(C-6″)，76.7(C-1?)，69.6(C-2?)，74.1(C-3?)，68.4(C-4″)，79.3(C-5?)，61.2(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，故鑒定為芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖基-8-C-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物12：黃色粉末(氯仿)，EI-MSm/z：236.3[M]+，分子式C10H20O6。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：3.91(1H，d，J=9.6 Hz，H-3′)，3.80(1H，m，H-5′)，3.74(1H，dd，J=11.8，3.2 Hz，H-4′)，3.74(1H，dd，J=11.2，1.0 Hz，H-6′)，3.69(1H，d，J=12.0 Hz，H-2′)，3.66(1H，d，J=12.1 Hz，H-1′)，3.65(1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，H-6)，3.57(2H，m，H-1)，1.54(2H，m，H-2)，1.47(2H， m，H-3)，0.98(3H，t，J=7.2 Hz，H-4)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：61.8(C-1)，33.5(C-2)，20.7(C-3)，14.5(C-4)，63.7(C-1′)，101.7(C-2′)，70.8(C-3′)，71.7(C-4′)，71.2(C-5′)，65.3(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，故鑒定為正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷。

化合物13：無(wú)色油狀液體，EI-MSm/z：334.6[M]+，分子式C20H30O4。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.70(2H，dd，J=3.3，5.7 Hz，H-3，6)，7.51(2H，dd，J=3.3，5.7 Hz，H-4，5)，4.29(4H，t，J=6.7 Hz，H-2′，2″)，1.74～1.66(4H，m，H-3′，3″)，1.46～1.38(4H，m，H-4′，4″)，1.23(4H，s，H-5′，5″)，0.94(6H，t，J=7.4 Hz，H-6′，6″)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：132.6(C-1，2)，129.1(C-3，6)，131.3(C-4，5)，167.9(C-1′，1″)，65.8(C-2′，2″)，30.8(C-3′，3″)，29.9(C-4′，4″)，19.4(C-5′，5″)，13.9(C-6′，6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二正戊酯。

4 討論

麗江黃芩與滇黃芩同為云南民族藥的藥用資源，主要含有黃酮苷元(化合物3、5～6、8、11)和黃酮苷(化合物1～2、4、7、9～10)，化學(xué)成分較為相似，但麗江黃芩還含有非黃酮(化合物12～13)，其中3、5～6、8、10～13為首次從該植物中分離得到。近年來(lái)研究表明，黃酮類具有抗氧化、抗炎、抗菌、調(diào)節(jié)脂代謝、抗腫瘤等作用，且毒性較小，已成為研究熱點(diǎn)[16-20]；本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物1具有較好的抗炎、抗腫瘤活性[21]，2具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、保肝、抗糖尿病等多種藥理活性[22]，3具有抗炎、抗凋亡、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)元等藥理活性[23]，4具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗癌等藥理活性[24]，7具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒、保護(hù)血管等藥理活性[25]。本研究探尋麗江黃芩的化學(xué)成分，明確其藥理活性研究基礎(chǔ)，闡明其用藥依據(jù)，可為其他民族藥的考察奠定理論基礎(chǔ)。