電位滴定法測定中藥材甜瓜子中的酸價和過氧化值

張 晶，蘇 喆，黃哲甦

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

甜瓜子為葫蘆科屬植物甜瓜Cucumis meloL．的干燥成熟種子，呈扁平長卵形，長6～9 mm，寬2～4 mm，厚約1 mm，具有清肺潤腸、化瘀、療傷止痛的功效。甜瓜子含脂肪油約27%，其中包括亞油酸、油酸、棕櫚酸、卵磷脂、膽固醇、硬脂酸等，此外還含有結(jié)晶性球蛋白、谷蛋白、半乳糖、葡萄糖等［1，2］。由于甜瓜子脂肪含量較高，油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸易被氧化、水解，導(dǎo)致酸敗變質(zhì)的發(fā)生，從而影響甜瓜子原材料的品質(zhì)。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)堅果與籽類食品》（GB 19300-2014）規(guī)定，籽類（以脂肪計）要求酸價不超過（KOH）3 mg/g，過氧化值不超過0.40 g/100 g。

鹿瓜多肽注射液、注射用鹿瓜多肽是以梅花鹿的骨骼和甜瓜子為原材料，分別提取后制成的滅菌水溶液或凍干粉，用于骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨折的輔助治療藥物，是一類臨床應(yīng)用廣泛的多組分生化藥［3-5］。生產(chǎn)企業(yè)有固定的甜瓜子供應(yīng)商，均對甜瓜子進(jìn)行自檢，原材料質(zhì)控以2015 年版《中國藥典》中甜瓜子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為檢驗依據(jù)，但均未對酸價及過氧化值有要求［6］。生化藥品的質(zhì)量控制更應(yīng)關(guān)注藥品整個生命周期的質(zhì)量，甜瓜子提取液以多肽含量計，與鹿骨提取液混合制備鹿瓜多肽提取液，酸價和過氧化值一定程度上可體現(xiàn)甜瓜子原料的新鮮程度，需要加以關(guān)注。本文采用電位滴定的方法對A、B 兩個生產(chǎn)企業(yè)提供的8 批甜瓜子原材料的酸價、過氧化值進(jìn)行測定，為甜瓜子原材料的質(zhì)量控制提供補(bǔ)充參考。

1 儀器與試藥

1.1 試藥 石油醚（沸點30～60 ℃，分析純，天津市康科德科技有限公司）；乙醚、乙醇、三氯甲烷、冰乙酸（分析純，天津市康科德科技有限公司）；碘化鉀、無水硫酸鈉（分析純，天津市華東試劑廠）；乙醚-乙醇（1 ∶1）混合液；三氯甲烷-冰醋酸（2 ∶3）混合液；酸價標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液為乙醇制氫氧化鉀滴定液（0.100 2 mol/L）；過氧化值標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液為硫代硫酸鈉滴定液（0.002 092 mol/L）。8批甜瓜子原材料（批號180901、181211、181227、1809005、1901002、1812006、1902003、1905004）由生產(chǎn)鹿瓜多肽的A、B 兩家企業(yè)提供。

1.2 儀器 自動電位滴定儀（T50，METTLER 公司）；非水相酸堿滴定專用復(fù)合電極：Ag/AgCl 內(nèi)參比電極（酸價測定用）；復(fù)合鉑環(huán)電極（過氧化值測定用）；數(shù)顯旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R-3 型，瑞士Buchi 公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 甜瓜子原料前處理 稱取適量甜瓜子原料，用不銹鋼組織搗碎機(jī)搗碎至粒徑約1 mm 的細(xì)小顆粒，置500 ml 具塞三角瓶中，加入3 倍樣品體積的石油醚完全沒過樣品，使樣品充分分散于石油醚中，蓋緊瓶塞置通風(fēng)櫥中靜置過夜。用裝有5 g 無水硫酸鈉的濾紙過濾，取濾液置200 ml 圓底燒瓶中，在38 ℃水浴中用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干石油醚溶劑，殘留物即為待測樣品。樣品處理以及滴定時應(yīng)避免陽光直射。

2.2 測定方法

2.2.1 酸價的測定 啟動自動電位滴定儀，安裝好非水相酸堿滴定專用復(fù)合電極：Ag/AgCl 內(nèi)參比電極，用乙醇制氫氧化鉀滴定液進(jìn)行管路沖洗。稱取3 g 左右待測樣品于滴定杯中，加入50 ml 乙醚-乙醇（1 ∶1）混合液，振搖使樣品溶解，將滴定杯安裝至滴定儀上，電極和滴定管插入樣品溶液中，以適當(dāng)?shù)乃俾蕯嚢?，滴定速度啟用動態(tài)滴定模式控制，開始滴定。每個樣品滴定結(jié)束后，電極和滴定管用乙醚-乙醇（1 ∶1）混合液沖洗干凈進(jìn)行下一個樣品的測定。空白試驗取50 ml 乙醚-乙醇（1 ∶1）混合液，按照上述方法測定。按照下面公式進(jìn)行計算：

式中：X酸價為油脂樣品的酸價，單位為mg KOH/g；V為樣品消耗的滴定溶液體積，單位為ml；V0為空白試劑消耗的滴定溶液體積，單位為ml；c為氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實際摩爾濃度，單位為mol/L；m為油脂樣品的質(zhì)量，單位為g；56.11 為氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量，單位為g/mol。

2.2.2 過氧化值的測定 啟動自動電位滴定儀，安裝好復(fù)合鉑環(huán)電極，用硫代硫酸鈉滴定液進(jìn)行管路沖洗。稱取3 g 左右待測樣品于滴定杯中，加入30 ml 三氯甲烷-冰醋酸（2 ∶3）混合液，振搖使樣品溶解，精密量取1.0 ml 新制飽和碘化鉀溶液加至樣品溶液，密閉，振搖0.5 min，暗處靜置3 min。反應(yīng)結(jié)束后加30 ml 蒸餾水，搖勻，將滴定杯安裝至滴定儀上，電極和滴定管插入樣品溶液中，以適當(dāng)?shù)乃俾蕯嚢?，立即滴定。啟用動態(tài)滴定模式，每個樣品滴定結(jié)束后，電極和滴定管用三氯甲烷-冰醋酸（2 ∶3）混合液沖洗干凈進(jìn)行下一個樣品的測定?？瞻自囼炄?0 ml 三氯甲烷-冰醋酸（2 ∶3）混合液，按照上述方法測定。按照下面公式進(jìn)行計算：

式中：X過氧化值為油脂樣品的過氧化值，單位為g/100 g；V為樣品消耗的滴定溶液體積，單位為ml；V0為空白試劑消耗的滴定溶液體積，單位為ml；c為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實際摩爾濃度，單位為mol/L；0.126 9 為與1.0 ml 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液相當(dāng)?shù)牡獾馁|(zhì)量；m為油脂樣品的質(zhì)量，單位為g；100為換算系數(shù)。

2.3 結(jié)果

2.3.1 酸價測定結(jié)果 采用電位滴定對A、B 兩家生產(chǎn)企業(yè)提供的甜瓜子原料進(jìn)行酸價的測定，重復(fù)測定6 次，測定結(jié)果為1.93～7.27 mg KOH/g，RSD 為0.37%～2.71%。具體結(jié)果見表1。A、B 兩家企業(yè)共提供了8批甜瓜子原材料：A 企業(yè)提供了3 批甜瓜子原材料，其中有1批的酸價超出《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)堅果與籽類食品》中籽類酸價的限度3 mg KOH/g，實際測定值為限度的2.4 倍；B 企業(yè)提供了5 批甜瓜子原料，其中有2 批超過了籽類酸價的限度3 mg KOH/g。

表1 甜瓜子酸價測定結(jié)果（n=6）

2.3.2 過氧化值測定結(jié)果 采用電位滴定對A、B 兩家生產(chǎn)企業(yè)提供的甜瓜子原料進(jìn)行過氧化值的測定，重復(fù)測定6 次，測定結(jié)果為0.004～0.014 g/100 g，RSD為7.49%～21.98%。具體結(jié)果見表2。A、B 企業(yè)提供的8 批甜瓜子原材料的過氧化值均未超出籽類過氧化值的限度0.40 g/100 g。

表2 甜瓜子過氧化值測定結(jié)果（n=6）

3 討論

甜瓜子是一味傳統(tǒng)的中藥材，具有食藥同源性，含有脂肪油、蛋白質(zhì)、半乳糖等營養(yǎng)物質(zhì)，屬于易蟲蛀、霉變、酸敗的原料，溫度、水分、倉儲條件等都會對原料的質(zhì)量有影響。在制備鹿瓜多肽的甜瓜子多肽提取液時，生產(chǎn)企業(yè)會購入大量的甜瓜子原材料，隨著存儲時間的延長，甜瓜子酸敗氧化的可能性增大。在酸敗氧化過程中，油脂會分解為甘油和游離脂肪酸，再通過水解氧化導(dǎo)致過氧化物的產(chǎn)生，使甜瓜子產(chǎn)生酸敗異味，降低了營養(yǎng)價值并且產(chǎn)生有害物質(zhì)。本文測定了8 批甜瓜子原材料的酸價及過氧化值，結(jié)果表明有3 批甜瓜子的酸價超出了《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)堅果與籽類食品》（GB 19300-2014）中對籽類酸價的要求限度，所有批次甜瓜子的過氧化值均未超出限度要求。油脂酸敗可以反映甜瓜子原材料的新鮮度，而《中國藥典》方法及生產(chǎn)鹿瓜多肽的企業(yè)自檢方法均未涉及對甜瓜子的酸價、過氧化值的檢查要求，應(yīng)當(dāng)引起關(guān)注并加以檢測。

可以通過測定酸價、過氧化值、羰基價和丙二醛（TBA 法）來檢驗油脂酸敗的程度［7-9］，在食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)（GB 5009.227-2016、GB 5009.229-2016）中，使用電位滴定的方法測定酸價和過氧化值，操作簡單且靈敏度高，而羰基價的檢測需要用試劑苯并需要加熱反應(yīng)，用丙二醛（TBA 法）測定植物組織時受多種物質(zhì)如可溶性糖的干擾。從操作便利、結(jié)果可靠的角度考慮，本文選定了酸價和過氧化值兩項指標(biāo)對甜瓜子原材料進(jìn)行檢測。鹿瓜多肽藥物是鹿骨多肽和甜瓜子多肽混合制備的多肽藥物，在制備甜瓜子多肽的生產(chǎn)過程中，油脂等雜質(zhì)以析脂、過濾等方法去除，本文在用石油醚對鹿瓜多肽的制劑浸潤、抽提時并未提取出脂肪油，所以本文的方法僅適用于對甜瓜子原材料的檢測。參考食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)方法［10］，電位滴定法可準(zhǔn)確測定甜瓜子中油脂的游離脂肪酸及過氧化值，為甜瓜子原料的質(zhì)量控制提供參考。