兩種芽胞桿菌對(duì)苗期土傳辣椒疫病的防控作用

祝文慧，秦 溥，趙 巖，殷 輝，任 璐，周建波

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，太谷 030801）

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌PhytophthoracapsiciLeonian 引起的一種危害嚴(yán)重的世界性土傳病害，在辣椒整個(gè)生育期均可發(fā)生。移栽苗帶菌是辣椒疫病發(fā)生面積不斷增大的重要因素。育苗室穴盤育苗是辣椒的主要育苗方式[1]，但育苗室中溫差小、濕度高等特殊環(huán)境條件，導(dǎo)致育苗時(shí)疫霉菌易在育苗土中大量增殖，形成帶菌苗，甚至造成大量病株和死苗[2-3]，因此辣椒育苗期疫病的預(yù)防是控制辣椒疫病田間發(fā)生的重要措施。

生防菌防治植物病害具有對(duì)環(huán)境無污染、對(duì)人畜無毒害、病原菌不產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，已成為植物病害防控研究熱點(diǎn)之一。已有多種辣椒疫霉生防菌的報(bào)道，部分生防菌兼具拮抗和促生作用，大多數(shù)生防菌是從根際土壤中分離得到的[4]。芽胞桿菌除具有較好的防病效果以外，還因其促進(jìn)植株生長(zhǎng)、增加植物抗逆性等優(yōu)勢(shì)特征而被廣泛研究和應(yīng)用[5]，已報(bào)道出枯草芽胞桿菌B.subtilis[6]、解淀粉芽胞桿菌Bacillus amyloliquefaciens[7]、多粘類芽胞桿菌Paenibacilluspolymyxa[8,9]等噴霧或灌根防控辣椒疫病，且防控效果較好，但生防菌浸種或包衣防治辣椒疫病鮮見報(bào)道。貝萊斯芽胞桿菌[10]和蠟樣芽胞桿菌[11]近年來也應(yīng)用于辣椒疫病的防控，但這兩種生防菌在浸種防治辣椒疫病中的應(yīng)用較少。生防菌的單一使用存在作用方式單一、見效慢、穩(wěn)定性和持久性差等缺點(diǎn)[12]，生防菌混合使用和化學(xué)藥劑生防菌劑聯(lián)合使用是提高生防菌利用效果的重要方式。國(guó)內(nèi)外已對(duì)生防菌混合使用、菌藥聯(lián)用防控真菌病害展開了廣泛深入的研究，但對(duì)辣椒疫病防控的研究較少。本研究測(cè)定了貝萊斯芽胞桿菌LYK10 與蠟樣芽胞桿菌QTK2 浸種對(duì)辣椒苗期疫病的防控效果，分析了兩種生防菌的防病作用方式，研究了兩種供試生防菌混合及貝萊斯芽胞桿菌LYK10 與烯酰嗎啉聯(lián)合浸種對(duì)辣椒苗期疫病的防治效果，以期為辣椒疫病生物防治和生防菌有效利用研究提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

病原菌辣椒疫霉菌BY1、兩種生防菌貝萊斯芽胞桿菌LYK10 和蠟樣芽胞桿菌QTK2 均由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病害研究室分離、純化、鑒定和保存；中椒108 號(hào)，甜椒品種，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所育成；育苗基質(zhì)，青州市施可壯育苗基質(zhì)，市售品；烯酰嗎啉（98.5%原藥），廣東中迅農(nóng)科股份有限公司提供；NA 培養(yǎng)基、NB 培養(yǎng)基、PDA 培養(yǎng)基，OA 培養(yǎng)基的配制均參照鄭小波[13]的方法；PA 培養(yǎng)基配方為方椒汁200 g，瓊脂 20 g，定容至1000 mL，pH 7.0。

1.2 辣椒疫霉菌孢子懸浮液的制備

將辣椒疫霉菌BY1 接種于OA 平板25 ℃下培養(yǎng)5 d 后，轉(zhuǎn)接于PA 平板25 ℃下培養(yǎng)，每天觀察辣椒疫霉的產(chǎn)孢情況。待辣椒疫霉大量產(chǎn)孢時(shí)用10 mL 無菌水洗脫孢子。使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)孢子量，菌懸液8000 r/min 離心10 min，去除上清液，無菌水稀釋制成104孢子/mL 孢子懸浮液備用。

1.3 LYK10 與QTK2 對(duì)辣椒幼苗疫病的防控作用

1.3.1 LYK10 與QTK2 菌懸液的制備 將NA 平板培養(yǎng)的生防菌LYK10、QTK2 接種于NB 培養(yǎng)液，26 ℃、160 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h，得到種子菌液；取2 mL 種子菌液于200 mLNB 培養(yǎng)液中，26 ℃、160 r/min 振蕩培養(yǎng)48 h，將菌液8000 r/min 離心10 min，去掉上清液，用無菌水稀釋菌體分別得到濃度為108cfu/mL、107cfu/mL LYK10、QTK2 菌懸液，振蕩混勻備用。

1.3.2 帶菌基質(zhì)、無菌基質(zhì)的制備 將制備好的辣椒疫霉菌孢子懸浮液均勻混入細(xì)沙中，再將帶菌細(xì)沙與育苗基質(zhì)以1:9 的體積比混合，基質(zhì)的帶菌量為103孢子/L。無菌細(xì)沙與育苗基質(zhì)以1:9 的體積比混合制成無菌基質(zhì)。

1.3.3 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種對(duì)辣椒出苗和對(duì)疫病的防治效果 分別使用濃度為108cfu/mL 生防菌LYK10、QTK2 菌懸液浸泡無菌辣椒種子4 h 穴盤育苗，以無菌水浸種作為對(duì)照處理，每個(gè)處理72 株，3 次重復(fù)。播種后40 d 每天觀察記錄各處理辣椒總株數(shù)及病株數(shù)，統(tǒng)計(jì)出苗率、病株率，并以播種后40 d病株率計(jì)算防治效果。

1.3.4 LYK10 與QTK2 對(duì)辣椒疫霉菌的拮抗作用 采用平板對(duì)峙法濾紙片法。在培養(yǎng)基中央接種疫霉菌BY1 菌餅，以平板中心為交點(diǎn)畫十字距中心20 mm 處貼5 mm 滅菌濾紙片，每個(gè)培養(yǎng)皿貼3 片，108cfu/mL生防菌菌液取5 μL 滴加于濾紙片上。每個(gè)菌株重復(fù)3 次，計(jì)算抑制率。抑制率（%）＝（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100。

1.3.5 LYK10 與QTK2 浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的促生作用及誘導(dǎo)生理抗性作用 108cfu/mL 生防菌LYK10與QTK2 菌懸液浸泡無菌辣椒種子4 h，分別于含疫霉菌量為103孢子/dm3的基質(zhì)和無菌基質(zhì)中穴盤育苗，以無菌水浸種作為對(duì)照處理。每個(gè)處理72 株，3 次重復(fù)。播種后40 d 于穴盤中采集辣椒植株樣品，每個(gè)處理隨機(jī)采樣10 株，測(cè)量單株平均地上部分長(zhǎng)度、地下部分的長(zhǎng)度和苗重；測(cè)定辣椒幼苗過氧化氫酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）活性，酶活性測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒完成。CAT酶活性計(jì)算方法：組織中CAT 活力（U/mgprot）=ΔA×271/V 樣/T/Cpr，其中271 為常數(shù)（斜率的倒數(shù)），V 樣為取樣量0.025 mL，T 為反應(yīng)時(shí)間60 s，Cpr 為勻漿蛋白濃度3.1303 mgprot/mL（prot 指蛋白）。PPO酶活性計(jì)算方法：PPO 活力（U/g 鮮重）=ΔA/0.01×V 提取液/W×V 反總/V 樣×1 mL/V 反總/T，其中V提取液為提取液總體積10 mL，W 為樣本鮮重1 g，V 為總反應(yīng)體系總體積0.9 mL，V 樣為取樣量0.15 mL，T 為反應(yīng)時(shí)間10 min。

1.4 LYK10 與QTK2 混合浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防控作用

將濃度為108、107cfu/mL 生防菌LYK10 與QTK2 菌懸液等濃度等體積混合后，浸泡無菌辣椒種子，時(shí)長(zhǎng)4 h，浸泡后種植于含疫霉菌量為103孢子/L 的基質(zhì)中，以無菌水浸種作為對(duì)照處理，每個(gè)處理72 株，3 次重復(fù)。播種后每天觀察記錄各處理辣椒總株數(shù)及病株數(shù)，統(tǒng)計(jì)出苗率、病株率，并以播種后40 d 病株率計(jì)算防治效果。

1.5 烯酰嗎啉與生防菌LYK10 相容性測(cè)定

將生防菌LYK10 加入NB 培養(yǎng)液，26 ℃、160 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h 制成種子液。取2 mL 種子液加入200 mL NB 培養(yǎng)液中，26 ℃、160 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h 得到生防菌液。分別配制濃度為3000、1500 μg/mL烯酰嗎啉溶液，與NA 培養(yǎng)基以1:9 比例混合，制成含藥培養(yǎng)基。將菌液稀釋涂布于培養(yǎng)皿中，3 d 后記錄菌落數(shù)量。以加無菌水的NA 培養(yǎng)基為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3 次。

1.6 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防控作用

用丙酮溶解98.5%的烯酰嗎啉原藥，配制成濃度為10 mg/mL 的母液，用無菌水分別稀釋成600、300μg/mL 溶液。將濃度為108cfu/mL 生防菌LYK10 菌懸液與600 μg/mL 烯酰嗎啉溶液等體積混合制成5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥聯(lián)用處理；將濃度為107cfu/mL 生防菌LYK10 菌懸液與300 μg/mL 烯酰嗎啉溶液等體積混合制成5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥聯(lián)用處理。將無菌辣椒種子分別在5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合溶液、5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥混合溶液、108cfu/mL LYK10 菌液、300 μg/mL 烯酰嗎啉溶液中浸泡4 h，種植于帶菌基質(zhì)中，以無菌水浸種作為對(duì)照。每個(gè)處理72 株，3次重復(fù)。播種后每天觀察記錄各處理辣椒總株數(shù)及病株數(shù)，統(tǒng)計(jì)出苗率、病株率，并以播種后40 d 病株率計(jì)算防治效果。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用Microsoft Excel 2010 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)差分析并繪制圖表；采用 SPSS Statistics 26.0 軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 LYK10 與QTK2 浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防控作用

2.1.1 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種、混合浸種對(duì)辣椒出苗的影響 兩種生防菌LYK10 與QTK2 均對(duì)辣椒出苗時(shí)間無影響，均為播種后第11 d 開始出苗。如表1 所示，108cfu/mL LYK10 與QTK2 處理的出苗率分別為86.11%、87.50%，108cfu/mL 混合菌液處理、107cfu/mL 混合菌液處理的出苗率分別為86.11%、87.50%，分別相比于清水處理出苗率分別提高1.39%和2.78%，2 種生防菌單獨(dú)、混合浸種均促進(jìn)辣椒出苗，各處理之間沒有差異性。

表1 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種、混合浸種后辣椒幼苗出苗率Table 1 Seedling rate of pepper seedlings after separate and mixed LYK 10 and QTK 2

2.1.2 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種、混合浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防治效果 如表2 所示，播種后40 d，108cfu/mL LYK10 處理的病株率為18.06%，防效為30.55%，108cfu/mL QTK2 處理的病株率與CK 處理有顯著差異，12.50%，防效為33.33%，108cfu/mL 混合菌液處理的病株率為16.67%，防效為42.59%，相比于108cfu/mL QTK2 處理與108cfu/mL LYK10 處理防效分別提高39.41%和27.78%；107cfu/mL 混合菌液處理的病株率與CK 處理間有顯著差異，為12.50%，防效為43.52%，相比于108cfu/mL QTK2 處理與108cfu/mL LYK10 處理防效分別提高42.45%和30.57%，各處理防效之間沒有差異性。

表2 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種、混合浸種后辣椒幼苗病株率及防效Table 2 Disease rate and control effect of LYK10 and QTK2 in pepper seedlings after separate and mixed immersion

LYK10 和QTK2 菌液?jiǎn)为?dú)浸種和混合浸種與CK 相比，均可延遲辣椒幼苗發(fā)病時(shí)間，LYK10 和QTK2菌液浸種可分別延遲5、2 d，108、107cfu/mL 混合菌液處理可分別延遲6、9 d（圖1）。

圖1 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種、混合浸種后辣椒幼苗發(fā)病動(dòng)態(tài)Fig.1 Pathogenesis dynamics of pepper seedlings after LYK10 and QTK2 were immersed separately and mixed

2.1.3 LYK10 與QTK 對(duì)辣椒疫霉菌的拮抗作用 如圖2 所示，LYK10 和 QTK2 對(duì)疫霉菌BYI 均有較好的拮抗效果，兩種生防菌與疫霉菌間存在明顯的抑菌圈；抑菌率分別為67.58%和66.97%（表3）。

表3 108 cfu/mL LYK10 和QTK2 對(duì)疫霉菌BY1 的拮抗效果Table 3 Antagonism effect rate of LYK10 and QTK2 at the concentration of 108 cfu/mL against BY1

2.1.4 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的促生作用 試驗(yàn)結(jié)果表明，生防菌LYK10 和QTK2 單獨(dú)浸種后播種40 d 平均株高相比CK 株高提高了4.56%、4.77%，說明2 個(gè)生防菌株對(duì)辣椒地上部分生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，各處理間差異不顯著；生防菌LYK10 和QTK2 浸種處理根長(zhǎng)相比CK 分別提高了23.50%、20.22%，處理間差異不顯著；生防菌LYK10 與QTK2 單株苗重與對(duì)照處理相當(dāng)，處理間差異不顯著（圖3）。

圖3 LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種對(duì)辣椒幼苗株高、根長(zhǎng)、苗重的影響Fig.3 Effects of pepper seedling on plant height, root length, and seedling weight after seed immersion between LYK10 and QTK2 alone

2.1.5 LYK10 與QTK 對(duì)辣椒幼苗疫病的誘導(dǎo)生理抗性作用 LYK10 處理后辣椒幼苗CAT、PPO 酶活性如圖4 所示，無菌基質(zhì)LYK10 處理的CAT 酶活力要略低于無菌基質(zhì)清水處理的酶活力，但是帶菌基質(zhì)LYK10 處理的CAT 酶活力要高于無菌基質(zhì)LYK10 處理的酶活力，說明無病條件下生防菌LYK10 不能誘導(dǎo)辣椒幼苗CAT 酶活提高，而在有菌條件下生防菌LYK10 可以一定程度上誘導(dǎo)植物提高CAT 活性，消除辣椒疫霉菌侵染過程中產(chǎn)生的活性氧，提高辣椒的抗病性。

圖4 生防菌LYK10 浸種對(duì)辣椒幼苗過氧化氫酶、多酚氧化酶酶活力的影響Fig.4 Effect of LYK10 on catalase and polyphenols oxidase activity in pepper seedlings

帶菌基質(zhì)LYK10 處理的PPO 酶活力低于帶菌清水處理的酶活力，帶菌基質(zhì)LYK10 處理的PPO 酶活力低于無菌基質(zhì)LYK10 處理的酶活力，無菌條件下PPO 活性有所提高，但是有菌條件下生防菌LYK10的存在使得辣椒植株體內(nèi)PPO 活性降低。

由圖5 可知，無菌基質(zhì)QTK2 處理的CAT 酶活力要略低于無菌基質(zhì)清水處理的酶活力，但是帶菌基質(zhì)QTK2 處理的CAT 酶活力要分別高于無菌基質(zhì)QTK2 處理的酶活力，說明無病條件下生防菌QTK2 不能誘導(dǎo)辣椒幼苗CAT 酶活提高，而在有菌條件下生防菌QTK2 可以一定程度上誘導(dǎo)植物提高CAT 活性，消除辣椒疫霉菌侵染過程中產(chǎn)生的活性氧，提高辣椒的抗病性。

圖5 生防菌QTK2 浸種對(duì)辣椒幼苗過氧化氫酶、多酚氧化酶酶活力的影響Fig.5 Effect of QTK2 on catalase and polyphenols oxidase activity in pepper seedlings

無菌基質(zhì)QTK2 處理的PPO 酶活力低于無菌基質(zhì)清水處理和帶菌基質(zhì)QTK2 處理的酶活力，說明無菌條件下生防菌QTK2 沒有誘導(dǎo)辣椒植株體內(nèi)PPO 活性增高。

2.2 烯酰嗎啉對(duì)生防菌LYK10 生長(zhǎng)的影響

經(jīng)烯酰嗎啉處理的菌落數(shù)與CK 相當(dāng)，處理間差異不顯著，烯酰嗎啉對(duì)生防菌LYK10 的生長(zhǎng)無影響（圖6），二者相容性較好。

圖6 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種后辣椒幼苗發(fā)病動(dòng)態(tài)Fig.6 Dynamic of pepper seedlings after mixing of LYK10 with allylmorpholine

圖6 烯酰嗎啉對(duì)生防菌LYK10 生長(zhǎng)的影響Fig.6 Effects of dimethomorph on the growth of biocontrol bacteria LYK10

2.3 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防控作用

2.3.1 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種對(duì)辣椒出苗的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明，生防菌LYK10 和烯酰嗎啉浸種處理后對(duì)辣椒出苗時(shí)間無影響，均為11 d 開始出苗。播種40 d 時(shí)，5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合處理、5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥混合處理的出苗率分別為86.11%和91.67%，相比于CK 出苗率分別提高1.39%和6.95%；5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合處理相比300 μg/mL 烯酰嗎啉處理提高1.39%；5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥混合處理的出苗率比108cfu/mL LYK10、300 μg/mL 烯酰嗎啉的出苗率分別提高5.56%和6.95%，各處理之間沒有顯著差異性（表4）。

表4 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種后辣椒幼苗出苗率Table 4 Seedrate of pepper seedlings after mixing LYK10 with allylmorpholine

2.3.2 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種對(duì)辣椒幼苗疫病的防治效果 試驗(yàn)結(jié)果表明，5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL菌藥混合處理、5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥混合處理相對(duì)于CK 處理辣椒發(fā)病時(shí)間分別延遲了4 和6 d（如圖6 所示）。由表5 可知，播種后40 d，5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合處理的病株率為13.89%，防效為48.15%，相比于108cfu/mL LYK10 處理與300 μg/mL 烯酰嗎啉處理防效分別提高57.61%和20.95%；5.0×106cfu/mL＋150 μg/mL 菌藥混合處理的病株率為16.67%，防效為38.89%，相比于108cfu/mL LYK10處理防效提高27.30%，相比于300 μg/mL 烯酰嗎啉處理防效降低2.31%，5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合浸種處理與108cfu/mL LYK10 浸種的防效之間有差異性，5.0×107cfu/mL＋300 μg/mL 菌藥混合浸種處理防病效果最佳。

表5 LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種后辣椒幼苗病株率及防效Table 5 Plant rate and efficacy of pepper seedlings after mixing LYK10 with allylmorpholine

3 討論

種苗帶菌是植物病害遠(yuǎn)距離傳播的重要方式，特別是對(duì)于土傳病害，不僅會(huì)直接造成發(fā)病危害，還會(huì)在種植田土壤中進(jìn)行病原積累，成為病害發(fā)生的潛在菌源。辣椒疫病是世界性的土傳和種傳病害，移栽種植模式下種子帶菌和育苗土帶菌均可導(dǎo)致種苗帶菌[14]。本試驗(yàn)在育苗土103孢子/L 接菌條件下，辣椒疫病發(fā)病率為26.39%，其他無癥帶菌辣椒種苗則會(huì)成為辣椒疫病大面積發(fā)生的病原菌初侵染源，因此育苗期辣椒疫病預(yù)防是防止辣椒疫病擴(kuò)散的重要措施。應(yīng)用生防菌浸種防治辣椒疫病可同時(shí)預(yù)防種子帶菌形成帶菌種苗，還可降低帶菌育苗土中病原菌數(shù)量，同時(shí)通過生防菌在辣椒苗植株內(nèi)和根基土中的定殖以預(yù)防和降低定植后田間辣椒疫病的發(fā)生。

貝萊斯芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌均為革蘭氏陽(yáng)性芽胞桿菌，具有植物促生長(zhǎng)、生物防治等功能。貝萊斯芽胞桿菌防治植物病害應(yīng)用較為廣泛，在馬鈴薯早疫病[15]、馬鈴薯晚疫病[16]、水稻稻瘟病[17]、香蕉枯萎病[18]、橄欖黃萎病[19]等病害防治中已有報(bào)道，蠟樣芽胞桿菌在線蟲病害防治方面的應(yīng)用比較廣泛[20,21]。張德珍等[10]用貝萊斯芽胞桿菌F1-1 發(fā)酵液灌根研究對(duì)辣椒疫病的防治效果，防效達(dá)到69.91%；鄒修為等[22]用貝萊斯芽胞桿菌Y4-39 發(fā)酵液灌根防治辣椒疫病，結(jié)果表明該菌株具有良好的防治效果。本試驗(yàn)采用供試生防菌浸種方式防治育苗期土傳辣椒疫病，兩種供試菌株均延遲了辣椒幼苗發(fā)病時(shí)間，降低了病株率。兩種生防菌菌液浸種對(duì)辣椒苗期防效在30%左右，防效低的原因可能與菌液浸種后種子表面帶菌量少相關(guān)，生防菌制劑化包衣可增加單粒種子表面帶菌量，是提高防治效果的有效途徑，因此生防菌制劑化研究也是生防菌有效利用的重要措施。

芽胞桿菌防病機(jī)理主要包括競(jìng)爭(zhēng)作用、拮抗作用、促生作用和誘導(dǎo)抗性作用等[23]。本試驗(yàn)結(jié)果表明LYK10 與QTK2 對(duì)辣椒植株有一定的促生作用，但效果不顯著，可能是由于在試驗(yàn)育苗期短，供試菌株的促生作用未完全發(fā)揮。兩種供試生防菌株對(duì)辣椒疫霉菌存在拮抗作用，存在明顯的抑菌圈，說明兩種供試菌株可產(chǎn)生在培養(yǎng)基中擴(kuò)散的抑菌物質(zhì)。CAT 在阻止或減少羥基自由基以及清除超氧自由基、H2O2和過氧化物等方面發(fā)揮重要作用，可以通過一系列防御機(jī)制來保護(hù)植物細(xì)胞；PPO 在植物遭到病原物侵襲時(shí)，能氧化體內(nèi)的多酚類物質(zhì)生成醌類物質(zhì)，而醌類物質(zhì)對(duì)多種病原物有毒害作用[24]。有菌條件下生防菌LYK10 與QTK2 可以一定程度上誘導(dǎo)植物提高CAT 活性，消除辣椒疫霉菌侵染過程中產(chǎn)生的活性氧，提高辣椒的抗病性。生防菌LYK10 的存在一定程度上可以提高辣椒植株體內(nèi)PPO 活性，但是作用不明顯，生防菌QTK2 則沒有誘導(dǎo)PPO活性提高可能是由于酶活性處于動(dòng)態(tài)變化，沒有檢測(cè)到峰值。LYK10與QTK2誘導(dǎo)防御酶活性變化動(dòng)態(tài)、產(chǎn)生的代謝物類型及生防機(jī)制還需要繼續(xù)研究。

生防菌混合使用即充分利用不同生防菌之間的協(xié)同增效作用，增加防治譜，提高防治效果及其穩(wěn)定性，是生防菌利用的的研究熱點(diǎn)。楊瑞先等[25]試驗(yàn)結(jié)果表明解淀粉芽胞桿菌 Fy11 和 Zy44 混合與單菌株相比顯著降低辣椒疫霉發(fā)生的嚴(yán)重度；楊定祥[26]用海洋木霉菌和海洋解淀粉芽胞桿菌防控辣椒疫病，2 菌株混合使用較單一菌株處理發(fā)病率分別降低了38.71%、42.42%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，貝萊斯芽胞桿菌LYK10 與蠟樣芽胞桿菌QTK2 混合浸種防效高于LYK10 與QTK2 單獨(dú)浸種的防效，并且低濃度混合菌液處理的防效高于高濃度生防菌聯(lián)合使用的防效。這可能是由于高濃度的混合菌液之間產(chǎn)生的抑制作用大于低濃度的混合菌液，需繼續(xù)進(jìn)行生防菌聯(lián)合使用最佳配比篩選試驗(yàn)。

生防菌與化學(xué)藥劑聯(lián)合使用是生防菌有效利用的另一個(gè)有效措施，該方法充分利用生防菌的持效性和化學(xué)藥劑的速效性，從而有效控制有害生物的危害。馮永新等[27]探究短小芽胞桿菌和化學(xué)殺菌劑協(xié)同防治煙草青枯病效果，結(jié)果表明菌藥復(fù)配劑的防效（68.77%）明顯優(yōu)于單劑噻菌銅和生防菌AR03 的防效，且混配劑中噻菌銅使用量只有單劑的1/2，大幅降低了化學(xué)藥劑的使用量；黃大野等[28]將淡紫褐鏈霉菌NBF715 和烯酰嗎啉聯(lián)合使用進(jìn)行辣椒疫病防控盆栽試驗(yàn)，防效提高且減少了烯酰嗎啉的使用量；枯草芽胞桿菌與氟環(huán)唑聯(lián)用對(duì)禾谷鐮孢霉的增效作用，結(jié)果表明：菌藥聯(lián)用對(duì)禾谷鐮孢霉的最高抑菌活性可達(dá)74.44%，表現(xiàn)增效和持效作用[29]。本試驗(yàn)利用貝萊斯芽胞桿菌LYK10 與烯酰嗎啉混合浸種防治育苗期土傳辣椒疫病，2 個(gè)菌藥聯(lián)用處理的防效均高于其高濃度單菌和單藥對(duì)照處理，達(dá)到了減藥增效的效果，但應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行菌藥配比篩選及辣椒疫病全程防控技術(shù)研究，充分利用生防菌資源防控辣椒疫病。