新疆兵團(tuán)巴州地區(qū)乳源性葡萄球菌屬細(xì)菌分離及藥敏試驗(yàn)

姜云　唐思靜

摘要：從巴州地區(qū)不同奶牛養(yǎng)殖場采集乳樣24份，進(jìn)行分離鑒定葡萄球菌屬細(xì)菌，采用瓊脂擴(kuò)散法對分離株進(jìn)行抗生素敏感性研究。結(jié)果：獲得了5種葡萄球菌屬細(xì)菌，分別是金黃色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、緩慢葡萄球菌、克氏葡萄球菌、溶酪葡萄球菌。分離到的5種細(xì)菌對慶大霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林高度敏感;對卡那霉素，甲氧芐啶中度敏感;對青霉素、紅霉素、萬古霉素、四環(huán)素、利福平耐藥。說明巴州地區(qū)奶牛養(yǎng)殖場乳中細(xì)菌的耐藥現(xiàn)象還比較嚴(yán)重。

關(guān)鍵詞：葡萄球菌屬;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

中圖分類號：S852.611

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.15.002

作者簡介：姜云，女，學(xué)士，高級畜牧師，研究方向：從事家畜遺傳育種、動物疫病診療防治。

0引言

奶牛隱性乳房炎作為一種常見疾病，嚴(yán)重影響奶牛業(yè)的發(fā)展。奶牛乳房炎發(fā)病原因多，通常是由多種非特定病原微生物感染引起，以金黃色葡萄球菌最常見。試驗(yàn)從巴州不同奶牛養(yǎng)殖場采集乳樣24份，分離鑒定葡萄球菌屬細(xì)菌，采用瓊脂擴(kuò)散法對分離株進(jìn)行抗生素敏感性研究。

1材料

1.1樣品來源

采自巴州地區(qū)3個(gè)不同奶牛場，牛只乳房用乳頭藥浴液消毒后，每個(gè)乳頭擠去頭2～3把乳，無菌取乳樣10mL，共24個(gè)乳樣（分次進(jìn)行），貼好標(biāo)簽4h內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)^[1]。

1.2培養(yǎng)基

普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（含結(jié)晶紫）三糖鐵瓊脂、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、高鹽甘露醇瓊脂、營養(yǎng)肉湯^[2]。

1.3生化試劑

各種細(xì)菌培養(yǎng)基生化試驗(yàn)管及藥敏片均購于杭州天和微生物試劑有限公司。

2方法

2.1細(xì)菌分離及鑒定

無菌取乳樣分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，在37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h后，觀察平皿上菌落形態(tài)、大小、顏色、溶血性等，將菌落分類，每一類典型菌落進(jìn)行涂片鏡檢^[3]。采用革蘭氏染色，區(qū)分陰性菌和陽性菌，并判定細(xì)菌類屬，并將其進(jìn)一步純化培養(yǎng)。將葡萄球菌屬進(jìn)行直接分離培養(yǎng)（普通瓊脂平板、普通瓊脂血平板）和選擇性分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇瓊脂）。取已純培養(yǎng)好的菌種，分別接種血瓊脂平板、普通瓊脂平板、甘露醇等生化培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24 h，置室溫24 h，觀察其生長表現(xiàn)、溶血情況和色素變化;同時(shí)接種普通肉湯，37℃培養(yǎng)18～24 h后做血漿凝固酶試驗(yàn)，對可疑單個(gè)菌落涂片、染色、鏡檢，進(jìn)一步觀察其在鑒別培養(yǎng)基上的生長情況，并純化培養(yǎng)菌落，保存?zhèn)溆?sup>[4]。

2.2藥敏試驗(yàn)

利用紙片瓊脂擴(kuò)散法對5株分離到的葡萄球菌菌株的抗生素敏感性進(jìn)行檢測。取營養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)后的菌液，用移液槍吸取100uL均勻涂抹到整個(gè)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，貼藥敏片，37℃倒置培養(yǎng)24～48 h，后判定結(jié)果參照美國實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCIS）法規(guī)^[5]。

3結(jié)果與分析

3.1細(xì)菌分離及鑒定

細(xì)菌分離純化后，根據(jù)鏡檢，生化試驗(yàn)結(jié)果，參考相關(guān)文獻(xiàn)認(rèn)為分離到了5種葡萄球菌屬的細(xì)菌。分別是木糖葡萄球菌為革蘭氏陽性菌球菌，成單個(gè)成雙及不規(guī)則葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，無鞭毛。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑為0.5～1 μm。緩慢葡萄球菌為革蘭氏陰性球菌?？耸掀咸亚蚓绕渌蚓蟆?種細(xì)菌的生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果見表1。

3.2藥敏試驗(yàn)

研究選用了12種不同類型的常見抗生素檢測葡萄球菌抗藥性，結(jié)果表明5種葡萄球菌屬細(xì)菌對慶大霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林高度敏感，對卡那霉素，甲氧芐啶中度敏感。對青霉素、紅霉素、萬古霉素、四環(huán)素、利福平耐藥，說明幾個(gè)奶牛場乳中葡萄球菌屬的細(xì)菌耐藥現(xiàn)象比較嚴(yán)重。

注：S為高度敏感，I為中度敏感，R為耐藥。-表示無抑菌直徑。

4討論與結(jié)論

（1）搞好圈舍環(huán)境衛(wèi)生，保持牛舍、牛床和牛體清潔，接奶前應(yīng)對乳房、擠奶員和自動擠奶器加強(qiáng)清洗消毒，定期進(jìn)行奶牛隱性乳房炎檢測。

（2）發(fā)現(xiàn)感染金黃色葡萄球菌的奶牛，及時(shí)用藥治療，最好分開飼養(yǎng)、擠奶，避免交叉感染，治愈率低的奶牛建議淘汰處理。

（3）在治療金黃色葡萄球菌性乳房炎時(shí)，要通過實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選用高度敏感和針對性強(qiáng)的抗生素進(jìn)行治療，治愈后要對乳中的藥物殘留進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)測。

（4）選用中草藥治療，既不易產(chǎn)生抗藥性及藥物殘留，又有藥物與營養(yǎng)劑雙重功能。

（5）疫苗預(yù)防。目前市場上出售的疫苗大多為滅活苗，但這種疫苗存在感染的風(fēng)險(xiǎn)性、廣譜性弱。

參考文獻(xiàn)

[1]李宏勝，郁杰，李新圃，等.我國部分地區(qū)個(gè)體奶牛場乳房炎細(xì)菌學(xué)調(diào)查[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2002 （6）：14-17.

[2]袁永隆，張禮華，劉純傳，等.我國奶牛乳房炎常見病原菌的區(qū)系調(diào)查[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1992，25 （4）：70-76.

[3]賈國勇，魏海紅.乳源葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性監(jiān)測[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008 （3）：36-38.

[4]王曉蘭，孫慶華.奶牛隱性型乳房炎奶樣中葡萄球菌的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34（ lO）：2 153，2 156.

[5]高攀，王登峰，李建軍，等.新疆牛源金黃色葡萄球菌抗菌素敏感性調(diào)查[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，49（ ll）：2134-2139.