反相高效液相色譜法測定西咪替丁片中西咪替丁的含量

王永杰，王繁華

（鶴壁市食品藥品檢驗檢測中心，河南 458030）

西咪替丁片主要用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎、應(yīng)激性潰瘍及卓-艾氏（Zollinger-Ellison）綜合征等相關(guān)疾病，在臨床上應(yīng)用廣泛［1，2］。西咪替丁主要通過作用于胃壁細(xì)胞上的H2受體，競爭性抑制組胺作用。抑制基礎(chǔ)胃酸分泌［3］。也還有相關(guān)報道，西咪替丁具有抗腫瘤和哮喘等作用［4］?！吨袊幍洹?015 年版中規(guī)定［5］，西咪替丁片中西咪替丁含量采用紫外-可見分光光度法測定，該法專屬性較低，靈敏度也不及高效液相色譜法。因此，采用具有更高靈敏度的高效液相色譜法進(jìn)行測定，可以更準(zhǔn)確地檢測此種藥品的含量。本試驗通過采用反相高效液相色譜法來測定西咪替丁片中西咪替丁的含量，操作簡單，回收率高，平行性好，可以作為一種測定西咪替丁含量的方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters e2695-2998 高效液相色譜儀（Empower 2 工作站），ME104T/02 電子分析天平（梅特勒-托利多集團），賽多利斯arium?mini 超純水系統(tǒng)（德國賽多利斯集團），XY4-180E 型超聲波清洗機（上海析宇儀器有限公司）。

1.2 試藥 西咪替丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100158-201406，99.8%）；色譜純甲醇（天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司），色譜純磷酸（北京邁瑞達(dá)科技有限公司），分析純磷酸二氫鉀（蘇州市久恒化工有限公司），水為試驗室自制超純水。西咪替丁片（上海信誼天平藥業(yè)有限公司，0.2 g，批號190810、190315、190107）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Waters e2695-2998 高效液相色譜儀（Empower 2 工作站），SunFire C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.01 mol/L 的磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為3.5）（70∶30），流速：1.0 ml/min，進(jìn)樣體積：10 μl，柱溫：30 ℃，檢測波長：221 nm。

2．2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取西咪替丁對照品約20 mg，置于100 ml 棕色量瓶中，加入流動相少許，超聲使溶解，放冷，用流動相稀釋至相應(yīng)刻度后作為對照品貯備液。取對照品貯備液5 ml，放置于20 ml 棕色量瓶中，加流動相稀釋至相應(yīng)刻度，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取西咪替丁片20 片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉（含西咪替丁約50 mg），置于100 ml棕色量瓶中，加流動相超聲10 min，溶解后放冷，用流動相定容至相應(yīng)刻度，搖勻，濾過，取過濾的澄清溶液10 ml，放置于100 ml 棕色量瓶內(nèi)，用流動相稀釋至相應(yīng)刻度，備用。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取不含西咪替丁主藥的各輔料適量，按照本藥的處方比例制備成陰性對照品，按照“2.2.2”項下的方法制備成陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 取上述“2.2”項下的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按照“2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果該色譜條件下的色譜峰峰形對稱，理論板數(shù)為19 625，出峰時間約為6 min，符合2015 年版《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定。見圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗 精密量取“2.2.1”項下的對照品貯備液1、5、10、15 和25 ml 分別置于25 ml 棕色量瓶中，用流動相稀釋至刻度，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行試驗，記錄色譜圖。以峰面積（Y）對濃度（X）進(jìn)行線性回歸分析，計算可得回歸方程為Y=5 436X+1 529（r=0.999 8），計算結(jié)果表明西咪替丁在7.98~199.60 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，分別記錄色譜圖，計算可得其RSD 為0.75%（n=6），試驗結(jié)果表明，在文中設(shè)置的條件下，西咪替丁的精密度高。

圖1 陰性對照（A）對照品（B）供試品（C）高效液相色譜圖

2.6 重復(fù)性試驗 取批號190810 的樣品6 份，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，按西咪替丁的峰面積計算，供試品的RSD 為0.64%（n=6）?？梢钥闯?，在此種條件下供試品重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取批號為190810 的樣品，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，室溫下避光放置。分別在0、1、3、5、9、15 和24 h 取樣，取樣后立即進(jìn)樣檢測，分別記錄其高效液相色譜圖，根據(jù)西咪替丁的峰面積計算其RSD 為0.76%。結(jié)果表明，在此種條件下制備的供試品溶液在室溫下放置24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 取含量已知的批號為190810 的樣品9 份（每份含西咪替丁約25 mg），分別加入西咪替丁對照品20.04、25.05 和30.06 mg（用西咪替丁對照品配制成5.01 mg/ml 的母液，分別精密量取4、5 和6 ml）各3 份，按“2.2.2”項下方法制成供試品加標(biāo)回收溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，最后以西咪替丁的峰面積計算其回收率。結(jié)果西咪替丁平均回收率為99.96%，RSD 為0.16%。見表1。

2.9 樣品含量測定對比 取批號為190810、190315和190107 的3 批供試品各2 份，按照“2.2.2”項下方法分別制成供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣。另取上述3 批供試品各2 份，按照2015 年版《中國藥典》中規(guī)定的方法測定西咪替丁片的含量。分別計算其含量，對計算結(jié)果進(jìn)行比較。見表2。

表1 西咪替丁回收率試驗結(jié)果

表2 不同方法測定西咪替丁片含量結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 按照“2.2.1”和“2.2.2”項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，對其進(jìn)行紫外掃描檢測，最后發(fā)現(xiàn)在221 nm 的波長處有最大吸收，因此選用了此波長作為最后的檢測波長。

3.2 流動相的選擇 通過查詢文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)有采用甲醇-水-乙腈、甲醇-水、乙腈-鹽等系統(tǒng)［6－8］作為流動相，本文對此也進(jìn)行了試驗，發(fā)現(xiàn)不是峰形不對稱，就是出峰時間較晚，在本文設(shè)置的條件下，出峰時間約為6 min，峰形也對稱，理論板數(shù)較高，因此采用了甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為3.5）（70∶30）作為最后的流動相。

通過含量測定結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)紫外和液相所測得結(jié)果基本相同，但是高效液相的分離度更好，靈敏度高，自動化程度也高。因此，本文通過試驗所得到的高效液相色譜方法可以用于測定西咪替丁片含量。