藍(lán)色半導(dǎo)體激光和近紅外激光對(duì)牙齦卟啉單胞菌殺菌作用的體內(nèi)研究

司薇杭，朱家禛，張千千，陳 悅*

(1西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院牙周病科，西安 710004；2西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院；*通訊作者,E-mail:dentistcy@126.com)

菌斑生物膜是牙周病的始動(dòng)因子，牙周病的預(yù)防和治療最重要的是控制菌斑，消除炎癥，通常牙周炎傳統(tǒng)的治療方法有齦上潔治術(shù)、齦下刮治和根面平整術(shù)、局部用藥、全身用藥等，但使用中也存在一些不足，如刮治器械難以進(jìn)入清除根分叉以及窄而深的牙周袋的菌斑，也難以清除入侵牙周組織的細(xì)菌，而長期用藥易產(chǎn)生耐藥性和副作用等。而激光可以到達(dá)刮治器械無法到達(dá)的位置，利用散射效應(yīng)、光熱效應(yīng)對(duì)牙周致病菌起到殺菌作用，并且同時(shí)避免了藥物治療的副作用和耐藥性等問題。

目前牙周領(lǐng)域常用的激光有Nd:YAG激光、Er:YAG激光、CO2激光、半導(dǎo)體激光等[1]。其中，半導(dǎo)體激光波長通常在800～980 nm之間，屬于近紅外激光，能量被水和硬組織吸收少，大部分被黑色素和血紅蛋白吸收，可殺滅牙周袋內(nèi)致病菌，尤其是牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，Pg)等含黑色素細(xì)菌[2,3]。藍(lán)色半導(dǎo)體激光(藍(lán)激光)是一種新研發(fā)的半導(dǎo)體激光，其在牙周炎治療中的殺菌效果和安全性有待研究。本實(shí)驗(yàn)將建立牙周炎大鼠模型，使用不同功率的藍(lán)激光和近紅外激光照射牙周袋殺菌，通過對(duì)照實(shí)驗(yàn)探究藍(lán)激光和近紅外激光對(duì)Pg的殺菌效果和安全性，為藍(lán)激光應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

PgATCC33277型標(biāo)準(zhǔn)菌株(四川大學(xué)華西口腔實(shí)驗(yàn)中心)，EDTA脫鈣液(武漢博士德生物工程有限公司)，細(xì)菌gDNA提取試劑盒(日本TaKaRa公司)，microCT掃描系統(tǒng)(美國PerkiElmer公司)，組織切片機(jī)(德國Leica公司)，光學(xué)顯微鏡(德國Leica公司)，細(xì)菌gDNA提取試劑盒(日本TaKaRa公司)，PCR擴(kuò)增試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)，DNA凝膠回收試劑盒(美國Omega公司)，熒光定量PCR試劑盒(日本TaKaRa公司)，PCR儀(美國ABI公司)，光學(xué)顯微鏡(德國Leica公司)，microCT掃描系統(tǒng)(美國PerkinElmer公司)，波長450 nm藍(lán)激光樣機(jī)(西安藍(lán)極醫(yī)療電子科技有限公司)，波長810 nm近紅外激光儀(德國A.R.C公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4周齡雄性SD大鼠35只，體質(zhì)量(140±10)g，購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號(hào)：SCXK(陜)2007-001。飼養(yǎng)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，溫度為(22±1)℃、相對(duì)濕度為(60±5)%、通風(fēng)干燥。實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)化飲食適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.3 牙周炎大鼠模型的建立

室溫下取PgATCC33277型標(biāo)準(zhǔn)菌株快速解凍，吸取100 μl菌液，按四區(qū)劃線法在BHI血平板上涂布。將涂布好的血平板和厭氧產(chǎn)氣袋一并放入密封飯盒中，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d。第7天后挑取形態(tài)飽滿的單菌落轉(zhuǎn)種，平板分區(qū)劃線涂布，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，形成黑色帶有金屬光澤的單克隆菌落。配置初始菌液不同濃度，并測(cè)定吸光度值，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，配得濃度為109CFU/ml的Pg菌液。

雄性SD大鼠35只，隨機(jī)分配為對(duì)照組(5只)和牙周炎模型組(30只)。對(duì)模型組大鼠進(jìn)行10%水合氯醛腹腔注射，麻醉后用鼠板固定，4-0絲線結(jié)扎雙側(cè)上頜第二磨牙(M2)，使絲線盡量進(jìn)入齦溝中，然后用小毛刷在結(jié)扎部位的牙齦涂布濃度為109CFU/ml的Pg菌液。每2 d檢查結(jié)扎情況，同時(shí)涂布菌液，如絲線斷裂脫落，標(biāo)記大鼠并重新結(jié)扎，連續(xù)兩次脫落的大鼠剔除，持續(xù)建模6周。

1.4 CT三維重建法測(cè)量牙周炎大鼠模型的牙槽骨吸收

建模6周，隨機(jī)挑選模型組大鼠5只和對(duì)照組大鼠5只，行10%水合氯醛腹腔注射麻醉，剪取大鼠雙側(cè)上頜牙槽骨，適當(dāng)修剪，放入MicroCT的檢測(cè)管，進(jìn)行掃描。使用Mimics 21.0軟件包重建牙槽骨的三維模型，分別測(cè)量第二磨牙(M2)近中腭尖(mesio-palatal cusp,MPC)、腭溝(palatal groove,PG)、遠(yuǎn)腭尖(disto-palatal cusp,DPC)三處對(duì)應(yīng)的釉牙骨質(zhì)界到牙槽嵴頂距離(cementoenamel junction to the alveolar bone crest,CEJ-ABC)，將3個(gè)值求平均，作為M2骨吸收高度。

1.5 牙周炎大鼠模型牙周組織的組織學(xué)觀察

大鼠上頜骨標(biāo)本室溫下用EDTA脫鈣液脫鈣4周，探針輕力能刺入牙和牙槽骨時(shí)為脫鈣完全。梯度乙醇脫水，二甲苯溶液中浸泡至透亮，浸蠟，石蠟包埋，切片(厚度為5 μm)，收集M2腭側(cè)近中、遠(yuǎn)中牙槽嵴頂?shù)那衅?，常?guī)HE染色，顯微鏡下觀察牙周組織的組織學(xué)變化。

1.6 牙周炎大鼠激光處理

25只模型組大鼠實(shí)驗(yàn)當(dāng)天(第0天)，用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，去除左、右側(cè)M2的結(jié)扎絲。10只大鼠左側(cè)M2牙周袋使用1 W藍(lán)激光，右側(cè)M2牙周袋使用1 W近紅外激光；另外10只大鼠左側(cè)M2牙周袋使用1.5 W藍(lán)激光，右側(cè)M2牙周袋使用1.5 W近紅外激光，分別照射頰側(cè)、舌側(cè)、近中、遠(yuǎn)中牙周袋各10 s。剩余5只大鼠使用假激光，不開激光電源，將藍(lán)激光光纖伸入左側(cè)M2，近紅外激光光纖伸入右側(cè)M2的頰側(cè)、舌側(cè)、近中、遠(yuǎn)中牙周袋做提拉動(dòng)作各10 s。分別在第3，7天進(jìn)行相同的操作。

10只大鼠左側(cè)M2牙周袋使用1 W藍(lán)激光，右側(cè)M2牙周袋使用1 W近紅外激光；另外10只大鼠左側(cè)M2牙周袋使用1.5 W藍(lán)激光，右側(cè)M2牙周袋使用1.5 W近紅外激光。其余5只大鼠使用假激光，不開激光電源，左、右側(cè)M2的牙周袋分別使用藍(lán)激光和近紅外激光的光纖伸入牙周袋做提拉動(dòng)作。

1.7 熒光定量PCR測(cè)定齦下菌斑中Pg拷貝數(shù)

BHI血平板上接種Pg標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33277，厭氧條件下37 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，用接種環(huán)挑取少許，制成2個(gè)樣本，使用細(xì)菌gDNA提取試劑盒提取Pg的DNA，按Pg的16SrRNA基因特異性保守片段設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增完畢后1.5%瓊脂糖電泳檢測(cè)，并使用DNA凝膠回收試劑盒從凝膠中收集PCR產(chǎn)物送上海生工公司測(cè)序鑒定。

PCR產(chǎn)物和PMD18-載體進(jìn)行連接反應(yīng)，構(gòu)建含目的基因片段的重組質(zhì)粒。使用快速感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒將受體菌制備成感受態(tài)細(xì)胞，將構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到受體菌后進(jìn)行培養(yǎng)。使用質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒提取重組質(zhì)粒。使用nano分光光度計(jì)測(cè)定重組質(zhì)粒OD260值及濃度，通過公式計(jì)算出拷貝數(shù)，并稀釋配制成109，108，107，106，105，104，103，102copies/μl的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。

1.8 藍(lán)激光、近紅外激光及假激光照射牙周袋后組織學(xué)觀察

1 W或1.5 W藍(lán)激光和近紅外激光在第0，7天照射M2牙周袋后各處死5只大鼠，假激光第7天照射后處死5只大鼠，10%水合氯醛麻醉后固定，取大鼠M2腭側(cè)牙周組織以及上頜骨樣本，室溫下用EDTA脫鈣液脫鈣4周，梯度乙醇脫水，二甲苯溶液中浸泡至透亮，浸蠟，石蠟包埋，切片(厚度為5 μm)，常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察M2腭側(cè)牙周組織的組織學(xué)變化。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 牙周炎模型大鼠牙槽骨的吸收程度

模型組大鼠左側(cè)與對(duì)照組大鼠左側(cè)相比CEJ-ABC明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，模型組的右側(cè)與對(duì)照組右側(cè)相比CEJ-ABC明顯增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，見圖1)，牙槽骨高度降低，表明出現(xiàn)骨吸收。對(duì)照組左側(cè)與右側(cè)的CEJ-ABC相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組左側(cè)與右側(cè)CEJ-ABC相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

與對(duì)照組相比，***P<0.001圖1 比較對(duì)照組和模型組牙槽骨吸收情況Figure 1 Comparison of alveolar bone resorption between control group and model group

2.2 牙周炎模型大鼠牙周組織的變化

對(duì)照組的溝內(nèi)上皮和結(jié)合上皮完整連續(xù)，溝內(nèi)上皮釘突增生，有少量炎癥細(xì)胞浸潤，上皮下結(jié)締組織局部可見炎癥細(xì)胞浸潤。模型組溝內(nèi)上皮和結(jié)合上皮釘突向結(jié)締組織深部增生，溝內(nèi)上皮出現(xiàn)糜爛、完整性缺失，結(jié)合上皮向根方增殖，形成牙周袋，上皮內(nèi)和上皮下結(jié)締組織內(nèi)有較多炎癥細(xì)胞浸潤，呈活動(dòng)性炎癥的狀態(tài)(見圖2)。

R：牙根；EPI：牙齦上皮；CT：結(jié)締組織；PL：牙周韌帶圖2 HE染色檢測(cè)對(duì)照組和模型組牙周組織 (標(biāo)尺=100 μm)Figure 2 HE staining of the periodontal tissues in control group and model group (bar=100 μm)

2.3 PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)及測(cè)序鑒定結(jié)果

2個(gè)Pg菌落樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，兩個(gè)樣本(泳道1,2)中各含1條明亮條帶，位于400 bp附近(見圖3A)，與404 bp預(yù)期產(chǎn)物相符，為Pg特異性目的片段。重新從凝膠中收集PCR產(chǎn)物并測(cè)序，測(cè)序結(jié)果和NCBI Genbank的PgATCC33277 16S rRNA基因的已知序列對(duì)比，相似度為100%(見圖3B)。

A.電泳結(jié)果 B.測(cè)序結(jié)果圖3 Pg的PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果及測(cè)序比對(duì)結(jié)果Figure 3 Electrophoresis of Pg PCR product and its sequencing

2.4 齦下菌斑中Pg拷貝數(shù)檢測(cè)結(jié)果

在第0，3，7天，與假激光比較，1 W藍(lán)激光照射后Pg拷貝數(shù)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與假激光比較，1.5 W的藍(lán)激光照射后Pg拷貝數(shù)也明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與假激光比較，1 W的近紅外激光Pg拷貝數(shù)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05))；與假激光比較，1.5 W的近紅外激光照射后Pg拷貝數(shù)也明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在第7天，與1.5 W藍(lán)激光比較，功率1.5 W近紅外激光照射后Pg拷貝數(shù)下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在第7天功率為1 W，或其他相同時(shí)間點(diǎn)，相同照射功率下，藍(lán)激光和近紅外激光的Pg拷貝數(shù)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

表1 藍(lán)激光和近紅外激光第0，3，7天照射后Pg拷貝數(shù) (copies/μl,n=5)

在第0，3，7天，功率1 W的藍(lán)激光照射牙周袋殺菌率均達(dá)到90%左右；功率1 W的近紅外激光第0天殺菌率達(dá)到80%～90%左右，第3，7天殺菌率均達(dá)到90%以上。功率1.5 W的藍(lán)激光和近紅外激光在不同時(shí)間點(diǎn)殺菌率均達(dá)到99%左右。不同時(shí)間點(diǎn)藍(lán)激光或近紅外激光功率1.5 W殺菌率較功率1 W相比更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第0，3天在相同功率，藍(lán)激光與近紅外激光殺菌率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第7天功率1 W的藍(lán)激光與近紅外激光殺菌率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而與相同功率藍(lán)激光相比，功率1.5 W的近紅外激光殺菌率更高(P<0.05，見圖4)。

同時(shí)間與1 W藍(lán)激光比較,*P<0.05,**P<0.01;同時(shí)間與1 W近紅外激光比較,#P<0.05,##P<0.01；同時(shí)間與1.5 W藍(lán)激光比較,△P<0.05圖4 藍(lán)激光和近紅外激光殺菌率比較Figure 4 Comparison of sterilization rate between blue laser and near-infrared laser

2.5 激光照射牙周袋后牙周組織變化

假激光照射牙周袋后牙周組織HE染色在低倍視野下顯示牙齦上皮糜爛，喪失連續(xù)性，表面不平，釘突增生，結(jié)合上皮根向移行，形成深牙周袋；結(jié)締組織內(nèi)能夠觀察到大量炎癥細(xì)胞浸潤，伴牙周韌帶破壞。高倍視野下可見齦上皮下方大量炎癥細(xì)胞浸潤，膠原纖維稀疏(見圖5)。

圖5 假激光照射后牙周組織HE染色Figure 5 HE staining of periodontal tissue after sham laser irradiation

設(shè)置激光功率為1 W，藍(lán)激光第0天照射牙周袋后，低倍視野下觀察M2遠(yuǎn)中及近中可見牙根表面規(guī)則，未見明顯形態(tài)變化，牙齦上皮未有明顯損傷，部分區(qū)域上皮完整性丟失，出現(xiàn)潰瘍，但未觀察到明顯熱損傷區(qū)，如凝固層、炭化物等。結(jié)合上皮根向增殖，結(jié)締組織內(nèi)觀察到大量炎癥細(xì)胞浸潤，微血管擴(kuò)張，牙周韌帶破壞(見圖6)。藍(lán)激光第7天照射牙周袋后牙根表面未見明顯形態(tài)變化，牙齦上皮尚完整，部分區(qū)域有角化脫落物質(zhì)，未觀察到明顯熱損傷。結(jié)合上皮下方可見少量炎癥細(xì)胞浸潤，與第0天照射后對(duì)比，炎癥有一定程度消退，牙周組織出現(xiàn)愈合(見圖6)。

近紅外激光第0天照射牙周袋后，低倍視野下觀察M2遠(yuǎn)中及近中，可見部分牙齦上皮表面有糜爛、破損，細(xì)胞水腫，牙根表面未見明顯形態(tài)變化，結(jié)合上皮根向移行，結(jié)締組織內(nèi)大量炎癥細(xì)胞浸潤，牙周韌帶受到破壞(見圖6)。第7天照射牙周袋后可見牙齦上皮完整，邊緣齦上覆蓋角化物，未觀察到熱損傷。牙根表面未見明顯形態(tài)變化，結(jié)合上皮下方觀察到少量炎癥細(xì)胞浸潤，與第0天照射牙周袋后對(duì)比，呈現(xiàn)炎癥消退、組織愈合的趨勢(shì)(見圖6)。

設(shè)置激光功率為1.5 W，藍(lán)激光第0天照射牙周袋后，低倍視野下觀察M2遠(yuǎn)中及近中可見牙齦上皮受到一定程度損傷，上皮有一部分汽化消失，殘留卷曲的組織壞死物，牙根表面未見明顯形態(tài)變化。上皮下方結(jié)締組織內(nèi)可見中等量炎癥細(xì)胞浸潤(見圖6)。第7天照射牙周袋后可見牙根表面稍粗糙，但無明顯形態(tài)變化，大部分區(qū)域上皮完整性缺失，可見熱損傷凝固區(qū)覆蓋即將脫落的角化層。結(jié)締組織內(nèi)微血管破裂，可見炎癥細(xì)胞及凝集的血細(xì)胞(見圖6)。

近紅外激光第0天照射牙周袋后，可見牙根表面無明顯形態(tài)變化，觀察到明顯熱損傷汽化區(qū)，牙齦上皮不完整，上皮表面殘留部分壞死物質(zhì)。結(jié)締組織內(nèi)膠原纖維稀疏，有大量炎細(xì)胞浸潤(見圖6)。第7天照射牙周袋后可見牙根表面粗糙，覆蓋有零星黑色碳化物，牙齦上皮基本丟失，表面糜爛，熱損傷范圍大，剩余組織稀疏。結(jié)締組織內(nèi)見大量炎癥細(xì)胞及血細(xì)胞(見圖6)。

3 討論

半導(dǎo)體激光已被廣泛應(yīng)用于牙周炎的治療中，通過光熱效應(yīng)、生物學(xué)刺激等，作用于牙周袋內(nèi)的菌斑，殺滅致病菌。藍(lán)激光是諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)得主研發(fā)的一種新型半導(dǎo)體激光，相較于其他半導(dǎo)體激光，波長較短為430～488 nm，與軟組織中血紅蛋白和黑色素的吸收峰值(430 nm左右)非常接近。Pg等利用血紅素作為鐵源的含黑色素的細(xì)菌，在405 nm處有強(qiáng)烈的吸收峰，可被光激發(fā)產(chǎn)生激發(fā)態(tài)氧，從而氧化和破壞細(xì)菌的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸，達(dá)到殺菌的目的[4]。另有研究表明藍(lán)激光穿透深度小，可降低意外傷害的風(fēng)險(xiǎn)；散射少，從而周圍組織吸收的激光能量較低，熱損傷小[5-7]。藍(lán)激光做為一種新型激光應(yīng)用于牙周炎的治療，其殺菌效果及安全性的研究十分重要。

本實(shí)驗(yàn)通過熒光定量PCR檢測(cè)牙周炎大鼠模型齦下菌斑的Pg拷貝數(shù)，以探究藍(lán)激光與已應(yīng)用于臨床的近紅外激光在體內(nèi)環(huán)境殺菌的效果，并比對(duì)其效果的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明使用功率1 W藍(lán)激光分別照射牙周袋3次，殺菌率均達(dá)到90%左右，與近紅外激光殺菌效果相同。功率1.5 W藍(lán)激光和近紅外激光分別照射3次，殺菌率則均達(dá)到99%左右，提示功率1.5 W時(shí)達(dá)到了理想的殺菌效果。第0，3天藍(lán)激光和近紅外激光照射牙周袋殺菌效果相同；第7天照射后，雖然統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示兩組剩余Pg拷貝數(shù)有差異，但此時(shí)兩組Pg拷貝數(shù)極低，均小于60 copies/μl，已實(shí)現(xiàn)99%的高殺菌率。因此兩種激光在相同功率(1 W或1.5 W)，殺菌效果相同，均能有效殺菌，且功率1.5 W比1 W的殺菌率高。功率1 W時(shí)，兩種激光短時(shí)間內(nèi)兩次照射即可達(dá)到最佳的殺菌效果。功率1.5 W時(shí)，兩種激光單次照射即可達(dá)到最佳的殺菌效果，重復(fù)進(jìn)行第二、三次照射并沒有增強(qiáng)殺菌效果。

以往半導(dǎo)體激光治療牙周炎的殺菌效果通過大量研究已經(jīng)得到證明。有研究檢測(cè)半導(dǎo)體激光輔助齦下刮治術(shù)和根面平整術(shù)(SRP)治療后牙周袋內(nèi)細(xì)菌總量明顯減少[8,9]。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)半導(dǎo)體激光牙周治療后1個(gè)月、3個(gè)月，能明顯減少牙周致病菌紅色復(fù)合體的數(shù)量[10,11]。另有研究評(píng)價(jià)了砷化鋁鎵(GaAlAs)半導(dǎo)體激光輔助SRP治療慢性牙周炎，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的Pg拷貝數(shù)在激光照射后從80%降低到20%[12]。有研究通過體外實(shí)驗(yàn)也證明半導(dǎo)體激光對(duì)Pg有很好的抗菌作用，并且增加照射功率有助于抗菌效果增強(qiáng)[13]。但激光的功率應(yīng)設(shè)置在合適的范圍既保證抗菌效果，又保證治療的安全性。

激光在牙周袋內(nèi)瞬間產(chǎn)生的局部高熱量可有效殺死細(xì)菌并滅活相關(guān)毒力因子，但過高的熱量也可能對(duì)周邊正常的牙周組織產(chǎn)生不利影響，如牙根表面炭化、牙齦上皮破壞、出血過多等，出現(xiàn)此類情況便無法保證牙周治療的安全性[14,15]。本實(shí)驗(yàn)在顯微鏡下觀察激光照射后牙周組織的變化，以探究藍(lán)激光和近紅外激光用于牙周袋殺菌的安全性。功率1 W藍(lán)激光在照射一次后，牙周組織未受到明顯熱損傷，而近紅外激光的部分區(qū)域出現(xiàn)一定熱損傷。兩種激光照射3次后，牙周組織均出現(xiàn)一定程度的愈合，未有明顯熱損傷。分析其原因，第1次治療時(shí)牙周炎癥明顯，病變組織富含血紅蛋白、細(xì)菌等，激光被吸收，使炎癥上皮消融，并達(dá)到止血、殺菌的效果；而第3次治療時(shí)已經(jīng)去除結(jié)扎絲第7天，并且經(jīng)過前兩次的治療，牙周炎癥已經(jīng)有明顯改善，容易吸收激光能量的血液、細(xì)菌等大大減少，因此未引起熱損傷。功率1.5 W兩種激光照射1次、3次后，牙周組織均出現(xiàn)熱損傷，藍(lán)激光的熱損傷較近紅外激光輕。因?yàn)檎丈?次后已出現(xiàn)熱損傷，短期內(nèi)再進(jìn)行2次照射，已有的熱損傷未修復(fù)，使得局部炎癥加重，牙周組織損傷更明顯。研究證明相同功率下(1 W或1.5 W)藍(lán)激光較近紅外激光對(duì)牙周組織的熱損傷小，安全性更高，且功率1.5 W較1 W更易出現(xiàn)熱損傷，說明低功率1 W更安全。

有體外研究顯示半導(dǎo)體激光功率1 W或1.5 W，照射時(shí)間10 s，被認(rèn)為是安全的[16]。也有學(xué)者在體內(nèi)研究觀察到810 nm半導(dǎo)體激光，功率小于1.5 W不破壞牙周袋中的牙齒結(jié)構(gòu)[17]。本研究結(jié)果則證明低功率1 W較高功率1.5 W照射牙周袋對(duì)牙周組織更安全。此外，有結(jié)果顯示半導(dǎo)體激光以功率1 W進(jìn)行5 s為間隔的牙周袋內(nèi)殺菌治療，不會(huì)造成明顯的微血管破裂和過多的出血，不破壞上皮的完整性、連續(xù)性，更不會(huì)對(duì)結(jié)締組織造成損傷[18]，提示今后激光照射牙周袋殺菌時(shí)功率設(shè)置為1 W，并進(jìn)行間斷式的照射，以提高安全性，并可進(jìn)一步探討合適的間隔時(shí)間。

綜上所述，在相同功率(1 W或1.5 W)藍(lán)激光具有與近紅外激光相同的殺菌效果，且安全性更高。本研究為藍(lán)激光的臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，但也存在一定的局限性，如只評(píng)價(jià)了藍(lán)激光對(duì)單一菌種Pg的殺菌作用，而臨床中牙周炎的菌斑生物膜往往包含多種細(xì)菌且具備更加復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，因此仍需進(jìn)一步明確藍(lán)激光對(duì)其他牙周致病菌的殺菌效果；此外，應(yīng)該從更多角度完善對(duì)藍(lán)激光的安全性檢測(cè)，如照射過程中組織溫度以及牙根表面形態(tài)的變化等，以期為后續(xù)相關(guān)臨床試驗(yàn)的開展提供更加全面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。