• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    丹參酮ⅡA減輕棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

    2021-08-08 07:56:16王亞丹艾景雪高瑞李運(yùn)麗張海波
    關(guān)鍵詞:棕櫚丹參酮內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

    王亞丹, 艾景雪, 高瑞, 李運(yùn)麗, 張海波

    (河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)三科,河南開封475000)

    肥胖可造成系統(tǒng)性代謝紊亂,是循環(huán)系統(tǒng)疾病的重要危險(xiǎn)因素[1]。富含高脂肪食物的飲食,尤其是飽和脂肪,會(huì)加重肥胖和脂毒性心肌病的風(fēng)險(xiǎn)[2],且脂質(zhì)積累程度與心臟功能障礙有關(guān)[3]。如何干預(yù)脂毒性心肌病對心血管疾病的預(yù)防具有重要的研究意義。丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖,味苦、性微寒,入心、肝經(jīng),具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰功效,是常用的改善心血管疾病的中藥[4-5]。丹參酮ⅡA是從丹參中提取的天然活性成分。已有研究表明:丹參酮ⅡA對心肌組織的缺血-再灌注損傷具有顯著的修復(fù)作用[6-7];丹參酮ⅡA預(yù)處理1周后的心肌缺血大鼠模型中,梗死面積明顯減小[8];丹參酮ⅡA可防止缺氧誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體功能障礙[9],可通過上調(diào)microRNA-133和激活蛋白激酶B(Akt)保護(hù)H9c2細(xì)胞免受氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡[10],也可通過磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPKs)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依賴的自噬途徑保護(hù)心肌梗死后心衰[11];丹參酮ⅡA可以通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制心肌細(xì)胞的凋亡[12-13]。鑒于丹參酮ⅡA具有較為明確的心肌保護(hù)作用,本研究進(jìn)一步探討丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞脂毒性損傷模型的保護(hù)作用及機(jī)制,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞大鼠胚胎心肌細(xì)胞H9c2(CM-0089),購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

    1.2 藥物、試劑與儀器丹參酮ⅡA(CAS:568-72-9,分子量:294.33)購自上海源葉生物科技有限公司,批號(hào):B20257。棕櫚酸購自上海源葉生物科技有限公司,批號(hào):JS688093;細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(CCK-8)、胰蛋白酶、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、10%十二烷基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)試劑、聚偏氟乙烯(PVDF)膜、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔IgG、電化學(xué)發(fā)光(ECL)檢測試劑盒(北京索萊寶科技有限公司);10 mg/mL RNaseA(上海翊圣生物科技有限公司);RNA純化系統(tǒng)(Qiagen公司);SuperScript RNase H-逆轉(zhuǎn)錄酶(美國Invitrogen公司);隨機(jī)六聚體(美國Sigma-Aldrich公司);SYBR Green Master Mix(美國Thermo Fisher公司);葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、轉(zhuǎn) 錄 激 活因 子4(ATF4)、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核生物翻譯起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)(美國CST公司)。Multiskan Sky酶標(biāo)儀購自美國Thermo Fisher公司;FACSCalibur流式細(xì)胞儀購自美國Becton Dickinson公司;ABI Prism 7000 PCR系統(tǒng)購自Applied Biosystems公司;ChemiDoc XRS+高靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司。

    1.3 CCK-8法測定細(xì)胞活力用胰酶消化對數(shù)期H9c2細(xì)胞后,收集并計(jì)數(shù),重懸細(xì)胞并接種于96孔板,分6組。即:①對照組:不做任何處理;②棕櫚酸(400 μmol/L)組:H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,用400 μmol/L棕櫚酸誘導(dǎo)細(xì)胞;③丹參酮ⅡA 20 μmol/L組:H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,用20 μmol/L丹參酮ⅡA誘導(dǎo)細(xì)胞;④棕櫚酸(400 μmol/L)+丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)3個(gè)濃度組:H9c2細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,用400 μmol/L棕櫚酸誘導(dǎo)細(xì)胞,24 h后,分別加入不同濃度(5、10、20 μmol/L)的丹參酮ⅡA處理細(xì)胞。按照CCK-8試劑盒的操作說明,在含對應(yīng)藥物的100 μL培養(yǎng)基中培養(yǎng)22 h,加入10 μL CCK-8繼續(xù)培養(yǎng)2 h,用酶標(biāo)儀檢測每個(gè)孔在450 nm波長處的吸光度,然后檢測各組的H9c2細(xì)胞存活率。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

    1.4 流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡情況分組同“1.3”項(xiàng)。用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇4℃過夜固定H9c2細(xì)胞,然后加入RNaseA和PI 4℃染色過夜,再按照Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書的方法操作,最后應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡率。AnnexinV-FITC(-)/PI(-)(左下)為正常細(xì)胞,AnnexinV-FITC(+)/PI(-)細(xì)胞(右下)為早期凋亡細(xì)胞,AnnexinV-FITC(+)/PI(+)(右上)為晚期凋亡細(xì)胞,AnnexinV(-)/PI(+)(左上)為壞死細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)法檢測心肌細(xì)胞GRP78、ATF4、CHOP mRNA表達(dá)分組同“1.3”項(xiàng)。用RNA純化系統(tǒng)提取總RNA。用SuperScript RNase H-逆轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)六聚體合成cDNA。在ABI Prism 7000系統(tǒng)中,使用SYBR Green Master Mix反應(yīng)體系和引物在優(yōu)化濃度下進(jìn)行PCR反應(yīng)。GRP78、ATF4、CHOP和管家基因GAPDH的序列如下:GRP78正向引物序列為5’-GAAACTGCCGAGGCGTAT-3’,反向引物序列為5’-ATGTTCTTCTCTCCCTCTCTCTTA-3’;ATF4正向引物序列為5’-TCCGAATGGCTGGCTGTGG-3’,反向引物序列為5’-AGTGTAGTCTGGCTTCCTATC TCC-3’;CHOP正向引物序列為5’-GGAAACAGA GTGGTCATTCCC-3’,反向引物序列為5’-CTGCT TGAGCCGTTCATTCTC-3’;GAPDH正向引物序列為5’-GGGTGTGAACCACGAGAAAT-3’,反向引物序列為5’-ACTGTGGTCATGAGCCCTTC-3’。反應(yīng)條件:95℃5 min;95℃30 s,60℃30 s,重復(fù)40個(gè)循環(huán)。每個(gè)基因均生成標(biāo)準(zhǔn)曲線,擴(kuò)增效率為90%~100%。通過閾值比較,確定基因表達(dá)的相對定量。結(jié)果以2ΔΔCt法計(jì)算。所有結(jié)果均以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行歸一化。

    1.6 蛋白免疫印跡(Western Blotting)法檢測心肌細(xì)胞GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α蛋白表達(dá)分組同“1.3”項(xiàng)。收集細(xì)胞,與細(xì)胞裂解緩沖液、蛋白酶抑制劑、去磷酸化酶抑制劑在冰上混合20 min,收集裂解液,以4℃以13 000×g離心5 min,取上清。使用BCA蛋白定量試劑盒測量蛋白質(zhì)的濃度。取30 μg蛋白,加熱變性,經(jīng)10%SDS-PAGE分離后轉(zhuǎn)移到PVDF膜。使用體積分?jǐn)?shù)2%牛血清白蛋白(BSA)室溫封閉1 h。加入GRP78抗體4℃孵育過夜。加入羊抗兔IgG-HRP孵育1 h。最后,采用ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒顯色,用高靈敏化學(xué)發(fā)光檢測儀觀察電泳 條 帶。ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、GAPDH檢測方法同上。

    1.7 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,以單因素方差分析(One-way ANOVA)方法進(jìn)行多組比較,兩兩比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 丹參酮ⅡA逆轉(zhuǎn)了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞存活率的降低圖1結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組的細(xì)胞存活率無顯著性差異(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組的細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)組比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組的細(xì)胞存活率以劑量依賴性方式回升,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞存活率回升有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    圖1 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞存活率的影響Figure 1 Effects of tanshinoneⅡA on survival rate ofpalmitic acid-induced H9c2 cells

    2.2 丹參酮ⅡA緩解了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激圖2-A結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平無顯著性差異(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平顯著升高(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)組比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平以劑量依賴性方式回降,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA水平回降顯著。

    圖2 -B結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平無顯著性差異(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平升高顯著(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)組比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平以劑量依賴性方式回降,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞的GRP78、ATF4和CHOP的蛋白水平回降顯著。

    圖2 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響Figure 2 Effects of tanshinoneⅡA on endoplasmic reticulum stress in palmitic acid-induced H9c2 cells

    2.3 丹參酮ⅡA抑制了棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的凋亡圖3-A結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的凋亡率無顯著性差異(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)組比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的凋亡率以劑量依賴性方式回降,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞的凋亡率回降顯著。

    圖3 -B結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組 細(xì) 胞 的Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12的蛋白表達(dá)水平無顯著性差異(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組的這3種蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)組比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組細(xì)胞的Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表達(dá)水平以劑量依賴性方式回降,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞的凋亡率回降顯著。

    圖3 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡的影響Figure 3 Effects of tanshinoneⅡA on apoptosis of palmitic acid-induced H9c2 cells

    2.4 丹參酮ⅡA阻礙了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞PERK信號(hào)通路的磷酸化圖4結(jié)果顯示:與對照組比較,丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例無顯著性變化(P>0.05),而棕櫚酸(400 μmol/L)組細(xì)胞p-PERK/PERK和peIF2α/eIF2α比例顯著增大(P<0.01);與棕櫚酸(400 μmol/L)比較,不同濃度丹參酮ⅡA(5、10、20 μmol/L)與棕櫚酸共處理組細(xì)胞p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2αs比例以劑量依賴性方式回降,且棕櫚酸+丹參酮ⅡA 10 μmol/L組(P<0.05)和棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組(P<0.01)細(xì)胞p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例回降顯著。

    圖4 丹參酮ⅡA對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞PERK信號(hào)通路磷酸化的影響Figure 4 Effects of tanshinoneⅡA on phosphorylation of PERK signaling pathway in palmitic acid-induced H9c2 cells

    2.5 丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路緩解棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激為了進(jìn)一步驗(yàn)證丹參酮ⅡA對PERK信號(hào)通路的影響,本研究引入PERK通路激活劑CCT020312進(jìn)行實(shí)驗(yàn),增加棕櫚酸(400 μmol/L)+CCT020312(3 μmol/L)組與棕櫚酸(400 μmol/L)+CCT020312(3 μmol/L)+丹參酮ⅡA(20 μmol/L)組。圖5-A結(jié)果顯示:與對照組比較,棕櫚酸組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例顯著增大(P<0.01);與棕櫚酸組比較,棕櫚酸+丹參酮ⅡA 20 μmol/L組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比 例 顯 著 減 ?。≒<0.01),而棕櫚酸+CCT020312組細(xì)胞的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比 例 顯 著 回 升(P<0.05);與棕櫚酸+CCT020312組和棕櫚酸+丹參酮ⅡA組比較,棕櫚酸+CCT020312+丹參酮ⅡA組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例顯著回降(P<0.05)。同樣,我們也考察了細(xì)胞凋亡率(圖5-B)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的GRP78、ATF4和CHOP的mRNA表達(dá)水平(圖5-C),得到了與上述信號(hào)通路結(jié)果相一致的結(jié)果。這些實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路緩解棕櫚酸誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。

    圖5 丹參酮ⅡA通過調(diào)節(jié)PERK信號(hào)通路對棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響Figure 5 Effects of tanshinoneⅡA on apoptosis and endoplasmic reticulum stress in palmitic acid-induced H9c2 cells by modulating the PERK signaling pathway

    3 討論

    肥胖是包括代謝綜合征和心肌病等在內(nèi)一系列疾病的危險(xiǎn)因素,其脂毒性是一個(gè)重要方面[14]。肥胖和脂質(zhì)積累會(huì)加快心血管系統(tǒng)的非脂肪細(xì)胞中過多脂質(zhì)的積累,導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙和細(xì)胞死亡,造成脂毒性心肌病[14]。棕櫚酸是最常見的飽和長鏈脂肪酸,在包括心肌細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中都能觸發(fā)細(xì)胞凋亡[15]。故本研究選擇棕櫚酸400 μmol/L刺激H9c2心肌細(xì)胞構(gòu)建心肌細(xì)胞脂毒性損傷模型。在此細(xì)胞模型上,流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),與對照組比較,棕櫚酸400 μmol/L組心肌細(xì)胞存活率、凋亡率明顯升高(P<0.01),說明在體外環(huán)境中棕櫚酸可通過誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡而發(fā)揮脂毒性作用。

    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是脂代謝密切相關(guān)的細(xì)胞器[16]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的破壞使大量錯(cuò)誤或者未折疊蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中聚集,激活相應(yīng)的信號(hào)通路,引起一系列的細(xì)胞反應(yīng),即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。一方面,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過調(diào)節(jié)參與脂質(zhì)合成或修飾關(guān)鍵酶的表達(dá)水平來影響脂質(zhì)代謝;另一方面,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡或細(xì)胞膜組件的異常合成可介導(dǎo)心肌細(xì)胞脂毒性損傷。有研究發(fā)現(xiàn),以棕櫚酸為代表的心肌脂毒性誘導(dǎo)過程中,發(fā)生的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活了葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、真核生物翻譯起始 因 子2α(eIF2α)、蛋 白 激 酶R樣 內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng) 激酶(PERK)、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase蛋白等相關(guān)凋亡通路[2]。由此推測,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路的激活及其相關(guān)蛋白的表達(dá)調(diào)控可能是心肌細(xì)胞脂毒性損傷的機(jī)制之一,減輕心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有望延緩脂毒性心肌病的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示,與對照組比較,棕櫚酸組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、ATF4、CHOP mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也顯著增大(P<0.01),凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)。不同濃度丹參酮ⅡA作用后,H9c2細(xì)胞的存活率升高,H9c2細(xì)胞的凋亡率降低,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平降低(均P<0.01)。加 入PERK通 路激 活劑CCT020312作 用后,與棕櫚酸組比較,棕櫚酸+CCT020312組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,細(xì)胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05);再經(jīng)過丹參酮ⅡA處理,與棕櫚酸+CCT020312組比較,棕櫚酸+CCT020312+丹參酮ⅡA組的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,細(xì)胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著回降(P<0.05)。提示丹參酮ⅡA通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路蛋白PERK和eIF2α的磷酸化下調(diào)了棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CRP78、ATF4和CHOP的表達(dá),起到抑制棕櫚酸誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果表明,丹參酮ⅡA可修復(fù)棕櫚酸刺激的心肌細(xì)胞損傷,其作用機(jī)制與減輕棕櫚酸引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡有關(guān)。

    綜上所述,本課題體外研究結(jié)果證明了棕櫚酸能啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,激活PERK信號(hào)通路,誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,引起心肌細(xì)胞脂毒性損傷,而丹參酮ⅡA可阻斷該通路,抑制心肌細(xì)胞脂毒性損傷。本研究初步通過體外實(shí)驗(yàn)探討了丹參酮ⅡA抗心肌細(xì)胞脂毒性作用,為今后在體內(nèi)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境中研究丹參酮ⅡA對脂毒性心肌病的干預(yù)機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    猜你喜歡
    棕櫚丹參酮內(nèi)質(zhì)網(wǎng)
    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬及其與疾病的關(guān)系研究進(jìn)展
    憤怒誘導(dǎo)大鼠肝損傷中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)
    它們可以用來書寫嗎
    Systematic Review and Meta-analysis of Tanshinone Capsule in the Treatment of Polycystic Ovary Syndrome
    Medicinal Plant(2020年2期)2020-05-14 12:11:26
    丹參酮ⅡA提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
    棕櫚樹
    棕櫚
    散文詩(2017年17期)2018-01-31 02:34:05
    棕櫚設(shè)計(jì)有限公司
    丹參酮Ⅱ A 保護(hù)大鼠腎移植術(shù)后缺血再灌注損傷的機(jī)制研究
    LPS誘導(dǎo)大鼠肺泡上皮細(xì)胞RLE-6 TN內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及凋亡研究
    国产国拍精品亚洲av在线观看 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 91av网一区二区| 久久精品综合一区二区三区| 国产成人影院久久av| 日本五十路高清| 国产一区二区激情短视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 内射极品少妇av片p| 老熟妇仑乱视频hdxx| 岛国视频午夜一区免费看| 最近最新免费中文字幕在线| 国产高清videossex| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 十八禁人妻一区二区| 久久伊人香网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 757午夜福利合集在线观看| av中文乱码字幕在线| 久久久久久国产a免费观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 午夜免费观看网址| 午夜福利视频1000在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩精品青青久久久久久| 变态另类丝袜制服| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 看免费av毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产成人aa在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 不卡一级毛片| 变态另类丝袜制服| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩国内少妇激情av| 村上凉子中文字幕在线| 午夜亚洲福利在线播放| 精品久久久久久成人av| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲国产精品sss在线观看| 99国产综合亚洲精品| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 午夜视频国产福利| 午夜免费成人在线视频| 亚洲av熟女| 老司机福利观看| 国产亚洲精品一区二区www| 日本与韩国留学比较| 国产精品精品国产色婷婷| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品野战在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人性生交大片免费视频hd| 免费av观看视频| 午夜免费成人在线视频| 欧美激情在线99| 亚洲avbb在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲av免费在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| ponron亚洲| 国产一区二区激情短视频| 黄色片一级片一级黄色片| 久久久久久久久中文| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一夜夜www| 婷婷丁香在线五月| 一区二区三区激情视频| 国产精品三级大全| av片东京热男人的天堂| 国产免费男女视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美黑人巨大hd| 日本在线视频免费播放| 国产高潮美女av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产成人aa在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 特大巨黑吊av在线直播| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 少妇人妻精品综合一区二区 | 女同久久另类99精品国产91| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 久久香蕉精品热| 国产成年人精品一区二区| 麻豆国产av国片精品| 一级毛片高清免费大全| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 在线观看午夜福利视频| 少妇的逼水好多| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲av熟女| 高清在线国产一区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲人成网站在线播| 波野结衣二区三区在线 | 亚洲人成网站在线播| 久久国产精品影院| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久久国产成人精品二区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 一级黄片播放器| 中文资源天堂在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 男人的好看免费观看在线视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美日韩精品网址| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美3d第一页| 欧美日韩黄片免| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 色视频www国产| www日本在线高清视频| 婷婷六月久久综合丁香| 少妇人妻精品综合一区二区 | 精品国产美女av久久久久小说| 免费观看的影片在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美日韩乱码在线| 亚洲av成人精品一区久久| 1000部很黄的大片| 51午夜福利影视在线观看| 欧美中文综合在线视频| 国产视频一区二区在线看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99久久精品国产亚洲精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜精品在线福利| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 午夜老司机福利剧场| 两个人看的免费小视频| 亚洲自拍偷在线| 亚洲黑人精品在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人午夜高清在线视频| 一本精品99久久精品77| 在线观看av片永久免费下载| 母亲3免费完整高清在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久久国内视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 日本黄色片子视频| 动漫黄色视频在线观看| 香蕉丝袜av| svipshipincom国产片| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久久久久精品吃奶| 成人一区二区视频在线观看| 搡老岳熟女国产| 嫁个100分男人电影在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 男人舔女人下体高潮全视频| 一进一出抽搐动态| 国产精品亚洲一级av第二区| 18禁美女被吸乳视频| 制服人妻中文乱码| 神马国产精品三级电影在线观看| 在线观看午夜福利视频| 欧美乱色亚洲激情| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 九九在线视频观看精品| 超碰av人人做人人爽久久 | 国内揄拍国产精品人妻在线| aaaaa片日本免费| 国产乱人伦免费视频| 国产黄a三级三级三级人| 久久久国产成人精品二区| 中文亚洲av片在线观看爽| 综合色av麻豆| 色尼玛亚洲综合影院| 在线观看av片永久免费下载| 桃红色精品国产亚洲av| 国产伦在线观看视频一区| 精品国产美女av久久久久小说| 少妇人妻精品综合一区二区 | 12—13女人毛片做爰片一| 国产黄色小视频在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | av欧美777| 欧美色视频一区免费| 欧美+日韩+精品| 亚洲,欧美精品.| 两人在一起打扑克的视频| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲性夜色夜夜综合| 制服人妻中文乱码| 亚洲自拍偷在线| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品99久久久久久久久| 麻豆国产97在线/欧美| 精品日产1卡2卡| 精品一区二区三区人妻视频| 中国美女看黄片| 人人妻人人看人人澡| 草草在线视频免费看| 久9热在线精品视频| 亚洲欧美日韩东京热| 国产高清视频在线观看网站| 欧美中文综合在线视频| 在线视频色国产色| bbb黄色大片| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲真实伦在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 五月玫瑰六月丁香| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜精品久久久久久毛片777| 成年版毛片免费区| 日本a在线网址| 日日夜夜操网爽| 热99在线观看视频| 久久草成人影院| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品久久视频播放| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 哪里可以看免费的av片| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 久久中文看片网| 在线看三级毛片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 嫩草影院入口| www日本在线高清视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 操出白浆在线播放| 精品一区二区三区人妻视频| 十八禁人妻一区二区| 天天一区二区日本电影三级| 免费观看人在逋| 中文字幕久久专区| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲第一电影网av| 一区福利在线观看| 国产亚洲欧美98| 国产高清视频在线播放一区| 日本一二三区视频观看| 一级黄色大片毛片| 欧美在线一区亚洲| 日韩国内少妇激情av| 成人特级av手机在线观看| 国产高清三级在线| 美女黄网站色视频| 日韩欧美国产在线观看| 久久这里只有精品中国| 亚洲av不卡在线观看| 久久精品人妻少妇| 成人性生交大片免费视频hd| 1000部很黄的大片| 1024手机看黄色片| 黄色成人免费大全| 亚洲国产精品成人综合色| 热99re8久久精品国产| 国产精品99久久99久久久不卡| 叶爱在线成人免费视频播放| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲在线观看片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美3d第一页| 男人舔奶头视频| 成年人黄色毛片网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产精品一区二区免费欧美| 美女黄网站色视频| 欧美大码av| 在线观看一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 午夜激情福利司机影院| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美黑人巨大hd| 伊人久久精品亚洲午夜| 制服丝袜大香蕉在线| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久久午夜电影| 免费观看精品视频网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美在线黄色| 中出人妻视频一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线观看av片永久免费下载| 国产麻豆成人av免费视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产淫片久久久久久久久 | 国产男靠女视频免费网站| 操出白浆在线播放| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产真实乱freesex| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 丝袜美腿在线中文| 网址你懂的国产日韩在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 免费大片18禁| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费观看人在逋| 91九色精品人成在线观看| 露出奶头的视频| 丁香六月欧美| 久久久久久久午夜电影| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 中文字幕久久专区| 成年女人永久免费观看视频| 看片在线看免费视频| 国产成人福利小说| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品精品国产色婷婷| 在线国产一区二区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 天天添夜夜摸| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲色图av天堂| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品久久国产高清桃花| 动漫黄色视频在线观看| 一级作爱视频免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲自拍偷在线| 国产69精品久久久久777片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产精品久久久久久久久免 | 男女床上黄色一级片免费看| 中文字幕久久专区| 久久久久久大精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 一夜夜www| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 免费大片18禁| 国产毛片a区久久久久| 两个人视频免费观看高清| 岛国在线观看网站| 中国美女看黄片| 九九在线视频观看精品| 好男人在线观看高清免费视频| 国产午夜福利久久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 两个人的视频大全免费| 三级毛片av免费| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 美女高潮的动态| 国产三级在线视频| 精品日产1卡2卡| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲,欧美精品.| 天堂网av新在线| 亚洲熟妇熟女久久| 中文字幕av在线有码专区| 天天添夜夜摸| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久久久国内视频| 两个人的视频大全免费| 午夜激情福利司机影院| 成人三级黄色视频| 99热这里只有精品一区| 免费av毛片视频| 日韩欧美国产在线观看| 哪里可以看免费的av片| 91在线观看av| 69av精品久久久久久| av福利片在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲成人久久性| 亚洲人与动物交配视频| 国产真实伦视频高清在线观看 | 桃色一区二区三区在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| www.熟女人妻精品国产| 免费高清视频大片| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美日韩乱码在线| 免费av不卡在线播放| 99riav亚洲国产免费| 国产午夜福利久久久久久| 国产真实乱freesex| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品456在线播放app | 男女午夜视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 一区福利在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美高清成人免费视频www| 日韩欧美免费精品| 白带黄色成豆腐渣| 黄片大片在线免费观看| 久久精品人妻少妇| 欧美一级毛片孕妇| 一级毛片女人18水好多| 国产一区二区激情短视频| 国产亚洲精品av在线| 免费观看人在逋| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 999久久久精品免费观看国产| 操出白浆在线播放| 美女大奶头视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 岛国视频午夜一区免费看| a级一级毛片免费在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲国产精品合色在线| 国产亚洲精品久久久com| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 高潮久久久久久久久久久不卡| 90打野战视频偷拍视频| 激情在线观看视频在线高清| 成年人黄色毛片网站| 波多野结衣高清无吗| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品免费一区二区三区在线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 18禁美女被吸乳视频| 精品不卡国产一区二区三区| 在线观看日韩欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 两个人看的免费小视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲最大成人手机在线| 国产三级在线视频| 99久久成人亚洲精品观看| 国产黄a三级三级三级人| 一本综合久久免费| www.www免费av| 日韩人妻高清精品专区| 午夜福利成人在线免费观看| 久久精品人妻少妇| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久久久久久大av| 国产精品野战在线观看| 两个人视频免费观看高清| 亚洲中文字幕日韩| 久久久久性生活片| 黄色女人牲交| 麻豆一二三区av精品| 制服丝袜大香蕉在线| 日本成人三级电影网站| 午夜激情福利司机影院| 国产主播在线观看一区二区| 国产激情欧美一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产黄片美女视频| 熟女人妻精品中文字幕| 国产真人三级小视频在线观看| 国产在视频线在精品| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一本一本综合久久| 美女大奶头视频| 男女那种视频在线观看| 深爱激情五月婷婷| 在线天堂最新版资源| 很黄的视频免费| eeuss影院久久| 亚洲在线观看片| 香蕉丝袜av| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲片人在线观看| 窝窝影院91人妻| av视频在线观看入口| 亚洲一区二区三区色噜噜| 最新在线观看一区二区三区| 久久中文看片网| 国产熟女xx| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久精品人妻少妇| 欧美国产日韩亚洲一区| 一个人看的www免费观看视频| 香蕉丝袜av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜激情福利司机影院| 久久久成人免费电影| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美一区二区精品小视频在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 免费高清视频大片| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 69av精品久久久久久| 一个人看的www免费观看视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产在视频线在精品| 搞女人的毛片| 性色av乱码一区二区三区2| 色综合婷婷激情| 18禁在线播放成人免费| e午夜精品久久久久久久| 老司机在亚洲福利影院| 在线观看午夜福利视频| 女同久久另类99精品国产91| 精品欧美国产一区二区三| 97碰自拍视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产不卡一卡二| 日韩欧美在线二视频| 久久99热这里只有精品18| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 在线观看av片永久免费下载| e午夜精品久久久久久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 级片在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一级黄片播放器| 12—13女人毛片做爰片一| 免费观看的影片在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 桃色一区二区三区在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本一本二区三区精品| a级毛片a级免费在线| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲,欧美精品.| 免费人成在线观看视频色| 国产精品三级大全| 在线国产一区二区在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 内射极品少妇av片p| 久久亚洲真实| 成人特级黄色片久久久久久久| 51国产日韩欧美| 午夜福利欧美成人| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品久久久久久久电影 | 我的老师免费观看完整版| 青草久久国产| 两个人的视频大全免费| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产爱豆传媒在线观看| av片东京热男人的天堂| av国产免费在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 午夜精品一区二区三区免费看| 国产成人福利小说| 国产伦在线观看视频一区| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 国产美女午夜福利| 国产一区在线观看成人免费| 国产在线精品亚洲第一网站| 90打野战视频偷拍视频| 白带黄色成豆腐渣| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品影院久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美zozozo另类| 国产极品精品免费视频能看的| 99热6这里只有精品| 久久人人精品亚洲av| 老司机福利观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 午夜日韩欧美国产| 一个人观看的视频www高清免费观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 男女那种视频在线观看| 久久久国产精品麻豆| 少妇高潮的动态图| 亚洲国产色片| 国产成人系列免费观看| xxx96com| 久久久久久大精品|