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    炒地龍與地龍飲片中次黃嘌呤和肌苷含量的比較

    2021-05-12 14:28:22孫立麗霍秦秦王婉婷
    關(guān)鍵詞:次黃嘌呤肌苷量瓶

    孫立麗,霍秦秦,王婉婷

    (吉林市食品藥品檢驗(yàn)所,吉林 吉林)

    0 引言

    炒地龍為地龍的清炒炮制加工品。炒地龍照炒炙法(《中國(guó)藥典》2015 版 四部 通則0213)清炒炮制。

    地龍的來(lái)源有廣地龍和滬地龍,廣地龍主產(chǎn)于廣東、海南、廣西,春季至秋季捕捉;滬地龍主產(chǎn)于浙江、江蘇、上海、山東、河南等地[1]?,F(xiàn)省內(nèi)制藥企業(yè)、藥品批發(fā)、市售及醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用的地龍藥材均為廣地龍,滬地龍較少見。

    化學(xué)成分:地龍?bào)w內(nèi)含有多種蛋白質(zhì)類、多肽類、核苷酸、氨基酸以及脂肪酸等化學(xué)成分[2]。蛋白質(zhì)是地龍的主要活性成分之一;多肽類包括活性地龍肽和抗菌肽等;核苷酸是地龍代謝的重要化學(xué)成分,地龍中主要有次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶等核苷酸成分;地龍含有多種氨基酸,包括了人體必需的八種氨基酸。

    藥理作用: 生地龍主要有平喘、抗凝血、抗血栓、抗腫瘤、降血壓等藥理作用,所含的蚯蚓解熱堿具有良好的解熱作用。地龍的平喘降壓作用,主要是含有次黃嘌呤、黃嘌呤等核苷酸成分, 并有抗組織胺及舒張支氣管作用,從而達(dá)到止咳平喘的目的[3]。

    1 樣品收集

    起草樣品收集情況:共收集地龍2 個(gè)品種10 批次藥材,其中廣地龍8 批、滬地龍2 批,來(lái)自廣西、河北、海南、廣東、江蘇、安徽等10 個(gè)產(chǎn)地。

    2 含量測(cè)定

    地龍主要活性成分有肌苷、次黃嘌呤、琥珀酸等。肌苷又可稱為次黃嘌呤核苷,它在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與次黃嘌呤極為相似,僅比次黃嘌呤多了一個(gè)呋喃糖。

    參照有關(guān)文獻(xiàn)[5,6]采用高效液相色譜法對(duì)炒地龍中肌苷、次黃嘌呤進(jìn)行含量測(cè)定。

    2.1 儀器與試藥

    高效液相色譜儀Waters e2695;電子天平METTLER MS105DΜ, 電子天平JA5003;

    肌苷對(duì)照品,批號(hào):140669-201104,含量100%,中國(guó)食品藥品檢定研究院;

    次黃嘌呤對(duì)照品,批號(hào):140661-201704,含量100%,中國(guó)食品藥品檢定研究院;

    甲醇為色譜純,其他試劑均為分析純。

    2.2 方法考察

    方法:采用高效液相色譜法以次黃嘌呤和肌苷為定量指標(biāo),進(jìn)行含量測(cè)定[7],對(duì)10 批地龍樣品炮制前后進(jìn)行含量考察。

    十六年前,有著優(yōu)越家世的古意,頂著耀眼的光壞,就讀于一所名牌大學(xué),跟青梅竹馬的女友十分相愛,已經(jīng)準(zhǔn)備談婚論嫁。

    色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.01mol/L 磷酸二氫鉀溶液—50%甲醇溶液(80 ∶20)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;柱溫30℃;流速0.8ml/min;進(jìn)樣量20μl。

    對(duì)照品溶液與供試品溶液制備:

    對(duì)照品溶液的制備:取次黃嘌呤對(duì)照品與肌苷對(duì)照品適量,精密稱定,置同一100ml 量瓶中,加0.9%氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置20ml 量瓶中,加0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,制成每1ml 中含次黃嘌呤對(duì)照品25μg、肌苷對(duì)照品50 μg 的混合對(duì)照品溶液。

    供試品溶液的制備:取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入0.9%氯化鈉溶液25ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30min,放冷,再稱定重量,用0.9%氯化鈉溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,離心10min(4000r/min),精密量取上清液5ml,置10ml 量瓶中,用0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

    測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液20μl 注入液相色譜儀,測(cè)定。

    3 方法學(xué)考察結(jié)果

    3.1 線性關(guān)系考察

    標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密稱取次黃嘌呤對(duì)照品10.24mg、肌苷對(duì)照品20.70mg,置同一100ml 量瓶中,加0.9%氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml,置20ml 量瓶中,加0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25μl,分別注入液相色譜儀,測(cè)得峰面積,以進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果次黃嘌呤回歸方程為Y=5392.9X-38420 r ≈1.0000,進(jìn)樣量在128-640ng 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    肌苷回歸方程為 Y=2822.3X-34021 r ≈1.0000,進(jìn)樣量在258.75-1293.75ng 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1、表2。

    表1 次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

    表2 肌苷標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

    3.2 儀器精密度試驗(yàn)

    取同一供試品(CDL-06)溶液,連續(xù)進(jìn)樣6 次,每次20μl,依法測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果見表3。

    次 黃 嘌 呤 平 均:682233,RSD=1.2%;肌 苷 平 均:1663696,RSD=1.5%

    結(jié)果表明精密度良好。

    3.3 穩(wěn)定性考察

    取同一供試品(CDL-06)溶液,分別在0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h 各進(jìn)樣測(cè)定一次,記錄峰面積。結(jié)果見表4。

    表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

    表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

    次黃嘌呤平均值:722540,RSD=5.7%,肌苷平均值:1716031,RSD=2.8%。

    結(jié)果表明:供試品溶液在24h 內(nèi)次黃嘌呤相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大,穩(wěn)定性較差。

    3.4 重復(fù)性考察

    取同一批供試品(CDL-06)6 份,依法測(cè)定,平行測(cè)定6 次,計(jì)算。結(jié)果見表5。

    表5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

    結(jié)果次黃嘌呤平均含量為545.98 μg/g,RSD 為1.5%;肌苷平均含量為2.76mg/g,RSD 為2.2%,表明本方法重復(fù)性較好。

    3.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

    取已知含量的樣品(CDL-06)(含次黃嘌呤520.55 μg/g、肌苷2.80 mg/g)6 份,每份約0.25 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別精密加入對(duì)照品混合溶液(次黃嘌呤0.02496mg/ml、肌苷0.1457mg/ml)5ml,分別精密加0.9%氯化鈉溶液適量,使總體積至25ml,依法測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果次黃嘌呤平均回收率為95.9%,RSD=5.6%,肌苷平均回收率為93.0%,RSD=4.8%,n=6。結(jié)果見表6、表7。

    表6 次黃嘌呤回收率試驗(yàn)結(jié)果

    表7 肌苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

    表8 樣品含量測(cè)定結(jié)果

    4 樣品測(cè)定

    10 批樣品測(cè)定結(jié)果:依法測(cè)定地龍炮制前、后樣品中次黃嘌呤和肌苷含量,結(jié)果見表8。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果:地龍10 批生品含量次黃嘌呤在 262.566-632.371μg/g 之 間,均 值450.28μg/g 、肌 苷 在1.820-3.560mg/g 之間,均值2.30 mg/g,炒地龍10 批含量次黃嘌呤在282.703- 658.166μg/g 之間,均值479.08μg/g 、肌苷在1.381- 2.804 mg/g 之間,均值1.96mg/g。地龍10 批炒制前后含量均有變化,炒地龍次黃嘌呤的含量相應(yīng)增高、肌苷含量相應(yīng)降低。

    5 討論

    地龍經(jīng)過(guò)炮制后化學(xué)成分或多或少會(huì)有一些變化。如炒制地龍中肌苷含量較生品相應(yīng)降低,而次黃嘌呤含量增高,平喘療效增強(qiáng);炮制品較地龍生品中蚓激酶的含量會(huì)減少[8]。

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