虎杖在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠中的入血成分及代謝產(chǎn)物分析

中圖分類(lèi)號(hào)R965；R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）13-1581-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.13.05

Analysisofcomponentsmigrating to bloodandmetabolitesof Polygonumcuspidatum inrats with acute goutyarthritis

KE Caiyi，SHEN Meng，JI Li， WANG Xuechun，ZHU Yuqing，CHEN Xi， WANG Chengweiqi，MA Qun（School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 102488）

ABSTRACTOBJECTIVEToanalyze thecomponents migrating tobloodand metabolitesofPolygomumcuspidatum inrats with acute gouty arthritis （AGA）.METHODs SD rats were randomly divided into blank group，model group and P. cuspidatum group （ |10g/kg ，byraw material），with 6rats in each group.Except for blank group，AGA model was induced in the remaining groups byinjecting potassiumoxonateand sodiumurate；meanwhile，theywereadministeredcoresponding drugsolutionsorwater intragastrically，onceaday，for1Oconsecutive days.Thehistopathological morphologyof thekne jointtisses inratswas observed;rat serum samples were collected，and the components migrating to blood and metabolites of P. cuspidatum were analyzed byusing UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS. RESULTS Following the intervention with P. cuspidatum，the histopathological morphologyoftheknee jointsynovialtisueinAGAratsshowedsignificantimprovement，withreduced inflammatorycel infiltrationandhyerplasiandthepreservationofteoneyombikestructureintegrityInbothpositiveandnegativeiodes， a total of 67 chemical components were detected in the serum of rats from P. cuspidatum group，including 25 prototype components and42metabolites.The involvedcompoundtypes encompassed stilbenes，anthraquinones，naphthols，andflavonoids，among others.Temetabolicreactionsidentifiedincludedmethylation，acetylation，sulfation，andglucuronidationNotably，compounds suchas polydatin，resveratrolandemodinwerecapableofentering thebloodstreamintheirprototypeformsandundergoingin vivo metabolism.CONCLUSIONsCompoundssuch aspolydatin，resveratrol and emodinarelikelytobe theactivecomponents responsible for the anti-AGA effects of P.cuspidatum.

KEYWORDsPolygomumcuspidatum；acutegoutyarthritis；componentsmigrating toblood；metabolites；pharmacokinetics; active components；UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎（acutegoutyarthritis，AGA）是由尿酸鈉結(jié)晶沉積引發(fā)的急性關(guān)節(jié)炎疾病，在全球患病率呈逐年上升趨勢(shì)，成年人群患病率已達(dá) 0.68%～3.90%^t 11。其現(xiàn)有治療藥物黃嘌呤氧化酶抑制劑、促尿酸排泄藥（如秋水仙堿）非甾體抗炎藥等，存在骨髓抑制、胃腸道毒性、腎功能損傷等副作用，且患者依從性差，從而限制了AGA的臨床治療效果[-3]。

虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.為蓼科多年生草本植物虎杖的根莖和根，具有散瘀止痛的功效，可用于治療風(fēng)濕痹痛等病癥[4]。臨床和現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，虎杖在AGA治療中具有明確療效，是中醫(yī)臨床治療AGA的核心藥物5-。中藥的體內(nèi)代謝產(chǎn)物是研究其作用機(jī)制的重要部分，但目前關(guān)于虎杖入血成分和體內(nèi)代謝過(guò)程的研究較少，且對(duì)其在AGA模型動(dòng)物體內(nèi)的研究鮮有報(bào)道?；诖耍狙芯客ㄟ^(guò)超高效液相色譜串聯(lián)四極桿靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜（UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS）法，鑒定虎杖在AGA大鼠中的人血成分，并研究虎杖在AGA大鼠體內(nèi)的吸收、代謝過(guò)程，以期闡明虎杖治療AGA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為虎杖的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1主要儀器

Ultimate3000型超高效液相色譜儀和Q-ExactiveOrbitrap-MS儀購(gòu)自美國(guó)ThermoFisherScientific公司；BS124S型萬(wàn)分之一電子天平購(gòu)自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；ZDHW型調(diào)溫型電熱套購(gòu)自北京中興偉業(yè)儀器有限公司；WS-10型光學(xué)顯微鏡購(gòu)自江蘇智躍醫(yī)療科技有限公司。

1.2主要藥品與試劑

尿酸鈉（批號(hào)BCCF5862）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；氧嗪酸鉀、烏來(lái)糖（批號(hào)分別為C14819668、C15887472）均購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司?；⒄龋ㄅ?hào)10510201）購(gòu)自北京三和藥業(yè)有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)楊瑤珺教授鑒定為蓼科植物虎杖 P. cuspidatumSieb.etZucc.的干燥根莖和根。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究所用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠共18只，體重（200±20）g ，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）20190008。所有大鼠均置于北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房飼養(yǎng)，使其自由飲食飲水，環(huán)境溫度為 （23±2）^°C ，相對(duì)濕度為 （60±5）% ，每日 12h 光照與 ^12h 黑暗模擬晝夜循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)BUCM-4-2022040602-2003）。

2 方法

2.1 虎杖提取液的制備

稱(chēng)取虎杖藥材 200g ，加3倍量 75% 乙醇浸泡 12h 加熱回流1h，提取3次，合并濾液，于水浴鍋 80^°C 條件 下濃縮成質(zhì)量濃度為 2g/mL 的虎杖提取液（以生藥 量計(jì)）]

2.2 動(dòng)物分組、造模與給藥

18只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為空白組、模型組和虎杖給藥組，每組6只。參考文獻(xiàn)[10—11]方法建立AGA大鼠模型，具體方法如下：模型組和虎杖給藥組大鼠腹腔注射 3% 氧嗪酸鉀 （0.01mL/g ，每天2次，連續(xù)7d;第8天，兩組大鼠腹腔注射烏來(lái)糖 （0.001mL/g ，下同）麻醉，將右膝關(guān)節(jié)向后屈曲 95^°～100^° ，充分打開(kāi)關(guān)節(jié)腔間隙并注入 0.2mL 尿酸鈉混懸液（ 25mg/mL 以造模；空白組大鼠腹腔及右膝關(guān)節(jié)腔注入等體積生理鹽水。造模后，各組取1只大鼠處死，剖取右膝關(guān)節(jié)組織，固定于 4% 多聚甲醛溶液中，經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片后，進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，采用光學(xué)顯微鏡觀察膝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)變化，若造模大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜處理層的邊界模糊、蜂窩狀結(jié)構(gòu)消失，并出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和異常增生，則表明造模成功。各組大鼠造模與給藥同時(shí)進(jìn)行，虎杖給藥組大鼠灌胃虎杖提取液 10g/kg （劑量根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，以生藥量計(jì)），空白組和模型組大鼠灌胃等體積水，每天1次。造模結(jié)束后，各組大鼠又繼續(xù)灌胃相應(yīng)藥物/水

2.3 血清樣本的采集

末次給藥1h后，各組大鼠腹腔注射烏來(lái)糖麻醉，腹主動(dòng)脈取血。血樣于 37^°C 促凝 1h，4^°C 收縮 30min ；在4^°C 條件下以 3500r/min 離心 15min ，吸取上清液，置于 -80^°C 冷凍保存，備測(cè)。

2.4膝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)形態(tài)觀察

取血完成后，處死各組大鼠，取其右膝關(guān)節(jié)組織置于 4% 多聚甲醛溶液中固定，按“2.2\"項(xiàng)下相應(yīng)方法處理后，采用光學(xué)顯微鏡觀察膝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)變化

2.5虎杖入血成分及代謝產(chǎn)物分析

2.5.1 色譜條件

以 ACQUITY UPLC BEH C₁₈（2.1mm×100mm 1.7μm， 為色譜柱，以 0.1% 甲酸溶液（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫 （0～5min，2%B10%B;5～25min 10%B?40%B;25～32min 60%B?98%B 37～39min ， 98% B;39＼～40min， 98%B? 2%B 40～42min 2%B ；流速為 0.20mL/min ；柱溫為30^°C ;進(jìn)樣體積為 2μL 。

2.5.2 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源（ESI），在正、負(fù)離子模式下掃描，掃描范圍為 100～1500Da ;毛細(xì)管溫度為 350^°C ；正離子模式噴霧電壓為 3.5kV ，負(fù)離子模式噴霧電壓為2.5kV ；鞘氣流速為35arb，輔助氣流速為15arb；碰撞能量為 30，50，70V ；一級(jí)分辨率為70000，二級(jí)分辨率為17500;掃描方式為FullMS/dd-MS2模式。

2.5.3 血清樣本的前處理

將模型組和虎杖給藥組大鼠血清分別混合，各取300μL ，加入3倍量乙腈，渦旋混勻 2min ，冰水浴超聲10min ，于 4^°C 條件下以 12000r/min 離心 15min ;取上清液，以氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)尤?200μL 50% 乙腈，渦旋2min，再次離心 15min ，取上清液，按\"2.5.1\"\"2.5.2\"項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析。

2.5.4 數(shù)據(jù)分析

將模型組和虎杖給藥組大鼠的血清質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及虎杖提取液的質(zhì)譜數(shù)據(jù)導(dǎo)人Xcalibur3.0軟件進(jìn)行峰提取和峰匹配，設(shè)置質(zhì)量精度誤差小于 10ppm ，原型成分及代謝產(chǎn)物參考前期研究結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)[12]，根據(jù)化合物的保留時(shí)間、精確分子量、碎片離子信息進(jìn)行鑒定。

3結(jié)果

3.1大鼠膝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)形態(tài)觀察結(jié)果

空白組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織的蜂窩狀結(jié)構(gòu)清晰，未發(fā)現(xiàn)血管增生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織邊界模糊，蜂窩狀結(jié)構(gòu)消失，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和異常增生；與模型組比較，虎杖給藥組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織病理學(xué)形態(tài)明顯改善，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和增生減少，蜂窩狀結(jié)構(gòu)完整。結(jié)果見(jiàn)圖1。

注：箭頭所指為炎癥浸潤(rùn)部位。

圖1各組大鼠滑膜組織的HE染色圖（標(biāo)尺為 100μm 3.2虎杖在大鼠體內(nèi)的入血成分和代謝產(chǎn)物分析

3.2.1 入血成分和代謝產(chǎn)物分析

在正、負(fù)離子模式下分析虎杖提取液以及模型組、虎杖給藥組大鼠血清樣本，得到總離子流圖（圖2）。在參考文獻(xiàn)[12一13]的基礎(chǔ)上，從虎杖給藥組大鼠血清中共檢測(cè)出67個(gè)化學(xué)成分，包括25個(gè)原型成分和42個(gè)代謝產(chǎn)物，具體見(jiàn)表1。

3.2.2 原型成分的鑒定

（1）二苯乙烯類(lèi)：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出5個(gè)以原型入血的二苯乙烯類(lèi)化合物（ ）。以化合物Y3為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 12.70min 準(zhǔn)分子離子峰為 m/z389.1249[M-H]^- ，分子式為C₂₀H₂₂O₈ 。準(zhǔn)分子離子峰 m/z389.1249[M-H]^- 在脫去C₆H₁₀O₅ （162）后生成 m/z227.0715[M.H.C₆H₁₀O₅]^- ，進(jìn)一步失去 C₂H₂O （42）和 2C2H₂O （84）后，分別生成 m/z 185.0609[M-H- ?C₆H₁₀O₅-C₂H₂O]^- 和 m/z 143.050 3[M-H-C₆H₁₀O₅-2C₂H₂O]^- 。這與文獻(xiàn)報(bào)道的白藜蘆醇- O. -葡萄糖苷裂解規(guī)律基本一致[14]，故推測(cè)其為白藜蘆醇- .O. -葡萄糖苷。其具體裂解途徑見(jiàn)圖3。

（2）蒽醌類(lèi)：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出5個(gè)以原型入血的蒽醌類(lèi)化合物（ ）。以化合物Y6為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 23.02min ，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z269.0459[M-H]^- ，分子式為 C₁₅H₁₀O₅ 。準(zhǔn)分子離子峰m/z269.0459[M-H]-脫去CO（28）、 CO₂ （44），分別生成 m/z241.0508[M-H-CO]^-?m/z225.0560 [M-H-CO₂]^- 進(jìn)一步失去 CH₃ （15）、CO（28）、 CO₂（44） ，分別生成 m/z 210.0328[M-H-CO2-CH3]、m/z197.0610[M-H-CO2-CO] .m/z 181.066 2[M-H-2CO₂]^- 。這與文獻(xiàn)報(bào)道的大黃素裂解規(guī)律基本一致[15]，故推測(cè)其為大黃素。其具體裂解途徑見(jiàn)圖4。

（3）萘酚類(lèi)：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出2個(gè)以原型入血的萘酚類(lèi)化合物 （Y15～Y16） ，以化合物Y15為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 22.67min ，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z245.0821[M-H]^- ，分子式為 C₁₄H₁₄O₄ 。準(zhǔn)分子離子峰 m/z 245.0821[M-H]在脫去 CH₃（15） 后生成m/z230.0586[M-H-CH₃]^- ，進(jìn)一步失去 CH₃ （15）和2CO（56）后，相繼生成 159.0452[M-H-2CH₃-2CO]^- 。這與文獻(xiàn)報(bào)道的決明酮裂解規(guī)律基本一致[]，故推測(cè)其為決明酮。其具體裂解途徑見(jiàn)圖5。

（4）其他類(lèi)：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出13個(gè)以原型入血的其他類(lèi)化合物（Y11～Y14、Y17～Y25）。以黃酮類(lèi)化合物Y17為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 32.15min ，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z269.0459[M-H]^- 分子式為 C₁₅H₁₀O₅ 。準(zhǔn)分子離子峰 m/z 269.0459[M-H]在脫去 CO₂ （44）后生成m/z225.0557[M-H- ，進(jìn)一步失去 CO₂ （44）后生成 m/z181.0659[M-H-2CO₂]^- 。這與文獻(xiàn)報(bào)道的芹菜素裂解規(guī)律基本一致[1]，故推測(cè)其為芹菜素。其具體裂解途徑見(jiàn)圖6。

3.2.3 代謝產(chǎn)物的鑒定

（1）二苯乙烯類(lèi)代謝產(chǎn)物：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出12個(gè)二苯乙烯類(lèi)代謝產(chǎn)物 （M1～M12 ）。以代謝產(chǎn)物M1為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為13.10min，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z403.1409[M-H]^- ，分子式為C₂₁H₂₄O₈ 。準(zhǔn)分子離子峰 m/z403.1409[M-H]^- 在脫去CH₂ （14）、 C₆H₁₀O₅ （162）后生成 m/z 227.0715[M-H-CH2-C₆H₁₀O₅]^- ，進(jìn)一步失去 C2H₂O（42） 和 C₂H₂O（42） 后，相繼生成 m/z 185.060 8[M-H-CH2- C₆H₁₀O₅ -C2HO]、 m/z ，推測(cè)該化合物可能是甲基白藜蘆醇-O-葡萄糖昔，可能是由白藜蘆醇- .O 葡萄糖苷經(jīng)甲基化反應(yīng)生成。二苯乙烯類(lèi)化合物在體內(nèi)可能涉及的代謝途徑包括氫化還原、甲基化、硫酸化和葡萄糖醛酸化反應(yīng)。鑒定結(jié)果顯示，白藜蘆醇-O-葡萄糖昔可通過(guò)甲基化反應(yīng)生成M1，可通過(guò)葡萄糖醛酸化反應(yīng)生成M4、M5；虎杖苷可以與葡萄糖醛酸基團(tuán)反應(yīng)生成M6；此外，白藜蘆醇及其氫化產(chǎn)物二氫白藜蘆醇易發(fā)生硫酸化和葡萄糖醛酸化反應(yīng)生成M3和M12。其具體代謝途徑見(jiàn)圖7。

（2）蒽醌類(lèi)代謝產(chǎn)物：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出23個(gè)蒽醌類(lèi)代謝產(chǎn)物 （M13～M35 ）。以代謝產(chǎn)物M16為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 20.25min ，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z431.0989[M-H]^- ，分子式為 C_2lH₁₈O_10? 準(zhǔn)分子離子峰 m/z 431.0989[M-H]在脫去 C₆H₁₀O₅（162） ！CO₂ （44）后相繼生成 m/z269.0458[M-H-C₆H₁₀O₅]^-，m/z （204號(hào) ， m/z 225.0557[M-H-C₆H₁₀O₅–CO₂]^- 進(jìn)一步失去 CH₃ （15）、 CO₂ （44）分別生成 m/z 181.066 1[M-H-C₆H₁₀O₅-CO₂-CO₂]^- ，推測(cè)該化合物可能是大黃素-O-葡萄糖昔，可能是由大黃素經(jīng)過(guò)葡萄糖醛酸化反應(yīng)生成。蒽醌類(lèi)化合物可能涉及的代謝途徑包括羥基化、甲基化、硫酸化和葡萄糖醛酸化反應(yīng)。鑒定結(jié)果顯示，大黃素甲醚可發(fā)生羥基反應(yīng)生成M13和M14，或者羥基大黃素在Ⅱ期代謝中被甲基取代形成M13和M14;大黃酸可發(fā)生羥基化反應(yīng)生成M15，M15進(jìn)一步發(fā)生葡萄糖醛酸化反應(yīng)生成M34，或者與硫酸基反應(yīng)生成M35。此外，大多數(shù)蒽醌類(lèi)化合物（大黃素、羥基大黃素、大黃素甲醚、乙酰大黃素、大黃酚等）都可以發(fā)生Ⅱ期代謝，如其可與葡萄糖醛酸基團(tuán)結(jié)合生成葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，或與硫酸基團(tuán)結(jié)合生成硫酸鹽化產(chǎn)物[8]，其具體代謝途徑圖略。

（3）其他代謝產(chǎn)物：虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出7個(gè)其他類(lèi)代謝產(chǎn)物（ M36～M42 ）。以代謝物M38為例，在負(fù)離子模式下，其保留時(shí)間為 15.80min ，準(zhǔn)分子離子峰為 m/z487.0922[M-H]^- ，分子式為 C₂₀H₂₄O₁₂S 。準(zhǔn)分子離子峰m/z487.0922[M-H]在脫去 SO₃ （80） C₆H₁₀O₅ （162）后相繼生成 m/z 407.137 8[M-H-SO3]、 m/z 1C₆H₁₀O₅] 進(jìn)一步脫去 CH₃（15） 、 CH₃（15） 和2C0（56）后，相繼生成 SO₃-C₆H₁₀O₅-2CH₃-2CO]Λ^- ，推測(cè)該化合物可能是決明酮- .O. -葡萄糖苷硫酸鹽，可能是決明酮經(jīng)過(guò)葡萄糖醛酸化和硫酸化反應(yīng)生成。鑒定結(jié)果顯示，虎杖中的黃酮類(lèi)化合物兒茶素可發(fā)生甲基化反應(yīng)生成M36；色酮類(lèi)化合物3-乙?；?2，5-二甲基色酮可發(fā)生硫酸化反應(yīng)生成M37；酚酸類(lèi)化合物沒(méi)食子酸的甲基化產(chǎn)物可與硫酸基反應(yīng)生成M39；此外，沒(méi)食子酸可發(fā)生還原反應(yīng)并失去2個(gè)氧原子生成M42。

4討論

本研究采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法對(duì)虎杖的入血成分及代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，從虎杖給藥組大鼠血清中共鑒定出67個(gè)化學(xué)成分，其中25個(gè)為原型成分、42個(gè)為代謝產(chǎn)物，涉及的化合物類(lèi)型有蒽醌類(lèi)、二苯乙烯類(lèi)、黃酮類(lèi)、萘酚類(lèi)和酚酸類(lèi)等；涉及的I相代謝反應(yīng)有氫化還原反應(yīng)，Ⅱ相代謝反應(yīng)有甲基化、乙酰化、硫酸酯化、葡萄糖醛酸化反應(yīng)。

與相關(guān)研究篩選出的虎杖潛在活性成分對(duì)比，本研究鑒定出的67種化學(xué)成分中，虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素和大黃酸為治療AGA的活性成分，其中大黃素和白藜蘆醇為作用靶點(diǎn)較多的活性成分。藥理研究表明，大黃素能通過(guò)增加尿排泄來(lái)降低血清尿酸濃度，以起到治療痛風(fēng)的作用2；白藜蘆醇可抑制NOD樣受體蛋白3（NOD-likereceptorprotein3，NLRP3）、白細(xì)胞介素1β和缺氧誘導(dǎo)因子 1α 的表達(dá)，顯著改善AGA的癥狀2；虎杖苷可通過(guò)抑制尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、NLRP3炎癥小體和核因子κB 通路，降低尿酸濃度，從而發(fā)揮抗痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用[2]。本研究結(jié)果顯示，虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素和大黃酸均能以原型吸收入血，并在體內(nèi)發(fā)生代謝反應(yīng)，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為虎杖苷葡萄糖苷酸、白藜蘆醇-O-葡萄糖苷葡萄糖苷酸、大黃素-O-葡萄糖苷、羥基大黃酸等代謝產(chǎn)物，提示虎杖可能主要通過(guò)虎杖昔、白藜蘆醇、大黃素等活性成分發(fā)揮抗AGA作用。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，虎杖在正常大鼠中的入血成分有33個(gè)[12]，比AGA大鼠入血成分多了8個(gè)，分別為大黃素-1-O-葡萄糖苷、大黃素-8-甲醚、羥基大黃素-O-葡萄糖苷、乙酰大黃素-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-（ 6^′ -丙二酰）-葡萄糖苷、決明酮-8-O-葡萄糖苷、決明酮-O-（乙?；?葡萄糖苷、沒(méi)食子酰葡萄糖苷;而AGA大鼠血清中檢測(cè)到的代謝產(chǎn)物比正常大鼠也多了8個(gè)，主要為二苯乙烯類(lèi)、蔥醌類(lèi)和色酮類(lèi)，涉及的代謝反應(yīng)有糖基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化。研究表明，AGA大鼠血清中尿酸水平較高，而高尿酸水平會(huì)損傷腎功能，從而影響腎中Ⅱ相代謝酶（如尿昔二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶）的活性，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體代謝環(huán)境發(fā)生變化[23-24]。由此筆者推測(cè)，虎杖在正常大鼠和AGA大鼠體內(nèi)的代謝差異可能是病理狀態(tài)下機(jī)體代謝環(huán)境發(fā)生變化所導(dǎo)致的。

綜上所述，本研究通過(guò)UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法鑒定了虎杖在AGA大鼠中的入血成分及代謝產(chǎn)物，其中虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素等化合物均能以原型入血并發(fā)生體內(nèi)代謝，可能是虎杖發(fā)揮抗AGA作用的活性成分。該研究結(jié)果有助于闡釋虎杖治療AGA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并為其藥理作用研究和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]DALBETH N，GOSLING AL，GAFFO A，et al. Gout[J]. Lancet，2021，397（10287）：1843-1855.

[2] TOWIWATP，PHUNGOENP，TANTRAWIWATK，etal. Quality of gout care in the emergency departments：a multicentre study[J].BMC EmergMed，2020，20（1）：27.

[3] RENS，MENGFY，LIU YT，et al. Effects of extermal application of compound Qingbi granules on acute gouty arthritiswith dampness-heat syndrome：a randomized controlled trial[J].Chin Med，2020，15（1）：117.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].2020 年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：217-218.

[5] 陳茜，虞斌，王澗，等.虎杖痛風(fēng)方治療急性痛風(fēng)的療效及對(duì) 炎癥細(xì)胞因子影響[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2021，59（1）：24-27.

[6] 程晶.虎杖提取物對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)功能障 礙指數(shù)及炎癥指數(shù)的影響[J].生物化工，2023，9（4）：94-97.

[7] LIUXG，CHENGCY，WANGJX，etal.Ametabolic exposure-oriented network regulation strategy for the identification of effective combination in the extract of Ginkgo bilobaL.[J].JPharmBiomed Anal，2018，149：151-159.

[8] 郝小燕，王霞，肖海濤，等.中藥虎杖吸收入血移行成分 分析[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（12）：28-30.

[9] 王莉婷，李顏伶，徐廣，等.基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技術(shù)的車(chē)前子不同溶劑提取物成分分析 [J].中國(guó)藥師，2022，25（8）：1341-1347.

[10] 呂軍，呂芳，方和金，等.高尿酸血癥并急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié) 炎大鼠模型的建立[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013，23 （27）：11-16.

[11]CODERRE T J，WALL P D. Ankle joint urate arthritis in rats provides a useful tool for the evaluation of analgesic and anti-arthritic agents[J]. Pharmacol Biochem Behav， 1988，29（3）：461-466.

[12]JI L，SHI WJ，WANGL T，et al. Characterization of the chemical constituents and metabolic profile of Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc. in rat plasma，urine，and feces by ultra-high performance liquid chromatography coupled with Quadrupole-Exactive Orbitrap mass spectrometry[J]. JSep Sci，2022，45（23）：4292-4317.

[13]梁慧，呂渭升，楊文惠，等.基于UPLC指紋圖譜和含量 測(cè)定的虎杖標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2022，18（1）：31-39.

[14]潘智然，梁海龍，梁朝暉，等.基于診斷離子策略的超高 壓液相色譜-線性離子阱-軌道離子阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)解析 中藥虎杖的化學(xué)成分[J].色譜，2015，33（1）：22-28.

[15]陶婷.基于藥效評(píng)價(jià)-網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)-實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的虎杖調(diào)節(jié)高 脂血癥的作用及機(jī)制研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2023.

[16]李丹丹.基于DNA甲基化調(diào)控NLRP3炎性小體通路探 討人參虎杖復(fù)方抗AS作用機(jī)制[D].北京：中國(guó)中醫(yī)科 學(xué)院，2022.

[17]韓文杰，張屏，常福厚，等.內(nèi)蒙古3種野生藜蘆化學(xué)成分 的定性定量分析[J].中國(guó)藥房，2022，33（8）：937-942，956.

[18] 史旭華，黃舒怡，梁幼玲，等.基于UPLC-Q-Exactive MS 技術(shù)的大黃素-8-O- β?{β} -D-葡萄糖苷體內(nèi)代謝研究[J].中 藥材，2021，44（10）：2389-2395.

[19]杜康，王唯丁，韓彬，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究\"虎杖-女 貞子\"配伍治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎機(jī)制及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證[J]. 中國(guó)中藥雜志，2022，47（6）：1677-1686.

[20]HOU S W，CHEN S J，SHEN JD，et al. Emodin，a natural anthraquinone，increasesuricacid excretioninratswith potassium oxonate-induced hyperuricemia[J]. Pharmaceuticals（Basel），2023，16（6）：789.

[21]WANG YM，LI W，ZHANGTH，etal. Resveratrol alleviates MSU-induced gouty arthritis in rats through inhibition of HIF-1α- and NLRP3-derived IL- ?1β secretion in macrophages[J]. Cell Mol Biol（Noisy-le-grand），2023，69 （7）：28-34.

[22]XUWJ，CHENYF，LIFF，et al.Polydatin alleviates hyperuricemia combined with gouty arthritis in mice via regulating urate transporters， NLRP3 inflammasome and NF- σ_κB pathway[J]. JFunct Foods，2023，105：105582.

[23]SINGHD K，AHIRE D，DAVYDOV D R，et al. Differential tissue abundance of membrane-bound drug metabolizing enzymes and transporter proteins by global proteomics[J]. Drug Metab Dispos，2024，52（11）：1152-1160.

[24]HERVIEUL，GROO AC，BELLIEN J，et al. Glucuronidation of orally administered drugs and the value of nanocarriers in strategies for its overcome[J]. Pharmacol Ther， 2025，266：108773.