Naa20通過(guò)抑制AIM2表達(dá)減輕膿毒癥心肌損傷

劉暢，范彩紅，劉佳，劉亞珊，張?jiān)婄?，劉士銘，申艷娜

心肌損傷是膿毒癥的常見并發(fā)癥，已成為膿毒癥預(yù)后不良的重要原因之一［1-2］。膿毒癥心肌損傷發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)有治療手段療效十分有限，因此深入闡明其發(fā)病機(jī)制并開發(fā)新的治療策略意義重大。近年來(lái)，細(xì)胞焦亡作為新發(fā)現(xiàn)的一種依賴于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的炎性程序性死亡形式，已被證實(shí)在膿毒癥心肌損傷的發(fā)生發(fā)展中起重要調(diào)控作用，但其機(jī)制尚未完全闡明［3］。黑色素瘤缺失因子2（absent in melanoma 2，AIM2）是干擾素誘導(dǎo)的HIN-200家族成員之一，其可在心肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞中表達(dá)。相關(guān)研究表明AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡與心血管疾病發(fā)展密切相關(guān)［4］。Naa20 是N 端乙?；D(zhuǎn)移酶（N-terminal acetyltransferases，NATs）復(fù)合物B（NatB）的核心蛋白，可通過(guò)調(diào)控蛋白N 端乙酰化修飾影響蛋白降解［5］、定位［6］和結(jié)合［7］。研究表明Naa20 可參與機(jī)體多項(xiàng)活動(dòng)，并與多種疾病的發(fā)生相關(guān)［8-9］，而其在心肌損傷中的調(diào)控作用卻鮮有報(bào)道。本研究旨在探究Naa20 及AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡在膿毒癥心肌損傷中的調(diào)控作用，以期為該病防治提供作用靶點(diǎn)及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞系與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 大鼠心肌細(xì)胞系H9c2購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心。12只SPF級(jí)6周齡雄性C57BL/6J 小鼠（體質(zhì)量18～20 g）和10 只SPF 級(jí)1 日齡SD乳鼠（體質(zhì)量7～9 g）購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010，質(zhì)量合格證號(hào)110324231101689256。C57BL/6J 小鼠實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度60%±5%，光照條件設(shè)定為明暗各12 h循環(huán)交替，自由飲水、攝食。

1.1.2 主要試劑與儀器 肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白細(xì)胞介素（IL）-1β酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；線粒體膜電位熒光探針（JC-1）、活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊公司；Trizol 試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；鼠源AIM2 一抗購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司；兔源消皮素D（GSDMD）、Naa20一抗購(gòu)自武漢愛(ài)博泰克生物公司；兔源IL-1β 一抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗及山羊抗鼠IgG二抗購(gòu)自美國(guó)Promega公司；Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒購(gòu)自蘇州海貍生物醫(yī)學(xué)工程有限公司；倒置熒光顯微鏡（型號(hào)：ECLIPSE Ti-U）購(gòu)自日本Nikon公司；多功能酶標(biāo)儀（型號(hào)：Synergy 2）購(gòu)自美國(guó)BioTek 有限公司；化學(xué)發(fā)光儀（型號(hào)：Universal Hood Ⅱ）購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2 研究方法

1.2.1 動(dòng)物分組及模型的建立 適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后將12 只雄性C57BL/6J小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和模型組，每組6 只。參照文獻(xiàn)［10］，采用尾靜脈注射10 mg/kg 脂多糖（LPS）制備膿毒癥心肌損傷模型，造模后給予小鼠正常飲食。對(duì)照組采用相同方法注射等體積磷酸鹽緩沖液（PBS）。

1.2.2 小鼠心臟多普勒超聲檢測(cè) 在注射LPS 或PBS 12 h后對(duì)2 組小鼠進(jìn)行心功能檢查。采用3%異氟烷麻醉小鼠。麻醉后固定、備皮，采用心臟多普勒超聲檢測(cè)左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、短軸縮短率（FS）。所得參數(shù)為連續(xù)6個(gè)心動(dòng)周期的平均值。

1.2.3 ELISA 檢測(cè)CK-MB、IL-1β 水平 采用腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，開胸取心臟血，3 000 r/min 離心15 min，收集血清，檢測(cè)小鼠血清中CK-MB含量，每組取6個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。心肌細(xì)胞處理后檢測(cè)心肌細(xì)胞上清液中IL-1β含量。

1.2.4 小鼠心臟組織的采集 獲取小鼠心臟血后，取出心臟，生理鹽水灌洗心腔以洗凈殘余血液。將心臟置于4%多聚甲醛中固定，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 蘇木精-伊紅（HE）染色觀察心肌組織結(jié)構(gòu) 首先將切片先后放入二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ各5 min，依次放入無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、去離子水各5 min。蘇木素液染色5 min后，流水沖洗1～2 min，1%鹽酸乙醇30 s，流水沖洗3～5 min。伊紅染色復(fù)染30 s 后脫水。最后用中性樹膠封片。

1.2.6 心肌細(xì)胞培養(yǎng)和分組 1日齡SD乳鼠消毒、開胸取心臟，去除血管等組織，采用1%胰蛋白酶4 ℃消化12 h，0.25%膠原酶Ⅱ37 ℃消化10 min。收集乳鼠心肌細(xì)胞并培養(yǎng)于含7%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/L 鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，24 h 后培養(yǎng)基更換為含1%轉(zhuǎn)鐵蛋白的DMEM 培養(yǎng)液。大鼠H9c2 心肌細(xì)胞在含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/L 鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)液中培養(yǎng)。上述細(xì)胞均置于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和LPS處理組（培養(yǎng)基中加入終濃度為10 mg/L的LPS孵育12 h）。

1.2.7 JC-1 檢測(cè)心肌細(xì)胞線粒體膜電位 乳鼠心肌細(xì)胞接種于6孔板（2×105個(gè)/孔）中，LPS處理12 h后，加入JC-1染色工作液（1 mL/孔），37 ℃孵育20 min，吸去上清液，JC-1 染色緩沖液洗滌2次，熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍攝。

1.2.8 熒光探針檢測(cè)心肌細(xì)胞ROS 水平 乳鼠心肌細(xì)胞分組處理后，加入10 mmol/L的2',7'-二氫二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）使其終濃度為10 μmol/L。37 ℃孵育30 min 后PBS洗滌2次，熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍攝。

1.2.9 Western blot 檢測(cè)心肌細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平 乳鼠心肌細(xì)胞或H9c2心肌細(xì)胞分組處理后，采用RIPA裂解液破壞細(xì)胞，4 ℃、10 000×g離心5 min，收集上清液，采用二辛可寧酸（BCA）法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。加入適量上樣緩沖液，沸水浴10 min后取25 μg蛋白上樣，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，PVDF 轉(zhuǎn)膜；5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別加入AIM2、GSDMD、活化的GSDMD（GSDMD-N）、IL-1β、活化的IL-1β（p17）、Naa20 和β-actin 一抗（稀釋倍數(shù)均為1∶1 000），4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜3次，每次10 min，加入HRP標(biāo)記的IgG二抗（稀釋倍數(shù)均為1∶2 000），室溫孵育1 h，TBST洗膜3 次，每次10 min，化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑顯色，凝膠成像系統(tǒng)觀察蛋白條帶并分析灰度值。以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算各組目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.10 qPCR檢測(cè)心肌細(xì)胞中Naa20 mRNA表達(dá) 乳鼠心肌細(xì)胞分別給予1、5、10 mg/L LPS處理，12 h后采用TRIzol試劑盒提取LPS各組及對(duì)照組細(xì)胞的總RNA，Nanodrop分光光度儀檢測(cè)RNA 純度和濃度。以RNA 為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件為95 ℃30 s；95 ℃10 s，60 ℃30 s，共40 個(gè)循環(huán)。Naa20 以GAPDH 為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計(jì)算Naa20 的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，見表1。

Tab.1 Primer sequences for qPCR表1 qPCR引物序列

1.2.11 H9c2 心肌細(xì)胞分組轉(zhuǎn)染 H9c2 心肌細(xì)胞接種于6孔板（2×105個(gè)/孔）中，采用Lipofectamine 2000 試劑分別轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒、Naa20過(guò)表達(dá)質(zhì)粒各1 μg，轉(zhuǎn)染24 h后進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。細(xì)胞分組：（1）對(duì)照組。轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒，未經(jīng)LPS 處理。（2）Naa20對(duì)照組。轉(zhuǎn)染Flag-Naa20過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，未經(jīng)LPS處理。（3）LPS組。轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒，24 h后加入終濃度為10 μg/L的LPS孵育12 h。（4）Naa20+LPS組。轉(zhuǎn)染Flag-Naa20過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，24 h后加入LPS處理。

1.2.12 MTT 法檢測(cè)H9c2 心肌細(xì)胞活力 將處理后的各組H9c2心肌細(xì)胞接種于96孔板（3 000個(gè)/孔）中，第2天每孔加入10 mL MTT溶液（5 g/L），37 ℃孵育4 h。隨后吸取上清液，加入100 μL 的二甲基亞砜，震蕩10 min 后，使用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)每孔的光密度（OD）值，并計(jì)算細(xì)胞活力。細(xì)胞活力（%）=（實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。每組細(xì)胞設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔。

1.2.13 檢測(cè)H9c2 細(xì)胞LDH 釋放 收集各組H9c2 心肌細(xì)胞，加入提取試劑（500 萬(wàn)細(xì)胞加1 mL 提取試劑），超聲波破碎細(xì)胞，8 000×g、4 ℃離心10 min，收集細(xì)胞上清液。按照試劑盒說(shuō)明書加入相應(yīng)試劑，充分混勻后室溫靜置3 min，于450 nm波長(zhǎng)處讀取各組樣品OD 值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值和相應(yīng)濃度擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各組樣品濃度（樣品濃度=0.359×OD值+0.091 9）和樣品相應(yīng)的LDH值（樣品LDH=0.133×樣品濃度）。每組細(xì)胞設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔。

1.2.14 免疫共沉淀檢測(cè)H9c2 中Naa20 與AIM2 的結(jié)合情況 收集RIPA 裂解后的細(xì)胞上清液，各組留取45 μL 上清液，記作全細(xì)胞裂解液（WCL），檢測(cè)細(xì)胞中相應(yīng)蛋白表達(dá)。另取20 μL Protein A/G免疫沉淀磁珠分別與5 μL Naa20抗體或IgG 室溫結(jié)合2 h，加入上清液4 ℃孵育過(guò)夜。次日，棄去上清液，加入適量上樣緩沖液，沸水浴10 min后取25 μg蛋白上樣，Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。H9c2 心肌細(xì)胞隨機(jī)分為3 組。對(duì)照組：細(xì)胞未處理并加入Naa20 抗體包被的磁珠；LPS處理組：細(xì)胞經(jīng)LPS處理12 h并加入Naa20抗體包被的磁珠；LPS對(duì)照組：細(xì)胞經(jīng)LPS處理12 h并加入IgG抗體包被的磁珠。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Graphpad Prism 8.0 軟件繪圖。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)；2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LPS 膿毒癥小鼠出現(xiàn)心肌損傷 與對(duì)照組相比，模型組小鼠LVEF、FS 降低，血清CK-MB 含量升高（P＜0.01），見表2。HE 染色結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，模型組小鼠心肌組織可見明顯的纖維斷裂和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變，見圖1。

Fig.1 Heart histopathological changes in two groups of mice(HE staining,×100)圖1 2組小鼠心臟組織病理學(xué)變化（HE染色，×100）

Tab.2 Comparison of left ventricular ejection fraction,fraction shortening and CK-MB betweentwo groups of mice表2 2組小鼠LVEF、FS、CK-MB水平比較（n=6，）

Tab.2 Comparison of left ventricular ejection fraction,fraction shortening and CK-MB betweentwo groups of mice表2 2組小鼠LVEF、FS、CK-MB水平比較（n=6，）

＊＊P＜0.01。

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2.2 LPS 刺激對(duì)心肌細(xì)胞線粒體功能及炎癥的影響 與對(duì)照組相比，LPS 處理組乳鼠心肌細(xì)胞中的線粒體膜電位下降，ROS 釋放增多，見圖2、3。與對(duì)照組相比，LPS 處理組乳鼠心肌細(xì)胞中的AIM2、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β 和p17 蛋白水平升高，且心肌細(xì)胞上清液中的IL-1β 含量增加（P＜0.01），見圖4、表3。

Fig.2 The mitochondrial membrane potential of neonatal rat cardiomyocytes in two groups(JC-1 staining,×100)圖2 2組乳鼠心肌細(xì)胞線粒體膜電位（JC-1染色，×100）

Fig.3 ROS levels of neonatal rat cardiomyocytes in two groups(DCFH-DA staining,×100)圖3 2組乳鼠心肌細(xì)胞ROS水平（DCFH-DA染色，×100）

Tab.3 Comparison of AIM2,GSDMD,IL-1β,p17 protein expression levels and IL-1β content in supernatant between two groups表3 2組乳鼠心肌細(xì)胞AIM2、GSDMD、IL-1β、p17蛋白表達(dá)和上清液中IL-1β水平比較 （n=3，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

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2.3 LPS 刺激誘導(dǎo)Naa20 表達(dá)增多 與對(duì)照組相比，LPS各組乳鼠心肌細(xì)胞中Naa20 mRNA和蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05），見表4、圖5。

Fig.5 The expression levels of Naa20 protein in neonatal rat cardiomyocytes in four groups圖5 各組乳鼠心肌細(xì)胞中Naa20的蛋白表達(dá)水平

Tab.4 Comparison of Naa20 levels between fourgroups of neonatal rat cardiomyocytes表4 各組乳鼠心肌細(xì)胞中Naa20水平比較（n=3，）

Tab.4 Comparison of Naa20 levels between fourgroups of neonatal rat cardiomyocytes表4 各組乳鼠心肌細(xì)胞中Naa20水平比較（n=3，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與對(duì)照組比較，P＜0.05。

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2.4 過(guò)表達(dá)Naa20抑制心肌細(xì)胞死亡 與對(duì)照組相比，LPS 組H9c2 心肌細(xì)胞活力降低，LDH 釋放量升高（P＜0.05）。與LPS組相比，Naa20+LPS組H9c2心肌細(xì)胞活力增強(qiáng)，而LDH 釋放降低（P＜0.05），見表5。

Tab.5 Comparison of H9c2 cell viability and LDH levels between four groups表5 各組H9c2細(xì)胞活力和LDH比較 （n=3，）

＊＊P＜0.01；a與對(duì)照組比較，b與LPS組比較，P＜0.05；表6同。

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2.5 Naa20 靶向抑制AIM2 表達(dá) 通過(guò)比對(duì)分析人源及鼠源（小鼠和大鼠）AIM2 的N 端前10 個(gè)氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)AIM2前兩個(gè)氨基酸分別為甲硫氨酸（M）和谷氨酸（E），提示AIM2可能與Naa20結(jié)合，見圖6。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在LPS處理的H9c2心肌細(xì)胞中，Naa20 與AIM2 結(jié)合，見圖7。與LPS 組相比，Naa20+LPS組H9c2心肌細(xì)胞中AIM2乙?；ˋc）水平增加，AIM2、GSDMD、GSDMD-N 的蛋白水平下降，且細(xì)胞上清液中IL-1β 含量降低（P＜0.05），見圖8、表6。

Fig.8 The expression levels of ace-AIM2 and AIM2,GSDMD protein in four groups of H9c2 cells圖8 各組H9c2心肌細(xì)胞中AIM2乙?；癆IM2、GSDMD、GSDMD-N的蛋白表達(dá)水平

Tab.6 Comparison of ace-AIM2 and AIM2,GSDMD,GSDMD-N protein,and IL-1β content in supernatant between four groups of H9c2 cells表6 各組H9c2心肌細(xì)胞中AIM2乙?；珹IM2、GSDMD、GSDMD-N蛋白及上清液IL-1β表達(dá)水平比較 （n=3，）

Tab.6 Comparison of ace-AIM2 and AIM2,GSDMD,GSDMD-N protein,and IL-1β content in supernatant between four groups of H9c2 cells表6 各組H9c2心肌細(xì)胞中AIM2乙?；?，AIM2、GSDMD、GSDMD-N蛋白及上清液IL-1β表達(dá)水平比較 （n=3，）

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3 討論

3.1 膿毒癥心肌損傷與細(xì)胞焦亡 膿毒癥心肌損傷是膿毒癥患者出現(xiàn)的一種非缺血性心功能障礙，主要表現(xiàn)為左心室擴(kuò)張伴充盈壓力正?；蚪档?、心室收縮力降低和左右心室（收縮或舒張）功能障礙伴容積輸注反應(yīng)降低［11］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，膿毒癥不合并心肌損傷的患者病死率僅為20%，而合并心肌損傷的患者病死率可達(dá)70%～90%［12］。膿毒癥患者的心肌損傷程度已成為其不良預(yù)后的主要預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。目前研究認(rèn)為心肌損傷與炎性因子的大量釋放［13］、線粒體損傷［14］和細(xì)胞死亡［15］等密切相關(guān)，其中心肌細(xì)胞死亡是造成膿毒癥心肌損傷的關(guān)鍵因素。研究顯示，在膿毒癥小鼠中，抑制NLRP3 介導(dǎo)的心肌細(xì)胞焦亡可有效提高小鼠的生存率，減輕心肌損傷［16］。本研究采用尾靜脈注射LPS 法構(gòu)建膿毒癥小鼠模型，也證實(shí)心肌細(xì)胞發(fā)生焦亡。因此，深入探明細(xì)胞焦亡在膿毒癥心肌損傷中的調(diào)控機(jī)制對(duì)防控該病有重要意義。

3.2 AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡與心血管疾病相關(guān) 研究表明AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡與心血管疾病密切相關(guān)［17］。Wang 等［18］研究表明，在糖尿病心肌病小鼠中，線粒體損傷釋放的ROS 可以增加AIM2 表達(dá)，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞焦亡，促進(jìn)糖尿病心肌病的發(fā)生。在心肌缺血再灌注小鼠心臟組織中AIM2 表達(dá)顯著升高［19］，并且其下游的細(xì)胞焦亡相關(guān)炎性因子IL-18升高［20］，提示AIM2介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡可能促進(jìn)該疾病進(jìn)展。本研究顯示，與對(duì)照組相比，LPS處理組心肌細(xì)胞線粒體膜電位顯著下降且ROS釋放增多，AIM2及焦亡相關(guān)蛋白GSDMD、GSDMD-N、IL-1β 和p17表達(dá)均升高，細(xì)胞上清液中IL-1β 含量增加，提示LPS可促進(jìn)心肌細(xì)胞發(fā)生AIM2介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡，這可能是導(dǎo)致心肌損傷的重要原因。

3.3 Naa20 通過(guò)抑制AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡減輕膿毒癥心肌損傷 Naa20 與多種疾病進(jìn)展有關(guān)。Jung等［8］發(fā)現(xiàn)，Naa20通過(guò)其N端乙?；富钚哉{(diào)控肝激酶B1（LKB1）-腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號(hào)通路，從而參與肝癌的發(fā)生發(fā)展。Morrison 等［21］發(fā)現(xiàn)，突變的Naa20 可損害NatB 的酶活性，患者出現(xiàn)發(fā)育遲緩、智力低下等表現(xiàn)。然而，Naa20在膿毒癥心肌損傷中的調(diào)控作用還鮮見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，LPS處理組乳鼠心肌細(xì)胞中的Naa20表達(dá)水平升高，并且在H9c2心肌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Naa20可提高心肌細(xì)胞活力并減少LDH 釋放，表明Naa20 可以有效減輕膿毒癥心肌損傷。Naa20的反應(yīng)底物需滿足其N端前兩個(gè)氨基酸為M和E（ME）或谷氨酰胺（MQ）或天冬氨酸（MD、MN）［22］，通過(guò)比對(duì)不同種屬的AIM2氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)其前兩個(gè)氨基酸均為ME，推測(cè)Naa20 可能調(diào)控AIM2。本研究利用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)Naa20 與AIM2 結(jié)合；與LPS 組相比，Naa20+LPS 組中AIM2 的乙?；揎椩黾?，AIM2 及焦亡相關(guān)蛋白GSDMD、GSDMD-N、IL-1β 和p17 的蛋白表達(dá)下降，且細(xì)胞上清液中IL-1β含量降低，表明Naa20可以抑制AIM2介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡。

綜上所述，Naa20 可通過(guò)結(jié)合AIM2，增加AIM2乙?；揎?，抑制AIM2 介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡，從而減輕LPS膿毒癥心肌損傷。本研究豐富了膿毒癥心肌損傷的發(fā)病機(jī)制，且探討了Naa20的調(diào)控作用及機(jī)制，有望為該病的臨床治療提供新思路和新靶點(diǎn)。