兔源大腸桿菌、奇異變形桿菌和球蟲混合感染及藥物敏感性分析

摘 要： 旨在確定引起河南某規(guī)模化兔場病死兔發(fā)病的病原及其藥物敏感性。本研究對河南某規(guī)?；脠鲋胁∷劳眠M行剖檢并采集3份病死兔病料組織，通過問診，結(jié)合發(fā)病情況、臨床表現(xiàn)、剖檢變化、細菌的分離培養(yǎng)、生化試驗、16S rRNA PCR鑒定、構(gòu)建系統(tǒng)進化樹和藥敏試驗，確定引起該兔場發(fā)病的病原及其藥物敏感性。結(jié)果顯示，經(jīng)細菌分離培養(yǎng)得到2株大小不等的革蘭陰性短桿菌（分別命名為LY-01和LY-02株），其分別符合大腸桿菌和奇異變形桿菌的生化特性。經(jīng)PCR鑒定發(fā)現(xiàn)，LY-01和LY-02的16S rRNA基因序列片段大小分別為833 bp和1 500 bp。經(jīng)同源比對分析發(fā)現(xiàn)LY-01與OR717622.1同源性為99.88%；LY-02與CP042907.1同源性為99.93%。經(jīng)球蟲檢查發(fā)現(xiàn)，其糞便中存在大量球蟲卵，其OPG值分別為0.64×104、0.62×104和0.68×104，均達到腸球蟲感染標準。藥敏試驗結(jié)果顯示，分離得到的大腸桿菌和奇異變形桿菌同時對青霉素和頭孢曲松敏感。綜上，本研究為家兔養(yǎng)殖過程中大腸桿菌、奇異變形桿菌和球蟲混合感染的防治提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 兔；大腸桿菌；奇異變形桿菌；球蟲；分離鑒定；耐藥性

中圖分類號：S858.291

文獻標志碼：A 文章編號： 0366-6964（2024）09-4204-09

Mixed Infection and Drug Sensitivity Analysis of Escherichia coli， Proteus mirabilis

and Coccidia from Rabbits

WANG" Jianing， ZHANG" Ziqiang， WANG" Shuaishuai， LIU" Yumei*

（College of Animal Science and Technology， Henan University of

Science and Technology， Luoyang 471000，" China）

Abstract：" The purpose of this study was to determine the pathogen and its drug sensitivity of rabbits who died in a large-scale rabbit farm in Henan province. In this study， the dead rabbits in a large-scale rabbit farm in Henan province were dissected， three rabbits’ diseased tissues were collected， the pathogen causing the disease in the rabbit farm and its drug sensitivity were determined by asking questions， combining with the incidence， clinical manifestations， autopsy changes， bacterial isolation and culture， biochemical tests， 16S rRNA PCR identification， phylogenetic tree construction and drug sensitivity tests. The results showed that two strains of Gram-negative Brevibacterium （named LY-01 and LY-02， respectively） with different sizes were obtained by bacterial isolation and culture， which accorded with the biochemical characteristics of Escherichia coli and Proteus mirabilis， respectively. It was found by PCR that the 16S rRNA gene fragments of LY-01 and LY-02 were 833 bp and 1 500 bp， respectively. The homology of LY-01 and OR717622.1 was 99.88%. The homology of LY-02 and CP042907.1 was 99.93%. After coccidiosis examination， it was found that there were a large number of coccidia eggs in their feces， and their OPG values were 0.64×104， 0.62×104 and 0.68×104， respectively， which all reached the infection standard of enterococcidia. The results of drug sensitivity test showed that Escherichia coli and Proteus mirabilis were sensitive to both penicillin and ceftriaxone. To sum up， this study provides a theoretical basis for the prevention and treatment of mixed infection of Escherichia coli， Proteus mirabilis and coccidia in rabbit breeding.

Key words： rabbit;" Escherichia coli; Proteus mirabilis; coccidian; separation and identification; drug-fast

*Corresponding author： LIU Yumei，E-mail： yumeiliu@haust.edu.cn

兔大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌及其產(chǎn)生的毒素引起的兔急性消化道傳染病，主要表現(xiàn)為排果凍樣或水樣糞便［1］。大腸桿菌作為一種條件性致病菌，當其他致病菌入侵機體后，機體免疫力降低，大腸桿菌便成為一種致病菌誘發(fā)機體患病。因此，大腸桿菌對各日齡兔均有較大程度危害。奇異變形桿菌是一種無莢膜、無芽孢的革蘭陰性短桿菌，其廣泛存在于自然界中，可引起宿主食物中毒、腹瀉等［2］。家兔感染奇異變形桿菌后，常表現(xiàn)為畏寒、腹瀉，在短時間內(nèi)出現(xiàn)大面積死亡，會對養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。兔球蟲病是由多種球蟲（例如艾美爾科、艾美爾屬等）寄生于腸和膽管上皮細胞而引起的消化道疾病，也是一種常見且危害嚴重的寄生蟲?。?］。兔感染球蟲后主要表現(xiàn)為腹瀉、腹圍膨大等，且其感染程度與致死率呈正比，感染越嚴重，其致死率越高［4］。

兔大腸桿菌病、奇異變形桿菌病和球蟲病均為兔消化道疾病，且無年齡和季節(jié)特異性，各日齡和各季節(jié)皆可發(fā)病，但主要發(fā)生在溫度驟變的春秋季節(jié)。這三種病原混合感染后，兔病情加重，從而導致病兔死亡率極高，對養(yǎng)殖戶造成較大經(jīng)濟損失。因此，本研究通過對河南某規(guī)?；脠霾∷劳眠M行細菌的分離培養(yǎng)、PCR鑒定和藥敏試驗，確定引起該兔場發(fā)病的病原及其耐藥情況，以期為后續(xù)類似疫病的診治和防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料來源

2023年4月，河南某規(guī)?；脠鐾蝗话l(fā)現(xiàn)數(shù)只剛生產(chǎn)完不久的獺兔出現(xiàn)急性腹瀉，且部分病兔在腹瀉癥狀發(fā)生不久后，便出現(xiàn)死亡。無菌采集3份病死兔心、肝、脾、肺等組織及糞便，進行細菌分離鑒定、耐藥性分析和球蟲檢測。

1.2 主要試劑與儀器

LB固體培養(yǎng)基；LB液體培養(yǎng)基；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基；血瓊脂培養(yǎng)基；DL 2000 DNA Marker（武漢賽維爾生物科技有限公司）；細菌基因組DNA小量提取試劑盒（北京莊盟國際生物基因科技有限公司）；革蘭染液（北京博奧拓達科技有限公司）；電子天平（JA3003N）；凝膠電泳儀（DYY-8C）；雙目生物顯微鏡（S500-2）。

1.3 細菌的分離純化

無菌條件下，將采集的樣品用接種環(huán)挑取，并通過四區(qū)劃線法接種于LB固體培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基中，在37℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察菌落的形態(tài)特征和生長情況。隨后挑取單菌落進行革蘭染色和鏡檢（得到2株大小不等的革蘭陰性短桿菌）。

1.4 生化試驗

分別將分離純化的菌株接種于各個微量生化管內(nèi)，37℃培養(yǎng)24～48 h后，觀察并記錄其結(jié)果。

1.5 引物的設(shè)計與合成

大腸桿菌（登錄號：CP042982.1）和奇異變形桿菌（登錄號：CP138492.1）引物由通用生物（安徽）股份有限公司合成，具體序列和各目的片段長度信息見表1。

1.6 分子生物學鑒定

將純化后的菌液進行細菌DNA的抽提后，作為DNA模板進行PCR擴增。Premix TaqTM 12.5 μL，ddH2O 9.5 μL，DNA模板1 μL，上游和下游引物各1 μL。反應條件為：94℃ 4 min；94℃ 30 s，57℃ 30 s，72℃ 1 min，共30個循環(huán)；72℃ 10 min；4℃保存。擴增后的PCR產(chǎn)物用2％的瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。擴增產(chǎn)物送至通用生物（安徽）股份有限公司進行測序，將測序結(jié)果與GenBank中已登錄的菌株進行同源性比對分析，并使用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。

1.7 藥敏試驗

選用臨床常用抗生素，通過紙片擴散法（K-B法）測定該分離菌的耐藥性，并參照美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）制定的藥敏判定標準判定其結(jié)果。抗生素紙片包括：慶大霉素、新霉素、卡那霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、丁胺卡那、桿菌肽、多黏菌素B、阿奇霉素、青霉素、復方新諾明、磺胺異噁唑、頭孢曲松。

1.8 球蟲檢查

取適量糞便于燒杯內(nèi)，加入適量飽和食鹽水混合后，用濾網(wǎng)將其過濾到另一個燒杯中，靜置5 min后移取適量上清進入麥克馬斯特蟲卵計數(shù)板鏡檢、計數(shù)，并計算其OPG值。

OPG=（n1/0.15）×60÷m，其中n1為卵數(shù)，0.15為每個計數(shù)室有效體積（mm3），60為糞液總體積（mm3），m為糞便克數(shù)（g）。

1.9 動物回歸試驗

將分離菌分別接種于普通營養(yǎng)培養(yǎng)基，通過平板法進行細菌計數(shù)，稀釋菌液濃度至108 CFU·mL－1。將15只SPF級KM小鼠（體質(zhì)量在20 g左右）隨機分為3組（每組5只），分別為對照組、試驗1組和試驗2組。試驗1、2組分別腹腔注射0.2 mL稀釋菌液，對照組小鼠注射等量PBS。接種后觀察各組小鼠狀態(tài)，并對病死鼠進行剖檢。

2 結(jié) 果

2.1 臨床剖檢

臨床剖檢發(fā)現(xiàn)病兔嚴重腹瀉（圖1A），腸壁明顯變薄，且有彌漫性充血和出血斑點（圖1B）；直腸內(nèi)充滿膠凍樣糞，且有腥臭味；有的胃底黏膜部分脫落，胃表面有出血斑點；肝稍腫、發(fā)黃，且有部分結(jié)節(jié)灶（圖1C）；病兔脾萎縮呈深褐色（圖1D）；肺部分充血或淤血。

2.2 細菌的形態(tài)及培養(yǎng)特性觀察

無菌采集病死兔心、肝、脾、肺、腎等組織，進行細菌分離，于37℃培養(yǎng)24 h后進行革蘭染色、鏡檢，可見兩種革蘭陰性桿菌，并將其分別命名為LY-01和LY-02株。此外，將2株分離菌分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，進行病原菌的分離與純化。經(jīng)細菌培養(yǎng)后，觀察發(fā)現(xiàn)LY-01在普通瓊脂培養(yǎng)基上長出光滑、圓形、濕潤、邊緣整齊的乳白色菌落（圖2A）；在血瓊脂培養(yǎng)基上呈邊緣整齊、表面光滑的灰白色菌落（圖2B）；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈粉紅色、濕潤、光滑的小菌落（圖2C）。LY-02在普通瓊脂培養(yǎng)基上呈擴散生長，形成遷徙生長現(xiàn)象，且具有腐敗臭味（圖2E）；在血瓊脂培養(yǎng)基上呈無色小菌落（圖2F）；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈表面光滑的半透明扁平菌落（圖2G）。

2.3 生化試驗

為進一步鑒定兩種分離菌，將純化好的分離菌分別接種于各類生化培養(yǎng)基中鑒定其生化特性。結(jié)果如表2所示，參照《伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊》初步判定這兩種分離菌可能為大腸桿菌和奇異變形桿菌。

2.4 分子生物學鑒定

取提取的細菌DNA進行PCR擴增和電泳后，通過凝膠成像系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)兩種分離菌均出現(xiàn)特異性條帶且與預期結(jié)果大小一致，進一步表明兩種分離菌可能是大腸桿菌和奇異變形桿菌（圖3）。

分別將兩種分離菌的擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果經(jīng)NCBI分析，通過DNAStar軟件中MegAlign進行多序列比對，采用MEGA 7.0軟件分別構(gòu)建其遺傳進化樹，結(jié)果顯示LY-01與登錄號為OR717622.1的大腸桿菌同源性為99.88%（圖4A），LY-02與登錄號為CP042907.1的奇異變形桿菌同源性為99.93%（圖4B）。以上表明，病兔混合感染大腸桿菌和奇異變形桿菌。

2.5 藥敏試驗

分別將兩種分離菌均勻涂布于普通瓊脂培養(yǎng)基上，用多種抗菌藥物紙片做藥敏試驗。結(jié)果表明，大腸桿菌對丁胺卡那、多黏菌素B、青霉素和頭孢曲松敏感，對阿奇霉素中介，對慶大霉素、新霉素、卡那霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、桿菌肽、復方新諾明和磺胺異噁唑耐藥；奇異變形桿菌對環(huán)丙沙星、青霉素和頭孢曲松敏感，對阿奇霉素中介，對慶大霉素、新霉素、卡那霉素、恩諾沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、丁胺卡那、桿菌肽、多黏菌素B、復方新諾"" 明和磺胺異噁唑耐藥（表3）。

2.6 球蟲檢查

分別取3只病兔適量糞便，加入適量飽和食鹽水后靜置5 min后，鏡檢可見大量球蟲卵，其OPG值分別為0.64×104、0.62×104和0.68×104，均達到腸球蟲感染標準（OPG≥0.5×104，圖5）。

2.7 動物回歸試驗

用2株分離菌攻毒后，試驗1、2組小鼠均表現(xiàn)為精神沉郁，48 h內(nèi)全部死亡，而對照組小鼠表現(xiàn)正常、精神良好。剖檢病死小鼠發(fā)現(xiàn)注射大腸桿菌組小鼠脾腫大；胃部膨大且充滿液體和氣體；各段腸道呈不同程度腫脹，腸道內(nèi)充滿膠凍樣黏液。注射奇異變形桿菌組小鼠脾充血淤血，腸黏膜脫落，腸道內(nèi)充滿黃綠色內(nèi)容物。無菌采集病死小鼠肺、肝等具有典型病變的組織，在普通瓊脂培養(yǎng)基上進行分離培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)與原分離菌株一致，16S rRNA的PCR鑒定證實序列與原分離株相同。

3 討 論

近年來，隨著兔養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，疾病問題也變得愈發(fā)突出［5］，尤其是腹瀉、肺炎等［6-8］，嚴重阻礙了養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展。其中，大腸桿菌作為一種條件性致病菌，在宿主免疫力低下時，該菌可在機體內(nèi)大量繁殖，導致宿主腹瀉。有大量研究表明，大腸桿菌可感染多種動物，例如，兔、雞、豬、羊等［9-11］。研究表明，當大腸桿菌感染兔后，常導致其發(fā)生消化道疾病，臨床上表現(xiàn)出腹瀉、嘔吐等癥狀。大腸桿菌可通過單獨或混合感染導致兔發(fā)病。在生產(chǎn)過程中，混合感染發(fā)生概率很高［12-15］。徐靖怡等［16］從急性死亡的兔中發(fā)現(xiàn)了大腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染；劉照波等［17］從發(fā)生腹瀉兔群中分離得到大腸桿菌和魏氏梭菌；李欣［18］以腹瀉、發(fā)熱、死亡的兔群為研究對象，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌和沙門菌是引起該兔群發(fā)病的主要原因。

奇異變形桿菌病是一種多發(fā)的細菌性傳染病，而最近的報道大多集中在雞、牛、羊等動物中，兔感染奇異變形桿菌的報道鮮見。閆建英等［19］從具有腹瀉、消瘦等癥狀的雛雞體內(nèi)分離出1株奇異變形桿菌；張健鵬等［20］從具有腹瀉、死亡等癥狀的驢中分離出奇異變形桿菌，發(fā)現(xiàn)引起該場區(qū)驢駒死亡的主要病原是奇異變形桿菌；廖娟等［2］從腹瀉死亡的病兔腸道中分離得到1株奇異變形桿菌，并對其耐藥情況進行檢測，發(fā)現(xiàn)該菌株對多種抗生素出現(xiàn)不同程度耐藥；王俊書等［21］發(fā)現(xiàn)引起其種兔腹瀉死亡的病原是奇異變形桿菌；此外，有研究表明哺乳動物感染奇異變形桿菌后常導致腹瀉、肺炎等癥狀［2］。與本研究通過剖檢發(fā)現(xiàn)病兔肺部出現(xiàn)出血、化膿的結(jié)果一致。

在兔養(yǎng)殖過程中，球蟲病是一類常見且危害嚴重的疾病。根據(jù)球蟲的寄生部位可將其分為肝型、腸型和混合型。有研究表明，肝型球蟲主要表現(xiàn)為肝腫大、肝表面有許多結(jié)節(jié)且膽囊腫大；腸型球蟲主要癥狀為腹瀉，病理變化主要為腸黏膜充血且有片狀或散在充血點，本研究中病兔也感染了球蟲，其特征與上述研究一致。而混合型球蟲既有肝型，也有腸型的病理變化［22］。此外，大量研究發(fā)現(xiàn)許多兔場均發(fā)現(xiàn)不同程度球蟲感染［23-26］。球蟲可導致幼兔發(fā)病，而成年兔可耐過，但耐過兔長期消瘦、免疫力低下，極易繼發(fā)其他致病菌的感染。

目前，在兔消化道疾病中，大腸桿菌病、奇異變形桿菌病和球蟲病流行廣泛且嚴重。截至目前，還未見兔大腸桿菌、奇異變形桿菌和球蟲混合感染的相關(guān)報道。本研究通過對腹瀉獺兔的病料采用細菌的分離鑒定等方法，確定了引起該兔場發(fā)病的病原主要是大腸桿菌、奇異變形桿菌和球蟲。通過與養(yǎng)殖戶交流后，判定這可能跟近期氣溫驟變有關(guān)。同時，發(fā)現(xiàn)該兔場生物安全防控措施不規(guī)范，導致了病原的散播。因此，對兔舍、用具和四周場地進行全面消毒；病兔及時隔離、治療；病死兔進行無害化處理是十分必要的。此外，腹瀉常導致機體脫水，因此可在飲水中加入多種維生素和電解質(zhì)，以補充病兔機體流失的營養(yǎng)物質(zhì)。

在生產(chǎn)實踐中，常通過聯(lián)合用藥的方式給藥，以增強其療效。因此，根據(jù)本研究的藥敏試驗結(jié)果，最終確定通過飲水添加環(huán)丙沙星和多黏菌素B聯(lián)合或通過肌注頭孢曲松的方式進行治療大腸桿菌和奇異變形桿菌。關(guān)于球蟲，可采用磺胺氯丙嗪鈉和恩拉霉素或者單獨使用妥曲珠利進行治療。通過5 d的綜合治療，兔群病死率下降明顯，并趨于穩(wěn)定。本次疫情得到控制，兔群逐漸恢復正常。

4 結(jié) 論

本研究通過對河南省某規(guī)?；脠龈篂a病死獺兔進行臨床剖檢、分離培養(yǎng)、生化鑒定、序列分析及動物回歸試驗等確定分離菌株為大腸桿菌和奇異變形桿菌。經(jīng)球蟲檢查發(fā)現(xiàn)糞便中存在大量球蟲卵。經(jīng)藥敏試驗測定發(fā)現(xiàn)分離得到的大腸桿菌和奇異變形桿菌均對青霉素和頭孢曲松2種藥物敏感，對所檢測的其他藥物有不同程度的耐藥性。

參考文獻（References）：

［1］ 欒慧慧.山東部分地區(qū)腹瀉兔致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析［D］.泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2022.

LUAN H H.Isolation，identification and drug resistance analysis of pathogenic Escherichia coli from diarrhea rabbits in some areas of Shandong［D］.Tai’an：Shandong Agricultural University，2022.（in Chinese）

［2］ 廖 娟，石英子，馮丹妮，等.兔源奇異變形桿菌的分離鑒定及耐藥基因檢測［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學，202 49（4）：125-129.

LIAO J，SHI Y Z，F(xiàn)ENG D N，et al.Isolation，identification and detection of antibiotics resistance genes of Proteus mirabilis from rabbit［J］.Jiangsu Agricultural Sciences，202 49（4）：125-129.（in Chinese）

［3］ 鄭愛武，李焦魏，雷亞非，等.兔球蟲病的預防與診治［J］.中國養(yǎng)兔雜志，2022（3）：45-46.

ZHENG A W，LI J W，LEI Y F，et al.Prevention and treatment of rabbit coccidiosis［J］.Chinese Journal of Rabbit Farming，2022（3）：45-46.（in Chinese）

［4］ 尹玉芹.關(guān)于兔球蟲病的防治措施［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2021（5）：202-203.

YIN Y Q.Prevention and control measures of rabbit coccidiosis［J］.Chinese Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2021（5）：202-203.（in Chinese）

［5］ 王豪杰，陳見興，王夢杰，等.兔多殺性巴氏桿菌和兔出血癥病毒雙重PCR檢測方法的建立及初步應用［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2023，45（2）：150-155.

WANG H J，CHEN J X，WANG M J，et al.Establishment and preliminary application of a duplex PCR assay for simultaneous detection of Pasteurella multocida and rabbit hemorrhagic disease virus［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2023，45（2）：150-155.（in Chinese）

［6］ CHEN S，WU X，XIA Y Y，et al.Effects of dietary gamma-aminobutyric acid supplementation on amino acid profile，intestinal immunity，and microbiota in ETEC-challenged piglets［J］.Food Funct，2020，11（10）：9067-9074.

［7］ BIN P，TANG Z Y，LIU S J，et al.Intestinal microbiota mediates Enterotoxigenic Escherichia coli-induced diarrhea in piglets［J］.BMC Vet Res，2018，14（1）：385.

［8］ HOLDEN V I，BREEN P，HOULE S，et al.Klebsiella pneumoniae siderophores induce inflammation，bacterial dissemination，and HIF-1α stabilization during pneumonia［J］.mBio，2016，7（5）：e01397-16.

［9］ APERCE C C，ALVARADO C A，MILLER K A，et al.Transit effects on fecal Escherichia coli O157 prevalence and coliform concentrations in feedlot cattle［J］.J Anim Sci，2014，92（2）：676-682.

［10］ 坤清芳，耿 毅，余澤輝，等.兔源大腸桿菌對喹諾酮藥物耐藥性及質(zhì)粒介導的耐藥基因檢測［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2016，38（12）：944-948.

KUN Q F，GENG Y，YU Z H，et al.Detection of quinolone resistance and plasmid mediated quinolone resistance gene in Escherichia coli isolated from rabbit［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2016，38（12）：944-948.（in Chinese）

［11］ 操義恒，王子杰，王巧梅，等.綿羊肺源大腸桿菌cyaA基因缺失對小鼠肺泡巨噬細胞感染的影響［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2023，45（3）：295-301.

CAO Y H，WANG Z J，WANG Q M，et al.Effects of cyaA gene deletion in sheep lung-derived Escherichia coli on murine alveolar macrophage infection［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2023，45（3）：295-301.（in Chinese）

［12］ 王佳佳，劉玉梅，劉 寧，等.家兔源性大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定及藥敏試驗［J］.中國獸醫(yī)科學，2020，50（4）：485-492.

WANG J J，LIU Y M，LIU N，et al.Isolation and identification of rabbit-derived Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae and their drug sensitivity test［J］.Chinese Veterinary Science，2020，50（4）：485-492.（in Chinese）

［13］ 張自強，王佳佳，任玉瑩，等.兔源支氣管敗血波氏桿菌和肺炎克雷伯菌的分離鑒定及其對抗菌藥物的敏感性分析［J］.畜牧獸醫(yī)學報，202 52（8）：2254-2264.

ZHANG Z Q，WANG J J，REN Y Y，et al.Isolation and identification of rabbit-derived Bordetella bronchiseptica and Klebsiella pneumoniae and their antimicrobial susceptibility analysis［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，202 52（8）：2254-2264.（in Chinese）

［14］ 王錦祥，孫世坤，陳巖峰，等.兔多殺性巴氏桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染的診斷［J］.中國養(yǎng)兔雜志，2021（4）：4-6，12.

WANG J X，SUN S K，CHEN Y F，et al.Diagnosis of a mixed infection of Pasteurella multocida and Staphylococcus aureus in rabbits［J］.Chinese Journal of Rabbit Farming，2021（4）：4-6，12.（in Chinese）

［15］ 趙金鳳，郭東輝，段天奎，等.兔源大腸桿菌與沙門菌混合感染的診斷［J］.畜牧與獸醫(yī)，2012，44（9）：71-73.

ZHAO J F，GUO D H，DUAN T K，et al.Diagnosis of mixed infection of Escherichia coli and Salmonella in rabbits［J］.Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2012，44（9）：71-73.（in Chinese）

［16］ 徐靖怡，劉玉梅，王佳佳，等.家兔大腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染的診斷及藥物敏感性分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2023（6）：70-75.

XU J Y，LIU Y M，WANG J J，et al.Diagnosis and drug susceptibility analysis of mixed infection with Escherichia coli and Staphylococcus aureus in rabbits［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2023（6）：70-75.（in Chinese）

［17］ 劉照波，李明勇，劉 曼，等.一例兔大腸桿菌與魏氏梭菌混合感染病例診斷與藥敏試驗［J］.中國養(yǎng)兔，2020（2）：4-6.

LIU Z B，LI M Y，LIU M，et al.Diagnose and tests for drug susceptibility of a case of mixed infection of Escherichia Coli and Clostridium Yerticilli in rabbits［J］.Chinese Journal of Rabbit Farming，2020（2）：4-6.（in Chinese）

［18］ 李 欣.兔沙門氏菌與大腸桿菌混合感染的診治［J］.河南畜牧獸醫(yī)，2006，27（2）：50.

LI X.Diagnosis and treatment of mixed infection of Salmonella and Escherichia coli in rabbits［J］.Henan Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2006，27（2）：50.（in Chinese）

［19］ 閆建英，李 虎，邢瀟月，等.雞源奇異變形桿菌的分離鑒定及生物學特性分析［J］.中國動物保健，2023，25（3）：55-57.

YAN J Y，LI H，XING X Y，et al.Isolation，identification and biological characteristics analysis of Proteus mirabilis from chicken［J］.China Animal Health，2023，25（3）：55-57.（in Chinese）

［20］ 張健鵬，紀言霏，許丹丹，等.一株驢源奇異變形桿菌的分離鑒定與毒力基因檢測［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2022（24）：118-123，141.

ZHANG J P，JI Y F，XU D D，et al.Isolation，identification and virulence gene detection of a strain of Proteus mirabilis from donkeys［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，2022（24）：118-123，141.（in Chinese）

［21］ 王俊書，徐進強，金紅巖，等.兔奇異變形桿菌的分離鑒定及耐藥性分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2019，46（5）：1508-1515.

WANG J S，XU J Q，JIN H Y，et al.Isolation，identification and drug resistance analysis of rabbit Proteus mirabilis［J］.China Animal Husbandry amp; Veterinary Medicine，2019，46（5）：1508-1515.（in Chinese）

［22］ 張曉霞.兔球蟲病的診斷與防治［J］.當代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2022（5）：47-48.

ZHANG X X.Diagnosis and prevention of rabbit coccidiosis［J］.Contemporary Livestock and Poultry Breeding，2022（5）：47-48.（in Chinese）

［23］ 王 欣.北鎮(zhèn)市家兔球蟲病流行病學調(diào)查報告［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2011（5）：52-53.

WANG X.Epidemiological investigation report on rabbit coccidiosis in Beizhen［J］.Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2011（5）：52-53.（in Chinese）

［24］ 陳美珍，張 嘉，王壽昆，等.福建某獺兔場兔艾美耳球蟲感染情況調(diào)查及種類鑒定［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2015，42（8）：2204-2209.

CHEN M Z，ZHANG J，WANG S K，et al.Epidemiological investigation and species identification of Eimeria of a Rex rabbit farm in Fujian province［J］.China Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2015，42（8）：2204-2209.（in Chinese）

［25］ 陳曉曉，宋 靜，梁高星，等.陜西某兔場球蟲感染情況調(diào)查［J］.現(xiàn)代牧業(yè)，2023，7（1）：37-41.

CHEN X X，SONG J，LIANG G X，et al.Investigation on coccidum infection in a rabbit farm in Shaanxi Province［J］.Modern Animal Husbandry，2023，7（1）：37-41.（in Chinese）

［26］ 李曉蕓，程振濤.道真縣兔場兔球蟲感染情況調(diào)查［J］.農(nóng)技服務(wù)，2023，40（1）：60-62.

LI X Y，CHENG Z T.Investigation on coccidia infection in rabbit farms in Daozhen County［J］.Agricultural Technology Service，2023，40（1）：60-62.（in Chinese）

（編輯 范子娟）