2型糖尿病伴冠心病病人載脂蛋白E基因多態(tài)性、血管內皮素1及頸動脈斑塊特點分析

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2025.14.024

AnalysisofApoipoproteinGenePolyopsmEdotelinandCarotidPlaqueCharacteristisinatitsitTbte

Mellitus Complicated with Coronary Heart Disease

LIU Chuntian，WANG Xiaojuan

，E-milaiinren83@.com

Keywordstype2diabetes melitus;coronary heartdisease;apolipoproteinE;endothelin1;carotidartery plaque

2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）是影響老年人健康的常見慢性疾病，預計今后20余年，我國糖尿病患病總數(shù)將增加到1.75億人[1]。T2DM病人易并發(fā)冠心?。╟oronaryheartdisease，CAD），T2DM病人較非T2DM病人發(fā)生CAD的風險高 2～3 倍[2]，是T2DM病人死亡的重要原因[3]。脂質代謝與載脂蛋白E（apolipoproteinE，ApoE）基因有關，脂質代謝異常引起血管內皮損傷，血管內皮素升高，導致血管動脈硬化斑塊形成。本研究分析T2DM伴CAD病人ApoE基因多態(tài)性、血管內皮素與頸動脈斑塊特點。

1資料與方法

1.1 研究對象

選取2020年1月一2022年6月在我院老年科住院的病人，本研究已經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審核（編號：2023倫理112），所有病人人組前均簽署書面知情同意書。收集病人年齡、性別、病史及生化指標，如血脂異常、血糖、血管內皮素。血脂異?；蚋咧Y標準4]：總膽固醇 （TC）gt;5.17mmol/L ，三酰甘油（TG） 1gt;1.69 mmol/L，低密度脂蛋白膽固醇（L oI/L，或高密度脂蛋白膽固醇 （11DL-C）lt;1.03mmol/L ?？崭寡?≥7.0mmol/L 或餐后2h血糖≥11.1mmolL，符合糖尿病診斷標準[5]

1.2 分組

將有糖尿病或冠心病病人分為糖尿病組（T2DM組）、冠心病組（CAD組）、糖尿病合并冠心病組（T2DM + CAD組）；將無糖尿病及冠心病病人設為對照組。T2DM組120例符合糖尿病診斷標準或正在接受口服抗糖尿病藥物治療；CAD組490例，主要冠狀動脈或其由冠狀動脈造影定義的分支之一至少存在50% 的狹窄；T2DM + CAD組320例患有糖尿病并發(fā)冠狀動脈疾?。ㄅ懦?型糖尿病、肝腎功疾病、腫瘤及自身免疫性疾?。?；對照組300名無高脂血癥、高血壓、心血管疾病和糖尿病的健康個體。

1.3 基因分析

按照說明書操作，從外周血白細胞中分離基因組DNA（中國珠海賽樂奇生物技術有限公司），使用相應的試劑盒測定。在Nanodrop 2000^m 分光光度計（賽默飛世爾科技）上，通過260、 280nm （光密度，OD）光吸收值估計DNA濃度和純度。使用檢測試劑盒對兩個ApoE單核苷酸多態(tài)性（SNP）類型（rs429358和rs7412）進行基因分型。所有樣品均根據(jù)說明書的說明進行擴增，采用全自動酶標檢測系統(tǒng)（珠海賽樂奇）對擴增產(chǎn)物進行測定。

1.4 血脂檢測

至少禁食12h后，收集靜脈血，使用自動生化分析儀器檢測血漿TC、TG、HDL-C及LDL-C水平。

1.5頸動脈斑塊測定

采用HP-5500超聲診斷儀，探頭中心頻率 7.5Hz 病人取頭后仰臥位，檢查一側頸動脈時，頭偏向對側45^° ，分別測量雙側頸動脈的不同部位。測量頸動脈管腔內膜主界面到中膜與外膜交界面之間的垂直距離即為頸動脈內膜中層厚度（IMT）。頸動脈IMT測量取頸總動脈遠端 20mm 、分叉處、頸內及頸外動脈近端10mm ，取雙側頸動脈8個位點的平均值分析[6。頸動脈斑塊的診斷標準：局限血管膜內突出的 1MTgt;1.2mm 的突起。根據(jù)回聲的性質分為軟斑塊、硬斑塊及混合斑塊[7]。

1.6 血管內皮素1（ET-1）測定

采用酶聯(lián)免疫吸附法，血漿解凍后按照試劑盒說明，用標準稀釋液配制（ET-1）濃度梯度，向預包被抗ET-1抗體的微孔板中依次加入標準品孔、樣本孔、空白孔中， 37^°C 孵育 ，經(jīng)過洗滌、加酶標二抗、再洗滌、顯色反應、終止反應步驟，使用酶標儀測定450nm處吸光度。

1.7 統(tǒng)計學處理

采用SPSS26.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布和方差齊性的定量資料以均數(shù)士標準差 （2表示，兩組間比較采用t檢驗或Wilcoxon檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗。定性資料以例數(shù)、百分比 （%） 表示，采用檢驗或Fisher確切概率法。以 Plt; 0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2結果

2.1各組臨床資料比較

T2DM組、CAD組和T2DM + CAD組TC水平高于對照組；T2DM組、CAD組和T2DM+CAD組HDL-C水平均低于對照組，且T2DM + CAD組HDL-C水平低于T2DM組、CAD組，差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05） 。詳見表1。

表1各組臨床資料比較

注：與對照組比較， ① Plt;0.05 ；與T2DM組比較； ② Plt;0.05 ；與CAD組比較， ③ Plt;0.05 。

2.2 各組ApoE基因型及ET-1比較

病人常見的基因型為 ε3/ε3 ，其次是 $＼varepsilon _ { ? } 3 / ＼varepsilon _ { ? } 4 ?$ 和 ε2/ε3 基因型， ε21ε2，ε21ε4 和 ε4/ε4 基因型最低。與對照組比較，CAD組和T2DM + CAD組 ε3/ε4 基因型頻率升高，差異有統(tǒng)計學意義（ ?Plt;0.05 ），T2DM+CAD組 ε3/ε4 基因型分布頻率與T2DM組、CAD組比較，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05） 。與對照組比較，T2DM組、CAD組和T2DM + CAD組ET-1水平升高，且T2DM + CAD組ET-1水平均高于T2DM組、CAD組，差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 。詳見表2。

表2各組ApoE基因型及ET-1比較

注：與對照組比較， ① Plt;0.05 ；與T2DM組比較； ② Plt;0.05 ；與CAD組比較， ③ Plt;0.05 。

2.3 各組頸動脈斑塊特點

T2DM組、CAD組、T2DM + CAD組頸動脈斑塊發(fā)生率均高于對照組，且T2DM + CAD組頸動脈斑塊發(fā)生率高于T2DM組、CAD組，差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt; 0.05）。T2DM + CAD組雙側動脈斑塊發(fā)生率高于對照組、T2DM組及CAD組，差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05）；相較于T2DM組、CAD組，T2DM + CAD組頸動脈斑塊易累及多個血管，且斑塊多為混合斑塊，差異有統(tǒng)計學意義（ ?Plt;0.05 ）。詳見表3。

單位：個（%）

表3各組頸動脈斑塊特點

注：與對照組比較， ① ）Plt;0.05 ；與T2DM組比較， ② Plt;0.05 ；與CAD組比較， ③ Plt;0.05 。

3討論

T2DM是老年病人常見的一種慢性疾病，由遺傳因素和環(huán)境因素誘發(fā)，是CAD的公認危險因素[3]。目前認為T2DM與脂質代謝有關，脂質代謝與ApoE基因有關。ApoE參與脂質的運輸與代謝，主要有2個SNP，即rs429358（ Tgt;C ）和rs7412（ Cgt;^′ T），產(chǎn)生3個主要等位基因，分別為ε2（rs429358-T，rs7412-T）、3（rs429358-T，rs7412-C）和ε4（rs429358-C，rs7412-C）。3個等位基因生成6種不同的基因型，其中3種是純合子，即 ε21ε2，ε3/ε3 和 ε4/ε4;3 種是雜合子，即 ε21ε3，ε2/ε4 和 ε3/ε4 。這些變體編碼3種不同的蛋白質亞型：ApoE2（ε2/ε2，ε2/ε3;Cys112/Cys158）、ApoE3（ε2/ε4，ε3/ε3 ;Cys112/Arg158）和ApoE4（ε3/ε4，ε4/ε4;Arg112/Arg158）。有研究顯示，ApoE基因多態(tài)性與T2DM和CAD 的風險顯著相關，認為其是遺傳的危險因素[8]。

本研究結果顯示，ApoEε3/ε4基因型與無T2DM或有T2DM的CAD風險升高有關，與文獻報道的研究結果[9相近。進一步研究發(fā)現(xiàn)，有ApoEε3/ε4基因型的病人ET-1較其他基因型的病人升高。本研究結果顯示，T2DM + CAD組更易發(fā)生頸動脈斑塊，累及的血管多為雙側血管，表現(xiàn)多支血管病變，多為混合斑塊，說明T2DM + CAD組血管損傷程度更重，與文獻報道[10]一致；進一步研究發(fā)現(xiàn)T2DM + CAD組ET-1水平更高。攜帶ApoEε3/ε4基因型的T2DM + CAD組累及血管更多及損傷血管嚴重，攜帶 ε3/ε4 基因型T2DM病人發(fā)生CVD風險增加。分析可能與T2DM代謝異常引起血管內皮、平滑肌細胞等細胞變化導致冠狀動脈損傷及冠心病。有ApoEε3/ε4基因型的T2DM病人更易發(fā)生CAD，應早期重點干預。

ApoE是一種多功能糖蛋白，在脂蛋白代謝中發(fā)揮核心作用。雖然3種ApoE亞型僅在1個或2個氨基酸不同，但這些微小的變化可影響結構并改變對脂蛋白的親和力[11]。HDL-C是脂質代謝的重要成分，對血管有保護作用，ApoE3優(yōu)先與HDL-C結合，而ApoE4顯示出極低密度脂蛋白（VLDL顆粒的脂質結合能力增強，損害其在循環(huán)中的脂解加工，導致促動脈粥樣硬化的脂蛋白-膽固醇分布。因此，脂蛋白代謝異?？赡懿糠纸忉孴2DM+CAD組ApoE4基因型血漿HDL-C水平最低。

本研究屬于回顧性分析，存在選擇偏倚的，單中心研究結果需擴大研究范圍進一步證實結果。

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（收稿日期：2023-08-03）

（本文編輯 薛妮）