亞麻葉白千層化學(xué)成分研究

張 莎，董春茅，徐楊蕊，陳德坤，周澄杰，康峰華，徐康平，鄒振興

中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，湖南 長沙 410013

亞麻葉白千層Melaleuca linariifoliaCT Musson隸屬于桃金娘科（Myrtaceae）白千層屬MelaleucaL.，該屬植物全球約有290 種，主要分布在澳大利亞和東南亞。白千層屬植物被廣泛用作民間藥物，主要用于感冒、流感以及痛風(fēng)等疾病的治療[1-2]，在第二次世界大戰(zhàn)中被澳大利亞軍隊用作急救中的驅(qū)蟲劑和抗菌劑[3-4]。因其觀賞和藥用價值也逐漸引入我國廣東、廣西、云南等地。國內(nèi)外研究表明，白千層屬植物除了富含精油外，還具有三萜類、黃酮類、木脂素類、糖苷類等[5]。目前對該屬植物化學(xué)成分研究最多的是互葉白千層[6-7]，而對于亞麻葉白千層植物的研究僅停留在其精油成分及其抗菌活性成分上[8-10]，對其他活性化學(xué)成分研究未見相關(guān)報道。前期活性篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)，亞麻葉白千層醋酸乙酯萃取部位對人類多種腫瘤細胞具有較好的細胞增殖抑制作用，半數(shù)抑制濃度（IC50）在14～37 μg/mL。為了進一步挖掘亞麻葉白千層中的天然活性小分子化合物。本課題組選取該部位進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，并從中分離得到15 個化合物，分別鑒定為3-O-乙酰熊果酸（3-O-acetyl ursolic acid，1）、3β-acetoxy-11-ursen-13α,30-olide（2）、betulinal（3）、diospyrolide（4）、3β-O-(E)-cumaroyl-alphitolinsaeure（5）、3′,4′-二羥基肉桂酸白樺脂酸酯（pyracrenic acid，6）、熊果醇（uvaol，7）、白樺脂醇（betulin，8）、豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-ene-3-one，9）、5,7,4′-三羥基黃酮 3-O-α-L-毗喃鼠李糖苷（5,7,4′- trihydroxyl-flavone 3-O-α-L-rhamnopyranoside，10）、山柰酚-3-O-(6′′-沒食子酰基)-β-D-葡萄糖苷[kaempferol 3-O-(6′′-galloyl)-β-D-glucoside，11]、α-生育酚（α-tocopherol，12）、methoxytocopherol（13）、α-tocopherolquinone（14）、植醇（phytol，15），結(jié)構(gòu)見圖1。以上所有化合物均為首次從該植物中分離得到。采用CCK8 法對化合物1～6 進行了體外細胞毒活性評價，結(jié)果顯示化合物1、3、5、6 對6種人類腫瘤細胞（人肺腺癌NCI-H441 細胞、人大細胞肺癌NCI-H460 細胞、人肺癌A549 細胞、卵巢腺癌SKOV3 細胞、人宮頸癌HeLa 細胞和人腎透明癌細胞caki-1 細胞）表現(xiàn)出一定的增殖抑制活性。

圖1 化合物1～15 的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1—15

1 儀器與材料

Bruker AV-400/AV-500/AV-600 核磁共振儀（美國布魯克公司）；Agilent 1290 UPLC-6545 accurate mass Q-TOF 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent 科技公司）；Agilent Zorbax Eclipse Plus C18（100 mm×3.0 mm，1.8 μm）色譜柱；MassHunter 質(zhì)譜工作站（美國Agilent 科技公司）；Büchi-540 熔點測定儀（瑞士Büchi 公司）；Agilent 1260 分析液相色譜儀（DAD 檢測器）、Agilent 1200 制備液相色譜儀（美國安捷倫公司）；YMC Pack ODS-A 分析型色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；YMC Pack ODS-A 制備型色譜柱（250 mm×10 mm，10 μm）；硅膠（60～100、200～300目，青島海洋化工廠）；C18反向硅膠（40～75 μm，富士，日本Kasugai)；Sephadex LH-20（德國Healthcare Uppsala Swedeb）；所有溶劑均為分析純。

NCI-H441、NCI-H460、A549、SKOV3、HeLa、caki-1 細胞均購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細胞資源中心。

亞麻葉白千層于2018年4月采集于廣州中國科學(xué)院華南植物園，由中國科學(xué)院華南植物園譚海波副研究員鑒定為桃金娘科植物亞麻葉白千層M.linariifoliaCT Musson。目前該植物干燥枝、葉樣品（20180411）保存于中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院。

2 提取與分離

亞麻葉白千層干燥枝、葉10 kg，粉粹，用95%乙醇冷浸提取，減壓濃縮至無醇味，得總浸膏，浸膏進一步用水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯各萃取3 次，減壓濃縮后分別得石油醚萃取部位（160 g）和醋酸乙酯萃取部位（280 g）。

選取醋酸乙酯萃取部位，用石油醚-醋酸乙酯-甲醇（100∶0∶0～0∶0∶100）體系經(jīng)硅膠柱色譜得10 個流分（Fr.1～10）。Fr.4（23.2 g）經(jīng)ODS柱色譜分離，用甲醇-水（50∶50～100∶0）梯度洗脫得7 個流分（Fr.4-1～4-7）。Fr.4-4（6.5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶100）梯度洗脫得6 個流分（Fr.4-4-1～4-4-6）。Fr.4-4-3（1.1 g）經(jīng)Sephadex LH-20，用二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫得3 個流分（Fr.4-4-3-1～4-4-3-3）。Fr.4-4-3-1（0.36 g）通過Prep-HPLC（90%～95%乙腈，0～5 min，95%乙腈，5～30 min，3 mL/min）得化合物1（4.8 mg，tR＝18 min）、3（3.8 mg，tR＝24 min）和4（2.6 mg，tR＝26 min）。Fr.4-4-3-2（0.13 g）經(jīng)Prep-HPLC（90%～95%乙腈，0～5 min，95%乙腈，5～30 min，3 mL/min）得化合物7（8.9 mg，tR＝23 min）。Fr.4-5（3.8 g）經(jīng)硅膠柱色譜，采用石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶100）梯度洗脫得5 個流分（Fr.4-5-1～4-5-5）。Fr.4-5-3（1.4 g）再經(jīng)硅膠柱色譜，采用石油醚-二氯甲烷-甲醇（10∶1∶0～0∶0∶100）梯度洗脫得6 個流分（Fr.4-5-3-1～4-5-3-6）。Fr.4-5-3-1（0.21 g）經(jīng)Prep-HPLC（75%～95%乙腈，0～20 min，95%乙腈，20～40 min，3 mL/min）得化合物9（6.5 mg，tR＝13 min）、8（4.9 mg，tR＝18 min）、2（5.7 mg，tR＝29 min）和15（3.3 mg，tR＝31 min）。Fr.6（16.9 g）經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚-二氯甲烷-甲醇（20∶1∶0～0∶0∶100）洗脫得9 個流分（Fr.6-1～6-9）。Fr.6-6（4.1 g）經(jīng)ODS 柱色譜，甲醇-水（60∶40～100∶0）梯度洗脫得到6 個流分（Fr.6-6-1～6-6-6）。Fr.6-6-4（0.98 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到2 個流分（Fr.6-6-4-1～6-6-4-2）。Fr.6-6-4-1 經(jīng)Prep-HPLC（75%～85%乙腈，0～40 min，3 mL/min）得到化合物5（18.5 mg，tR＝26 min）和6（11.3 mg，tR＝28 min）。Fr.6-6-4-2 經(jīng)Prep-HPLC（60%～80%乙腈，0～30 min，3 mL/min）得化合物12（12.9 mg，tR＝13 min）、13（5.6 mg，tR＝15 min）、14（7.3 mg，tR＝24 min）。Fr.6-6-5（1.2 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜，甲醇洗脫得3 個流分（Fr.6-6-5-1～6-6-5-3）。Fr.6-6-5-2（0.4 g）經(jīng)Prep-HPLC（30%～40%乙腈，0～40 min，3 mL/min）得到化合物10（6.4 mg，tR＝23 min）、11（5.8 mg，tR＝16 min）。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色固體。ESI-MSm/z: 499.376 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.24 (1H, t,J= 3.5 Hz, H-12), 4.51 (1H, dd,J= 9.0, 5.5 Hz, H-3), 2.20 (1H, d,J= 11.5 Hz, H-18), 2.06 (3H, s, -COCH3), 1.08 (3H, s, H-27), 0.97 (3H, s, H-23), 0.97 (3H, s, H-26), 0.96 (3H, d,J= 8.0 Hz, H-30), 0.88 (3H, s, H-25), 0.87 (3H, d,J= 9.0 Hz, H-29), 0.78 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 36.9 (C-1), 23.3 (C-2), 81.0 (C-3), 38.3 (C-4), 55.3 (C-5), 18.2 (C-6), 32.8 (C-7), 39.5 (C-8), 48.0 (C-9), 36.7 (C-10), 23.6 (C-11), 125.6 (C-12), 137.9 (C-13), 41.9 (C-14), 28.0 (C-15), 24.0 (C-16), 47.5 (C-17), 52.5 (C-18), 39.0 (C-19), 38.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.7 (C-22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.7 (C-25), 17.0 (C-26), 23.6 (C-27), 184.1 (C-28), 17.1 (C-29), 21.2 (C-30), 171.1 (CO), 21.3 (CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物1 為3-O-乙酰熊果酸。

化合物2：白色固體。ESI-MSm/z: 497.351 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.95 (1H, d,J= 10.0 Hz, H-11), 5.54 (1H, dd,J= 10.0, 3.0 Hz, H-12), 4.50 (1H, dd,J= 11.0, 5.5 Hz, H-3), 2.06 (3H, s, -COCH3), 1.16 (3H, s, H-27), 1.05 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-29), 0.93 (3H, s, H-23), 0.93 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-28), 0.86 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.0 (C-1), 23.3 (C-2), 80.7 (C-3), 37.9 (C-4), 54.8 (C-5), 17.6 (C-6), 31.3 (C-7), 41.7 (C-8), 53.0 (C-9), 36.3 (C-10), 133.3 (C-11), 128.9 (C-12), 89.7 (C-13), 41.9 (C-14), 24.7 (C-15), 30.8 (C-16), 45.1 (C-17), 40.3 (C-18), 38.1 (C-19), 60.6 (C-20), 22.8 (C-21), 31.2 (C-22), 27.7 (C-23), 16.1 (C-24), 19.2 (C-25), 18.9 (C-26), 16.1 (C-27), 18.0 (C-28), 17.9 (C-29), 180.0 (C-30), 171.1 (CO), 21.3 (CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物2 為3β-acetoxy-11-ursen-13α,30-olide。

化合物3：白色晶體（甲醇）。mp 163～166 ℃。 ESI-MSm/z: 441.367 2 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 9.70 (1H, d,J= 1.5 Hz, CHO), 4.77 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-29a), 4.65 (1H, m, H-29b), 3.21 (1H, dd,J= 11.0, 4.5 Hz, H-3), 1.72 (3H, s, H-30), 1.00 (3H, s, H-27), 0.98 (3H, s, H-23), 0.94 (3H, s, H-25), 0.84 (3H, s, H-26), 0.77 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.9 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.8 (C-4), 55.3 (C-5), 18.3 (C-6), 34.3 (C-7), 40.9 (C-8), 50.5 (C-9), 37.2 (C-10), 20.8 (C-11), 25.6 (C-12), 38.7 (C-13), 42.6 (C-14), 28.8 (C-15), 29.9 (C-16), 59.3 (C-17), 48.1 (C-18), 47.6 (C-19), 149.7 (C-20), 29.3 (C-21), 33.2 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 15.9 (C-25), 16.2 (C-26), 14.3 (C-27), 206.7 (C-28), 110.2 (C-29), 19.0 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物3 為betulinal。

化合物4：白色針晶（甲醇）。mp 265～267 ℃。ESI-MSm/z: 415.321 7 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3)δ: 4.63 (1H, s, H-19), 3.19 (1H, dd,J= 11.4, 4.2 Hz, H-3), 0.97 (3H, s, H-23), 0.94 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-27), 0.84 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-24)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 38.9 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.9 (C-4), 55.4 (C-5), 18.2 (C-6), 34.2 (C-7), 40.6 (C-8), 50.9 (C-9), 37.3 (C-10), 20.7 (C-11), 22.2 (C-12), 34.3 (C-13), 40.6 (C-14), 28.9 (C-15), 28.2 (C-16), 51.2 (C-17), 55.0 (C-18), 79, 3 (C-19), 29.7 (C-21), 29.6 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 16.4 (C-25), 15.7 (C-26), 13.2 (C-27), 179.5 (C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物4 為diospyrolide。

化合物5：白色固體。ESI-MSm/z: 619.399 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.08 (1H, s, COOH), 9.98 (1H, s, 4′-OH), 7.55 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.52 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 6.80 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.40 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 4.71 (1H, d,J= 2.5 Hz, H-29a), 4.58 (1H, s, H-29b), 4.53 (1H, d,J= 5.5 Hz, H-3), 3.68 (1H, m, H-2), 2.97 (1H, m, H-19), 1.67 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-27), 0.88 (3H, s, H-26), 0.88 (3H, s, H-25), 0.84 (3H, s, H-24), 0.78 (3H, s, H-23)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 48.2 (C-1), 65.4 (C-2), 84.0 (C-3), 39.3 (C-4), 55.0 (C-5), 18.3 (C-6), 34.2 (C-7), 40.8 (C-8), 50.2 (C-9), 38.0 (C-10), 21.1 (C-11), 25.5 (C-12), 38.2 (C-13), 42.5 (C-14), 29.7 (C-15), 32.2 (C-16), 55.9 (C-17), 49.0 (C-18), 47.1 (C-19), 150.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.0 (C-22), 28.8 (C-23), 18.1 (C-24), 17.6 (C-25), 16.2 (C-26), 14.8 (C-27), 177.7 (C-28), 110.1 (C-29), 19.4 (C-30), 125.7 (C-1′), 130.6 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′), 160.1 (C-4′), 144.5 (C-7′), 115.6 (C-8′), 167.2 (C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物5 為3β-O-(E)-cumaroyl- alphitolinsaeure。

化合物6：白色固體。ESI-MSm/z: 619.400 1 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.44 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-7′), 7.04 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.99 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.75 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.23 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-8′), 4.70 (1H, brs, H-29a), 4.57 (1H, brs, H-29b), 4.49 (1H, dd,J= 11.0, 4.5 Hz, H-3), 2.97 (1H, m, H-19), 1.65 (3H, s, H-30), 0.96 (3H, s, H-23), 0.89 (3H, s, H-26), 0.87 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-23), 0.80 (3H, s, H-27)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 38.3 (C-1), 24.0 (C-2), 80.2 (C-3), 38.0 (C-4), 55.2 (C-5), 18.2 (C-6), 34.2 (C-7), 40.7 (C-8), 50.2 (C-9), 36.9 (C-10), 21.0 (C-11), 25.5 (C-12), 38.1 (C-13), 42.5 (C-14), 29.7 (C-15), 32.2 (C-16), 55.9 (C-17), 49.0 (C-18), 47.1 (C-19), 150.8 (C-20), 30.6 (C-21), 37.2 (C-22), 28.2 (C-23), 16.4 (C-24), 17.0 (C-25), 16.2 (C-26), 14.8 (C-27), 177.9 (C-28), 110.1 (C-29), 19.4 (C-30), 125.9 (C-1′), 114.9 (C-2′), 146.1 (C-3′), 148.9 (C-4′), 115.3 (C-5′), 121.8 (C-6′), 145.3 (C-7′), 116.2 (C-8′), 166.8 (C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物6 為3′,4′-二羥基肉桂酸白樺脂酸酯。

化合物7：白色固體。ESI-MSm/z: 443.388 7 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 5.12 (1H, t,J= 4.0 Hz, H-12), 3.55 (1H, d,J= 11.2 Hz, H-28a), 3.15 (1H, dd,J= 11.2, 4.8 Hz, H-3), 3.03 (1H, d,J= 11.2 Hz, H-28b), 1.13 (3H, s, H-27), 1.04 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-23), 0.98 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-29), 0.83 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-30), 0.79 (3H, s, H-24)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 38.7 (C-1), 26.5 (C-2), 78.3 (C-3), 37.8 (C-4), 55.3 (C-5), 18.1 (C-6), 32.6 (C-7), 39.9 (C-8), 47.3 (C-9), 36.6 (C-10), 22.7 (C-11), 124.9 (C-12), 138.8 (C-13), 41.8 (C-14), 25.7 (C-15), 22.5 (C-16), 38.5 (C-17), 54.2 (C-18), 39.3 (C-19), 39.5 (C-20), 35.2 (C-21), 30.4 (C-22), 27.3 (C-23), 14.8 (C-24), 15.1 (C-25), 15.9 (C-26), 23.1 (C-27), 68.8 (C-28), 16.5 (C-29), 20.4 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[17]，故鑒定化合物7 為熊果醇。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z: 443.387 7 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.68 (1H, s, H-29a), 4.58 (1H, s, H-29b), 3.80 (1H, d,J= 11.0 Hz, H-28a), 3.33 (1H, d,J= 11.0 Hz, H-28b), 3.19 (1H, dd,J= 11.5, 5.0 Hz, H-3), 1.68 (3H, s, H-30), 1.02 (3H, s, H-27), 0.98 (3H, s, H-23), 0.97 (3H, s, H-25), 0.82 (3H, s, H-26), 0.76 (3H, s, H-24)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 38.7 (C-1), 27.4 (C-2), 79.0 (C-3), 38.9 (C-4), 55.3 (C-5), 18.3 (C-6), 34.2 (C-7), 40.9 (C-8), 50.4 (C-9), 37.2 (C-10), 20.8 (C-11), 25.2 (C-12), 37.3 (C-13), 42.7 (C-14), 27.0 (C-15), 29.2 (C-16), 47.8 (C-17), 48.8 (C-18), 47.8 (C-19), 150.5 (C-20), 29.8 (C-21), 34.0 (C-22), 28.0 (C-23), 15.4 (C-24), 16.1 (C-25), 16.0 (C-26), 14.8 (C-27), 60.5 (C-28), 109.7 (C-29), 19.1 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[18]，故鑒定化合物8 為白樺脂醇。

化合物9：淺黃色油狀。ESI-MSm/z: 413.377 4 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.75 (1H, s, H-4), 1.20 (3H, s, H-19), 0.94 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-29), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-21), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-26), 0.85 (3H, q,J= 7.2 Hz, H-27), 0.73 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 35.6 (C-1), 34.0 (C-2), 199.8 (C-3), 123.7 (C-4), 171.8 (C-5), 33.0 (C-6), 32.0 (C-7), 35.7 (C-8), 53.8 (C-9), 38.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.6 (C-12), 42.4 (C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 28.2 (C-16), 56.0 (C-17), 11.9 (C-18), 17.4 (C-19), 36.1 (C-20), 18.7 (C-21), 33.8 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.7 (C-25), 19.8 (C-26), 19.0 (C-27), 23.0 (C-28), 12.0 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[19]，故鑒定化合物9 為豆甾-4-烯-3-酮。

化合物10：黃色晶體（二氯甲烷-甲醇）。mp 211～213 ℃。ESI-MSm/z: 433.100 9 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.77 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.39 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.37 (1H, d,J= 1.5 Hz, H-1′′), 0.92 (3H, d,J= 5.5 Hz, H-6′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 159.3 (C-2), 136.2 (C-3), 179.6 (C-4), 158.6 (C-5), 95.0 (C-6), 166.6 (C-7), 100.1 (C-8), 163.2 (C-9), 105.8 (C-10), 122.6 (C-1′), 131.9 (C-2′, 6′), 116.6 (C-3′, 5′), 161.7 (C-4′), 103.5 (C-1′′), 72.1 (C-2′′), 72.2 (C-3′′), 72.0 (C-4′′), 73.2 (C-5′′), 17.7 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[20]，故鑒定化合物10 為5,7,4′-三羥基黃酮3-O-α-L-毗喃鼠李糖苷。

化合物11：淡黃色固體。ESI-MSm/z: 601.116 9 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.93 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.94 (2H, s, H-2′′′, 6′′′), 6.73 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.35 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.18 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.20 (1H, m, H-1′′), 4.28 (2H, m, H-6′′), 3.46 (4H, m, H-2′′～5′′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 158.5 (C-2), 135.3 (C-3), 179.4 (C-4), 162.9 (C-5), 100.0 (C-6), 166.1 (C-7), 95.0 (C-8), 159.6 (C-9), 105.6 (C-10), 122.7 (C-1′), 132.2 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.5 (C-4′), 104.4 (C-1′′), 75.8 (C-2′′, 5′′), 71.5 (C-4′′), 64.3 (C-6′′), 121.3 (C-1′′′), 110.2 (C-2′′′, 6′′′), 146.4 (C-3′′′, 5′′′), 139.8 (C-4′′′), 168.1 (C-7′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[21]，故鑒定化合物11 為山柰酚-3-O-(6′′-沒食子?；?-β-D-葡萄糖苷。

化合物12：黃色油狀物。ESI-MSm/z: 431.384 4 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 2.54 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-4), 2.11 (3H, s, H-7a), 2.06 (3H, s, H-5a), 2.04 (3H, s, H-8a), 1.73 (2H, m, H-3), 1.18 (3H, s, H-2a), 0.87 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-12′a), 0.86 (3H, d,J= 6.0 Hz, H-13′), 0.85 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-4′a), 0.84 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-8′a)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 73.9 (C-2), 31.7 (C-3), 20.5 (C-4), 120.4 (C-5), 144.7 (C-6), 121.6 (C-7), 122.9 (C-8), 145.3 (C-9), 116.7 (C-10), 22.9 (C-2a), 10.6 (C-5a), 11.6 (C-7a), 11.0 (C-8a), 39.4 (C-1′), 20.7 (C-2′), 37.3 (C-3′), 32.6 (C-4′), 37.3 (C-5′), 24.2 (C-6′), 37.2 (C-7′), 32.5 (C-8′), 37.1 (C-9′), 24.6 (C-10′), 39.2 (C-11′), 27.8 (C-12′), 21.9 (C-13′), 19.0 (C-4′a), 19.0 (C-8′a), 22.0 (C-12′a)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，故鑒定化合物12 為α-生育酚。

化合物13：黃色油狀物。ESI-MSm/z: 461.394 2 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3)δ: 4.66 (2H, s, H-8a), 3.44 (3H, s, -OCH3), 2.60 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-4), 2.15 (3H, s, H-7a), 2.11 (3H, s, H-6a), 1.77 (2H, m, H-3), 1.26 (3H, s, H-2a), 0.87 (6H, d,J= 6.6 Hz, H-13′, 12′a), 0.84 (6H, d,J= 6.6 Hz, H-4′a, 8′a)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3)δ: 74.4 (C-2), 31.4 (C-3), 20.0 (C-4), 144.7 (C-5), 123.1 (C-6), 115.9 (C-7), 125.8 (C-8), 147.3 (C-9), 115.4 (C-10), 23.7 (C-2a), 11.9 (C-6a), 11.7 (C-7a), 69.8 (C-8a), 58.1 (-OCH3), 39.8 (C-1′), 21.0 (C-2′), 37.5 (C-3′), 32.8 (C-4′), 37.5 (C-5′), 24.5 (C-6′), 37.4 (C-7′), 32.7 (C-8′), 37.3 (C-9′), 24.8 (C-10′), 39.4 (C-11′), 28.0 (C-12′), 22.6 (C-13′), 19.8 (C-4′a), 19.7 (C-8′a), 22.7 (C-12′a)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，故鑒定化合物13 為methoxytocopherol。

化合物14：黃色油狀物。ESI-MSm/z: 447.373 8 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 2.56 (2H, m, H-1′), 2.05 (3H, s, H-6a), 2.02 (6H, s, H-3a, 4a), 1.25 (3H, s, H-3′a), 0.88 (9H, d,J= 7.0 Hz, H-7′a, 16′, 15′a), 0.86 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-11′a)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 144.5 (C-1), 187.7 (C-2), 140.2 (C-3), 140.5 (C-4), 187.3 (C-5), 140.4 (C-6), 12.3 (C-3a), 12.4 (C-4a), 12.0 (C-6a), 21.4 (C-1′), 39.4 (C-2′), 72.7 (C-3′), 42.3 (C-4′), 21.3 (C-5′), 29.9 (C-6′), 32.8 (C-7′), 37.6 (C-8′), 24.5 (C-9′), 37.4 (C-10′), 32.8 (C-11′), 37.3 (C-12′), 24.8 (C-13′), 40.3 (C-14′), 28.0 (C-15′), 22.7 (C-16′), 26.6 (C-3′a), 19.8 (C-7′a), 19.7 (C-11′a), 22.6 (C-15′a)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[23]，故鑒定化合物 14 為 α- tocopherolquinone。

化合物15：無色油狀物。ESI-MSm/z: 314.341 3 [M＋NH4]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 5.43 (1H, t,J= 5.5 Hz, H-2), 4.18 (2H, d,J= 7.0 Hz, H-1), 2.01 (2H, m, H-4), 1.69 (3H, s, H-17), 1.54 (1H, m, H-15), 0.88 (6H, d,J= 7.0 Hz, H-16, 20), 0.87 (6H, d,J= 6.5 Hz, H-18, 19)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 59.4 (C-1), 123.1 (C-2), 140.3 (C-3), 39.9 (C-4), 25.1 (C-5), 36.7 (C-6), 32.7 (C-7), 37.4 (C-8), 24.5 (C-9), 37.4 (C-10), 32.8 (C-11), 37.3 (C-12), 24.8 (C-13), 39.4 (C-14), 28.0 (C-15), 22.6 (C-16), 16.2 (C-17), 19.7 (C-18), 19.8 (C-19), 22.7 (C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[24]，故鑒定化合物15 為植醇。

3.2 細胞毒活性評價

以星形孢菌素（staurosporine，STS）為陽性對照，采用CCK8 法檢測化合物1～6 對6 種人腫瘤細胞（NCI-H441、NCI-H460、A549、SKOV3、Hela、caki-1）的細胞毒活性。首先將上述6 種癌細胞以3×103/孔的濃度懸浮在96 孔板中的含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基中，并在5% CO2、37 ℃條件下孵育24 h。然后，每組添加不同濃度的測試樣品（0.39～50 μmol/L，2 倍梯度稀釋），同時設(shè)立不加化合物的對照組和加STS 的陽性對照組，培養(yǎng)72 h 后，將含有CCK8 試劑（10%）的新鮮培養(yǎng)基（100 μL）加入各孔中，并再培養(yǎng)2 h。最后，在450 nm 下測定溶液的吸光度（A）值，并根據(jù)公式計算抑制率。

并用Graph Pad Prism 軟件擬合化合物的IC50值。所有結(jié)果均平行測試3 次，取平均值。CCK8結(jié)果見表1。

表1 化合物1～6 對6 種腫瘤細胞的細胞毒活性Table 1 Cytotoxic activity of compounds 1―6 on six tumor cells

4 討論

本研究從亞麻葉白千層醋酸乙酯部位中共分離得到15 個化合物，主要包括三萜類化合物9 個，黃酮苷類化合物2 個，生育酚類以及其他化合物4 個。體外活性實驗表明化合物1、3、5、6 對6 種人類腫瘤細胞均有不同程度的增殖抑制作用，提示三萜類成分可能是亞麻葉白千層抗腫瘤主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其分子作用機制還有待我們進一步深入研究。本研究結(jié)果豐富了白千層屬的化學(xué)成分，也能為該植物綜合藥用開發(fā)利用提供一定的科學(xué)和實驗依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突